Efectos patológicos de las especies reactivas de oxígeno en

Sistema de Revisiones en Investigación
Veterinaria de San Marcos
Efectos patológicos de las especies
reactivas de oxígeno en
espermatozoides
UPG
Veterinaria
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
Autor:
Shirley Sujey Evangelista Vargas
Universidad Nacional Mayor de San Marcos
Facultad de Medicina Veterinaria
Agosto 2014
TABLA DE CONTENIDO
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
INTRODUCCIÓN ..................................................................................................... 2
FORMACIÓN DE LA ROS ...................................................................................... 3
ANTIOXIDANTES PRESENTES EN EL PLASMA SEMINAL ............................ 5
ESTRÉS OXIDATIVO .............................................................................................. 6
DAÑO ESPERMÁTICO PRODUCIDO POR EL ESTRÉS OXIDATIVO .............. 7
PEROXIDACIÓN LIPÍDICA .................................................................................... 9
DAÑO DE ADN ...................................................................................................... 10
CONCLUSIÓN ........................................................................................................ 10
LITERATURA CITADA ......................................................................................... 11
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 1
EFECTOS PATOLÓGICOS DE LAS ESPECIES
REACTIVAS DE OXÍGENO EN ESPERMATOZOIDES
Shirley Sujey Evangelista Vargas
[email protected]
1. INTRODUCCIÓN
El primer ROS que se produce en la
Las especies reactivas de oxígeno o
mitocondria espermática es el O2-, el cual
(reactive
son
primero se oxida y luego se reduce
compuestos que se producen durante el
convirtiéndose en H2O2. A su vez el H2O2
proceso de respiración aeróbica en la
primero se oxida y luego se reduce
mitocondria espermática como parte de la
convirtiéndose en radical hidroxilo (OH•), el
reducción del oxígeno (Makker et al., 2009).
cual es el ROS más reactivo (Koppers et al.,
Su gran reactividad se debe a que poseen
2008).
ROS
electrones
oxygen
desapareados
species),
que
les
hace
El daño oxidativo se produce cuando
reaccionar con otras moléculas orgánicas en
ocurre un desequilibrio entre la producción y
procesos de óxido-reducción.
degradación de las ROS. Este daño oxidativo
Las ROS se subdividen en dos tipos:
se puede dar por dos causas: por una
los radicales libres y los no radicales. Siendo
deficiencia del sistema antioxidante o un
los radicales libres el anión superóxido (O2-)
incremento en la formación de ROS (Aitken
y el radical hidroxilo (OH•). Mientras que el
y Fisher, 1994). Estas moléculas son
principal no radical es el peróxido de
sumamente reactivas e intervienen en la
hidrógeno (H2O2) (Aitken y Fisher, 1994).
fisiopatología de la muerte celular y su
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
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principal mecanismo de citotoxicidad es la
correlacionados con niveles elevados de
peroxidación lipídica de las membranas
ROS en el mismo. También se ha observado
celulares (Jones et al., 1979). A su vez los
que existe un incremento en la producción
ROS también causan degradación proteica
de
(Koppers et al., 2008), disminución de la
congelamiento, lo cual genera trabas en la
motilidad
implementación
(Wang
fragmentación
del
et
al.,
ADN
1997)
y
espermático
ROS
durante
de
el
esta
proceso
de
biotecnología
reproductiva en algunas especies.
(Kasimanickam et al., 2006; Lukanov et al.,
Actualmente se vienen desarrollando
2009). Estos daños son provocados por el
diversos estudios enfocados en determinar
malondialdehído, el cual es uno de los
cuáles son los niveles tolerables de ROS que
productos finales de la peroxidación lipídica
no afectan la viabilidad espermática y
y que tiene capacidad altamente mutagénica
estrategias
(Marnett, 1999).
antioxidantes como agentes que previenen o
En la actualidad existen diversos
que
implican
el
uso
de
disminuyen el estrés oxidativo.
estudios sobre la producción de ROS y su
efecto sobre los espermatozoides. Ya que se
2. FORMACIÓN DE LA ROS
ha demostrado que los espermatozoides son
En primer lugar debemos recordar
sumamente sensibles a los niveles elevados
que por definición, un radical libre es
de
podido
cualquier átomo con al menos un electrón
determinar tanto en animales domésticos,
desapareado en la capa más externa, el cual
animales de laboratorio y en el hombre, que
es capaz de una existencia independiente. Un
los porcentajes elevados de espermatozoides
radical libre se forma fácilmente cuando se
anormales
están
rompe un enlace covalente entre moléculas y
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
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ROS.
Así
en
mismo,
se
ha
eyaculados
un electrón queda con cada átomo recién
O2
formado (Buonocore et al., 2010). Los
autooxidación en la mitocondria, producto
radicales libres son altamente reactivos e
de estas reacciones se produce la reducción
inestables, sólo logran volverse estables
de un electrón formando O2-. Por más que el
cuando
O2- es poco reactivo, puede liberar Fe2+ de
sustraen
electrones
de lípidos,
pasa por una serie de reacciones de
proteínas, ácidos nucleicos, carbohidratos o
proteínas
cualquier molécula cercana, causando de
Chang, 2011). Posteriormente el O2- puede
este modo una cascada de daños. Hay dos
pasar por dismutación y formar H2O2
tipos principales de especies de radicales
espontáneamente o por catálisis enzimática
libres: las ROS y las especies reactivas de
por intermedio de la superoxido dismutasa.
nitrógeno (Buonocore et al., 2010).
También es un precursor para la formación
Las ROS contienen dos electrones no
apareados en la capa exterior. Como se
ferrosulfuradas
(Dickinson
y
de OH• catalizado por metales a través de la
reacción de Fenton.
mencionó anteriormente, los ROS más
El H2O2 es el estado de reducción de
comunes son: el anión superóxido (O2-), el
dos electrones del O2, formado por la
radical hidroxilo (OH•) y el peróxido de
dismutación de O2- o por reducción directa
hidrógeno (H2O2) (Dickinson y Chang,
de O2. El H2O2 es soluble en lípidos y por
2011).
ende capaz de difundir por membranas
Dentro
de
la
mitocondria
(Buonocore et al., 2010).
continuamente se está formando el O2-. La
El OH• posee una vida media corta
tasa de formación del mismo depende de la
de alrededor de 10-9 segundos. El OH• es el
cantidad de oxígeno (O2) que fluye a través
estado de reducción de tres electrones del
de las mitocondrias en un momento dado. El
O2. El OH• es virtualmente eliminado en el
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mismo sitio de la formación, ya que
fluorescentes específicas para ambas ROS.
interactúa con la primera molécula que se
El diacetato de diclorodihidrofluoresceina
encuentra.
(DCFH-DA) es una sonda fluorescente
Es
extremadamente
reactivo,
ataca
componentes
por
ello
inestable
la
celulares
considerado
y
mayoría
y
altamente
de
puede
los
específica
para
H2O2,
diclorodihidrofluoresceina
La
(DCFH)
es
dañar
oxidada por el H2O2 intracelular en
cualquier tipo de célula (Buonocore et al.,
diclorofluoresceina (DCF) que se une al
2010). El radical hidroxilo se produce
ADN y emite una fluorescencia verde.
principalmente cuando hay un exceso de
Mientras que el dihidro de etidio (DHE) es
producción de anión superóxido y peróxido
una sonda específica para O2-, el cual lo
de hidrógeno en la reacción de Habere-
oxida en bromuro de etidio que se une al
Weiss:
ADN y emite una fluorescencia roja. Es
entonces,
Así mismo una gran parte de OH•
proviene de la descomposición del H2O2
catalizada por metales, siendo el hierro el
más común, de acuerdo con la reacción de
por
intermedio
de
estas
evaluaciones indirectas que en la actualidad
se puede determinar el porcentaje de
espermatozoides
que
se
encuentran
produciendo ambas ROS.
Fenton:
3. ANTIOXIDANTES PRESENTES EN
Mahfouz et al. (2009) logró establecer un
EL PLASMA SEMINAL
Los antioxidantes son sustancias que
protocolo para detección de H2O2 y O2espermatozoides. Para ello utilizó sondas
cuando
están
presentes
en
bajas
concentraciones en comparación con el
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sustrato
oxidable,
retasa
o
previene
daño
estructural y funcional de la célula
significativamente la oxidación de dichos
espermática (Bansal et al., 2011). Sin
sustratos. Los antioxidantes pueden inhibir o
embargo, los espermatozoides no tienen la
retardar la oxidación
habilidad de resintetizar los componentes de
captando
radicales
de dos formas:
libres
o
mediante
mecanismos que no involucran la captación
membrana
y
poseen
baja
capacidad
antioxidativa (Jones et al., 1979).
de radicales libres. Entonces, se considera
que los antioxidantes minimizan el daño
oxidativo, por lo tato protegen a las células,
incluyendo a los espermatozoides (Fuchs et
al., 1997), ya que previenen la formación de
ROS o disminuyen el efecto de los mismos.
El plasma seminal y el propio
espermatozoide
producen
antioxidantes
como parte de la prevención del daño
oxidativo. Estudios realizados en humanos
demuestran la presencia de antioxidantes
enzimáticos naturales como la superóxido
dismutasa
(SOD),
catalasa,
glutation
peroxidasa (GP) y glutation reductasa (GPx)
en el plasma seminal (Smith et al., 1996).
4.
ESTRÉS OXIDATIVO
En la década de los 80, el estrés oxidativo
fue definido como la perturbación en el
equilibrio entre oxidantes y antioxidantes en
favor de los primeros (Sies, 1985). Sin
embargo, Da Silva et al (2010) proponen un
cambio en la definición, mencionando que la
definición de Sies (1985) no tiene en cuenta
que la generación de radicales libres puede
generar beneficios para las células. Por lo
tanto proponen un cambio en la definición,
considerando por ello al estrés oxidativo
como: la perturbación grave en el equilibrio
entre oxidantes y antioxidantes en favor de
Todos ellos neutralizan el exceso de ROS
quebrando la cadena oxidativa y previenen el
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 6
los primeros, y que por lo tanto conduce a un
daño potencial a las células y órganos.
Se ha determinado que las ROS
pueden
funcionar
como
moléculas
de
señalización. Además existe evidencia que
5. DAÑO ESPERMÁTICO
sugiere que los espermatozoides pueden
PRODUCIDO POR EL ESTRÉS
producir concentraciones bajas y controladas
OXIDATIVO
de ROS, específicamente de O2 y H2O2, las
Diversos estudios sugieren que son
cuales
promueven
los
procesos
de
necesarias pequeñas cantidades de ROS para
capacitación, hiperactivación y la reacción
activar la capacitación, hiperactivación y
del acrosoma (Bansal y Bilaspuri., 2011), las
reacción acrosomal de los espermatozoides
mismas que son cruciales para la adquisición
(Makker et al., 2009). Sin embargo, las ROS
de
también
los
espermatozoide. También se ha determinado
espermatozoides cuando se producen en
que condiciones oxidativas leves resultantes
grandes
los
de bajas concentraciones de ROS pueden
constituyentes celulares e induciendo la
estimular la unión entre el espermatozoide y
muerte celular.
la zona pelúcida (Bansal y Bilaspuri., 2011).
resultan
nocivas
cantidades
para
dañando
ROS
Efectos Benéficos
• Capacitación espermática
• Fecundación
• Transmisión de señales
la
capacidad
del
Efectos Dañinos
• Peroxidación lipídica de las
membranas celulares
• Daño oxidativo de proteínas
bioquímicas de la superficie
• Mutación del ADN
celular mediante la unión
• Activación de factores de
receptor-ligando
fecundante
muerte celular
Adaptado de: Buonocore et al., 2010
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
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Los ROS tienen afinidad por oxidar a
oxidativo genera una amplia gama de
los lípidos, produciendo una reacción que se
patologías
conoce con el nombre de peroxidación
reproductiva. Investigaciones recientes han
lipídica.
son
determinado que el 25% a 40% de los
daño
hombres infértiles evaluados presentan altos
inducido por el estrés oxidativo debido a que
niveles de ROS en sus muestras seminales
sus
(De Iuliis et al., 2007). Es por ello que en la
Los
espermatozoides
particularmente
susceptibles
membranas
grandes
plasmáticas
cantidades
de
al
contienen
ácidos
grasos
actualidad
que
se
afectan
la
considera
función
sumamente
poliinsaturados y su citoplasma contiene
importante evaluar cuáles son los niveles de
bajas
enzimas
producción de ROS en espermatozoides de
antioxidantes, es por ello que debe evitarse
diferentes especies de animales. Debido a
enfrentarlos a altas concentraciones de ROS.
que se considera que los ROS a altas
Por lo tanto, las ROS deben ser inactivadas
concentraciones
de forma continua para mantener sólo una
infertilidad debido a los efectos tóxicos que
pequeña cantidad necesaria para mantener la
generan, los cuales afectan la calidad y la
función normal de los espermatozoides
funcionabilidad de los espermatozoides.
concentraciones
de
(Venero, 2002).
inductores
de
Es a través de la marcación con
El estrés oxidativo se produce como
consecuencia de la producción excesiva de
ROS y una alteración en los mecanismos
antioxidantes
son
que
protegen
a
los
espermatozoides. Se considera que el estrés
sondas fluorescentes que se pudo determinar
que los espermatozoides producen H2O2 y
O2- ante diferentes estímulos o medios. Por
ejemplo se determinó en humanos que
eyaculados
con
altos
porcentajes
de
espermatozoides anormales (Aziz et al.,
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 8
2004) o con leucospermia (Makker et al.,
grasos poliinsaturados contienen más de dos
2009 ) producen altos niveles H2O2 y O2-.
dobles enlaces carbono-carbono, lo cual los hace
También se comprobó que durante los
sumamente sensibles a la oxidación. Las ROS
procesos de centrifugación (Mahfouz et al.,
2010) y criopreservación (Wang et al., 1997)
son responsables de la oxidación de muchos
componentes celulares, de estos el OH• es el
mayor iniciador de la peroxidación lipídica
se elevan los niveles de ROS.
(Aitken et al., 1989).
Así mismo se determinó que tanto las
formas
maduras
espermatozoides
como
inmaduras
producen
de
normalmente
La mayoría de ácidos grasos poliinsaturados no
se encuentran conjugados y poseen más de un
doble enlace entre sus carbonos. La presencia de
ROS, siendo esta producción más elevada en
un doble enlace adyacente a un grupo metileno
las formas inmaduras (Mahfouz et al., 2010).
hace los enlaces metileno-hidrógeno más débil.
Además se comprobó que medios con
Por lo tanto el hidrógeno se vuelve más
elevada concentración de H2O2 afectan en
susceptible a ser sustraído. Una vez que se ha
menor
sustraído el hidrógeno, el radical producido se
grado
la
viabilidad
de
los
espermatozoides, a diferencia de los medios
con elevada concentración de O2- el cual es
más letal (Mahouz et al., 2010).
estabiliza mediante la reordenación de los
enlaces dobles, que forman un radical dieno
conjugado que puede ser oxidado. Esta fase de la
peroxidación lipídica es considerada la fase de
iniciación (Marnett, 1999).
6. PEROXIDACIÓN LIPÍDICA
La peroxidación lipídica se define como el
deterioro oxidativo por el que pasan los ácidos
grasos poliinsaturados que forman la membrana
plasmática de los espermatozoides. Estos ácidos
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Obviamente esto nos lleva a deducir que cuantos
más grupos metilenos posea el ácido graso
poliinsaturado,
más
suceptible
será
a
la
peroxidación (Maia et al., 2010). Esa es la forma
en la que se inicia el proceso de peroxidación. La
Página 9
propagación de la peroxidación lipídica depende
del mismo. El daño del ADN inducido por el
de las estrategias antioxidantes empleadas por el
estrés oxidativo puede acelerar el proceso de la
espermatozoide.
apoptosis de células germinales que conduce a la
Uno de los productos finales de la peroxidación
disminución del número de espermatozoides
lipídica es el malondialdehído (MDA), el cual es
asociados con la infertilidad masculina y el
altamente mutagénico. El MDA produce daño a
aparente deterioro de la calidad del semen
nivel del ADN nuclear y mitocondrial, así
(Mata-Campuzano et al., 2012).
mismo produce una alta toxicidad en la célula
La mayoría del daño en el ADN en los
espermática (Marnett, 1999). Maia et al., (2010)
espermatozoides humanos fueron asociados con
lograron establecer un protocolo de detección
un aumento del estrés oxidativo, así también la
indirecto de los niveles de peroxodación lipídica
mayoría de la fragmentación del ADN y daño
en muestras espermáticas, dicha metodología
oxidativo estaba presente en las células no
estimulaba la generación de MDA, el cual era
viables (Mata-Campuzano et al., 2012). Estos
cuantificado mediante espectofotometría. Con lo
resultados refuerzan la ventaja de la medición de
cual no solo se nota la huella de la exposición a
la producción de ROS, la peroxidación de
ROS (peroxidación lípica), sino también se
lípidos, y la fragmentación del ADN con el
determina la presencia de uno de los agentes
objetivo de obtener una estimación cuantitativa
citotóxicos más potentes que puede producir la
del número o porcentaje de células espermáticas
reacción en cadena desatada por el estrés
dañadas en la población total del eyaculado, y
oxidativo, el MDA.
permiten la identificación de estos tipos de daño
en las muestras de semen de baja calidad.
7. DAÑO DE ADN
El estrés oxidativo no sólo genera daño en la
8. CONCLUSIÓN
membrana plasmática del espermatozoide, sino
El estrés oxidativo se generaría como
también daña la integridad del ADN en el núcleo
consecuencia de la producción excesiva de ROS
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 10
y/o por una alteración en el mecanismo de
las células germinales y de los espermatozoides
defensa antioxidante. La extensa revisión de la
eyaculados, lo que lleva a la disminución del
literatura que se ha realizado indica que el estrés
número
oxidativo produce una serie de daños patológicos
eyaculado.
de
espermatozoides
viables
por
en el espermatozoide, generan procesos de
Cabe resaltar que medir la producción de
infertilidad y de no ser solucionado podría
ROS espermático es una tarea sumamente
generarse esterilidad en los machos cuyos
engorrosa pero no imposible, ya que se cuentan
eyaculados presentan una alta concentración de
con técnicas de medición indirecta mediante el
ROS. En la actualidad múltiples estudios han
uso de sondas fluorescentes las cuales se oxidan
demostrado que tanto espermatozoides humanos
en presencia de las ROS. Así mismo se puede
como
realizar la detección indirecta de la peroxidación
animales
producirían
de
ROS.
animales
Por
domésticos
desgracia,
los
lipídica, mediante la medición de los niveles de
espermatozoides no pueden reparar el daño
malondialdehído y la determinación de daño de
inducido por el exceso de ROS porque carecen
ADN mediante pruebas de determinación de
de los sistemas de enzimas citoplasmáticos
fragmentación de ADN.
necesarios para llevar a cabo esta reparación.
Aún existe mucho por estudiar con
Esta es una de las características que hacen que a
respecto a la producción de ROS espermático y
los espermatozoides sumamente susceptibles al
los mecanismos antioxidantes presentes en el
daño oxidativo.
plasma seminal en diferentes especies de
Existen dos sistemas a través de los
mamíferos.
cuales las ROS generan daño oxidativo en los
espermatozoides: el daño de la membrana
plasmática y el daño del ADN en el núcleo del
espermatozoide. El daño del ADN inducido por
ROS puede acelerar el proceso de la apoptosis de
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
9. LITERATURA CITADA
1. Aitken R, Clarkson J, Fishel S. 1989.
Generation
species,
of
lipid
reactive
oxygen
peroxidation
and
Página 11
human sperm function. Biol Reprod
40:83-197.
ML.
2. Aitken R, Fisher H. 1994. Reactive
oxygen
6. Buonocore G, Perrone S, Tataranno
species
generation
and
human spermatozoa: the balance of
benefit and risk. Bioessays 16:259267.
2010.
Oxygen
toxicity:
chemistry and biology of reactive
oxygen species. Seminars in Fetal &
Neonatal Medicine 15:186-190.
7. Da Silva FM, Marques A, Chaveiro
A. 2010. Reactive Oxygen Species:
3. Aitken RJ. 1994. A free radical
A
Double-Edged
Sword
in
theory of male infertility. Reprod
Reproduction. The Open Veterinary
Fertil Dev 6:19–24.
Science Journal 4:127-133.
4. Aziz N, Saleh RA, Sharma RK,
8. De Iuliis GN, Wingate JK, Koppers
Lewis-Jones I, Esfandiari N, Thomas
AJ, McLaughlin EA, Aitken RJ.
AJ,
2006. Definitive evidence for the
Agarwal
A.
2004.
Novel
association between sperm reactive
nonmitochondrial
oxygen species production, sperm
superoxide
morphological defects, and the sperm
spermatozoa.
deformity index. Fertil steril 81:349-
Metab 91:1968-1975
354.
production
anion
J
Clin
by
of
human
Endocrinol
9. Dickinson BC y Chang CJ. 2011.
5. Bansal AK y Bilaspuri GS. 2011.
Chemistry and biology of reactive
Impacts of oxidative stress and
oxygen species in signaling or stress
antioxidants on semen functions.
responses. Nature chemical biology
Veterinary Medicine International
7:504–511.
11:1-7.
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 12
10. Fuchs J, Thiele J, Ochsendorf F.
13. Koppers AJ, De Iuliis GN, Finnie
1997. Oxidants, antioxidants and
JM, McLaughlin EA, Aitken RJ.
oxidative injury. En: Ochsendorf,
2008. Significance of mitochondrial
F.R. and Fuchs, J (eds), Oxidative
reactive
stress in male infertility, Michael
generation of oxidative stress in
Itschert, Gardez Verlag, Germany, p
spermatozoa.
21-40.
Metab 93:3199–3207.
11. Jones R, Mann T, Sherins R. 1979.
Peroxidative
breakdown
oxygen
J
species
Clin
in
the
Endocrinol
14. Lukanov T, Lichev D, Konova E,
of
Emin A, Ayvazova N, Velkov A,
human
Roussev R. 2009. Flow cytometric
spermatozoa, spermicidal properties
measurement of sperm nuclear DNA
of
and
fragmentation in infertile men with
protective action of seminal plasma.
normal standard sperm parameters. J
Fertil steril 31: 531- 664.
Mens Health 6:50-55.
phospholipids
fatty
in
acids
12. Kasimanickam
Kasimanickam
peroxides,
R,
V,
Pelzer
K,
15. Mahfouz R, Sharma R, Lackner J,
Swecker
W,
Aziz N, Agarwal A. 2009. Evaluation
Thatcher C. 2006. Association of
of
classical semen parameters, sperm
cytometry
DNA
production of hydrogen peroxide and
fragmentation
peroxidation
index,
and
lipid
antioxidant
chemiluminescence
superoxide
as
tool
anion
and
in
in
flow
assessing
human
enzymatic activity of semen in ram-
spermatozoa. Fertil Steril 92:819-
lambs.
827.
Theriogenology
65:1407-
1421.
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 13
16. Mahfouz RZ, du Plessis SS, Aziz N,
20. Mata-Campuzano
M,
Alvarez-
Sharma R, Sabanegh E, Agarwal A.
Rodriguez
2010. Sperm viability, apoptosis, and
Fernández-Santos MR, Garde JJ,
intracellular reactive oxygen species
Martínez-Pastor F. 2012. Quality,
levels in human spermatozoa before
oxidative markers and DNA damage
and after induction of oxidative
(DNA) fragmentation of red deer
stress. Fertil steril 93:814-821.
thawed spermatozoa after incubation
17. Maia S, Bicudo S, Sicherle C,
M,
antioxidants.
peroxidation
78:1005–1019.
generation
of
hydrogen peroxide in forzen-thawed
ram
semen
cryopreserved
Olmo
E,
at 37°C in presence of several
Rodello L, Gallego I. 2010. Lipid
and
Del
Theriogenology
21. Sies H. 1985. Oxidative stress:
in
introdutory remarks. En: Sies H, ed.
extenders with antioxidants. Anim
Oxidative Stress. Londres: Academic
Reprod Sci 122: 118 – 123.
Press. p 1-8.
18. Makker K, Agarwal A, Sharma R.
22. Smith R, Vantman D, Ponce J,
2009. Oxidative stress and male
Escobar J, Lissi E. 1996. Total
infertility.
antioxidant
Indian
J
Med
Res
129:357–367.
19. Marnett
LJ.
peroxidation-DNA
seminal
1999.
damage
Lipid
capacity
of
human
plasma.
Human
Reproduction 11: 1655-1660.
by
23. Venereo G. 2002. Daño oxidativo,
malondialdehyde. Mutat Res 424:83-
radicales libres y antioxidantes. Rev
95.
Cubana Med Militar 31:126-133.
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 14
24. Wang AW, Zhang H, Ikemoto I,
Anderson DJ, Loughlin KR. 1997.
Reactive oxygen species generation
by
seminal
cells
during
cryopreservation. Urology 49, 921925.
Autor: Shirley Sujey Evangelista Vargas
Página 15