descripcion de un programa para la determinacion de la

Rev. Méd. Hosp. Na!. Niños Costa Rica 1 y 2 (24): 11-12, 1989.
Descripción de un programa para la determinación de la
capacidad de los antivenenos para neutralizar la
actividad hemolítica de los venenos
Dr. Abel Robles* y Dr. José María Gutiérrez*
Introducción
La evaluación de la potencia de los sueros antiofídicos, también llamados
antivenenos, se ha efectuado tradicionalmente mediante el estudio de la neutralización del efecto letal de los venenos. Se ha definido la Dosis Efectiva 50% de un
determinado antiveneno como aquella proporción antiveneno/veneno en la que se
protege la mitad de los ratones inoculados (2). La evaluación de los antivenenos
mediante la neutralización del efecto letal tiene el inconveniente de que utiliza una
gran cantidad de ratones, con las implicaciones que esto conlleva. Por ello, la
Organización Mundial de la Salud (2) ha planteado la necesidad de introducir técnicas
in vitro para evaluar la potencia de los antivenenos.
En Costa Rica, Gutiérrez et al. (1) describieron una técnica de hemólisis
radial en geles de agarosa para el estudio de la actividad hemolítica de los venenos y
su neutralización por los antivenenos. En esta técnica, los geles de agarosa
contienen eritrocitos, lecitina de huevo y CaCI2. El veneno, o las mezclas de
veneno y antiveneno, se aplican en orificios que se abren en el gel y la reacción se
deja desarrollar durante 20 horas a 37°C. Después de este período de incubación, se
mide el diámetro de los halos de hemólisis, los cuales son directamente proporcionales a la actividad hemolítica indirecta de los venenos o de las mezclas de veneno y
antiveneno.
Para el estudio de la capacidad neutralizante de los antivenenos, se incuban
diversas proporciones, o razones, de veneno y antiveneno durante 30 mio a 37°C,
aplicándose luego las muestras en orificios abiertos en el gel. Una vez ocurrida la
reacción, se miden los diámetros de hemólisis, tomándose como 100% de actividad
el diámetro de las muestras que tenían sólo veneno. El resto de los datos se expresan
porcentualmente con respecto a ese valor de 100%. Finalmente, se calcula la Dosis
Efectiva 50% (Deso), la cual se define como la razón Jll de antiveneno/mg de veneno
en la que la actividad hemolítica se reduce al 50%.
En el Instituto Clodomiro Picado hemos desarrollado un programa en lenguaje
Pascal para el cálculo de la DEso de los antivenenos cuando se estudia la neutralización de la actividad hemolítica indirecta inducida por venenos de serpiente. Para
• Instituto Clodomiro Picado, Facultad de Microbiologra, Universidad de Costa Rica,
11
san José, Costa Rica.
12
REVISTA MEDICA HOSPITAL NACIONAL DE
NIÑos "DR. CARLOS SAENZ HERRERA"
el uso de este programa, el operador debe suministrar el
antiveneno/mg veneno) a usar, los niveles mayor y menor,
en el gel para aplicar la muestra y los diámetros de los
resultado que se obtiene es la Dosis Efectiva 50%,
antiveneno/mg de veneno.
número de niveles (Jll
el diámetro del orificio
halos de hemólisis. El
exvresada en ul de
Resumen
Se describe un programa en lenguaje Pascal diseñado para calcular la capacidad
de los antivenenos para neutralizar la actividad hemolítica indirecta de los venenos de
serpientes, cuando se emplea la técnica de hemólisis radial descrita por Gutiérrez et
al. (1). El operador debe suministrar el número de niveles, así como los niveles
mayor y menor, el diámetro de los halos de hemólisis y el diámetro del orificio que
se hace en el gel para aplicar las muestras. El resultado se expresa como Dosis
Efectiva 50% (DEso), definida como la razón ul de antiveneno/mg de veneno en la
que se neutraliza en un 50% la actividad hemolítica del veneno.
Summary
A program, inPasc<ll latlguage. for the estimation of the ability of
antivenoms to neutralize indirect hemolytic activity ofvenoms is described, when
using the radial hemolytic assay described by Gutiérrez et al. (1). The user must
provide the numoer of antivenom/venom levels tested, the highest and lowest
antivenomjvenom levels; the diameter of hemolytic halos and the diameter of the
\vell made in the gel te apply samples. Results are given as Effective Dose 50%
(EDso), defined as the ratio ~ antivenom/mg venom that neutralizes 50% oí the
hemolytie aetivity.
Bibliografia
1.
Gutiérrez, J. M. et al.: An altemauve in vitro method for testing thc
potency of the polyvalent antivenom produced in Costa Rica. Toxicon 26:
411, 1988.
2.
World Hea1th Organization: Progress in the characterization of venoms and
standardization of antivenoms. Geneva, WHO, 1981.
Listado de A~chivo: HEMDL.PA5
PROGRAM HEMOLI5I5;
VAR
C,B1,M,8,A:ARRAY[1.,10] OF REAL;
RE,AN,RE5UL,HIOO:REAL;
CON,Y,X:INTEGER;
Z9,Z:STRING[1];
KK:CHAR;
BEGIN
CLRSCgj TEXTCOLOR(lO);
FOR X:=1 TO 8 DO
WRITELN; :NRITE(' ':24); TEXTBACI<GRC'UND(11);
WRITELN( 'NEUTRALIZACION DE HEMOLI515 RADIAL'); TEXTBACKGROUND(0);
WRITE('
:35); TEXTBACKGROUND(ll);
WRITE('ARH. 1989')j TEXTBACKGROUND(O)¡
DELAY(lOOO); CLRSCR;
lAJRITELN( 'Cálculo de la DE50 por el método dE': HEMOLISIS RADIAL' :66; j
WRITELN; WRITELN; WR~TELN(' «»' :40) jWRITELN¡
WRITELN( 'Al diámetro del halo se le debe restar' :60)¡
WRITELN( 'el diámetro del orificio en la agaroza.' :61);
lAJR 1 TELN j
lAJRITFLN(PARA TERMINAR L:4 EJECUCION
DEL' :56);
WRITELN( . PROGRAMA DIGITE "O" EN CONTRlJL.' :'56); WRITELN¡
WRITELN( . «»' :40);
FDR X:=l TO B DQ
~vR ITELN j
WRITE('Espaciador para cOfOtinuar •. ' :53);
READ(I<BD,KK)¡
IF KEYPRES5ED THEN
WRITE'LN;
CLRSCR;
WRITE( 'CUANTOS NIVELES?.' :49)¡READLN(Y);
WF 11 E ( , DOS 1 S MENOR.,' : LI. 7) ¡ READLN ( C [y] ) ;
WRITE('DOSIS MAYOR .. ':47)¡ READLN(C[l]);
RE:=( (LN(C[1])/LN(lO) )-(LN(C[Y])/LN(10) )/(Y-l);
AN:=EXP(RE*LN(10))j
FDR X:=2 ro Y-l DO
C[
C[
1 J / AN ¡
CLRSCR;
REPEAT
REPEAT
CON:=l¡
WR ITE ( 'CONTRfJL ::: ' : 40) ¡ READLN (Hl 00) ;
IF H100=O THEN BEGIN CLRSCR; EXIT¡ END¡
WR 1 TE ( C [ CON J : 37 : 2 "
= ' ) ; RE ADL N ( A( r,ON] } ;
1 F (A[ CON J )H10(¡/2) THEN
BEGIN
lAR 1 TELN;
WR 1 TELN ( 'NO SE PUEDE CALCULAR.' ) ;
WRITE( 'Se debe u=,ar dosis ma~/ores a ');
WRI,ELN(C[CON]:6:2,'l-l1 de antiveneno/mq de venenD.');
WRITELNj WR¡TE( '['esea hacer otro cálculo? (SIN) •• ' ) ¡
READLN(Z9) j CLRSCR¡
IF (Z9='N') OR (Z9='n') THEN BEGIN CLRSCR; EXIT; END;
ENO;
UN1IL (A[CON]<=H100/2);
FOR CON:= 2 TO y DO
BEGIN
WRITE(C[CONJ:37:2,' = ' ) ¡ REA.JLN(A[CON]);
END¡
x] : :::
x-
~istado
de Archivo: HEMOL.PAS
FDR X:=1 TO y DO
IF A[X)=O THEN B(X):=O
EL SE B[X]:=A[X]*~OO/H100;
FDR X:=Y-1 DUWNTD 1 DO
M[X]:=(B[X]-8[X+1])/(C[X]-C[X+l);
FDR X:=1 TD Y-~ DO
81[X):=B[X+1]-M[X)*C[X+l);
WRITELNj RE5UL:=O;
FOR X:=Y-l DOWNID 1 DO
BEGIN
lF M[XJ<>O THEN BEGIN
RESUL:=(50-Bl[X])/M[X]j
IF «RESUL<C[X]) AND (RESUL>=C[X+l]»
TH~N
BEGIN
WRITE( 'Valor de la DE50 = . :32,rESUt.;:4:2J;
WRITELfIJ( '1-11 de Antiveneno/mg de Veneno' J j
ENDj
END;
END;
IF A[Y]=HIOO/2 THEN
BEr, IN
WRITE('VaJor de la CESO'" ':32,C[Y]:5:2)j
WRITELN( '~I de Antivp.neno/mg de Veneno');
END¡
IF A[YJ<H100/2 THEN
BCGIN
WRITELN( 'NO SE PUEDE CALCULAR.'):
WRITE( 'Se debe usar dosis menores a . J;
WRITELN(C[Y]:6:2,'\-I1 de a"tivene-no/mg de Vene'1D.');
WRITELNj WRITE('Desea hacer otro cálculo? (SIN) .. ');
REQDLN(Z9); CLRSCRj
IF (Z9='N') OR (Z9='n') TrlEN BEG1N CLRSCRj EXITj ENDj
ENDj
WRITELNj WRITELNj 7:='5';
UNT 1 L z",' N' ;
TEXTCOLDR(O) j
END.