ast/got - BioSystems Antioquia

COD 11830
1 x 50 mL
COD 11531
1 x 200 mL
COD 11567
1 x 500 mL
ASPARTATE AMINOTRANSFERASE
(AST/GOT)
COD 11561
1x1L
CONSERVAR A 2-8ºC
ASPARTATO AMINOTRANSFERASA
(AST/GOT)
IFCC
Reactivos para medir la concentración de AST/GOT
Sólo para uso in vitro en el laboratorio clínico
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
VALORES DE REFERENCIA
La aspartato aminotransferasa (AST o GOT) cataliza la transferencia del grupo amino del
aspartato al 2-oxoglutarato, formando oxalacetato y glutamato. La concentración catalítica se
determina, empleando la reacción acoplada de la malato deshidrogenasa (MDH), a partir de la
velocidad de desaparición del NADH, medido a 340 nm1,2,3.
AST
Aspartato + 2 – Oxoglutarato
Oxalacetato + Glutamato
MDH
Oxalacetato + NADH +H+
Malato + NAD+
CONTENIDO
COD 11830
A. Reactivo
B. Reactivo
COD 11531
COD 11567
COD 11561
1 x 160 mL
1 x 40 mL
1 x 400 mL
1 x 100 mL
1 x 800 L
1 x 200 mL
1 x 40 mL
1 x 10 mL
COMPOSICIÓN
Temperatura de reacción
Sin fosfato piridoxal, hasta4
Con fosfato piridoxal, hasta1,2
37ºC
30ºC
40 U/L = 0,67 µkat/L
50 U/L = 0,83 µkat/L
25 U/L = 0,42 µkat/L
30 U/L = 0,50 µkat/L
Las concentraciones en niños y recién nacidos son superiores a las de adultos. Se encuentran
valores ligeramente más elevados en hombres que en mujeres.
Estos valores se dan únicamente a título orientativo; es recomendable que cada laboratorio
establezca sus propios intervalos de referencia.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda el uso de los Sueros Control Bioquímica niveles I (cod. 18005, 18009 y 18042) y
II (cod. 18007, 18010 y 18043), para verificar la funcionalidad del procedimiento de medida.
Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de Calidad interno, así como
procedimientos de corrección en el caso de que los controles no cumplan con las tolerancias
aceptables.
A. Reactivo: Tris 121 mmol/L, L-aspartato 362 mmol/L, malato deshidrogenasa > 460 U/L,
lactato deshidrogenasa > 660 U/L, hidróxido sódico 255 mmol/L, pH 7,8.
Irritante (Xi): R36/38: Irrita los ojos y la piel. S26: En caso de contacto con los ojos, lávense
inmediata y abundantemente con agua y acúdase a un médico. S37/39: Úsense guantes
adecuados y protección para los ojos/la cara.
B. Reactivo: NADH 1,3 mmol/L, 2-oxoglutarato 75 mmol/L, hidróxido sódico 148 mmol/L, sodio
azida 9,5 g/L
Nocivo (Xn): R22: Nocivo por ingestión. R31: En contacto con ácidos libera gases tóxicos.
S28.1: En caso de contacto con la piel, lávese inmediata y abundantemente con agua. S45:
En caso de accidente o malestar, acuda inmediatamente al médico.
− Límite de detección: 1,1 U/L = 0,018 µkat/L
− Límite de linealidad: 500 U/L = 8,33 µkat/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la
muestra 1/10 con agua destilada y repetir la medición.
− Repetibilidad (intraserie):
CONSERVACIÓN
− Reproducibilidad (interserie):
Conservar a 2-8ºC.
Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se
conserven bien cerrados y se evite la contaminación durante su uso.
Indicaciones de deterioro:
−
Reactivos: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco inferior a 1,100 a 340
nm (cubeta de 1 cm).
REACTIVOS AUXILIARES
C. Reactivo (cod 11666): Fosfato de piridoxal 10 mmol/L. 5 mL.
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Reactivo de Trabajo: Vaciar el contenido del frasco B en el frasco A. Agitar suavemente. Si se
desea preparar otros volúmenes, mezclar en la proporción: 4 mL de Reactivo A + 1 mL de
Reactivo B. Estable 2 meses a 2-8ºC.
Reactivo de Trabajo con Fosfato de Piridoxal (Nota 1): Mezclar en la proporción: 10 mL de
Reactivo de Trabajo + 0,1 mL de Reactivo C (cod 11666). Estable 6 días a 2-8ºC.
EQUIPO ADICIONAL
− Analizador, espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a 30 ó 37ºC para
lecturas a 340 nm.
− Cubetas de 1 cm de paso de luz.
MUESTRAS
Suero recogido mediante procedimientos estándar.
La aspartato aminotransferasa en suero es estable 7 días a 2-8ºC.
PROCEDIMIENTO
1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a la temperatura de reacción.
2. Pipetear en una cubeta: (Nota 2)
Temperatura de reacción
Reactivo de Trabajo
Muestra
CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS
20
20
Concentración media
CV
n
38 U/L = 0,63 µkat/L
119 U/L = 1,98 µkat/L
5,9 %
3,8 %
25
25
Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar al
cambiar de instrumento o realizar el procedimiento manualmente.
CARACTERÍSTICAS DIAGNÓSTICAS
Las aminotransferasas catalizan la formación de ácido glutámico a partir de 2-oxoglutarato
mediante la transferencia de grupos amino. Las concentraciones más elevadas de AST se
encuentran en el hígado y el músculo cardíaco aunque también es abundante en el músculo
esquelético, riñones y páncreas.
Se encuentran concentraciones séricas elevadas de AST en hepatitis y otras enfermedades
hepáticas asociadas con necrosis: mononucleosis infecciosa, cirrosis, colestasis, carcinoma
metastásico del hígado, delirium tremens, así como después de la administración de algunos
medicamentos4,6.
También se encuentran concentraciones séricas elevadas de AST después de un infarto de
miocardio, en enfermedades del músculo esquelético (como la distrofia muscular progresiva),
en pancreatitis aguda, enfermedades hemolíticas y otras4,6.
El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un único ensayo,
sino que debe integrar los datos clínicos y de laboratorio.
NOTAS
30ºC
1. La IFCC recomienda la utilización de fosfato de piridoxal. En este caso, el tiempo de
preincubación antes de iniciar el período de mediciones, se debe aumentar a 2 minutos.
1,0 mL
50 µL
1,0 mL
100 µL
2. Estos reactivos pueden utilizarse en la mayoría de analizadores automáticos. Solicite
información a su distribuidor.
CÁLCULOS
Vt x 106
= U/L
ε x I x VS
El coeficiente de absorción molar (ε) del NADH a 340 nm es 6.300, el paso de luz (l) es 1 cm, el
volumen total de reacción (Vt) es 1,05 a 37ºC y 1,1 a 30ºC, el volumen de muestra (Vs) es 0,05
a 37ºC y 0,1 a 30ºC, y 1 U/L equivale a 0,0166 µkat/L. Se deducen los siguientes factores para
calcular la concentración catalítica:
M11531c-0519
n
1,4 %
1,5 %
− Sensibilidad analítica: 0,3 ∆mA⋅L/U⋅min = 0,00502 ∆mA⋅L/µkat⋅min
− Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias
sistemáticas significativas al ser comparados con reactivos de referencia. Los detalles del
estudio comparativo están disponibles bajo solicitud.
− Interferencias: La bilirrubina (20 mg/dL) no interfiere. La lipemia (triglicéridos 2 g/L) y la
hemólisis pueden afectar los resultados. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir5.
BIBLIOGRAFÍA
1.
Sociedad Española de Química Clínica, Comité Científico, Comisión de Enzimas. Método
recomendado para la determinación en rutina de la concentración catalítica de la
aspartato aminotransferasa en suero sanguíneo humano. Quim Clin 1987; 6: 235-239.
2.
Approved recommendations (1985) on IFCC Methods for the Measurement of Catalytic
Concentration of Enzymes. Part 2: IFCC Method for Aspartate Aminotransferase (EC
2.6.1.1). J Clin Chem Clin Biochem 1986; 24:497-510.
3.
Gella FJ, Olivella T, Cruz Pastor M, Arenas J, Moreno R, Durban R and Gómez JA. A
simple procedure for routine determination of aspartate aminotransferase and alanine
aminotransferase with pyridoxal phosphate. Clin Chim Acta 1985; 153: 241-247.
4.
Tietz NW. Clinical guide to laboratory tests, 2nd ed. Saunders Co, 1991.
La concentración de AST/GOT en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula general:
∆A/min
CV
38 U/L = 0,63 µkat/L
119 U/L = 1,98 µkat/L
37ºC
3. Mezclar e insertar la cubeta en el fotómetro. Poner el cronómetro en marcha.
4. Pasado 1 minuto (Nota 1), anotar la absorbancia inicial y efectuar nuevas lecturas cada
minuto durante 3 minutos.
5. Calcular el incremento de absorbancia por minuto promedio (∆A/min).
∆A/min x
Concentración media
37ºC
30ºC
x 3333 = U/L
x 55,55 = µkat/L
x 1746 = U/L
x 29,1 = µkat/L
5.
Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press, 1995.
6.
Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC Press,
1997.
BioSystems S.A. Costa Brava 30, Barcelona (Spain)
Quality System certified according to
EN ISO 13485 and EN ISO 9001 standards