evaluación de la irritabilidad dérmica, oftálmica y el efecto

Anuario Toxicología 2001;1(1):93-7
Centro de Investigaciones y Evaluacioes Biológicas. IFAL.
Universidad de la Habana
EVALUACIÓN DE LA IRRITABILIDAD DÉRMICA, OFTÁLMICA
Y EL EFECTO SENSIBILIZANTE DE LA CREMA ULCEPROL
Lic. Isis Bermudez Camps, 1 Lic. Gastón García Simón,2 Lic. Eliecer Martínez Suárez3
y Lic. Keyla Díaz Hernández.3
RESUMEN: Se realizó un estudio para determinar la posible irritabilidad dérmica, oftálmi-
ca y el efecto sensibilizante de la crema elaborada a partir del propóleos recolectado en la
región de Manzanillo. El ensayo se llevó a cabo en conejos y curieles con las técnicas descritas en los procedimientos normalizados del trabajo establecidos por el Centro de Investigaciones y Evaluaciones Biológicas de la Universidad de la Habana. La crema ulceprol al 15 % no
resulta irritante en la piel de los conejos ensayados, es moderadamente irritante al 10 y al 15
% en las estructuras oculares de los conejos evaluados y no tiene efecto sensibilizante al
ponerse en contacto con la piel de los curieles sometidos a estudio; por lo que puede
afirmarse que cumple con los requisitos indispensables para la aceptación del producto y su
empleo en la patología para la cual fue diseñada dicha formulación.
S DE TTO
O XICID
AD/métodos; ADMINISTRA
CION CUT
ANEA;
DeCS: PROPOLIS/análisis; TEST
TESTS
XICIDAD/métodos;
ADMINISTRACION
CUTANEA;
ANTES; CONEJOS.
IRRITANTES;
IRRIT
El propóleos es una sustancia de gran
utilidad en la práctica médica por las numerosas propiedades atribuidas 1 y a pesar
de que existen reportes sobre investigaciones llevadas a cabo, desde el punto de
vista toxicológico, 2-4 la variabilidad de su
composición química implica el esclarecimiento de su toxicidad y más si éste es
llevado a una forma farmacéutica para su
comercialización, con un principio activo
procedente de una región geográfica di-
1
2
3
ferente a la de los propóleos cubanos que
hasta el momento han sido evaluados.
Bajo las condiciones antes expuestas, la presente investigación tuvo como
objetivo evaluar la irritabilidad dérmica,
oftálmica y el efecto sensibilizante de la
crema ulceprol en animales de experimentación con la finalidad de emitir un criterio científicamente sustentado sobre la
posible toxicidad de este producto.
Licenciada en Ciencias Farmacéuticas. Profesora Auxiliar.
Licenciado en Biología. Centro de Investigaciones y Evaluaciones Biológicas IFAL.UH.
Licenciados en Ciencias Farmacéuticas. Universidad de Oriente Santiago de Cuba.
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Métodos
(22±1 oC) y humedad 50±5, PNT/ANI/ 011,
PNT/ ANI/ 006 y PNT/ ANI/ 005).
Las técnicas utilizadas son descritas en
el PNT establecido por el CIEB-IFAL 0208.
La crema de propóleos al 10 % y al
15 % (0,1 g) se aplicó en el fondo del
saco conjuntival del ojo derecho, que permaneció cerrado por espacio de 15 seg; en
el ojo izquierdo no se aplicó producto alguno, tomándose a manera de control.
Para graduar las afectaciones que presentaron y evaluar los resultados se utilizó
el PNT correspondiente.
El cálculo del IIO se determinó mediante la suma de todas las observaciones que
se encontraron en las 3 estructuras analizadas (córnea, iris y conjuntiva), en los
tiempos que se prefijan y este valor se dividió por 12, el resultado obtenido fue el IIO.
ENSAYO DE IRRITABILIDAD
DÉRMICA
La prueba de irritabilidad dérmica se
realizó en 3 conejos de la línea F1 con un
peso no menor de 1,8 kg, procedentes del
CENPALAB con su correspondiente certificado de calidad. (PNT/ ANI/ 00).
Los animales se mantuvieron en condiciones de aclimatación con un ciclo de
luz/oscuridad 12 x 12 h controlándose la
temperatura (22±1 oC) y la humedad 50±5 %
con acceso al agua y la comida ad libitum.
(PNT/ANI/011, PNT/ANI/006 y
PNT/ ANI/ 005).
Las técnicas utilizadas en este ensayo se describen en PNT/ ANI/ 0207 establecido por el CIEB-IFAL.
Para esta prueba se empleó la formulación al 15 % (0,5 g), la cuál se aplicó en un
área aproximada de la piel de 6 cm2; afeitada
el día antes de la prueba.
El cálculo del índice de irritación primario (I I P) se efectuó sumando todas las
observaciones de los días 2,3 y 4, dividiéndolas por el número de observaciones
realizadas. El valor obtenido se comparó con
lo reportado en el PNT correspondiente para
clasificar el producto y de esta forma su
aprobación o rechazo.
ENSAYO
DE SENSIBILIZACIÓN
En este ensayo se utilizaron 30 curieles
albinos de la línea hartley distribuidos en
20 curieles (10 hembras y 10 machos) para el
grupo de tratamiento, así como 10 curieles
(5 hembras y 5 machos) para el grupo control. El peso de los animales fue mayor de
250 g con su correspondiente certificado
de salud, se mantuvieron en cuarentena
según los procedimientos de laboratorio (PNT/ANI/ 011) con acceso al agua
y la comida administrada ad libitum
(PNT/ ANI/ 006 y PNT/ ANI 005).
Las técnicas utilizadas en este ensayo se describen en el PNT 0209 establecido
por el CIEB-IFAL.
La crema de propóleos ensayada se
elaboró al 2 % dado a que en este tipo de
ensayo se utiliza la mayor concentración
que no produzca irritación a la piel. Esta
concentración se determinó mediante la
aplicación en 4 curieles jóvenes, adultos y
ENSAYO DE IRRITABILIDAD
OFTÁLMICA
El ensayo se realizó en 3 conejos de
la línea F1 con una masa corporal entre
1,8 y 2,0 kg, procedentes del CENPALAB
con su correspondiente certificado de
calidad. (PNT/ ANI/ 00) Estos animales
se mantuvieron en aclimatización con
agua y comida ad libitum con un ciclo
luz/oscuridad 12 x 12 h, temperatura
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ENSAYO DE IRRITABILIDAD
OFTÁLMICA
sanos de la línea hartley, con un peso
mayor de 250 g al inicio del ensayo y
procedentes del CENPALAB, de diferentes
concentraciones de la formulación (2 %,
8 %, 10 % y 15 %).
El cálculo del porcentaje de animales
sensibilizados se realizó dividiendo el total
de los animales que presentaron sensibilidad entre el total del grupo y se comparó el
resultado obtenido con lo establecido por
Draize.5
En la tabla 1 se presentan las afectaciones que se encontraron en las distintas
estructuras estudiadas en las diferentes
lecturas realizadas a la crema ulceprol al
15 %, así como, el índice de irritación ocular.
El índice de irritación ocular fue de
29,9 por lo que la crema de propóleos al
15 % se clasifica como moderadamente
irritante según lo establecido en el PNT
correspondiente.
En la tabla 2 puede observarse que también se presentaron alteraciones en las
estructuras oculares de los animales durante
las primeras 48 h del ensayo. El índice de
irritación ocular obtenido para la concentración al 10 % es de 27,83; valor muy cercano al alcanzado para la concentración
al 15 % donde no existen diferencias significativas para p<0,05 entre ambas, lo cual
confirma que la formulación ensayada es
moderadamente irritante.
Resultados
ESTADO DE IRRITABILIDAD
DÉRMICA
El día del ensayo, y durante los 3 días
posteriores se efectuaron lecturas de la piel
para eritema, edema y escaras, sin observar
en ninguna de ellas alteraciones de esta
índole. Tampoco se presentaron signos
clínicos en los animales sometidos a prueba, por lo que el índice de irritación primario
para la crema ulceprol al 15 % es de 0-0, lo
cual cataloga a la sustancia como potencialmente no irritante para la piel, según la
escala establecida en la literatura.5
ENSAYO
DE SENSIBILIZACIÓN
Las observaciones efectuadas en los
animales para las lecturas realizadas mos-
TABLA. 1. Evaluación de la irritabilidad oftálmica de la crema ulceprol al 15 %
Horas
1
24
48
72
Total
Conjuntiva
20
14
4
0
38
Estructuras observadas
Iris
30
0
0
0
30
Total general: 359
Índice ocular: 29,9
95
Córnea
240
46
5
0
291
TABLA 2. Evaluación de la irritabilidad oftálmica de la crema ulceprol al 10 %
Horas
Estructuras observadas
Conjuntiva
Iris
1
24
48
72
Total
22
88
4
0
34
30
0
0
0
30
Córnea
240
30
0
0
270
Total general: 334
Índice de irritación ocular: 27,83
traron que no hubo reacción de eritema o
edema con la piel en los curieles tratados,
inducidos y desafiados.
El porcentaje de animales sensibilizados es de 0 %, o sea, que el producto no es
alergeno, por lo tanto no es un agente
sensibilizante.
pero sí resulta aconsejable que se indique
en la etiqueta del producto que puede dañar las estructuras oculares, por lo que debe
tenerse cuidado durante su manipulación y
si incidentalmente tiene contacto con el
medicamento, entonces se recomienda lavar profusamente con agua y si persiste la
irritación, debe acudir al facultativo.
Según los resultados obtenidos en este
ensayo, la crema ulceprol no es un agente
sensibilizante, sin embargo, la literatura refiere el desarrollo de alergias al propóleos 7
en pacientes que han recibido tratamiento
por tiempo prolongado, por lo que parece
indicar que la alergia causada por el
propóleos objeto de estudio, observada en
la clínica en bajos porcentajes sea una reacción de hipersensibilidad de tipo I, tipo
de alergia que responde a otro procedimiento7 que no ha sido empleado en este ensayo.
Discusión
Los resultados obtenidos en el ensayo de irritabilidad dérmica coinciden con lo
reportado en investigaciones desarrolladas
a propóleos procedentes de Francia 4 que
fueron ensayados en conejos y no se observó ningún tipo de irritación. Por otro
lado, estudios realizados a soluciones
hidroalcohólicas de propóleos cubanos de
la región de Nuevitas 2 tampoco desarrollaron efecto irritante sobre la piel ( Cruz RM.
Estudio preliminar de la relación entre composición química y actividad antibacteriana
del propóleos al norte de Nuevitas [Trabajo
de
diploma]
La
Habana,
Cuba:IFAL,1986:24;32.).
Los fines terapéuticos de la crema
ulceprol pueden involucrar durante su uso,
el contacto de manera incidental, con las
estructuras oculares. El índice de irritación
oftálmico obtenido para la crema ulceprol al
10 y al 15 % demuestran que este producto
es moderadamente irritante, lo cual no implica su rechazo, ni la invalidez para su uso,
Agradecimientos
Agradecemos a los Técnicos Boris
Sosa Ramírez y Arturo Valdivieso García
por su contribución, sin la cual no hubiera sido posible la obtención de estos resultados.
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SUMMARY
SUMMARY:: A study was conducted to determine the possible dermal and ophthalmic
irritability and the sensitizing effect of the cream made from propolis collected in the region of
Manzanillo.The trial was conducted in rabbits and guinea pigs and the techniques described in
the standardized procedures of the work established by the Center of Biological Research and
Evaluations from the Pharmacy and Food Institute of Havana University were used. The ulceprol
cream 15 % does not irritate the skin of the assayed rabbits, causes a moderate irritation at 10 and
15 % in the ocular structures of the evaluated rabbits and has no sensitizing effect on contacting the
skin of the guinea pigs included in the study
efor
study.. Ther
Therefor
eforee, it cannot be affirmed that it meets the
indispensable requirements for the acceptance of the product and for its use in the pathology for
which this formulation was designed.
Subject headings: PROPOLIS/analysis; TOXICITY TESTS/methods; ADMINISTRATION, CUTANEOUS;
IRRITANTS; RABBITS.
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Recibido: 29 de mayo del 2001. Aprobado: 30 de
junio del 2001.
Lic. Isis Bermúdez Camps. San Germán no. 615
entre Reloj y San Agustín, Santiago de Cuba,
Cuba.
97