QUANTA LiteTM dsDNA

QUANTA LiteTM ssDNA ELISA
708525
Cadena simple DNA ELISA
Para Diagnóstico In Vitro
Complejidad de CLIA: Alto
Aplicación
QUANTA LiteTM ssDNA es un ensayo basado en la técnica ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay)
para la detección semi cuantitativa de autoanticuerpos anti-DNA de cadena simple. El kit QUANTA LiteTM
ssDNA está diseñado para la determinación semi cuantitativa de autoanticuerpos contra DNA de cadena
simple en suero humano y debe utilizarse en conjunción con el kit INOVA QUANTA LiteTM dsDNA. La
determinación de dichos autoanticuerpos sirve de ayuda en el diagnóstico de Lupus Eritematoso Sistémico
(LES) y otras enfermedades reumáticas. El test no es definitivo por sí mismo, sino un parámetro en un
proceso de diagnóstico con diferentes criterios.
Sumario y Explicación de la prueba
Los anticuerpos antinucleares (ANA) se hallan en una gran variedad de enfermedades del tejido conectivo y
son por ello utilizados como prueba de cribaje gracias a su elevada sensibilidad.1 Los anticuerpos anti-DNA
de doble cadena se presentan casi de forma exclusiva en pacientes con LES y por ello están considerados
como un anticuerpo indicador de esa enfermedad. La presencia de anticuerpos anti-DNA de doble cadena
es un indicador muy importante del LES; sin embargo, la ausencia de estos anticuerpos no permite
descartar el LES en todos los casos.2
Los autoanticuerpos anti-DNA de cadena simple aparecen en muchas enfermedades reumáticas y en varias
enfermedades3,4 de otros tipos. La mayor incidencia y cantidad de anti-DNA de cadena simple se halla en
pacientes con LES.4 Con los pacientes con LES que han dado positivo por anticuerpos anti-DNA de cadena
simple, se ha considerado que la cantidad de anticuerpos puede utilizarse para controlar los cambios en la
actividad de la enfermedad y la respuesta a la farmacoterapia 5,6. Mientras que los anticuerpos anti-DNA de
cadena simple no son específicos de LES, pueden ser el único elemento serológico positivo hallado en
algunos pacientes con LES que no llegan a mostrar una cantidad de ANA significativa 7. Muchos de estos
pacientes con una alta cantidad de anticuerpos anti-DNA de cadena simple muestran enfermedades
cutáneas fotosensibles. Aproximadamente el 25% de los pacientes con lupus discoides poseen anti-DNA de
cadena simple y sufren el riesgo de desarrollar rasgos sistémicos 3. Sólo se ha demostrado la presencia de
anti-DNA de cadena simple en pacientes graves de lupus discoides con glomerulonefritis3. Estos estudios
indican que determinar la presencia o no de anticuerpos anti-DNA de cadena simple puede resultar un
diagnóstico importante para la evaluación de pacientes con lupus discoides o que se sospecha que tengan
ANA negativos de LES3. Los anticuerpos que reaccionan con el DNA de cadena simple térmicamente
desnaturalizado reaccionan con purinas y pirimidinas, así como la cadena azúcar-fosfato de la molécula de
DNA1,4. Desde un punto de vista técnico, todavía es imposible medir en un sólo test los anticuerpos antiDNA de cadena simple auténticos (siendo el único antígeno las bases de purinas y pirimidinas). La técnica
ELISA empleada en este ensayo es objetiva y sus resultados pueden ser presentados de forma
semicuantitativa. El procedimiento ELISA es adecuado para testar tanto una cantidad grande como pequeña
de perfiles de muestras en combinación con otros ensayos para diagnosticar enfermedades reumáticas
como el DNA de doble cadena, las histonas o anticuerpos nucleares extraíbles (ENA).
Procedimiento de trabajo
Los pocillos de la microplaca contienen antígeno de DNA de cadena simple de timo de ternera altamente
purificado y desnaturalizado por calor que se ha unido en condiciones que mantienen su estado nativo. Se
añaden controles y muestras convenientemente diluidas en pocillos separados, uniéndose durante la
incubación los anticuerpos anti ssDNA al antígeno que los recubre. El resto de componentes no unidos se
elimina mediante lavado y se añade conjugado anti IgG humana a cada pocillo. Un segundo paso de
incubación permite que el conjugado se una a los anticuerpos presentes. Tras un lavado que elimina el
conjugado sobrante, se añade un sustrato cromogénico y tras incubación la actividad enzimática presente
en el pocillo es proporcional a la intensidad de color desarrollado. El ensayo puede ser evaluado
fotométricamente comparando la intensidad de color en las muestras con la de los controles.
Reactivos
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Microplaca ELISA de poliestireno con pocillos recubiertos con antígeno ssDNA purificado (12-1 x 8
pocillos), envasada en su soporte en una bolsa de aluminio con desecante
Control negativo ELISA, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano ausente de
anticuerpos humanos anti ssDNA, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA ssDNA Positivo Débil, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano
con anticuerpos anti ssDNA, prediluido, 1.2 ml
Control ELISA ssDNA Positivo Fuerte, 1 frasco de tampón conteniendo conservante y suero humano
con anticuerpos anti ssDNA, prediluido, 1.2 ml
Diluyente de Muestra HRP, 1 frasco color rosado conteniendo tampón con Tris, Tween 20 y
conservante, 50 ml
Solución de Lavado Concentrada HRP, 1 frasco de concentrado 40x color rojo conteniendo tampón
con Tris y Tween 20, 25ml. Referirse a la Sección “Metodología” para instrucciones de dilución.
1
7.
8.
9.
Conjugado HRP IgG, con anti- IgG humana de cabra, 1 frasco - color azul conteniendo tampón,
estabilizante de proteína y conservante, 10ml
Cromógeno TMB, 1 frasco conteniendo estabilizantes, 10ml
Solución de Parada HRP, Acido Sulfúrico 0.344 M, 1 frasco, incolora, 10 ml
Advertencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Aviso: Este producto contiene cloramfenicol al 0.02% en el Diluyente de muestras, controles y
conjugado considerado en el estado de California como causante de cáncer.
Todo material de origen humano usado en la preparación de los controles para este producto se ha
examinado resultando negativo para anticuerpos contra HIV, HBsAg, y HCV por métodos aprobados
por la FDA. Ningún método puede sin embargo ofrecer garantía completa que HIV, HBV, HCV o
otros agentes contagiosos estén ausentes. Por lo tanto, los controles ssDNA ELISA positivo fuerte,
ssDNA ELISA positivo débil y ELISA negativo deben manejarse como si fueran material
potencialmente contagioso.8
Dado que se utiliza azida sódica como conservante, este producto puede ser tóxico por ingestión o
absorción a través de piel o mucosas. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o cobre de las
tuberías para formar azidas metálicas potencialmente explosivas. Si se utilizan desagües para la
eliminación de reactivos se recomienda lavarlos con abundante agua para prevenir la formación de
dichas azidas metálicas.
El Conjugado HRP contiene diluido un producto químico venenoso y corrosivo que puede ser tóxico
si se ingiere. Para impedir quemaduras, evitar el contacto con piel o ojos.
El Cromógeno TMB contiene un irritante. Puede ser dañino si es inhalado, ingerido o absorbido por
la piel. Evitar la inhalación, ingestión o contacto con piel y ojos.
La Solución de parada HRP consiste de una solución diluida de ácido sulfúrico. Evitar exposición a
bases, metales, u otros compuestos que puedan reaccionar con ácidos. El ácido Sulfúrico es
venenoso y corrosivo, puede ser tóxico si ingerido. Para impedir quemaduras, evitar contacto con
piel y ojos.
Se recomienda utilizar el equipo protector apropiado al trabajar con este kit.
Los reactivos derramados deben limpiarse inmediatamente. Siga las normas aplicables en su
laboratorio acerca de la eliminación de residuos.
Precauciones
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Este producto es para ser usado en el Diagnóstico In Vitro.
La sustitución de componentes diferentes de los incluidos en el sistema puede generar resultados
inconsistentes.
Un lavado incompleto o ineficiente y una eliminación insuficiente de líquido de los pocillos puede dar
lugar a una pérdida de precisión y/o un fondo elevado.
La adaptación de este ensayo para su uso en procesadores automáticos u otros dispositivos,
totalmente o en parte, puede producir diferencias en los resultados en comparación con el
procedimiento manual. Es responsabilidad de cada laboratorio de validar sus procedimiento
automatizado y comprobar que produce resultados dentro de los límites aceptables.
Existe una variedad de factores que influyen en la realización del ensayo. Esto incluye la
temperatura inicial de los reactivos, la temperatura ambiente, la exactitud y reproducibilidad de
técnica de pipeteo, la calidad de la técnica de lavando, el fotómetro que se utiliza para medir los
resultados, y los tiempos de incubación durante el ensayo. Es necesario un exquisito cuidado y un
trabajo consistente para obtener resultados exactos y reproducibles.
Se recomienda seguir estrictamente el protocolo.
El sellado incompleto de la bolsa “zip-lock” que contenga tiras sin usar y desecante provocará la
degradación del antígeno que se apreciará en un empeoramiento de la precisión de resultados.
Pueden observarse absorbancias inaceptablemente bajas tras dos o más usos separados de un
conjugado HRP. Es importante seguir todas las recomendaciones de manipulación específicas para
este producto para evitar que esto ocurra.
La contaminación química del conjugado HRP puede ocurrir como resultado de una limpieza o
secado inadecuados del equipo o instrumentos. Residuos de productos químicos comunes en el
laboratorio como formalina, lejía, etanol, o detergente causan la degradación del conjugado HRP con
el tiempo. Enjuague bien todo equipo o instrumentos después de usar dichos productos.
Condiciones de Almacenaje
1.
2.
3.
Guardar todos los reactivos del kit en nevera a 2-8°C. No congelar. Los reactivos son estables hasta
la fecha de caducidad si son almacenados y manipulados correctamente.
Las tiras sin utilizar deben volverse a guardar en la bolsa de aluminio que contiene desecantes
cerrándola herméticamente y almacenándola a 2-8ºC.
La solución de lavado diluida es estable 1 semana a 2-8°C.
Recolección de Muestras
Este kit requiere suero como muestra. La adición de azida u otros conservantes a las muestras puede
afectar adversamente los resultados. No deben utilizarse muestras contaminadas, tratadas por calor o que
contengan partículas visibles. Deben asimismo evitarse las muestras lipémicas o hemolizadas.
2
Tras la recolección de las muestras de sangre, el suero debe ser separado del coágulo. El documento
NCCLS H18-A2 recomienda las siguientes condiciones de almacenaje para muestras: 1) Guardar las
muestras a temperatura ambiente no más de 8 horas. 2) Si el ensayo no se va completar en 8 horas,
refrigerar la muestra a 2-8°C. 3) Si el ensayo no se va completar entre 48 horas, o para enviar las muestras,
congelar a -20°C o a temperatura inferior. Una vez descongeladas las muestras deben agitarse bien antes
de utilizarse.
Procedimiento
Materiales Suministrados
1
1
1
1
1
1
1
1
1
Microplaca ssDNA ELISA (12-1 x 8 pocillos), con soporte
1.2 ml control prediluido ELISA negativo
1.2ml control prediluido ssDNA ELISA Positivo Débil
1.2ml control prediluido ssDNA ELISA Positivo Fuerte
50ml Diluyente de muestra HRP
25ml Solución de lavado concentrada 40X
10ml Conjugado IgG (cabra) anti IgG humana
10ml Cromógeno TMB
10ml Solución parada HRP (Ácido Sulfúrico 0.344M)
Material necesario no incluido
Micropipetas para 5, 100, 200-300 y 500µl
Puntas desechables para micropipeta
Tubos para dilución de muestras, 4ml
Agua destilada
Recipiente de 1L para la solución de lavado reconstituida
Lector de microplacas capaz de medir densidades ópticas a 450nm (y a 620nm para lecturas de doble
longitud de onda)
Metodología
Antes de empezar
1.
2.
3.
4.
Llevar todos reactivos y muestras a la temperatura ambiente (20-26°C) y agitar.
Diluir la solución de lavado HRP 1:40 añadiendo el contenido del envase con concentrado a 975 ml.
de agua destilada. Si no va a utilizar toda la placa, puede preparar una cantidad menor de solución
de lavado añadiendo 2.0 ml del concentrado a 78ml de agua destilada para cada 16 pocillos que
vayan a utilizarse. El tampón diluido es estable 1 semana a 2-8°C.
Preparar una dilución 1:101 de cada muestra a procesar añadiendo 5 µl de muestra a 500 µl de
diluyente. Las muestras diluidas deben ser utilizadas dentro de las 8 horas de su preparación. NO
DILUIR los controles ssDNA ELISA positivo débil, positivo fuerte y ELISA negativo.
La determinación de la presencia o ausencia de anticuerpos anti ssDNA usando unidades arbitrarias
requiere dos pocillos para cada uno de los tres controles y uno o dos pocillos para cada muestra. Se
recomienda que las muestras se hagan por duplicado.
Procedimiento de Ensayo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
TODOS REACTIVOS DEBEN ESTAR A TEMPERATURA AMBIENTE (20-26°C) ANTES DE
EMPEZAR EL ENSAYO. Ponga el número necesario de tiras en el soporte. Devolver
inmediatamente las tiras sin utilizar a la bolsa de aluminio y sellarla firmemente para
minimizar la exposición a la humedad.
Agregar 100µl de los controles prediluidos ssDNA ELISA Positivo Débil, ssDNA ELISA Positivo
Fuerte, ELISA Negativo y las muestras prediluidas a los pocillos. Cubrir los pocillos e incubar 30
minutos a temperatura ambiente en una superficie plana . El tiempo de incubación empieza después
de la adición de la última muestra.
Lavado: Aspirar el contenido de cada pocillo. Agregar 200-300µl de solución de lavado a todos
pocillos y aspirar. Repetir esta secuencia dos veces más para un total de tres lavados. Invertir la
placa y golpearla suavemente en material absorbente para eliminar cualquier fluido residual tras el
último lavado. Es importante que cada pocillo esté completamente vacío después de cada paso de
lavado. Mantener la misma secuencia para la aspiración que la usada para la adición de muestras.
Agregar 100µl de Conjugado IgG HRP a cada pocillo. El conjugado debe pipetearse en las
condiciones más asépticas posibles y siguiendo buenas técnicas de laboratorio. Aspirar solamente la
cantidad de conjugado necesaria para el ensayo. PARA EVITAR CUALQUIER CONTAMINACIÓN
POTENCIAL MICROBIANA Y/O QUÍMICA, NUNCA DEVOLVER EL CONJUGADO SIN USAR A
SU RECIPIENTE ORIGINAL. Incubar los pocillos 30 minutos como en el paso 2.
Lavado: Repetir el paso 3.
Agregar 100µl de Cromógeno TMB a cada pocillo e incubar 30 minutos en oscuridad a temperatura
ambiente.
Agregar 100µl de Solución de parada a cada pocillo. Mantener la misma secuencia y
temporalización que la efectuada en la adición de Cromógeno. Agitar suavemente la placa para
mezclar bien los pocillos.
Leer la absorbancia (DO) de cada pocillo a 450nm en un plazo máximo de una hora. Si se desea
seguir el método de lectura bicromática puede utilizarse 620 nm como longitud de onda de
referencia.
3
Control de Calidad
1.
2.
3.
4.
Los controles ssDNA ELISA Positivo Débil, ssDNA ELISA Positivo Fuerte y Control Negativo ELISA
deben procesarse con cada lote de muestras para asegurar que todos reactivos y procedimientos
funcionan correctamente.
El usuario debe notar que debido a que los controles ssDNA ELISA Positivo Débil, ssDNA ELISA
Positivo Fuerte y ELISA Negativo son prediluidos, no controlan procedimientos asociados con
dilución de especímenes.
Pueden añadirse controles adicionales según las directivas o requisitos del laboratorio. Pueden
prepararse controles válidos haciendo alícuotas de un “pool” de suero humano que debe
almacenarse a < -20°C.
Para considerar válidos los resultados deben considerarse satisfechos todos los criterios
especificados a continuación, si alguno de ellos no se cumple la prueba debe considerarse inválida y
repetirse.
a.
La absorbancia del control ssDNA Positivo debe ser superior a la del control ssDNA positivo
débil y la de este debe ser superior a la del control negativo.
b.
El control ssDNA positivo fuerte debe tener una absorbancia mayor que 1.0 mientras que la
del control negativo no debe exceder de 0.2.
c.
La absorbancia del control ssDNA positivo débil debe ser superior al doble del control
negativo, u oscilar entre 0.25.
d.
Los controles ELISA negativo y ssDNA positivo fuerte están pensados para monitorizar
problemas de reactivo de magnitud substancial. El control ssDNA positivo fuerte no puede
asegurar precisión alguna en el punto de corte del ensayo.
e.
El usuario puede referirse al documento NCCLS (National Committee of Clinical Laboratory
Standards) C24-A para una guía adicional acerca de buenas prácticas de laboratorio.
Cálculo de Resultados
Debe determinarse en primer lugar el promedio de densidades ópticas de cada juego de duplicados. La
reactividad para cada muestra se calcula dividiendo la densidad óptica (DO) promedio de la muestra por la
densidad óptica promedio del control ssDNA positivo débil.
DO Muestra
Valor de la Muestra = —————————————————— x Valor ELISA Positivo Débil
(unidades)
DO ELISA Positivo Débil
(unidades)
La reactividad de la muestra está relacionada de manera no lineal con la cantidad de anticuerpo presente.
Mientras que los aumentos y disminuciones en la concentración de anticuerpos del paciente se reflejarán en
el aumento o disminución correspondiente de la reactividad, los cambios no son proporcionales (por
ejemplo, al doblarse la concentración de anticuerpo no se dobla la reactividad). Si se deseara una
cuantificación más precisa de la cantidad de anticuerpo, puede informarse como el título de anticuerpo de la
muestra la última dilución positiva de una serie de diluciones seriadas de la muestra.
Interpretación de los Resultados
La técnica ELISA es muy sensible y es capaz de detectar pequeñas diferencias entre poblaciones de
pacientes. Los valores presentados a continuación son sólo valores sugeridos. Cada laboratorio debe
establecer su propio rango normal basado en su propia metodología, controles, equipo y población de
pacientes. LA siguiente información sirve como ejemplo para la interpretación de los resultados.
Tanto los autoanticuerpos anti-DNA de cadena simple como los de cadena doble pueden reaccionar con el
antígeno de DNA de cadena simple de este kit, y es por esta razón que las muestras también deberían ser
testadas para la reacción con DNA de doble cadena. Estos resultados, en unidades de la OMS, deberían
tomarse en consideración al evaluar los niveles de DNA de cadena simple. Al combinar los resultados del
ensayo ELISA de DNA de doble cadena INOVA QUANTA LiteTM con los del ensayo ELISA de DNA de
cadena simple INOVA QUANTA LiteTM se pueden extraer conclusiones acerca de la existencia de
anticuerpos anti-DNA de cadena simple calculando la proporción (DNA de cadena simple/DNA de cadena
doble). Una proporción < 0.5 indica la ausencia de anticuerpos anti-DNA de cadena simple. Una proporción
> 0.5 indica la presencia de anticuerpos anti-DNA de cadena simple.
ATENCIÓN: Sólo se deberá considerar positiva la muestra cuando el resultado del ensayo de Anticuerpos
anti-DNA de cadena simple sea positivo y la proporción de unidades de DNA de cadena simple con las de
DNA de cadena doble sea > 0.5.
Ejemplo 1:
Ejemplo 2:
Ensayo 1: concentración en el ensayo de anticuerpos anti-DNA de cadena doble: 120
Unidades OMS/mL
Ensayo 2: concentración en el ensayo de anticuerpos anti-DNA de cadena simple: 160 U/mL
Proporción de anticuerpos anti-DNA de cadena simple (DNA de cadena simple/DNA de
cadena doble): 160/120 = 1.33 (+)
Interpretación: La muestra es positiva para los anticuerpos anti-DNA de cadena simple
Ensayo 1: concentración en el ensayo de anticuerpos anti-DNA de cadena doble: 270
Unidades OMS/mL
4
Ejemplo 3:
Ensayo 2: concentración en el ensayo de anticuerpos anti-DNA de cadena simple: 130 U/mL
Proporción de anticuerpos anti-DNA de cadena simple (DNA de cadena simple/DNA de
cadena doble): 130/270 = 0.48 (-)
Interpretación: La muestra da negativo por anticuerpos anti-DNA de cadena simple
Ensayo 1: concentración en el ensayo de anticuerpos anti-DNA de cadena doble: 80
Unidades OMS /mL
Ensayo 2: concentración en el ensayo de anticuerpos anti-DNA de cadena simple: 80 U/mL
Proporción de anticuerpos anti-DNA de cadena simple (DNA de cadena simple/DNA de
cadena doble): 80/80 = 1.0 (+)
Interpretación: La muestra es positiva para los anticuerpos anti-DNA de cadena simple
Si se determina que el resultado del ensayo de DNA de cadena simple es positivo, entonces las unidades de
DNA de cadena simple pueden ser comparadas con las siguientes categorías clínicas.
Menos de 68.6 U/mL
68.6 - 229 U/mL
más de 229 U/mL
Negativo para anticuerpos anti-DNA de cadena simple
Positivo moderado para anticuerpos anti-DNA de cadena simple
Positivo alto de anticuerpos anti-DNA de cadena simple
Puede ser difícil determinar la actividad de DNA de cadena simple en muestras que exhiban valores
positivos altos (p. ej. mayores de 2.0 DO) tanto para DNA de cadena simple como para DNA de cadena
doble. Cuando las muestras son altamente positivas la proporción puede llevar a conclusiones engañosas
ya que el ensayo ELISA está saturado con anticuerpos del paciente. Se recomienda que se testen de nuevo
las muestras altamente positivas tanto para el DNA de cadena simple como de cadena doble con una nueva
dilución de 1:4 y 1:20 (p.ej. 1:404 y 1:2020) en un Diluyente de Muestras HRP para determinar si la actividad
el DNA de cadena simple tiene lugar a un nivel superior que la del DNA de cadena doble. Los cálculos
anteriores deben llevarse a cabo con la misma dilución que la muestra.
Limitaciones del Procedimiento
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Como desde el punto de vista clínico, los anticuerpos IgG se consideran los más significativos, este
ensayo utiliza un conjugado específico de IgG. Los anticuerpos IgM de DNA de cadena simple no
medidos en este ensayo pueden competir con los anticuerpos IgG para ocupar las uniones libres. Si
se sospecha que existe una interferencia con anticuerpos IgM, vuelva a realizar el ensayo sobre la
muestra con una dilución menos concentrada de HRP. Un incremento pronunciado en el valor de la
muestra indica la presencia de anticuerpos IgM competidores. Este nuevo valor proporcionará una
idea más precisa sobre la cantidad de anticuerpos IgG de DNA de cadena simple que hay en la
muestra del paciente.
La presencia de inmunocomplejos u otros agregados de inmunoglobulinas en la muestra del
paciente puede producir un aumento de uniones inespecíficas y causar falsos positivos en este
ensayo.
Debido a que tanto los autoanticuerpos anti-DNA de cadena simple y algunos de doble cadena
pueden reaccionar con los antígenos de DNA de cadena simple del equipo, debe someter las
muestras del paciente al test de reactividad de DNA de doble cadena, y los resultados obtenidos
deberán tomarse en consideración a la hora de evaluar los niveles de DNA de cadena simple
Una variedad de factores puede tener influencia en los resultados del ensayo. Entre ellos podemos
destacar la exactitud y reproducibilidad de la técnica de pipeteo, el fotómetro utilizado para medir los
resultados y las variaciones respecto a los tiempos recomendados durante el ensayo. Una especial
atención a la consistencia en el método de trabajo es necesaria para obtener resultados correctos y
reproducibles.
El test ELISA para anticuerpos anti-DNA de cadena simple QUANTA LiteTM no funciona por sí solo.
Debe usarse en conjunción con el test ELISA para anticuerpos anti-DNA de cadena simple QUANTA
LiteTM de INOVA Diagnostics, Inc., para poder medir los anticuerpos anti-DNA de cadena simple. No
utilice ningún otro test para anticuerpos anti-DNA de doble cadena de una marca diferente, ya que la
calibración del ELISA para anticuerpos anti-DNA de cadena simple y el ELISA para anticuerpos antiDNA de doble cadena de INOVA se han ajustado de manera acorde.
Los resultados de este ensayo deben utilizarse conjuntamente con hallazgos clínicos y otras
pruebas serológicas.
La funcionalidad del ensayo no ha sido establecida para matrices diferentes del suero.
Valores Esperados
La capacidad del procedimiento QUANTA LiteTM ssDNA ELISA para detectar anticuerpos ssDNA se evaluó
comparándola con los tests ELISA disponibles en el mercado. Los resultados del test ELISA se
determinaron de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
Rango Normal
Se seleccionaron y sometieron al test QUANTA LiteTM ssDNA ELISA ciento diecisiete muestras de suero
normales escogidas al azar. De todas ellas, siete presentaban 69 o más unidades (un resultado positivo en
este sistema ELISA). De dichas siete muestras, cinco también dieron positivo en un método de referencia
existente en el mercado para anticuerpos anti-DNA de cadena simple y, por lo tanto, se eliminaron de la
población normal. La media del muestreo fue de 27, con una desviación estándar de 21. El rango del
muestreo oscilaba entre 12 y 186. La prueba indicó que la muestra normal media tiene una desviación
estándar 2.0 por debajo del punto de corte.
5
Sensibilidad y Especificidad Relativas
Treinta y dos muestras positivas de ANA escogidas al azar fueron sometidas a los tests de DNA de cadena
simple QUANTA LiteTM y de otro equipo existente en el mercado (Referencia). Dieciocho muestras dieron
positivo y doce negativo con ambos métodos. Dos de las muestras dieron positivo con el método de
referencia y negativo con el test de INOVA. Estas dos muestras también dieron negativo en otro test
realizado con otro equipo disponible en el mercado. Los resultados se resumen a continuación.
+
INOVA
+
18
2
Referencia
-
0
12
Sensibilidad relativa
Especificidad relativa
Eficiencia relativa
90%
100%
94%
Para investigar más a fondo la especificidad de la fase sólida del DNA de cadena simple, se sometió a test
una variedad de controles monoespecíficos con altas cantidades de autoanticuerpos con el equipo de DNA
de cadena simple QUANTA LiteTM. Dichos controles incluían controles de alto nivel de los siguientes equipos
ELISA QUANTA LiteTM de INOVA: Sm, RNP, SS-A, SS-B, Scl-70, Jo-1, Tiroides microsomal y Tiroglobulina,
Histona y Mitocondria M2. Todos esos controles dieron negativo en el ensayo de DNA de cadena simple.
Reactividad del DNA de cadena simple en varias enfermedades del tejido
conectivo
Número de pacientes
LES
Síndrome de Sjögren’s
Escleroderma
Polimiositis
Lupus inducido por fármacos
Artritis reumatoide
43
21
15
6
20
11
% Positivo
58
62
80
17
80
45*
* 2 de las 5 muestras positivas se encontraban en la frontera (entre 69 y 99 unidades).
Veinticinco de los pacientes con LES dieron positivo en el test de DNA de cadena simple. Seis de los casos
de LES que dieron DNA de cadena simple positivo eran equívocos con el método ELISA sensible al DNA de
doble cadena de INOVA. Trece de los 21 pacientes que padecían síndrome de Sjogren presentaban DNA
de cadena simple positivo. Los 21 pacientes dieron positivo para SS-A, SS-B o tanto para SS-A y SS-B con
el test ELISA (INOVA). Tres de las muestras de los pacientes con síndrome de Sjogren dieron positivo para
DNA de cadena simple a pesar de que dieron negativo con el método ELISA sensible al DNA de doble
cadena (INOVA). Doce de los quince pacientes con escleroderma que dieron positivo con el test Scl-70 lo
hicieron también para DNA de cadena simple, mientras que sólo 1 de los seis pacientes con polimiositis dio
positivo. Todos los pacientes con polimiositis dieron positivo para autoanticuerpos anti-Jo-1 con el test
ELISA (INOVA). El único paciente con polimiositis que dio positivo para DNA de cadena simple (112 U)
resultó no tener ningún indicio de anticuerpos anti-DNA de cadena simple con el método ELISA (INOVA).
Precisión y Reproducibilidad
La precisión y reproducibilidad del ensayo se midieron mediante seis replicados de muestras positivas
fuerte, moderado y negativas en cuatro ensayos separados. La reactividad media de los positivos fuerte fue
de 814 unidades, positivos moderado fue de 300 unidades y la de los negativos fue de 72. La desviación
estándar y el coeficiente de variación para cada muestra se resume a continuación.
Global
Intra ensayo
Inter ensayo
Negativo
SD
4.7
4.7
4.6
CV
6.6%
6.5%
6.3%
Positivo Fuerte
SD
CV
36
4.5%
35
4.3%
24
3.0%
6
Positivo Moderado
SD
CV
8.0
2.7%
6.8
2.7%
8.7
2.9%
Referencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
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Immunology 33: 167-239, 1982.
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erythematosus. Arthritis and Rheumatism 7: 379-390, 1964.
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Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories. Centers for Disease Control/National
Institute of Health, 2007, Fifth Edition
Fabricante:
INOVA Diagnostics, Inc.
9900 Old Grove Road
San Diego, CA 92131
United States of America
Representante Autorizado:
Medical Technology Promedt Consulting GmbH
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