Sistema de componentes en fase solida para T3 Uptake

Diagnostics Division
13 Mountain View Avenue
Orangeburg, NY 10962
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Sistema de componentes
en fase solida para T3 Uptake
Catalog No.: 06B-237116 (100 Tube Kit)
06B-237124 (200 Tube Kit)
RIA HOT LINE U.S. ONLY: 1-800-437-1705
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SISTEMA DE COMPONENTES EN FASE SOLIDA PARA T3 UPTAKE
Para la Determinación Cuantitativa del % de T3 Uptake en Suero.
NE. de Catálogo 06B237416, Tubos Recubiertos con Anticuerpos T3
NE. de Catálogo 06B237728, Solución Trazadora T3
NE. de Catálogo 06B237418, Suero de Referencia T3
Resumen y Explicación de la Prueba
Las hormonas tiroideas ejercen un gran poder de regulación, influyendo en el crecimiento,
diferenciación, metabolismo celular y en general en el balance hormonal del cuerpo. La tiroxina
(T4) y la 3,5,3'-triyodotironina (T3) circulan en la sangre principalmente unidas a la Globulina
Fijadora de la tiroxina (TBG)1. De todos modos existe una pequeña fracción de estas hormonas
que esta en estado libre2. T4 libre y T3 libre son las sustancias que penetran las membranas
celulares e interaccionan con los receptores celulares T3. T4 libre y T3 libre tambien actuan
inhibiendo la síntesis y liberación de la hormona estimulante del tiroides (TSH) en la glandula
tiroides4.
Todo cambio en la habilidad de la TBG en el suero del paciente, para fijar la T3 y T4 resultará un
cambio proporcional en la cantidad de hormonas libres. En el hipertiroidismo, la TBG del paciente
está más saturada, permitiendo así un excesivo nivel de T3 y T4 que pasan al estado libre; en el
hipotiroidismo, la menor saturación de la TBG impide un nivel adecuado de hormona libre. La
medición de la capacidad de fijación de la TBG insaturada mediante el ensayo con Uptake, puede
por tanto ayudar en la evaluación de la función de la glandula tiroides.
Fundamento de la Prueba
En el test de retención de T3 Uptake, incrementos en las cuentas de T3 Uptake [125I] observados
en la fase sólida se representa T3 marcada que no se ha unido a la TBG y por lo tanto un
disminución de la capacidad de fijación de la TBG insaturada. En el test de T3 Uptake de ICN
Pharmaceuticals, el anti-suero T3 recubierto en los tubos de plástico actua como agente separador
y fija la T3 no unida a la TBG.
Reactivos
Para uso diagnóstico in vitro
1.
Tubos Recubiertos de Anticuerpos Anti-T3, NE. de Catálogo 06B237416. Tubos de
polipropileno recubiertos de antisuero (conejo); 100 tubos por bolsa. Conservación:
Almacenar a temperatura ambiente (18-25EC), fuertemente sellado en envase original.
Estabilidad: Consultar la fecha de caducidad del envase. Estabilidad una vez abierto:
2 meses.
2.
Suero de Referencia T3 NE. de Catálogo 06B237418. Contiene suero humano* y azida
sódica** al 0,1% y otro conservante; 2 ml/vial. Conservación: Refrigerar a 2-8EC.
Estabilidad: Consultar la fecha de caducidad del envase. Estabilidad una vez abierto: 2
meses.
3.
Solución Trazador T3, NE. de Catálogo 06B237728. Cada vial contiene <10 FCi (370 kBq)
por frasco de triyodotironina [125I] en tampón de barbital en albúmina sérica bovina,
facilitador de la decantación y azida sódica** al 0,1% como conservante. Un frasco
contiene 110 ml y es suficiente para 100 tubos. Conservación: Refrigerar a 2-8EC o
almacenar a temperatura ambiente. Estabilidad: Consultar la fecha de caducidad del frasco.
Equipos y material necesarios pero no suministrados con el kit:
1.
Tubos de vidrio con vacio de 5 ml.
2.
Aspirador (opcional)
3.
Cualquier tipo de pipeta semiautomática con puntas desechables y capacidad para 25 Fl y
1,0 ml.
4.
Contador gamma para medir [125I].
*
PRECAUCION: MANIPULAR COMO POSIBLE TRANSMISOR DE INFECCIONES: El material
original del que se ha obtenido este producto no reaccionaba frente a HBsAg y era negativo
en anti-cuerpos anti-HIV cuando se analizó con reactivos autorizados. No se conoce ningún
método que asegure que los productos derivados de sangre humana no sean infecciosos.
Consultar CDC/NIH, Biosafety in Microbiological and Biomedical Laboratories (Publicación
HHS NE CDC 84-8395).
**
ATENCION: Los reactivos contienen azida sódica. Esta puede reaccionar con las tuberías
de cobre y plomo, formando azidas metálicas, altamente explosivas. Cuando se desechen
déjese correr un gran volumen de agua para evitar la acumulación de azidas. Muito tóxico
em caso de ingestao. Em contacto com ácido liberta um gaz muito tóxico. Após contacto
com a pele, lavar imediata e abbundantemente com de agua.
ADVERTENCIA: CONTIENE MATERIAL RADIACTIVO
Este Kit Para Radioensayo de ICN Pharmaceuticals contiene <10 microcuries (370 kBq) of de [125I]
por vial de trazador.
Este reactivo sólo pueden recibirlo, poseerlo y utilizarlo médicos, laboratorios clínicos u hospitales,
y solamente para pruebas clínicas o de laboratorio in vitro, que no impliquen la administración
interna o externa del producto, o de sus radiaciones, a los seres humanos o animales. Su
recepción, adquisición, utilización y transferencia, están sometidas a las normas y regulaciones de
la legislación española.
ICN Pharmaceuticals, Inc.
El estricto cumplimiento de las normas básicas de seguridad para radiaciones asegura una
protección adecuada contra la contaminación radioactiva. Dichas normas pueden obtenerse de la
Junta de Seguridad Nuclear, Madrid. En resumen:
Ë No comer, beber, fumar, o aplicar cosméticos donde se utilicen materiales radiactivos. Ë No
pipetear soluciones radiactivas oralmente. Ë Evitar el contacto directo con todo material radiactivo,
utilizando artículos protectores tales como batas de laboratorio y guantes desechables. Ë Todo
trabajo radiológico se realizará en zonas especiales, que no sean de paso. Ë Los materiales
radiactivos deben ser almacenados en sus envases originales en una zona especial. Ë Debe llevarse
un libro de registro con la entrada y salida de material radiactivo. Ë El equipo de laboratorio y
material de vidrio, sometido a contaminación, debe estar separado de forma que se evite la contaminación cruzada de diferentes radioisótopos. Ë Cualquier posible contaminación con material
radiactivo se tratará inmediatamente según los métodos establecidos. Ë El material radiactivo será
eliminado de acuerdo con las normas y regulaciones de las agencias que tengan jurisdicción sobre
el laboratorio. Ë Los envases no contaminados se desecharán junto con el material no radiactivo,
después de destruir sus etiquetas.
Obtención de Muestras
No se requiere ningún manejo especial del paciente. Se recomienda
usar sólo suero para este test.
Preparación de la muestra para el análisis: Recoger la sangre en un tubo de vidrio con vacío de 5
ml. Dejar que la sangre se coagule a temperatura ambiente. Centrifugar y recoger el suero.
Traslado de la muestra: El suero envasado cuidadosamente, debe ser enviado a una temperatura
de 2-8EC. Si el traslado excede de 48 horas, las muestras deben ser enviadas congeladas.
Conservación: Si las muestras no son analizadas en las primeras 6 horas, refrigerar de 2-8EC;
congelar las muestras si este tiempo fuese mayor de 48 horas.
Procedimiento del Ensayo
Utilizar solo tubos y reactivos del mismo kit. Todos los reactivos y
muestras deben haberse llevado a la temperatura ambiente antes de su uso, pero no deben
permanecer así más tiempo del estrictamente necesario para minimizar su deterioro. Si se utiliza
un pipeteador automático, se pude pipetear simultáneamente el suero de referencia/muestras y
solución trazadora. Evitar el arrastre de una muestra a otra.
Las muestras clínicas deben analizarse de forma simultanea al suero de refer-encia. Los sueros
control deben analizarse simultaneamente y de forma idéntica a las muestras de los pacientes.
Seguidamente se realiza un perfil del análisis.
1.
Numerar una cantidad de tubos recubiertos de anticuerpo para el Suero de Referencia y
muestras de los pacientes.
2.
Añadir el Suero de Referencia T3 Uptake y las muestras de la forma siguiente.
NE. Tubo
Muestra
1,2 25 Fl del Suero de Referencia
3,4 25 Fl de la Muestra Clínica
Si se analizan mas de 50 tubos, despues del 50, verificar de nuevo el suero de referencia.
3.
Añadir 1,0 ml de Solución Trazadora de T3 a cada tubo.
4.
Incubar a temperatura ambiente durante 60 ± 5 minutos a partir de la última adicción del
paso anterior.
5.
Aspirar completamente el liquido de cada tubo; o decantar, dejándolos escurrir en posición
invertida al menos por 1 minuto. Sacudir y secar con papel de filtro el liquido residual del
borde de los tubos.
6.
Contar la radiactividad de todos los tubos en secuencia durante un minuto, con un contador
gamma. Puede requerirse más tiempo para instrumentos de eficacia baja.
Resumen del Radioinmunoensayo en Fase Solida T3 Uptake
Tubo
Suero de
Referencia
Muestras
Clínicas
1,2
25 Fl
---
Muestras
Clínicas
---
25 Fl
Solución
Trazador
de T3
Añadir
1,0 ml
a todos
los
tubos
Incubar
Incubar
todos los
tubos a
temperatura
ambiente
durante
60 ± 5
minutos
Aspirar
o
Decantar
Aspirar
o
decantar
todos
los
tubos
Contar la radiactividad de todos los tubos. Calcular y determinar los valores de los
pacientes.
Calculo de Resultados
Nota: No es obligatorio expresar el recuento en cuentas por minuto (cpm). Sin embargo el tiempo
de recuento debe ser constante en todos los tubos.
% T3 Uptake (muestra)
=
Cuentas de la Muestra
Promedio Cuentas Suero de Referencia
x % T3 Uptake de Referencia
(ver etiqueta del vial)
27860 x 37,5 (como indica la etiqueta)
26491
= 39,4% T3 Uptake (muestra clínica)
En la Tabla 1 (pagina 24) se muestran unos datos tipicos de recuento.
Limitaciones del Procedimiento
1.
Los valores de T3 estan influidos por los niveles de la Globulina Fijadora de Tiroxina (TBG).
2.
Los esteroides, fenitoina, salicilatos, heparina y alguna otra droga pueden afectar al T3
Uptake.
3.
Las muestras clínicas que contengan radioactividad de tratamientos o estudios anteriores
pueden dar resultados erroneos.
Valores Esperados
Se estudiaron 106 muestras de sujetos eutiroideos dando un rango de normalidad entre 30% y
40%. Cada laboratorio debe establecer su propio rango de normalidad para un grupo de neonatos
normales. De todas formas, los rangos descritos pueden ser usados como guia hasta que el
laboratorio haya analizado suficiente número de muestras como para establecer sus propios valores
normales.
Características Específicas de la Prueba
Exactitud:
No existe un estándar de referencia para el T3 Uptake. Este análisis está calibrado en unidades
arbitrarias con un rango de normalidad entre 30% y 40%.
Precisión
1.
Los resultados de las determinaciones intra-ensayo son las siguentes:
Controles Commerciales
1
NE. de
determinaciones
Media % T3
Uptake
S.D.
% C.V.
20
58,45
2,2
3,83
2
20
39,14
0,82
2,09
3
19
34,25
0,88
2,56
2.
Los resultados de las determinaciones inter-ensayo son las siguentes:
Controles Commerciales
1
NE. de
determinaciones
Media % T3
Uptake
S.D.
% C.V.
54
56,4
2,33
4,13
2
54
38,8
1,28
3,30
3
54
32,9
1,30
3,96
TABLE 1
T3 Solid Phase Radioimmunoassay [125I]:
Typical Data
Counts
Average Counts
% T3 Uptake
26491
37.5 (from label)
Reference
Serum
1
2
26201
26780
Serum 1
3
4
27860
27592
39.4
39.1
Serum 2
5
6
22332
22438
31.6
31.8
Bibliografia:
1.
2.
3.
4.
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Metabolism, 21, 1073, 1972.
Utiger, R.R., Serum Triiodothyronine in Man. Ann. Rev. Med.,25, 289, 1974.
Ekins, R.P., et al., The Sensitive and Precise Measurement of Serum Thyroxine by
Saturation Analysis. Clin. Biochem, 2, 253, 1969.
Selenkow, H.A., The Normal and Abnormal Thyroid. MEDCOM. Med. Update Series.
New York, 1973.
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