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LDH
Método Cinético UV
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - España
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
CONSERVAR A 2 - 8º C
REF
GN 42125:
GN 42500:
GN 4215000:
25/30ºC
Método birreactivo:
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
Referencia:
PROCEDIMIENTO:
Existen aplicaciones para los principales sistemas automáticos.
Longitud de onda: 340 nm
Paso óptico: 1 cm
Temperatura: 37ºC / 25-30ºC
Reacción: cinética decreciente
Medida: frente a aire
Cont.
37ºC
Muestra
20 µL
10 µL
R1 de enzima
1000 µL
1000 µL
Mezclar, incubar aproximadamente 3 minutos, después añadir:
R2 de arranque
250 µL
250 µL
Mezclar y leer la absorción después de 1 minuto. Leer de nuevo cada minuto
durante 3 minutos y calcular el ∆ Abs/min. medio.
Presentación:
5 x 20 mL reactivo 1 + 25 mL reactivo 2
5 x 80 mL reactivo 1 + 100 mL reactivo 2
4 x 50 mL reactivo 1 + 50 mL reactivo 2*
(* para autoanalizadores DIRUI)
PRINCIPIO DEL METODO:
El reactivo LDH de Gernon determina la actividad de LDH en muestras de suero
mediante el método optimizado de la DGKC.
25/30ºC
Método monorreactivo:
CALCULO:
Piruvato + NADH + H+------------ÆL-lactato + NAD+
Mediante Factor:
Actividad muestra = ∆ Abs/min x Factor
La velocidad de disminución de la concentración de NADH es directamente
proporcional a la concentración de LDH en la muestra.
Factor 340 nm
Método Birreactivo
Método monorreactivo
LDH
37ºC
Muestra
20 µL
10 µL
R de trabajo
1000 µL
1000 µL
Mezclar y leer la absorción después de 1 minuto. Leer de nuevo cada minuto
durante 3 minutos y calcular el ∆ Abs/min.
25º/30ºC
10080
8095
SIGNIFICACIÓN CLINICA:
La Lactato Deshidrogenasa (LDH) es un enzima que cataliza la interconversión de
L-Lactato y Piruvato. La LDH se encuentra en el citoplasma de todos los tejidos,
con altas concentraciones en hígado, corazón y músculo esquelético, y bajas
concentraciones en eritrocitos, páncreas, riñón y estomago. El incremento de la
actividad de la LDH puede deberse a distintas causas: infarto de miocardio,
cáncer, enfermedades hepáticas, hematológicas o musculares. Es conveniente
efectuar pruebas complementarias de ALP, GOT y GPT para obtener un
diagnóstico diferenciado.
Mediante Calibrador:
[LDH] (U/L) muestra = (∆A/min
REACTIVOS:
Se encuentran listos para el uso.
Reactivo 1:
Tampón Imidazol:
Piruvato:
Reactivo 2:
NADH:
Rango de medida:
muestra
/ ∆A/min
37ºC
20000
16030
cal)
. [LDH] (U/L)
cal
CALIBRADORES Y CONTROLES:
Se recomienda el uso del multicalibrador Biocal (GN 90999) para calibrar la
técnica.
Se recomienda el uso de los controles Gernorm (GN 90998) y Gerpath (GN 90997)
para controlar a dos niveles la técnica.
CARACTERÍSTICAS DEL METODO:
El test ha sido desarrollado para determinar la actividad de LDH hasta 1450 U/L. Si
los valores exceden este límite, diluir la muestra en solución salina (1+9) y
multiplicar el resultado obtenido por 10.
4.4 g/L
0.6 mmol/L
Especificidad / Interferencias:
0.12 g/L
Para trabajar en modo monorreactivo mezclar 4 partes de R1 por una parte de R2.
Proteger el monorreactivo de la luz. La estabilidad del monorreactivo es de 2
semanas a 2-8ºC ó 5 días a temperatura ambiente.
CONSERVACIÓN:
El reactivo es estable hasta fecha de caducidad si se mantiene a 2-8ºC, protegido
de la luz y de contaminación. No debe congelarse.
Los reactivos deben estar libres de turbidez y de partículas. La absorbancia del
blanco (mezcla de reactivo 1 y reactivo 2 a proporciones adecuadas) a 340 nm
debe ser superior a 1.0.
PRECAUCIONES EN EL MANEJO:
El reactivo contiene azida sódica. Evítese cualquier contacto con piel y
membranas. No ingerir.
Deben tomarse las precauciones necesarias en el uso de reactivos de laboratorio
clínico.
Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos.
MUESTRA:
Suero. Debe separarse lo antes posible de los eritrocitos. La utilización de oxalato
como anticoagulante puede interferir en el resultado.
Estabilidad: 2 días a 2-8ºC.
Deben descartarse muestras contaminadas.
La hemólisis interfiere con la determinación. Anticoagulantes como el oxalato
afectan al resultado. Existen varios medicamentos y sustancias que interfieren con
la determinación de la LDH.
Sensibilidad / Límite de detección:
El límite inferior de detección es 1 U/L.
Precisión intra ensayo (n=20):
Muestra 1 (U/L): media: 337, SD: 4.63, CV: 1.37%
Muestra 2 (U/L): media: 548, SD: 5.11, CV: 0.93%
Precisión inter ensayo (n=20):
Muestra 1 (U/L): media: 345, SD: 5.27, CV: 1.53%
Muestra 2 (U/L): media: 553, SD: 7.68, CV: 1.38%
Comparación con otros métodos:
Se han analizado 100 muestras utilizando el reactivo de Gernon (y) y otro de un
fabricante de la competencia (x).
Correlación: r= 0.993; Relación: y = 1.006 x – 1.107
VALORES NORMALES:
120-240 U/L (25ºC), 160-320 U/L (30ºC), 230-460 U/L (37ºC)
Cada laboratorio debe definir su propio rango de referencia.
BIBLIOGRAFÍA:
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
IU/GN/42125/R2/0712
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com
LDH
UV Kinetic Method
Manufacturer: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - Spain
IVD
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC USE
STORE AT 2 - 8º C
Bireagent method:
REF
25/30ºC
37ºC
Sample
20 µL
10 µL
Reagent 1
1000 µL
1000 µL
Mix, incubate for 3 minutes approx, then add:
Reagent 2
250 µL
250 µL
Mix, read absorbance after 1 minute. Read absorbance again every minute
for 3 minutes and calculate the ∆ Abs/min.
READ INSTRUCTIONS
Reference:
PROCEDURE:
Application sheets for main automated systems are available on request.
Wavelength: 340 nm
Optical path: 1 cm
Temperature: 37ºC / 25-30ºC
Reaction: Kinetic (decreasing absorbance)
Measurement: against air
Cont.
Package:
GN 42125:
GN 42500:
5 x 20 mL reagent 1 + 25 mL reagent 2
5 x 80 mL reagent 1 + 100 mL reagent 2
GN 4215000:
4 x 50 mL reagent 1 + 50 mL reagent 2*
(* for DIRUI autoanalyzers)
PRINCIPLE:
Gernon LDH reagent quantifies the activity of LDH in samples of serum according
to optimized DGKC method:
LDH
Piruvate + NADH + H+------------ÆL-lactate + NAD+
The amount of LDH in sample is proportional to the rate of decrease of NADH
concentration, which is measured by photometer.
Monoreagent method:
25/30ºC
37ºC
Sample
20 µL
10 µL
Monoreagent
1000 µL
1000 µL
Mix and read the absorbance after 1 minute. Read absorbance again every
minute for 3 minutes and calculate the ∆ Abs/min.
CALCULATION:
With Factor:
Sample activity = ∆ Abs/min x Factor
Factor 340 nm
Bireagent Method
Monoreagent Method
25º/30ºC
10080
8095
With Calibrator:
[LDH] (U/L) sample = (∆A/min
sample
/ ∆A/min
37ºC
20000
16030
cal)
. [LDH] (U/L)
cal
SUMMARY:
Lactate dehydrogenase (KDH) is an enzyme, consisting of five different
isoenzymes which catalyse the interconversion of L-lactate and pyruvate. LDH is
present in the cytoplasm of all human tissues with higher concentrations in liver,
heart and skeletal muscle, and lower values in erythrocytes, pancreas, kidney and
stomach. Increased LDH activities are found in a variety of pathological conditions
such as myocardial infarction, cancer, diseases of liver, blood or muscle. However,
because of the lack of organ specificity, determination of its isoenzymes or other
enzymes such as alkaline phosphatase or ALAT/ASAT is necessary for differential
diagnosis.
CALIBRATORS AND CONTROLS:
It is recommended to use the multicalibrator Biocal (GN 90999) to calibrate the
method.
For internal quality control Gernorm (GN 90998) and Gerpath (GN 90997) should
be assayed with each batch of samples.
REAGENTS:
Reagents are ready to use.
Specificity / Interferences:
Reagent 1:
Imidazol Buffer:
Piruvate:
Reagent 2:
NADH:
PERFORMANCE CHARACTERISTICS:
Measuring range:
The test has been developed to determine LDH activities up to 1450 U/L.
If such value is exceeded the sample should be diluted (1+9) with NaCl solution
and results multiplied by 10.
Haemolysis interferes with the assay. Anticoagulants like oxalate interfere with the
reaction. A list of drugs and other interfering substances have been reported.
Sensitivity / Limit of detection:
4.4 g/L
0.6 mmol/L
The lower limit of detection is 1 U/L.
Precision intra assay (n=20, at 37ºC):
0.12 g/L
In case of monoreagent use, mix reagent 1 and reagent 2 in a 4+1 ratio.
The stability of monoreagent is 2 weeks at 2-8ºC or 5 days at 15-25ºC. The
monoreagent must be protected from light.
STORAGE:
The reagents are stable up to the end of the indicated month of expiry, if stored at
2-8ºC, protected from light and contamination. Do not freeze reagents.
The reagents must be free of turbidity and particles. The blank (mixture of
reagent 1 and reagent 2 according to the specified ratio) absorbance at 340 nm
should be higher than 1.0.
WARNINGS AND PRECAUTIONS:
Reagents contain Sodium Azide as preservative. Do not swallow. Avoid contact
with skin and mucous membranes.
Take the necessary precautions for the use of laboratory reagents.
For waste management, please refer to local legal requirements.
SPECIMEN:
Serum. The serum has to be separated from cells as soon as possible. The use of
oxalates as anticoagulants may interfere with the results.
Stability: 2 days at 2-8ºC.
Discard contaminated specimens.
Tel: (+34) 93 480 80 47
Fax: (+34) 93 373 00 92
Sample 1 (U/L): mean: 337, SD: 4.63, CV: 1.37%
Sample 2 (U/L): mean: 548, SD: 5.11, CV: 0.93%
Precision inter assay (n=20, at 37ºC):
Sample 1 (U/L): mean: 345, SD: 5.27, CV: 1.53%
Sample 2 (U/L): mean: 553, SD: 7.68, CV: 1.38%
Method Comparison:
A comparison between Gernon LDH (y) and a commercially available test (x) using
100 samples gave following results:
Correlation: r= 0.993; Ratio: y = 1.006 x -1.107
REFERENCE RANGES:
120-240 U/L (25ºC), 160-320 U/L (30ºC), 230-460 U/L (37ºC)
Each laboratory should establish its own reference range.
LITERATURE:
Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995
Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999
IU/GN/42125/R2/0712/EA
e-mail: [email protected]
web: www.ral-sa.com