A-006 - Universidad Nacional del Nordeste

Resumen: A-006
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2004
Cultivo in vitro de tejidos para la regeneración
de plantas de Aloe vera L. (Liliaceae)
Cura, Andrés A. - Rey, Hebe Y. - Mroginski, Luis A.
Facultad de Cs. Agrarias - IBONE - UNNE.
CC. 209 - Sargento Cabral 2131 - (3400) Corrientes - Argentina.
Tel./Fax: +54 (03783) 427589 - 427131
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Antecedentes
Aloe vera, es una planta económicamente importante por sus propiedades terapéuticas excepcionales (Rehm & Espig,
1991). Actualmente su uso se ha incrementado notoriamente por su amplio espectro de beneficios en diferentes
afecciones, por ello, las plantas son explotadas comercialmente (Lewingston, 1990). Aloe vera se propaga
vegetativamente en su estado natural. Sin embargo, la tasa de propagación es demasiado lenta para la producción
comercial. El cultivo in vitro es una herramienta que permite aumentar la tasa de multiplicación en corto tiempo. . En
tal sentido, el objetivo de este trabajo es desarrollar procedimientos que permitan la regeneración de plantas de Aloe
vera a partir de meristemas.
Materiales y Métodos
Las plantas empleadas fueron cedidas por el Ingeniero Agrónomo Marcos Kupervaser y cultivadas en macetas en el
invernáculo de la Facultad de Ciencias Agrarias (UNNE). De las plantas madres se extrajeron los hijuelos y se
desinfectaron por inmersión en etanol 70% durante cinco minutos, seguidamente se sumergieron en una solución de
NaOCl al 1.1% más una gota de Tween 20 durante veinte minutos. Posteriormente se realizaron 3 lavados con agua
destilada estéril. La preparación y posterior cultivo de los mismos se realizó bajo condiciones asépticas en un flujo
laminar de aire estéril.
Se estudió la influencia en la regeneración de la sacarosa y del ácido indolbutírico (IBA), sola y en combinación con
bencilaminopurina (BA). En este experimento se utilizó el meristema de las plantas madres como explante primario.
El medio de cultivo estaba compuesto por sales minerales y vitaminas de Murashige y Skoog (1962) y 0.70% de Agar
Sigma (A-1296), suplementado con sacarosa al 3%, 6% y 9%, ácido indolbutírico (IBA) y bencilaminopurina (BA) en
distintas concentraciones (Tabla 1).
El pH de los medios fue ajustado a 5,7 con KOH y/o HCl antes de adicionar el agar. Los tubos fueron obturados con
papel de aluminio y esterilizados en autoclave a 0,101 MPa durante 20 minutos.
Los tubos fueron obturados con Resinite AF 50 (Casco SACIF Bs. As.) y se incubaron en un cuarto climatizado a 27
± 2 ºC con un fotoperíodo de 14 hs y una intensidad lumínica de 116 µmol m-2 s-1.
Cada tratamiento fue aplicado a 10-15 explantes. Se realizaron 3 repeticiones por experiencia.
Tabla 1: Composición de los once medios de cultivo utilizados
Tratamientos Composición del medio de cultivo
MS + (Sacarosa 3%)* + IBA 1 + BA 0.1 mg/L
1
MS +Sacarosa 3% + IBA 1+ BA 1 mg/L
2
MS + Sacarosa 3% + IBA 1+ BA 2 mg/L
3
MS + (Sacarosa 6%)* + IBA 1 mg/L
4
MS + (Sacarosa 9% )*+ IBA 1 mg/L
5
MS + Sacarosa 6% + IBA 1+ BA 0.1 mg/L
6
MS + Sacarosa 6% + IBA 1+ BA 1 mg/L
7
MS + Sacarosa 6% + IBA 1+ BA 2 mg/L
8
MS + Sacarosa 9% + IBA 1+ BA 0.1 mg/L
9
MS + Sacarosa 9% + IBA 1+ BA 1 mg/L
10
MS + Sacarosa 9% + IBA 1+ BA 2 mg/L
11
* Representa la concentración final de sacarosa en el medio de cultivo.
Resultados y Discusión
Los resultados de la Fig. 1 muestran que al cultivar meristemas, a los 30 días de cultivo, el mayor porcentaje de plantas
(53%), vástagos (20%) y yemas (10%) se obtiene en MS + sacarosa 6% + 1 mg/L de IBA. La adición de BA a los
medios hizo disminuir el porcentaje de plantas obtenidas y aumenta el número de yemas por explante.
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Asimismo, el incremento de la sacarosa fue benéfico para la diferenciación de plantas, resultando la mejor
concentración 6%.
Fig. 1) Efecto de once medios de cultivo en la inducción de múltiples yemas, vástagos y plantas a partir de
meristemas de Aloe vera a los 30 días de cultivo.
100
R esp u estas (% )
75
50
25
0
Sacar osa
I BA
BA
3
1
0.1
3
1
1
3
1
2
6
1
0
9
1
0
6
1
0.1
Pl antas
6
1
1
6
1
2
Vástagos
9
1
0.1
9
1
1
9 %
1mg/L
2 "
Yemas
Las yemas eran vigorosas, su tamaño oscilaba entre 0.5 y 1 cm aproximadamente (Fig. 2a). También se observaron
vástagos con hojas que tenían entre 3 y 5 cm de altura, de color verde claro, eran robustos y turgentes (Fig. 2b). Las
plantas se caracterizaron por tener un sistema radical muy desarrollado (Fig. 2c, d). También se visualizaron yemas en
el cuello de las plantas in vitro (Fig. 2d).
Los mejores medios para inducir plantas completas fueron los que contenían MS + Sacarosa 6% + IBA 1 mg/L y MS +
Sacarosa 6% + IBA 1 mg/L + BA 0.1 mg/L.
Además se visualizó que el BA ejerció un efecto represor en la diferenciación de raíces en los vástagos,
independientemente de la concentración de sacarosa del medio de cultivo. A mayor concentración de BA menor
porcentaje de vástagos enraizados. Sin embargo, a medida que aumentó su concentración se observa un incremento en
el número de vástagos por explante, efecto más notorio en los medios suplementados con 3% de sacarosa.
Estos resultados se asemejan con los obtenidos por Zhihua et al. (2004) en la propagación de Aloe chinensis, quienes
muestran el efecto positivo de la sacarosa, del BA y del ANA en la regeneración de yemas. Asimismo, el efecto
favorable del IBA en la regeneración de yemas de Aloe, fue también informado por Meyer & Van Staden (1991) para
Aloe barbadensis.
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Fig. 2) Respuestas obtenidas al cultivar meristemas de Aloe vera en medios conteniendo MS + Sacarosa 6% +
IBA 1 mg/L a los 30 días de cultivo. a) Múltiples yemas; b) Vástago; c) Planta; d) Plantas con múltiples yemas en
el cuello. La barra vertical indica 1 cm.
a
b
c
d
Conclusiones
Es posible la regeneración in vitro de plantas de Aloe vera a partir de meristemas en medios constituidos por MS +
Sacarosa 6% + IBA 1 mg/L, seguido por MS + Sacarosa 6% + IBA 1 mg/L + BA 0.1 mg/L.
Bibliografía
Lewingston, A. 1990. Plants for people. Published by The Natural History Museum. Royal Botanic Gardens, Kew,
London. pp 232.
Meyer, H. J. & Van Staden, J. 1991. Rapid in vitro propagation of Aloe barbadensis Mill. Plant Cell, Tissue and Organ
Culture 26: 167-171.
Murashige, T. & Skoog, F. 1962. A revised medium for rapid growth and bio-assays with tobacco tissue cultures. Physiol. Plant. 15: 473-497.
Rehm, S. & Espig, G. 1991. The Cultivated Plants of the Tropics and Subtropics: Cultivation, economic value,
utilization. Printed by; Priese GmbH, Berlin. Germany.pp.552.
Zhihua, L.; Min Chen; Fena Tan; Xiaofen Sun & Kexuan Tang. 2004. Micropropagation of endangered Chinense aloe.
Plant Cell, Tissue and Organ Cultura 76: 83-86.