Epidemiología molecular de la infección del cérvix por

Epidemiología molecular de la infección del cérvix por virus del
papiloma humano en San Luis Potosí y Guanajuato
Luz Aurora Martínez-Contreras1, Mireya Guadalupe Sánchez-Garza1, Aurora Londoño-Avendaño1, Adriana Lomelí-Forcada1, Julio OrtizValdez2, Raúl Rojas-Hernández3, Silvia Quintana3, Rubén López-Revilla1
1División
de Biología Molecular, Instituto Potosino de Investigación Científica y Tecnológica, Camino a la Presa San José 2055, Col. Lomas 4ª Sección, 78216 San Luis Potosí, S.L.P. [email protected],
[email protected]
2 Clínica de Displasias de la Jurisdicción Sanitaria No. 1, Servicios de Salud de San Luis Potosí
3 Departamento de Investigación y Desarrollo Tecnológico, Secretaría de Salud de Guanajuato
Introducción
El cáncer cervicouterino (CaCu) es la segunda causa de muerte por cáncer en las mujeres del mundo y la primera en México y Latinoamérica. Para el desarrollo del
CaCu es necesaria la infección por virus del papiloma humano (VPH), transmitidos a las mujeres por contacto sexual con hombres infectados. Por su asociación con el
CaCu, los VPH son denominados como tipos de alto riesgo (VPH-AR) o de bajo riesgo (VPH-BR). Los VPH-AR provocan transformación celular benigna que causa
verrugas o condilomas mientras que los VPH-AR pueden conducir a la transformación maligna que progresa al CaCu invasor. Los métodos moleculares son más
sensibles y específicos que el Papanicolaou para diagnosticar la infección e identificar los tipos de VPH-AR.
El objetivo de este trabajo fue identificar los tipos de VPH−AR circulantes en los estados de San Luis Potosí (SLP) y Guanajuato (Gto) mediante análisis de restricción
de un producto de la región viral E6/E7 de ~250 pares de bases de VPH-AR amplificado a partir de lesiones del cérvix de mujeres de ambos estados.
Métodos
Detección de VPH-AR
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Muestras cervicales de 370 mujeres con lesiones (250 de SLP, 120 de Gto) fueron colectadas con cytobrush
en solución salina amortiguada, fijadas y mantenidas a temperatura ambiente. El ADN total de las muestras
fue extraído y purificado.
La infección por VPH-AR fue detectada mediante amplificación por PCR anidada de un segmento de ~250
pares de bases amplificado de la región del genoma viral que abarca los genes E6/E7.
Tipificación con Ava II
1
2
3
4
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
La digestión del producto de ~250 pb con cinco endonucleasas permite identificar siete de los tipos de
VPH−AR (16, 18, 31, 33, 35, 52 y 58) más frecuentes en el mundo (Fujinaga y cols. J Gen Virol 72:10391044, 1991) por los tamaños de los dos fragmentos generados.
La enzima de restricción Ava II permite distinguir tres de los tipos más frecuentes (16, 18 y 33). Cada una de
las enzimas restantes (Rsa I, Ava I, Bgl II, Acc I) permite distinguir un solo tipo de VPH-AR (ver tabla de
abajo).
Tipificación con otras enzimas
Enzima de
restricción
Tamaño (pb)
Ava II
Rsa I
Ava I
Bgl II
Acc I
16
238
157/81
-----
18
268
172/96
-----
Tipo de VPH
31
33
35
232
244
232
-136/108
-117/115
----186/46
-------
Resultados
En SLP encontramos los siete tipos identificables de VPH−AR (16, 18, 31, 33, 35, 52 y
58). En Guanajuato no encontramos el tipo 58.
En ambos estados los tipos más frecuente fueron el 16 (72.0%), 31 (10.1%) y 18 (10.1%)
y los menos frecuentes fueron, en SLP el 35 (0.6%) y 58 (0.6%), y en Gto el 33 (2.0%) y
el 35 (2.0%).
En ambos estados en el 80% de los casos identificamos un solo tipo de VPH-AR.
Identificamos infecciones por dos tipos de VPH-AR en ambos estados pero por tres tipos
solamente en SLP.
Los tipos de VPH-AR más frecuentes en las infecciones múltiples fueron, en orden
descendente, 16, 31, 52 y 58.
1
52b
231
---176/55
--
2
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
58
244
----126/118
Tipos de VPH-AR en las infecciones múltiples
Total
SLP
Gto
n
%
n % n
%
Infección Tipos
Tipos de VPH-AR en las infecciones
únicas
Total
SLP
Gto
Tipo
n
%
n
% n
%
16
185 72.0 123 77.4 62 63.3
18
26 10.1 15 9.4 11 11.2
31
26 10.1 13 8.2 13 13.3
52
9
3.5
4 2.5 5
5.1
33
4
1.6
2 1.3 2
2.0
35
3
1.2
1 0.6 2
2.0
58
1
0.4
1 0.6 0
0
NI
3
1.2
0
0 3
3.1
Totales 257 100 159 100 98 100
Doble
Conclusiones
1. En SLP circulan los siete tipos VPH-AR (16, 18, 31, 33, 35, 52 y 58) identificables con el método empleado. En Gto
no parece circular el tipo 58.
2. Las frecuencias de los tipos de VPH-AR predominantes en ambos estados son similares a las de poblaciones con
alta incidencia de CaCu.
Triple
16/18
9
7 14.6 2
9.5
16/31
22 31.9 14 29.2 8
13.0
38.1
16/33
1
16/52
13 18.8
1.5
1
9 18.8 4
2.1 ---
19.1
16/35
10 14.5
7 14.6 3
14.3
16/58
3
4.3
3
6.3 ---
18/35
2
2.9
2
4.2 ---
---
18/31
2
2.9
1
2.1
1
4.8
18/52
1
1.5
1
2.1 ---
---
18/?
1
1.5
1
2.1 ---
---
31/33
1
1.5
--
---
4.8
31/35
1
1.5
1
2.1 ---
---
35/52
3
4.3
1
2.1
2
9.5
16/31/
52
2
40
2
40
---
---
16/18/
35
1
20
1
20
---
---
16/31/
35
1
20
1
20
---
---
16/35/
52
1
20
1
20
---
---
1
3. La mayoría de la infecciones en ambos estados son únicas, pero casi el 20% se debe a dos o tres tipos de VPHAR.
4. La vacunación profiláctica contra la infección por los tipos de VPH-AR 16 y 18 probablemente tendrá efectos
favorables en ambos estados.
5. A partir de este trabajo las mujeres de la región tienen acceso a la detección y tipificación molecular de HPV−AR.
Agradecemos el apoyo
financiero de FONINVGuanajuato (2002-5751) y
FOMIX-SLP (2002-4441)
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