ESTRIOL LIBRE

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Σ=96 pruebas
#3171-17
ESTRIOL LIBRE
Determinación inmunoenzimática directa de Estriol Libre en suero o plasma
Cat. No. 3171-17
1. PRINCIPIO
El Estriol Libre (antígeno) en la muestra compite con la peroxidasa de rábano picante Estriol (antígeno marcado con una enzima) para unirse a un número limitado de lugares de
anti-Estriol (anticuerpo) en los micropozos (fase sólida).
Después de la incubación, se realiza la separación unión/libre con un simple lavado de la
fase sólida.
Se agrega el sustrato enzimático (H2O2) y el sustrato-TMB (TMB). Después de haber
pasado un tiempo apropiado para el desarrollo máximo del color, se detiene la reacción de
la enzima y se determina la absorbancia.
Se calcula la concentración de Estriol basado en una serie de estándares.
La intensidad del color es inversamente proporcional a la concentración de Estriol en la
muestra.
2. REACTIVO, MATERIAL E INSTRUMENTACIÓN
2.1 Reactivo y material proporcionado en el kit
* S1-S2-S3-S4 (1 botella de cada uno) 1 mL
Estándares de Estriol
1. Tampón de incubación (1 botella) 30 mL
Tampón de fosfato 50 mM pH 7.4; BSA 1 gr/L
2. Conjugado (1 botella) 0.4 mL
Conjugado de Estriol-HRP
3. Micropozo recubierto (1 microplaca rompible de 96 pozos)
Anti-Estriol IgG adsorbido en micropozo
4. Sustrato-TMB (1 botella) 12 mL
Peróxido de Hidrógeno/TMB 0.25gr/L (evite el contacto con la piel)
6. Solución Stop (1 botella) 12 mL
Ácido sulfúrico 0.15 mol/L (corrosivo: evite el contacto con la piel)
2.2 Notas
Almacene todos los reactivos a un temperatura de entre +2 y + 8C° en la oscuridad.
Abra la bolsa del reactivo 3 (Micropozo recubierto) sólo cuando esté a temperatura
ambiente y ciérrelo inmediatamente después de su uso.
No retire las hojas adhesivas en las tiras no utilizadas.
2.3 Reactivos necesarios que no han sido proporcionados con el kit
Agua destilada.
2.4 Materiales auxiliares e instrumentación
Dispensador automático.
Lector de micropozos.
2.5 Preparación de los reactivos
*. Estándar (S1, S2, S3, S4) (líquidos)
Antes de usarse, mezcle por 2 minutos con un mezclador rotativo.
El estándar tiene la siguiente concentración de Estriol:
Estable hasta la fecha de expiración del kit a +4°C
1. Conjugado diluido. (Prepare inmediatamente antes de su uso)
Añada 10 l de solución stock (reactivo 2) a 2.0 mL de Tampón de Incubación (reactivo 1).
Mezcle suavemente.
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3. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
La determinación de Estriol puede hacerse tanto en plasma como en suero.
Almacene el reactivo a -20°C si no se hará la determinación el mismo día de la recolección
de la muestra.
3.1 Precaución
- No utilice muestras altamente hemolizadas.
- Se requiere la máxima precisión para la reconstitución y dispensación de los reactivos.
- Este método permite la determinación de Estriol de 0.1 ng/mL a 12.0 ng/mL.
- Para la concentración de Estriol en 12 ng/mL diluya el suero (1 + 3) con solución salina.
Considere el factor de dilución cuando calcule los resultados.
- El significado clínico de la determinación de Estriol puede ser invalidado si el paciente
fue tratado con esteroides naturales o sintéticos.
_______________________________________________
4. PROCEDIMIENTO
Como es necesario realizar la determinación por duplicado, prepare dos pozos para cada
uno de los cuatro puntos de la curva de calibración (S1-S4), dos para el Bo y para cada
muestra, uno para el Blanco.
Pipetee:
Reactivo1
Muestra
Estándares S1-S4
Conjugado diluido
Bo
20l
----------200 l
Estándar
----------------------20 l
200 l
Muestra
---------20 l
----------200 l
Blanco
---------
---------
---------
---------
Incubado a 37°C por 1 hora
Remueva el contenido de cada pozo; lave los pozos con 300 mL de agua destilada. Repita
el procedimiento de lavado descartando el agua completamente.
Pipetee:
Bo
Estándar
Sustrato-TMB
100L
100L
Incube a 20-25°C por 15 minutos en la oscuridad.
Muestra
100L
Blanco
100L
Bo
Estándar
Muestra
Solución Stop
100l
100l
100l
Lea la absorbancia (E) a 450 nm contra el Blanco.
_________________________________________________
Blanco
100l
Pipetee:
5. CURVA DE CALIBRACIÓN – CÁLCULO DE RESULTADOS
5.1 Media de absorbancia y porcentaje relativo
Calcule la media de absorbancia (Em) correspondiente a los puntos individuales de la curva
de calibración (S1-S4), y de cada muestra. Exprese los datos como el porcentaje de la
media de absorbancia de B0 (EmB0) con la siguiente fórmula:
5.2 Curva de calibración
Trace los valores de los estándares (S1-S4) expresados como (B/B0) % en el papel
logarítmico adjunto.
Extrapole la línea pasando a través de los puntos.
5.3 Cálculo de los resultados
Interpole los valores de las muestras expresados como (B/B0) % en la curva de calibración
para obtener los valores correspondientes de las concentraciones expresadas en ng/mL.
6. VALORES DE REFERENCIA
“Estriol no conjugado”
Semanas de
Embarazo
14°
15°
16°
17°
18°
19°
20°
22°
24°
26°
28°
30°
32°
34°
36°
37°
38°
39°
40°
41°
Número medio de suero o plasma
0.6
0.8
1.0
1.2
1.4
1.6
2.0
2.5
2.7
4.0
5.0
5.0
5.6
5.8
9.0
10.6
15.1
13.7
14.8
17.4
Rango ng/mL
(0.2 - 3.0)
(0.2 - 3.5)
(0.3 - 4.2)
(0.4 - 5.2)
(0.4 - 5.8)
(0.4 - 6.2)
(0.4 - 6.8)
(0.4 - 9.1)
(0.4 - 9.1)
(1.9 - 9.5)
(2.2 - 10.1)
(2.0 - 10.8)
(2.5 - 11.3)
(2.2.- 12.7)
(2.5 - 25.0)
(3.6 - 25.3)
(6.6.- 29.7)
(6.7.- 25.3)
(7.2 - 22.9)
(8.8 - 31.5)
7. CARACTERÍSTICAS DE DESEMPEÑO
7.1 Especificidad
Las reacciones cruzadas del anticuerpo, calculadas a 50% de acuerdo a Abraham, se
muestran en la tabla:
Estriol
16-epi-estriol
15 α-OH-estriol
Estriol - 3 – sulfato
Estradiol
17-epi-estriol
Estriol- α glucuronate
estriol- 16 α glucuronate
estrona
100.0 %
10.5. %
7.0. %
2.0 %
0.1 %
<1x10-2. %
<1x10-2 %
<1x10-2%
<1x10-4%
7.2 Sensibilidad
La sensibilidad de este método, es calculada como dos veces la D. S. a partir del B0, es de 2
pg cuando el valor de (B/B0) % es aproximadamente del 90%.
7.3 Precisión
La precisión de la inter e intra-ejecución tuvo un coeficiente de variación de 3.6% y 6.1%
respectivamente.
7.4 Precisión
La recuperación de 0.1 - 1.0 - 4.0 - 12.0 ng/mL de Estriol añadida a la muestra “libre de
plasma” dio un valor promedio de (±SE) de 94 % ±4.0% en referencia a las
concentraciones originales.
7.5 Correlación con RIA
Correlación con el RIA ejecutado en las mismas muestras:
y = 0.90 + 1.12x
r = 0.996
n = 25
p < 0.001
BIBLIOGRAFÍA
Fisher-Rasmussen, W., Gabrielsen, M. V., andWisborg, Acta Obstet. Gynecol Scand 60:
417 -420 (1981)
Truran, P. L., Read, G.F., and Walker, S. Clin. Chem. 28/12, 2393 (1982)
Vining, R. F., Mc Ginley, R., and Rice B. J. Clin. Endoc. Metab. 56, 454 (1983)
Bagger, P. V., Jacobsson, K., and Gullberg, B. Acta Obstet Gynecol Scand 60: 187 (1981)
Osterman, T. M., Juntunen, K.O., and Gothoni, G.D. Clin. Chem. 25 (5) 716 (1979)
Wisdom, G.B. Clin Chem. 22 (8) 1243-1255 (1976)
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ISO 13485-2003
Fecha de Revisión: 10-4-06