ALK IQFISH Break-Apart Probe Número de pieza G111600-8
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ALK IQFISH Break-Apart Probe Número de pieza G111600-8 Uso previsto La ALK IQFISH Break-Apart Probe está destinada a la detección de reordenaciones que impliquen al gen ALK mediante hibridación in situ fluorescente (FISH). La sonda puede utilizarse en cortes de tejido pulmonar incluidos en parafina. Resumen Las sondas de separación constan de dos sondas secundarias, diseñadas para situarse en lados opuestos del punto de rotura de traslocación para un gen dado, cada una de ellas etiquetadas con un color diferente. Estas sondas generan señales en células normales que se corresponden estrechamente en tamaño y están colocalizadas (fusión de 2). Después de una traslocación, las señales se “rompen” y ya no se colocalizan (por ejemplo: 1 roja, 1 verde, 1 fusión). Componentes del kit Componente Número de pieza Volumen Almacenamiento ALK IQFISH Break-Apart Probe G111600-85510 200 l –25 °C a –15 °C Mantenga la ALK IQFISH Break-Apart Probe protegida de la luz siempre que sea posible. Junto con el kit se envía un certificado de análisis. Advertencias y precauciones 1 Para uso en diagnóstico in vitro. 2 Evite la contaminación microbiana, que puede dar lugar a resultados erróneos. 3 Todas las muestras biológicas y los materiales expuestos a ellas deben manipularse como si fuesen potencialmente infecciosos y deben eliminarse de acuerdo con las precauciones adecuadas según la normativa federal, estatal y local. Consulte las precauciones correspondientes sobre patógenos transmitidos por la sangre suministradas por su centro o la normativa local. Nunca pipetee con la boca. Evite el contacto de la muestra con la piel y las membranas mucosas. Agilent Technologies 4 Siga las precauciones estándar cuando obtenga, manipule o deseche reactivos potencialmente carcinogénicos. 5 Tenga cuidado de evitar la contaminación cruzada de las muestras durante todos los pasos de este procedimiento, ya que esto puede ocasionar resultados erróneos. 6 Utilice guantes sin polvo cuando sea posible para minimizar la introducción de partículas de polvo en la muestra o los materiales del kit. 7 Una vez abierto, este producto se mantiene estable durante 30 días cuando se almacena a la temperatura de almacenamiento recomendada. 8 Se ha demostrado que el rendimiento del kit no se ve afectado hasta los 22 ciclos de congelación-descongelación. 9 La interpretación de los resultados debe realizarla personal cualificado en el contexto de la historia clínica del paciente y los resultados de otras pruebas diagnósticas. 10 Se recomienda el uso de portaobjetos de control. Uso de portaobjetos de control Se recomienda utilizar portaobjetos de control junto con los portaobjetos de pacientes para supervisar el resultado del ensayo y evaluar la precisión de la enumeración de señales. Información de seguridad La hoja de datos de seguridad (MSDS) se encuentra disponible en www.agilent.com. Indicaciones de inestabilidad o deterioro Procedimiento del flujo de trabajo Revise los paquetes a su llegada. Si la etiqueta a prueba de manipulaciones estuviera abierta por las perforaciones, o si el contenido del vial estuviese descongelado a su llegada, no utilice el contenido del paquete. Para obtener asistencia al cliente o soporte técnico, póngase en contacto con Agilent Genomics. Utilice la sonda IQFISH con cortes de tejidos fijados con formol e incluidos en parafina (FFPE). Se proporciona un protocolo en la tabla siguiente. El protocolo utiliza reactivos del Dako Histology Accessory Kit (Dako p/n K5799). Preparación de portaobjetos para FISH 1 Prepare los reactivos de Dako Histology. • Prepare 50 ml de 1× Dako Pre-Treatment Solution en un recipiente Coplin. • Prepare 500 ml de 1× Dako Wash Buffer. 2 Desparafinice las muestras. • Opcional: Incube los portaobjetos de muestra a 60 ºC durante 1 hora. • Incube los portaobjetos en un recipiente de xileno (o sustitutos de xileno) durante 5 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por xileno fresco e incube 5 minutos más. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 100% durante 2 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por etanol 100% fresco e incube 2 minutos más. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 70% durante 2 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por etanol 70% fresco e incube 2 minutos más. • Incube los portaobjetos en un recipiente de 1× Dako Wash Buffer durante 2–5 minutos a temperatura ambiente. ALK IQFISH Break-Apart Probe 2 3 Pretrate las muestras con Dako Pre-Treatment Solution utilizando la Opción 1 o la Opción 2. Opción 1: Pretrate utilizando un baño de agua • Precaliente el recipiente de 1× Dako Pre-Treatment Solution a 98 °C en un baño de agua. Supervise la temperatura en el interior del recipiente mediante un termómetro calibrado para asegurarse de que la temperatura alcance un mínimo de 95 °C sin alcanzar el punto de ebullición de 100 °C. • Añada los portaobjetos al recipiente de 1× Dako Pre-Treatment Solution. Incube durante 10 minutos a 98 ºC. • Retire el recipiente del baño de agua. Quite la tapa y deje que el contenido se enfríe durante 15 minutos a temperatura ambiente. • Incube los portaobjetos en un recipiente de 1× Dako Wash Buffer durante 3 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por 1× Dako Wash Buffer fresco e incube durante 3 minutos más. Opción 2: Pretrate utilizando un microondas • Añada los portaobjetos al recipiente de 1× Dako Pre-Treatment Solution y coloque el recipiente en un horno microondas de 1100 vatios. Caliente a potencia máxima hasta que la solución empiece a hervir (~1–3 minutos). • Caliente al 10–20% de potencia durante 10 minutos para mantener la solución justo por debajo de la temperatura de ebullición. Si se utiliza un microondas con detección de vapor, caliente durante 10 minutos utilizando esta función. • Retire el recipiente del microondas. Quite la tapa y deje que se enfríe durante 15 minutos a temperatura ambiente. • Incube los portaobjetos en un recipiente de 1× Dako Wash Buffer durante 3 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por 1× Dako Wash Buffer fresco e incube durante 3 minutos más. 4 Las proteínas se digieren utilizando Pepsin. • Utilizando un paño sin pelusa, seque el área del portaobjetos alrededor de la muestra sin alterarla. • Añada 5 gotas de Dako Pepsin Solution fría a cada portaobjetos, cubriendo la muestra con líquido. • Incube los portaobjetos de muestra a 37 ºC durante 7 minutos. • Incube los portaobjetos en un recipiente de 1× Dako Wash Buffer durante 3 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por 1× Dako Wash Buffer fresco e incube durante 3 minutos más. 5 Deshidrate las muestras. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 70% durante 2 minutos a temperatura ambiente. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 85% durante 2 minutos a temperatura ambiente. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 100% durante 2 minutos a temperatura ambiente. • Deje que los portaobjetos se sequen al aire completamente a temperatura ambiente. Hibridación a la sonda FISH 1 Descongele la sonda (ALK IQFISH Break-Apart Probe). • Descongele la sonda IQFISH a temperatura ambiente. • Mezcle con vórtex el vial durante 15 segundos y centrifugue brevemente en una microcentrifugadora. 2 Desnaturalice la sonda y el ADN cromosómico. • Pipetee 10 l de la sonda IQFISH en un portaobjetos, cubriendo la muestra con líquido. Cubra con una tapa de vidrio. • Selle los bordes de la tapa con Dako Coverslip Sealant. • Incube los portaobjetos a 80 ºC durante 10 minutos. 3 Hibride la sonda a los cromosomas. • Baje la temperatura de incubación a 45 °C. Incube los portaobjetos a 45 °C durante 1–2 horas. Lavado y visualización de portaobjetos 1 Lave los portaobjetos. • Prepare 100 ml de 1× Dako Stringent Wash Buffer. Divida el tampón entre dos recipientes de Coplin. • Precaliente uno de los recipientes a 63 ºC en un baño de agua. Deje el otro recipiente a temperatura ambiente. • Trabajando con un portaobjetos cada vez, desprenda el Dako Coverslip Sealant y después quite la tapa. Cuando termine con cada portaobjetos, póngalo en el recipiente a temperatura ambiente de 1× Dako Stringent Wash Buffer. • Transfiera los portaobjetos al recipiente de 1× Dako Stringent Wash Buffer que está en el baño de agua a 63 °C. Incube los portaobjetos a 63 ºC exactamente durante 10 minutos. • Incube los portaobjetos en un recipiente de 1× Dako Wash Buffer (no el Stringent Wash Buffer) durante 3 minutos a temperatura ambiente. Reemplace por 1× Dako Wash Buffer fresco e incube durante 3 minutos más. ALK IQFISH Break-Apart Probe 3 2 Deshidrate las muestras. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 70% durante 2 minutos a temperatura ambiente. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 85% durante 2 minutos a temperatura ambiente. • Incube los portaobjetos en un recipiente de etanol 100% durante 2 minutos a temperatura ambiente. • Deje que los portaobjetos se sequen al aire completamente a temperatura ambiente y a oscuras. 3 Vea los resultados. • Pipetee 15 l de medio de montaje en un portaobjetos y añada una tapa. • Vea el portaobjetos con microscopio de fluorescencia con Cy3/FITC o filtro doble naranja/verde. Los portaobjetos se pueden analizar después de 15 minutos o en el plazo de 7 días después de montarlos. Conserve los portaobjetos en un lugar oscuro a una temperatura de –18 °C a 8 °C para minimizar la decoloración. Limitaciones del procedimiento Servicio técnico Un almacenamiento y una manipulación adecuados de reactivos y muestras son esenciales para los resultados. Todo el equipo de laboratorio utilizado para preparar la diana durante este procedimiento debe calibrarse y mantenerse para garantizar la precisión. La medición incorrecta de los reactivos puede afectar al resultado del procedimiento. País Correo electrónico Austria [email protected] Teléfono (local gratuito) 01 25125 6800 Bélgica [email protected] 02 404 92 22 Dinamarca [email protected] 45 70 13 00 30 Finlandia [email protected] 010 802 220 Francia [email protected] 0810 446 446 Alemania [email protected] 0800 603 1000 Italia [email protected] 800 012575 Holanda [email protected] 020 547 2600 España [email protected] 901 11 68 90 Suecia [email protected] 08 506 4 8960 Suiza [email protected] 0848 8035 60 Reino Unido/Irlanda [email protected] 0845 712 5292 Todos los demás países Encuentra información de contacto local en http://www.agilent.com/genomics/contactus Tabla de símbolos Número de catálogo Conformidad europea Código del lote Fecha de caducidad Límite de temperatura Fabricante Contiene suficiente para <n> pruebas Dispositivo médico para diagnóstico in vitro Irritante Consulte las instrucciones de uso Representante autorizado en la Comunidad Europea ALK IQFISH Break-Apart Probe 4 Agilent Technologies, Inc. 1834 State Highway 71 West Cedar Creek, Texas 78612 EE. UU. AGILENT TECHNOLOGIES FRANCE PARC TECHNOPOLIS - ZA COURTABOEUF 3 AVENUE DU CANADA CS 90263 91978 LES ULIS CEDEX FRANCIA © Agilent Technologies, Inc. 2014, 2016 Revisión B0, Abril 2016, español *5990-7280* 5990-7280 ALK IQFISH Break-Apart Probe 5
