biblioteca de farmacia y bioquimica

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
O
Q
UI
M
IC
A
ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
BI
“VALIDACIÓN DEL MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO PARA DETERMINAR
IA
Y
ALBUMINA SÉRICA EN EL ÁREA DE BIOQUÍMICA
FA
RM
AC
DEL LABORATORIO QUINTANILLA S.R.L.”
INFORME DE PRÁCTICAS PRE-PROFESIONALES
DE
PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL
BL
I
O
TE
CA
DE
QUÍMICO FARMACÉUTICO
Br. IRIGOIN LÓPEZ, SULI MAGALI
BI
AUTOR:
ASESOR:
Dr. ALVA PLASENCIA, PEDRO MARCELO
TRUJILLO – PERÚ
2012
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IC
A
Dedicatorias:
Q
UI
M
A Dios:
BI
O
Por el inmenso amor que me regalas, por
AC
IA
Y
bendecir a mis seres queridos y sobre
FA
RM
todo por la fortaleza necesaria
poder lograr
mis metas.
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
que me brindaste para
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A mis padres Manuel Irigoin y Emperatriz López:
Sabiendo que jamás encontraré la forma de
agradecer su constante apoyo y confianza,
IC
A
sólo espero que comprendan que mis,
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M
esfuerzos y logros han sido también
BI
O
suyos e inspirados en ustedes.
DE
FA
RM
AC
IA
Y
Con amor
O
TE
CA
A mis hermanos Víctor y José:
BL
I
Gracias por prestarme su ayuda cuando
BI
más lo he necesitado y apoyarme
en los momentos más
difíciles.
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Agradecimientos:
A Richard Cáceda y Cynthia Tello:
M
IC
A
Gracias por brindarme su confianza, su apoyo
O
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y por contribuir en la realización de
IA
Y
BI
este informe, muchas gracias
O
TE
CA
DE
FA
RM
AC
por todo.
BI
BL
I
Un sincero agradecimiento al
Dr. Pedro Alva Plasencia
por su apoyo y asesoramiento
en la realización del
presente trabajo.
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A la Dra. Judith castro Guzmán:
Gracias por la amistad, por su confianza, por
A
el interés y el valioso apoyo brindado, sin
Q
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M
IC
vuestra ayuda jamás hubiera realizado
O
y concluido satisfactoriamente
DE
FA
RM
AC
IA
Y
BI
este informe.
O
TE
CA
Al Dr. Ángel Quintanilla Lora:
BL
I
Gracias por la confianza, el apoyo y por la
BI
oportunidad brindada para realizar el
internado y aprender mucho de
todos ustedes.
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A mis amigos:
María, Doris, Jesús, compañeros, profesores y
IC
A
demás personas quienes de alguna
BI
O
Q
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M
manera colaboraron conmigo.
AC
IA
Y
Gracias por el cariño y apoyo moral que siempre
FA
RM
recibí de ustedes y con el cual he logrado
DE
culminar mi esfuerzo, terminando así
O
TE
CA
mi carrera profesional, que es para
agradecimiento.
BI
BL
I
mí la mejor prueba de cariño y
Muchas gracias…
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FA
RM
AC
IA
Y
BI
O
PRESIDENTE
Q
UI
M
Jesús G. Gallardo Meléndez
IC
----------------------------------------
A
JURADO EVALUADOR
-----------------------------------
MIEMBRO
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
Mayar L. Ganoza Yupanqui
----------------------------------Pedro M. Alva Plasencia
MIEMBRO
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PRESENTACIÓN
Señores miembros del jurado:
IC
A
Dando cumplimiento a las disposiciones establecidas en el Reglamento para la
Q
UI
M
obtención de GRADOS Y TÍTULOS DE LA FACULTAD DE FARMACÍA Y
O
BIOQUÍMICA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO, presento a
BI
vuestra consideración y elevado criterio el Informe de Prácticas Pre-profesionales,
DEL
Y
“VALIDACIÓN
MÉTODO
ANALÍTICO
IA
intitulado:
AC
ESPECTROFOTOMETRICO PARA DETERMINAR ALBUMINA SÉRICA
FA
RM
EN EL ÁREA DE BIOQUÍMICA DEL LABORATORIO QUINTANILLA
DE
S.R.L.” con el que pretendo obtener el Título de Químico Farmacéutico.
O
TE
CA
Dejo a vuestra consideración, señores miembros del jurado la calificación del
BI
BL
I
presente Informe de Prácticas Pre-profesionales.
Trujillo, noviembre del 2012
Suli Magali Irigoin López
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INDICE
M
IC
A
RESUMEN…………………………………………………....i
BI
O
Q
UI
ABSTRACT………………………………………..…………ii
IA
Y
I. INTRODUCCIÓN ................................................................... 1
AC
II. MATERIAL Y MÉTODO ..................................................... 5
FA
RM
III. RESULTADOS........................................................ ….….. 20
DE
IV. DISCUSIÓN ......................................................................... 24
O
TE
CA
V. CONCLUSIONES ................................................................ 28
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.............................. 29
BI
BL
I
ANEXOS ..................................................................................... 33
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RESUMEN
La finalidad de este trabajo fue demostrar que el Método espectrofotométrico para la
Cuantificación de albúmina utilizado en el área de Bioquímica del Laboratorio
Quintanilla S.R.L. cumple con los requisitos establecidos en la norma ISO/IEC/NTC
IC
A
17025 que un laboratorio requiere para ser reconocido por su competencia técnica para
M
ejecutar análisis clínicos de confiabilidad y de acuerdo a estándares internacionales. En
Q
UI
el proceso de validación de cada uno de los procedimientos se determinaron los valores
BI
O
para los test de: Linealidad, Precisión, Exactitud, Límite de Cuantificación y Robustez,
IA
Y
utilizando estándar de albúmina de 5,4 g/dL; 4,05 g/dL; 2,7 g/dL; 2,025 g/dL y 1,35
AC
g/dL. En los parámetros ensayados, se encontró que el método es lineal con un r =
FA
RM
0,997607 y t Student para el test de linealidad = 52,020983 > 2,16, tiene precisión,
encontrándose para repetibilidad un C.V. < 2 % (1,76 %) y para precisión intermedia un
DE
C.V. < 2 % (1,11 %), se encontró un Límite de Cuantificación de 0,48 g/dL, siendo el
O
TE
CA
método también robusto con respecto a las variables de analistas, tiempo de reacción y
temperatura de reacción. En conclusión, se aportó y registró la evidencia necesaria para
BL
I
demostrar que el método validado cumple con lo establecido por las políticas de calidad
BI
del laboratorio y aseguran que el método es adecuado para su aplicación en el análisis de
Albúmina, bajo las condiciones particulares y requerimientos del Laboratorio Quintanilla
S.R.L.
Palabras claves: Validación, Albúmina, Linealidad, Precisión, Robustez, Detección,
Cuantificación.
i
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ABSTRACT
The finality of this work was to demonstrate that the method spectrophotometric by
quantification of albumin used in the area of Biochemistry Laboratorio Quintanilla S.R.L.
meets the requirements of ISO / IEC / NTC 17025 requires a laboratory to be recognized
IC
A
for technical competence in testing clinical reliability and according to international
M
standards. In the process of validation of each of the values were determined procedures
Q
UI
for testing linearity, precision, accuracy, limit of quantification and robustness, using
BI
O
standard albumin 5,4 g / dL; 4,05 g / dL; 2,7 g / dL; 2,025 g / dL and 1,35 g / dL. In the
IA
Y
parameters tested, it was found that the method is linear with an r = 0,997607 Student t test
AC
for linearity = 52,020983> 2,16 is precision repeatability found for a C.V <2% (1,76%)
FA
RM
and intermediate precision a C.V <2% (1,11%) found a limit of quantification of 0,48 g /
dL, the method is also robust with respect to the variables of analysts, reaction time and
DE
reaction temperature. In conclusion, it was contributed and recorded the evidence
O
TE
CA
necessary to prove that the validated method complies with the policies of laboratory
quality and ensure that the method is suitable for application in the analysis of albumin,
BI
BL
I
under the particular conditions and requirements Laboratorio Quintanilla S.R.L.
Keywords: Validation, Albumin, linearity, accuracy, robustness, detection, quantification.
ii
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I.
INTRODUCCIÓN
Hoy en día todos los productos y servicios de una empresa tienen que asegurar la
calidad esperada, por lo que en lo que respecta a Laboratorios como son los clínicos
deben implementar las Buenas Prácticas de Laboratorio (BPL), normas que permiten
asegurar resultados confiables.
IC
A
La finalidad de un laboratorio de análisis clínicos es producir resultados
Q
UI
M
relevantes y confiables para la toma de decisiones, estos datos deben ser obtenidos con
O
técnicas analíticas confiables, precisas y adecuadas para su fin. Esto, no es tan fácil de
BI
lograr en la realidad, como se ha demostrado en múltiples estudios entre laboratorios,
IA
Y
que muestran que laboratorios diferentes, utilizando una misma metodología analítica
AC
y personal experimentado, analizando una misma muestra, obtienen resultados con
FA
RM
variabilidad.1, 2
DE
Para poder disminuir esta variabilidad, en el mundo se constituyeron asociaciones y
O
TE
CA
agrupaciones con en el fin de poder estandarizar estos métodos, dando origen a los
principios de las “Buenas Prácticas”, dentro de las cuales surgieron los principios de
BL
I
las Buenas Prácticas de Laboratorio, el cual contiene normatividades generales a
BI
seguir respecto a la calidad de los procedimientos. Dentro de esto, el personal que
compone el laboratorio deben estar capacitados, ser proactivo y con responsabilidades
bien definidas, quienes, así como los resultados obtenidos, están bajo un control
riguroso mediante los controles de calidad, los programas de aseguramiento de la
calidad y gestión de calidad.2, 3
Dentro de las BPL, se establecen las normas para la Validación, ya sea de
métodos analíticos o procesos; las validaciones son Sistemas de Aseguramiento de la
Calidad mediante los cuales se establecen evidencias documentadas para demostrar
1
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que un proceso o método analítico conducirá, con un alto grado de seguridad a la
obtención de resultados precisos y exactos dentro de las especificaciones y los
atributos de calidad previamente establecidos. En otras palabras, proporciona un alto
grado de confianza de que un proceso o método analítico específico, producirá en
forma consistente un resultado que cumpla con sus especificaciones predefinidas. 2, 3,4,
5, 6,
IC
A
Dentro del complicado Sistema de Gestión de Calidad, la validación de métodos
Q
UI
M
analíticos constituye una etapa fundamental, que aporta a la demostración de las
O
competencias necesarias para llegar a generar resultados confiables y precisos, sin
BI
embargo el Sistema de Gestión de Calidad debe ser aplicado a todo el proceso analítico
IA
Y
incluyendo todas sus fases tanto pre analítica, analítica como post analítica,
AC
constituyendo la validación de los métodos sólo una parte de todo este complejo sistema
FA
RM
proceso.2, 4, 5, 7
DE
La validación dependiendo de las características del método puede ser: método
O
TE
CA
normalizado, ejecutado tal y como se establece en el documento; método normalizado
modificado, en el cual se hayan realizado cambios que puedan tener repercusión sobre
BL
I
la calidad de los resultados; por ejemplo cambio en la metodología de extracción,
BI
cambio en la matriz, extensión del rango, equipamiento nuevo, etc; y método interno,
elaborado por el laboratorio o sacado de la bibliografía pero sin datos de performance
del método.8, 9
La Validación debe aplicarse cuando se requiere incorporar una técnica nueva al trabajo
de rutina del laboratorio, también cuando se comparan dos metodologías o bien cuando
se está desarrollando un método o técnica nueva, en este sentido se está realizando la
incorporación de una técnica nueva al trabajo de rutina del laboratorio y por tanto es
necesario realizar la validación. 10
2
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El producto de un Laboratorio Clínico son los resultados que se emiten de los
diferentes análisis clínicos, los cuales tienen que ser validados, considerando el
potencial riesgo que traería al informarse resultados no reales.
Dentro los análisis que se desarrollan en un Laboratorio Clínico, se encuentra el de
Albúmina Sérica; la albúmina sérica es el principal contribuyente de las proteínas
totales plasmáticas. Entre sus múltiples funciones se pueden mencionar: Transporte de
A
una amplia variedad de sustancias como hormonas esteroides, ácidos grasos, bilirrubina,
M
IC
catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso; mantenimiento de la
Q
UI
presión coloidosmótica, que estaría relacionado con su bajo peso molecular y su gran
BI
O
carga neta; la albúmina fija y desdobla varios compuestos, como por ejemplo el calcio y
Y
ácidos grasos de cadena larga. Además, la albúmina es capaz de fijar iones de metales
AC
IA
pesados tóxicos así como numerosos fármacos, por lo cual bajas concentraciones de
FA
RM
albúmina en sangre tienen graves efectos farmacocinéticos. Los aumentos anormales de
albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con la deshidratación que
DE
provoca la reducción en el contenido del agua plasmática.10, 11
O
TE
CA
La hipoalbuminemia ocurre en condiciones patológicas tales como pérdida
excesiva de proteínas en el síndrome nefrótico, desnutrición, infecciones prolongadas,
BL
I
quemaduras severas. En casos graves de hipoalbuminemia, la concentración plasmática
BI
de la albúmina máxima alcanza 2,5 g/dL (380 μmol/L). Debido a la baja presión
osmótica en el plasma, el líquido pasa de los capilares sanguíneos al tejido (edema). La
determinación de la albúmina permite supervisar a pacientes bajo dieta controlada y
constituye un test excelente del funcionamiento hepático.12, 13
Actualmente, en el área de Bioquímica del Laboratorio Quintanilla S.R.L., para
la cuantificación de Albúmina se utilizan kits de reactivos de marca WIENER LAB el
cual contiene: El reactivo de trabajo para la cuantificación de albúmina sérica, que se
3
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utiliza mediante coloración por punto final; dentro de la técnica descrita, se ha realizado
la siguiente modificación: la disminución en forma proporcional de la cantidad de
reactivo y muestra, esta modificación tiene como objetivo
conocer la utilidad de
trabajar con muestras pequeñas, en pacientes pediátricos y hospitalizados, ya que
muchas veces se requiere procesar mayor número de ensayos y la obtención de más
A
muestra no siempre es la más óptima.
M
IC
Conociendo la importancia del proceso de validación dentro del Sistema de
Q
UI
Gestión de Calidad y conociendo también que valores erróneos traen como
BI
O
consecuencia un mal diagnóstico es que se decidió realizar éste trabajo de investigación;
Y
para lo cual se planteó la siguiente interrogante:
AC
IA
¿Cumplirá con los criterios de validación el método espectrofotométrico para la
FA
RM
cuantificación de albúmina sérica utilizando el kit de reactivos WIENER LAB
DE
empleado en el área de Bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.?

O
TE
CA
Los objetivos a alcanzar fueron:
Validar el método espectrofotométrico para la cuantificación de albúmina
BL
I
sérica utilizando el kit de reactivos WIENER LAB empleado en el área de
BI
Bioquímica del Laboratorio Quintanilla S.R.L.

Determinar los parámetros de validación del método espectrofotométrico para
la cuantificación de albúmina sérica: linealidad, exactitud, precisión, límite de
cuantificación y robustez, utilizando el kit de reactivos WIENER LAB
empleado en el área de Bioquímica del Laboratorio Quintanilla S.R.L.
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II. MATERIALES Y MÉTODOS
 MATERIALES
Muestra
 Suero patrón: solución de albúmina y globulinas en estado nativo
A
con título conocido de proteínas totales (Biuret o Kjeldhal): 9,6 g/dL
Q
UI
M
IC
y albúmina (Unión BCF): 5,40 g/dL.
BI
O
Materiales de Laboratorio
Baño maría Tomas.

Cronómetro

Espectrofotómetro Stat Fax 3300.

Gradilla de plástico

Guantes de látex

Micropipetas regulables de 5 µL a 10 µL (Pipet4u) y de 100
O
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
Y

µL – 1000 µL (TECO DIAGNOSTICS).
Puntas para micro pipetas hasta 200 µL y hasta 1000 µL

Tubos de ensayo.
BI
BL
I

Reactivos
 Reactivo BCF: solución de 3,3’,5,5’-tetrabromocresolsulfonftaleina
(empolioxietilenlaurileter).
5
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 MÉTODO
Fundamento de la reacción
La albúmina reacciona específicamente con la forma aniónica de la 3,3',
5,5’-tetrabromocresolsulfonftaleina (BCF), en presencia de un exceso de
colorante, en medio tamponado a pH 3,9. El aumento de absorbancia a 625
nm respecto del blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de
M
IC
A
albúmina presente en la muestra.13
Q
UI
Condiciones de reacción:
BI
O
- Longitud de onda: 625 nm en espectrofotómetro.
Y
- Temperatura de reacción: 15 °C -28°C.
AC
IA
- Tiempo de reacción: 10 minutos
FA
RM
- Volumen de muestra: 10 µL
- Volumen de Reactivo BCF: 3.5 mL
O
TE
CA
DE
- Volumen final de reacción: 3.51 mL
Procedimiento
B
S
D
Suero Patrón
-
10 µL
-
Muestra
-
-
10 µL
Reactivo BCF
3,5 mL
3,5 mL
3,5 mL
BI
BL
I
En tres tubos marcados B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:
Mezclar con varilla. Mantener los tubos entre 15 °C y 28°Cdurante 10
minutos. Leer en espectrofotómetro a 625 nm llevando a cero con el
blanco de reactivo.
6
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Estabilidad de la mezcla de reacción final:
El color es estable 20 minutos por lo que la absorbancia debe
ser leída dentro de ese lapso.13
La modificación que se realizó fue la disminución en forma proporcional de
la cantidad de reactivo y muestra a utilizar.
S
D
Suero Patrón
-
5 µL
-
Muestra
-
-
5 µL
Reactivo BCF
1,75 mL
1,75 mL
1,75 mL
Q
UI
M
IC
A
B
Para determinar si el método modificado, empleado en la cuantificación de
BI
O
Albúmina sérica cumple con los criterios de validación, se evaluaron los
AC
IA
Y
siguientes test:
FA
RM
Linealidad
Para evaluar la linealidad se hizo uso de un estándar o suero patrón que
DE
viene con el kit de reactivos PROTI 2 de concentración para
O
TE
CA
albúmina de 5.4 g/dL, con el cual se realizó diluciones cuyas
concentraciones fueron de 4,05g/dL, 2,70g/dL, 2,025g/dL, 1,35 g/dL,
BL
I
las cuales fueron analizadas cada uno por triplicado y por un mismo
BI
analista.
Precisión
Para determinar la precisión del método, se evaluó su repetibilidad y su
reproducibilidad de la manera que se describe a continuación:
7
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Repetibilidad:
Se realizó un número de 10 determinaciones de la dilución de
4,05g/dL, por un mismo analista, el mismo día, con los mismos
reactivos y los mismos instrumentos.
Precisión Intermedia:
Para su determinación se empleó un estándar de 4,05g/dL, el cual
IC
A
se analizó en dos días diferentes, por dos analistas en un número
Q
UI
M
de tres determinaciones; por analista y por día.
BI
O
Exactitud
Y
Se evaluó a través de un análisis repetitivo de 3 concentraciones: 5,4
AC
IA
g/dL, 4,05 g/dL y 1,35 g/dL. El análisis de cada uno de estos
FA
RM
estándares se llevó a cabo por triplicado.
DE
Límite de Cuantificación
O
TE
CA
Se determinó mediante el análisis repetitivo de un blanco. El blanco
utilizado fue el reactivo para la determinación de albúmina sérica
BL
I
del kit de reactivo PROTI 2 y se llevó a cabo 10 determinaciones.
BI
Robustez
La robustez se determinó de acuerdo al diseño de Youden & Steiner,
siendo las variables evaluadas: Temperatura de reacción, analista (2
analistas) y tiempo de reacción.1, 4, 6,14
Cada una de las determinaciones a realizar se efectuó empleando la técnica
descrita en el inserto del kit de reactivos de la marca provista por el
fabricante WIENNER LAB.
8
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 ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE LOS RESULTADOS1, 4, 6, 14, 15, 16, 17
LINEALIDAD
Cálculos para el test de Regresión
Fórmula empleada para el cálculo de la Pendiente o Coeficiente de
Regresión “b”.

n
IC
M
Q
UI
2
n
 x 2
Y
BI
x
 x y
O
b
 xy 
A
La pendiente b fue determinada empleando la fórmula siguiente:
AC
IA
Donde:
FA
RM
x= Concentración de las muestras utilizadas.
y= Absorbancias obtenidas en las lecturas de las muestras
O
TE
CA
DE
n= Número de determinaciones.
Fórmula empleada para el Cálculo del Intercepto “a”
BI
BL
I
Su determinación se hizo mediante la siguiente fórmula:
a
y  b x
n
9
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Ecuación de la Recta de Regresión
Con los datos obtenidos en este procedimiento se procedió a elaborar
la recta de regresión, la cual tuvo la siguiente fórmula:
y  bx  a
Donde:
M
IC
estándares y muestras utilizadas.
A
y = Absorbancias obtenidas a partir de las lecturas de los
Q
UI
x = Concentración de las muestras utilizadas.
BI
O
b = Pendiente de la recta de regresión.
AC
ordenadas.
IA
Y
a= Intercepto de la regresión lineal con el eje de
FA
RM
Cálculo del Coeficiente de Correlación “r”
O
TE
CA
r 
DE
Para su determinación se empleó la siguiente fórmula:
y
2
 y 

2
2

n




BL
I


x2



x
 xy   n
 x    y

 
n
BI
Cálculo del Coeficiente de Determinación “r2”
Se determinó mediante la siguiente fórmula:
r 2  (r )2
10
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Cálculos efectuados en el Test de Linealidad de la Pendiente b
Cálculo del valor de la varianza residual “ S 2y , x ”
Se la halló a través de la siguiente fórmula:
y  ay  bxy

2
2
y,x
S
n 2
IC
A
Donde:
M
b = Pendiente de la recta de regresión.
Q
UI
a = Intercepto con el eje de ordenadas.
BI
O
n = # de determinaciones.
IA
Y
Cálculo del valor de la varianza de la pendiente b “ S 2b ”
FA
RM
AC
Se determinó empleando la fórmula siguiente:
S 2y , x
S 
x
2

( x ) 2
n
O
TE
CA
DE
2
b
Cálculo del valor de la desviación estándar de la pendiente b “ S b ”
BL
I
Se obtuvo a partir del valor de la varianza de la pendiente b ( S 2b )
BI
mediante la siguiente fórmula:
Sb 
S 2b
11
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Fórmula empleada para determinar el Intervalo de Confianza de
la Pendiente “b”
Se empleó la siguiente fórmula:
Int.Conf .  b  tSb
Donde:
A
b = Pendiente.
M
IC
t = ttab para un nivel de significancia del 95% y n-2 grados
Q
UI
de libertad.
IA
Y
BI
O
S b = Desviación estándar de la pendiente.
AC
Cálculos efectuados en el Test de Proporcionalidad
FA
RM
Cálculo de la Varianza del Término Independiente “ S a2 ”
S S
2
a
2
b
x

2
n
BL
I
O
TE
CA
DE
Se utilizó la siguiente fórmula:
BI
Fórmula empleada para determinar la Desviación Estándar del
Término Independiente “Sa”
Para determinar la Desviación Estándar se utilizó la siguiente fórmula:
Sa 
S a2
12
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Fórmula empleada para determinar el Intervalo de Confianza del
Intercepto “a”
Para determinarla se aplicó la siguiente fórmula:
Int.Conf.  a  tSa
Donde:
A
a = Intercepto.
M
IC
t = ttab para un nivel de significancia del 95% y n-2 grados
Q
UI
de libertad.
BI
O
S a =Desviación estándar del intercepto
IA
Y
Cálculo del valor de texp
FA
RM
AC
El valor de texp se determinó empleando la siguiente fórmula:
b
Sb
DE
t exp 
O
TE
CA
Donde:
S b = Desviación estándar de la pendiente b.
BI
BL
I
b = Pendiente de la recta de regresión.
El método será lineal si, para la pendiente (b) texp es mayor al ttab y
para el intercepto (a) texp es menor al ttab, con el 95% de confianza
y n-2 grados de libertad y el coeficiente de correlación (r) es igual
o mayor que 0,990.
13
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PRECISIÓN
Repetibilidad
Determinación de las Concentraciones Prácticas a partir de las
absorbancias. Los valores de las concentraciones prácticas se
obtuvieron al empelar la fórmula elaborada a partir de la ecuación
IC
M
ya
b
Q
UI
x 
A
de la recta obtenida en la curva de calibración:
BI
O
Donde:
Y
x = Concentración práctica
AC
IA
y = Absorbancia
FA
RM
b = Pendiente de la recta de regresión.
ordenadas.
O
TE
CA
DE
a = Intercepto de la regresión lineal con el eje de
BI
BL
I
Determinación de la Media “ x ”
Se utilizó la fórmula siguiente:
n
x 

xi
i 1
n
Donde:
x  Media
n = Número de determinaciones
14
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Determinación de la Desviación Estándar “s”
Para hallarla se empleó la fórmula siguiente:
2


x
x

 i
n
S
i 1
n 1
Determinación del Coeficiente de Variación (CV)
M
S * 100
x
Q
UI
CV 
IC
A
Se hizo uso de la fórmula descrita a continuación:
BI
O
Donde:
IA
Y
s = Desviación Estándar
AC
x = Media
FA
RM
Determinación de los Intervalos de Confianza Individual y de la
Media.
Intervalos de Confianza Individual
x  t tab * S
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
Se hicieron uso de las siguientes fórmulas:
Donde:
x
Media
ttab= Valor de t tablas para un 95% de confianza y
n-1 grados de libertad.
s = Desviación estándar
15
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Intervalo de Confianza de la Media
x  t tab *
s
n
Donde:
IC
A
x  Media
M
ttab= Valor de t tablas para un 95% de confianza y
Q
UI
n-1 grados de libertad.
BI
O
s = Desviación Estándar
FA
RM
Precisión Intermedia:
AC
IA
Y
n = Número de determinaciones.
Los valores de concentraciones prácticas, de la media, de la
DE
desviación estándar, del coeficiente de variación y de los
O
TE
CA
Intervalos de Confianza se obtuvieron de manera idéntica que en
el test de repetibilidad.
BL
I
El método será preciso si en los procedimientos de Repetibilidad y
BI
Precisión Intermedia se obtiene un coeficiente de variación menor
al 2%.
16
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EXACTITUD
Cálculo de las Concentraciones Prácticas a partir de las
absorbancias.
Las concentraciones fueron obtenidas mediante la siguiente fórmula,
obtenida a partir de la curva de calibración:
A
ya
b
IC
x 
M
Donde:
BI
O
Q
UI
x = Concentración práctica
y = Absorbancia
Y
Cálculo del Porcentaje de Recuperación
AC
IA
En la determinación de la exactitud del método los valores de las
siguiente forma:
FA
RM
concentraciones se expresaron como porcentaje de recuperación de la
cc. Pr áctica
 100
cc.Teórica
O
TE
CA
DE
% Re cuperación 
Cálculos efectuados en la aplicación de la Prueba t Student
BI
BL
I
Para la aplicación de esta prueba fue necesaria la determinación
del valor de texp mediante la siguiente fórmula:
texp 
100  % R n
CV
Donde:
% R = Valor del promedio de los % de Recuperación.
n = Nº de determinaciones.
C.V = Coeficiente de variación.
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El método será exacto si el valor de ttab es mayor que el texp, al
95% de confianza y n-1 grados de libertad en la aplicación de la
t Student.
LÍMITE DE CUANTIFICACIÓN
Se obtuvo mediante la aplicación de la siguiente fórmula:
A
K  Sbl
b
IC
C LQ 
Q
UI
M
Donde:
O
CLQ =Límite de cuantificación.
BI
K = Constante (10 para el límite de cuantificación).
AC
IA
Y
b = Pendiente obtenida en el test de linealidad.
FA
RM
ROBUSTEZ
Se empleó el diseño de Youden & Steiner, el cual se muestra en el
1
2
3
4
5
6
7
8
A/a
A
A
A
A
a
a
a
a
B/b
B
B
b
b
B
B
b
b
C/c
C
c
C
c
C
c
C
c
s
t
u
v
w
x
y
z
BL
I
Factor / Prueba
BI
O
TE
CA
DE
siguiente esquema:
Resultado
Siendo:
 A: Temperatura de reacción: 20 ° C.
 a: Temperatura de reacción: 37 ° C.
 B: Analista 1
 b: Analista 2
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 C: Tiempo de Reacción: 5 minutos.
 c: Tiempo de Reacción: 25 minutos.
 s, t, u, v, w, x, y, z: concentraciones de Albúmina determinadas en
cada prueba.
A continuación se procederá a determinar las diferencias para cada
factor, empleando la fórmula siguiente:
IC
A
VA = 1/4 (s+t+u+v) - (w+x+y+z)
Q
UI
IA
Y
BI
Vx  S 2
O
VC = 1/4 (s+u+w+y) - (t+v+x+z)
M
VB = 1/4 (s+t+w+x) - (u+v+y+z)
AC
Donde:
FA
RM
VA, VB, VC =Valor de las diferencias existentes entre las variables
DE
estudiadas.
O
TE
CA
Si V x  S 2 y la diferencia no es significativa, el método será
robusto para esa variable. (S = desviación estándar hallada en el test
BI
BL
I
de repetibilidad).
19
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III. RESULTADOS
Cuadro 1: Parámetro de linealidad en la validación del método espectrofotométrico
para determinar albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla
S.R.L.
Criterio de
aceptación
Resultado
Coeficiente de correlación (r)
r > 0,990
0,997607
Coeficiente de determinación
(r2)
r2> 0,990
Conformidad
Conforme
Q
UI
M
IC
A
Estimadores estadísticos
Conforme
Criterio de
aceptación
DE
Test de verificación de la
pendiente
L.C no incluye el
cero
texp>ttabla
O
TE
CA
a. Límite
de
confianza (LC)
Conformidad
L.S= 0,078183
L.I= 0,071949
Conforme
texp= 52,021
ttabla= 2,160
BL
I
b. Test de t
Resultado
FA
RM
AC
Estimadores estadísticos
IA
Y
BI
O
0,9952
BI
Test de verificación de la
variable independiente
a. Límite
de
confianza (LC)
L.C incluye el
cero
texp < ttabla
b. Test de t
L.S= 0,014207
L.I= -0,07166
Conforme
texp= 0,7115
ttabla= 2,160
ttabla: 2,160 para: α = 0,05 y n-2 grados de libertad
Límite inferior (L.I)
Límite superior (L.S)
20
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LINEALIDAD
0.450
IC
A
y = 0.0751x + 0.0035
R² = 0.9952
M
0.400
UI
BI
O
Q
0.300
Y
0.250
AC
I
A
0.200
0.150
M
S
A
I
C
N
A
V
R
O
S
B
A
0.100
FA
R
ABSORBANCIAS
0.350
TE
CA
1.000
2.000
3.000
4.000
5.000
6.000
CONCENTRACION TEORICA
BI
BL
IO
0.000
0.000
DE
0.050
Gráfico 1: Recta de regresión obtenida en el test de linealidad en la validación del método espectrofotométrico para determinar
albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
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Cuadro 2: Parámetro de precisión en la validación del método espectrofotométrico para
determinar albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Estimadores estadísticos
Criterio de
Resultado
Conformidad
aceptación
C.V. < 2 %
1,759 %
Conforme
Precisión Intermedia
C.V. < 2 %
1,1051 %
Conforme
IA
Y
BI
O
Q
UI
M
IC
A
Repetibilidad
AC
Cuadro 3: Parámetro de exactitud en la validación del método espectrofotométrico para
ttabla
Resultado
Conformidad
2,306
1,35 < 2,306
Conforme
aceptación
t exp< t tab
BI
BL
I
t Student
DE
estadísticos
Criterio de
O
TE
CA
Estimadores
FA
RM
determinar albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
22
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Cuadro 4: Límite de cuantificación en la validación del método espectrofotométrico para
determinar albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Resultado
Límite de cuantificación
0,480 g / dL
Q
UI
M
IC
A
Parámetro
O
Cuadro 5: Parámetro de robustez en la validación del método espectrofotométrico para
Criterio de
estadísticos
aceptación
Factores
FA
RM
Estimadores
AC
IA
Y
BI
determinar albumina sérica en el área de bioquímica del Laboratorio Quintanilla S.R.L.
DE
Temperatura de
reacción
O
TE
CA
Vx  S 2
Analista
Tiempo de
reacción
Conformidad
0,027 < 0,109
0,008 < 0,109
Conforme
0,004 < 0,109
BI
BL
I
Vx
Resultado
23
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IV. DISCUSION
En el presente trabajo se desarrolló la validación del método analítico para determinar
Albumina sérica en el Área de Bioquímica del Laboratorio Quintanilla S.R.L. Los test a
evaluar en un estudio de validación de un método dependerán de la naturaleza del mismo.
Para determinar si el método empleado en la cuantificación de Albúmina sérica cumple con
IC
A
los criterios de validación, se evaluaron los siguientes test: Linealidad, precisión, exactitud,
Q
UI
M
límite de cuantificación y robustez.
O
Para evaluar el parámetro de linealidad, los resultados deben hallarse mediante
Y
BI
métodos estadísticos adecuados como el cálculo de una línea de regresión por el método de
IA
los mínimos cuadrados, la intersección con el eje de ordenadas o variable independiente
FA
RM
AC
(b), la pendiente de la línea de regresión (m) y la suma de los cuadrados residuales.18
En el cuadro Nº 01 se presenta el coeficiente de determinación (r2 = 0.9952), del que se
DE
deriva el coeficiente de correlación “r” = 0,997607que nos indica el grado de relación
O
TE
CA
entre la concentración (x) y la respuesta (y), el cual su valor máximo es cercano a 1. Según
AEFI, Bioanalytical Methods Validation e ICH establecen para el test de Linealidad, que el
BL
I
coeficiente de correlación debe ser mayor o igual r > 0,990. Los valores obtenidos suponen
BI
una correlación aceptable con una probabilidad superior al 99,90%.19, 20
Sin embargo, un valor del coeficiente de correlación muy cercano a la unidad no puede
tomarse como indicador absoluto de linealidad, sino que además se tiene que demostrar
mediante el empleo de una prueba parar la linealidad, siendo uno de los más confiables la
prueba de t Student, la cual aplicada al test, tal como se muestra en la cuadro Nº 1, para
que cumpla con los criterios de aceptabilidad según los organismos internacionales: texp>
ttab, y valor del texp (52.020983) obtenido es mucho mayor al ttab (2,16) (n-2= 13 grados de
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libertad) con un nivel de confianza del 95 %, con esto nos demuestra que el método
cumple con el test de linealidad.
Para el test de Linealidad, en el gráfico Nº 01 se observa en la ecuación resultante del test
de Linealidad para hallar las concentraciones, La pendiente “b” está relacionada con la
sensibilidad del método, de forma que a mayor pendiente, mayor sensibilidad (respuesta
A
del método frente a los cambios de la concentración del analito), de modo que, en este
Q
UI
M
IC
caso, puede diferenciar concentraciones al encontrar lecturas cercanas.4
El término “a” independiente u ordenada en el origen, es la intersección de la recta con el
BI
O
eje de ordenadas y es indicativo del error sistemático si es que no pasa cerca del origen de
IA
Y
coordenadas; en éste caso existe un error sistemático por exceso5. En el test de
AC
proporcionalidad vemos que los límites de confianza no incluyen al cero, lo que significa
FA
RM
que el método analítico presenta sesgo; como ya lo mencionamos, éste es por exceso.4
DE
En lo que respecta al test de precisión, que es el grado de dispersión de los datos analíticos
O
TE
CA
respecto a su valor medio, se evaluó la repetibilidad como una medida de ésta, la cual se
define como el grado de concordancia entre los valores de una serie repetida de
BL
I
procedimientos analíticos efectuados sobre una muestra homogénea por un mismo analista
BI
bajo las mismas condiciones, es decir es la capacidad del método para dar resultados
semejantes cuando se aplica repetidamente en una muestra. La precisión se expresa
matemáticamente por el coeficiente de variación, AEFI establece que el coeficiente de
variación sea menor que 2 %. En el caso de la determinación de la repetibilidad, tal como
se muestra en el cuadro Nº 2 se obtuvo un coeficiente de variación igual a 1,759 %, siendo
menor al valor máximo del criterio de aceptación.4, 6, 21
25
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Referente a la precisión intermedia, el cual se realizó en diferentes días, en el cuadro Nº 02,
se presenta un C.V.= 1.1051 % y lo establecido por la AEFI que sea menor al 2%, la
precisión intermedia se obtiene cuando dentro del mismo laboratorio se varían uno o más
factores entre cada uno de los procedimientos.4, 19
La exactitud es la capacidad del método analítico para proporcionar resultados lo más
A
cercanos posibles al valor teórico, la falta de exactitud puede ser por defecto o por exceso.
M
IC
Las desviaciones por exceso suelen producirse cuando existen interferencias analíticas y la
Q
UI
selectividad del método no es la adecuada, los resultados finales son superiores a los
BI
O
verdaderos. En éste caso debería modificarse el método para hacerlo más selectivo. Las
Y
desviaciones por defecto suelen darse en métodos analíticos muy laboriosos, con varias
FA
RM
disminución de la recuperación.4, 14,16
AC
IA
fases, extracciones, purificaciones, etc., que se traducen inevitablemente en una
Para determinar la exactitud, se obtuvo el porcentaje de recuperación media el cual fue de
DE
99.0382%, no existiendo diferencia significativa con el 100 %, En el cuadro Nº 03 se
O
TE
CA
observa un texp = 1.35 que es menor al ttablas = 2,306, teniendo como criterio de aceptación
BL
I
que el ttablas debe de ser mayor al texp , con esto el método cumple con el test de exactitud.4
BI
Límite de cuantificación es la mínima concentración de un analito que podemos determinar
con una precisión y exactitud adecuadas, se expresan como concentración del analito. En
el cuadro Nº 04 se observa el Límite de cuantificación de 0.480g/dL, siendo resultados
óptimos y muy aceptados.4, 6
En el caso del parámetro robustez, según AEFI, es definida como el grado de influencia
que cambios en las condiciones analíticas ejercen sobre la fiabilidad del método analítico.
Es importante evaluarla porque permite localizar factores que originan fluctuaciones y los
26
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que necesitan una atención especial por cuanto son origen de variaciones significativas en
los resultados. En el estudio, los cambios a los que fue sometido el método analítico, en
concentración de 4.05 g/dL fueron: la variación de analistas, tiempo de reacción (5 minutos
y 25 minutos) y temperatura de reacción (20 oCy 37oC). Se consideran como aceptables
aquellos valores absolutos de las diferencias obtenidas de acuerdo al diseño de Youden &
Steiner que sean menores o iguales al valor del producto de su desviación estándar
IC
A
multiplicado por 2, en el cuadro Nº 05 se observa que el valor del producto de su
Q
UI
M
desviación estándar multiplicado por 2 es 0.109, y los resultados obtenidos en cada
O
operación son de 0.027, 0.008 y 0.004, siendo estos valores menores a 0.109. Tomando en
BI
cuenta esto, se aprecia en los resultados que el método es robusto a las variaciones de
IA
Y
analistas, tiempo de reacción (5 minutos y 25 minutos) y temperatura de reacción (20 oC y
FA
RM
AC
37 oC). Al haberse comprobado experimentalmente que no hay influencia de los factores
estudiados recomienda la realización de este test dentro de los límites de temperatura
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
establecidos.4, 6, 21
27
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V. CONCLUSION
El método espectrofotométrico
para cuantificación de albúmina sérica en el área de
bioquímica, del laboratorio Quintanilla S.R.L.; es lineal con un “r” = 0,997607 con valor del
A
texp = 52.020983 obtenido con un nivel de confianza del 95 %; es preciso con coeficiente
M
IC
de variación igual a 1,759 % para repetibilidad y con coeficiente de variación igual a
Q
UI
1.1051 % para precisión intermedia; es exacto con un porcentaje de recuperación media de
diferentes tiempos de reacción de 05 minutos y 25 minutos y
Y
diferentes analistas,
BI
O
99.0382 % y texp = 1.35; tiene un límite de cuantificación de 0.480g/dL, y al emplear
AC
IA
temperatura de reacción de 20 oC y 37 oC, tiene robustez; cumpliendo con los parámetros
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
FA
RM
de validación establecidos.
28
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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. D’Ocon C. Fundamentos y Técnicas de Análisis Bioquímico: Principios de Análisis
instrumental 2da ed. ED. Thomson. 2003 Madrid. Pp. 1 – 10, 233 – 257.
2. Rodríguez G. “Aseguramiento de la calidad analítica y norma ISO 17025 en
laboratorios clínicos y químicos”. Rev. Costarricense de Ciencias Médicas. San José,
IC
A
Costa Rica. Vol (22)1-2. Junio, 2001.[Fecha de Acceso: 14 de Abril del 2012]
Q
UI
M
Disponible en:
O
http://www.ia.csic.es/sea/revista/VOL3634/03.pdf#search=%22protocolo%20de%20va
Y
BI
lidacion%22
IA
3. Sabater J. Buenas Prácticas de Laboratorio (GLP) y Garantía de Calidad (Quality
FA
RM
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UI
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BI
BL
I
O
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
Y
BI
&task=view
32
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Q
UI
M
IC
A
Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
Y
BI
O
ANEXOS
33
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Anexo Nº 1: Kit de reactivo usado en la validación del método espectrofotométrico para
determinar albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Proti 2. Albumina
Estándar
Lote
1105068760
Lote
068760
Exp. /Venc.
05/2013
Exp. /Venc.
05/2013
IC
A
Anexo Nº 2: Datos experimentales obtenidos en el test de Linealidad en la validación del
Q
UI
M
método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de bioquímica del
XY
X2
IA
BI
O
laboratorio Quintanilla S.R.L.
0,413
2,23
29
5,4
0,405
2,19
29
5,4
0,406
2,19
29
4,05
0,306
1,24
16
2
4,05
0,312
1,26
16
3
4,05
0,312
1,26
16
1
2,7
0,202
0,55
7
2
2,7
0,198
0,53
7
3
2,7
0,199
0,54
7
1
2,03
0,180
0,36
4
2
2,03
0,157
0,32
4
3
2,03
0,155
0,31
4
1
1,35
0,101
0,14
2
2
1,35
0,102
0,14
2
3
1,35
0,101
0,14
2
g/dL (X)
1
5,4
Absorbancia (Y)
Muestra
1
1
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
Muestra
2
Muestra
4
Muestra
5
FA
RM
2
3
Muestra
3
AC
Y
Nº Repeticiones
34
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Anexo Nº 3: Datos experimentales de regresión lineal obtenidos en el test de linealidad, en
la validación del método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de
bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Resultado
Pendiente b
0,075066
Intercepto a
0,003520
Ecuación de la Recta
y = 0,075066x + 0,003520
BI
O
Q
UI
M
IC
A
Parámetros de Regresión
0,9952
AC
IA
Y
Coeficiente de Determinación (r2)
FA
RM
Anexo Nº 4: Datos experimentales para Linealidad de la Pendiente (b), obtenidos en el
DE
test de Linealidad, en la validación del método espectrofotométrico para determinar
O
TE
CA
albumina sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Pendiente
BI
BL
I
Parámetros del Test de Linealidad de la
Varianza Residual ( s 2y , x )
Varianza de la Pendiente ( S 2b )
Desviación Estándar de la Pendiente ( Sb )
Resultado
0,000066
2,08223 E-06
0,000065
Superior  0,078183
Intervalo de Confianza de la Pendiente
Inferior  0,071949
35
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Anexo Nº 5: Datos experimentales del Test de Proporcionalidad, obtenidos en ensayo de
Linealidad, en la validación del método espectrofotométrico para determinar albumina
sérica en el área de bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Resultado
Varianza del Intercepto ( Sa2 )
2,44769
Desviación Estándar del Intercepto ( Sa )
0,004947
IC
A
Parámetros del Test de Proporcionalidad
M
Superior  0,014207
Q
UI
Intervalo de Confianza del Intercepto
Y
BI
O
Inferior  -0,07166
IA
Anexo Nº 6: Datos experimentales obtenidos en el test de Repetibilidad en la validación
FA
RM
AC
del método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de bioquímica
del laboratorio Quintanilla S.R.L.
Concentración
Práctica
0,333
4,05
4,39
0,340
4,05
4,48
0,336
4,05
4,43
0,328
4,05
4,32
5
0,341
4,05
4,50
6
0,333
4,05
4,39
7
0,325
4,05
4,28
8
0,328
4,05
4,32
9
0,339
4,05
4,47
10
0,325
4,05
4,28
DE
Concentración
Teórica
2
3
BI
4
BL
I
1
Absorbancias
O
TE
CA
Muestra
36
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Cuadro 7: Datos experimentales obtenidos en el test de Repetibilidad en la validación del
método espectrofotométrico para determinar Albumina sérica en el Área de Bioquímica del
Laboratorio Quintanilla S.R.L.
10
Media
4,39
Desviación Estándar
0,077173
Intervalos de
confianza individual
Superior  4,5611
Inferior  4,2119
Intervalos de
confianza
de la media
Superior  5,1018
Inferior  3,6712
BI
O
Q
UI
M
IC
A
Nº de análisis
IA
Y
Anexo Nº 8: Datos experimentales obtenidos en el test de Precisión Intermedia, en la
AC
validación del método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de
Concentración
Teórica
Concentración
Práctica
0,306
4,05
4,03
2
0,312
4,05
4,11
3
0,312
4,05
4,11
1
0,308
4,05
4,06
2
BL
I
0,312
4,05
4,11
3
0,314
4,05
4,14
1
0,306
4,05
4,03
2
0,314
4,05
4,14
3
0,316
4,05
4,16
1
0,311
4,05
4,10
2
0,317
4,05
4,18
3
0,310
4,05
4,08
1
BI
Analista
Analista
1
Analista
2
1
O
TE
CA
Analista
Absorbancias
DE
Muestra
2
FA
RM
bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
37
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Anexo Nº 9: Datos experimentales obtenidos en el test de Exactitud, en la validación del
método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de bioquímica del
laboratorio Quintanilla S.R.L.
Absorbancias
ensayo
Concentración
Concentración
Teórica
Práctica
5,45
0,413
5,40
2
0,405
5,40
3
0,406
1
0,306
2
IC
1
Q
UI
M
Muestra
4,05
4,03
0,312
4,05
4,11
0,312
4,05
4,11
0,101
1,35
1,30
2
0,102
1,35
1,31
0,101
1,35
1,30
O
TE
CA
DE
3
Y
BI
3
IA
AC
FA
RM
2
1
BI
5,36
BL
I
5,35
5,40
Muestra
3
O
1
Muestra
A
Nº de
38
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Anexo Nº 10: Datos experimentales obtenidos en el test de Exactitud, en la validación del
método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de bioquímica del
laboratorio Quintanilla S.R.L.
% DE RECUPERACION
1
101.0173
2
99.0437
M
IC
A
Nº de
ensayo
Q
UI
Muestra
BI
O
1
99.2904
99.4943
2
101.4679
DE
FA
RM
Muestra
AC
1
IA
Y
3
3
101.4679
1
96.1918
2
97.1786
3
96.1918
O
TE
CA
2
BI
BL
I
Muestra
3
PROMEDIO
101.0173
39
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Anexo Nº 11: Datos experimentales obtenidos en los test de Límite de cuantificación, en la
validación del método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de
Absorbancia
1
0,0000
0,000
2
0,0000
0,001
3
0,0000
4
0,0000
5
0,0000
M
IC
A
Concentración
Q
UI
bioquímica del laboratorio Quintanilla S.R.L.
0,006
FA
RM
AC
IA
Y
BI
O
0,003
0,0000
0,008
0,0000
0,009
8
0,0000
0,009
9
0,0000
0,009
0,0000
0,010
BI
BL
I
O
TE
CA
7
DE
6
0,006
10
40
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Anexo Nº 12: Datos experimentales obtenidos en el test de Robustez, en la validación del
método espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de bioquímica del
laboratorio Quintanilla S.R.L.
8
25
Minutos
05
Minutos
25
Minutos
Int.
Cinthya Tello
05
Minutos
Int.
Cinthya Tello
IA
25
Minutos
AC
Int.
Suli Irigoin
BI
Int.
Suli Irigoin
O
Q
UI
20 º C
7
20 º C
6
0,322
0,306
0,301
0,296
0,299
BI
BL
I
O
TE
CA
Y
FA05
Minutos
RM
0,342
0,324
Int.
Cinthya Tello
Int.
Cinthya Tello
25
Minutos
0,324
DE
Int.
Suli Irigoin
05
Minutos
Absorbancia
Int.
Suli Irigoin
Tiempo de
Reacción
Analista
5
M
20 º C
IC
A
4
20 º C
3
37 º C
37 º C
Temperatura
de
Reacción
2
37 º C
1
37 º C
Factor /
Ensayo
41
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Anexo Nº 13: Variables utilizadas para el test de Robustez, en la validación del método
espectrofotométrico para determinar albumina sérica en el área de bioquímica del
laboratorio Quintanilla S.R.L.
37 º C
Temperatura de Reacción 2
20 º C
Analista 1
Int. Suli Irigoin
Analista 2
Int. Cinthya Tello
Tiempo de Reacción 1
05 Minutos
Tiempo de Reacción 2
25 Minutos
BI
BL
I
O
TE
CA
DE
FA
RM
AC
IA
Y
BI
O
Q
UI
M
IC
A
Temperatura de Reacción 1
42
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