procedimiento de control de documentos

Instructivo para el procesamiento de espermatobioscopias
Código: I-FQUI-LAC-08
Revisión: 10
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Fecha de emisión:5/enero/2009
Fecha de modificación: 12/Septiembre/2016
1.- OBJETIVO
Analizar muestras biológicas de esperma obtenidas de usuarios que acuden al Laboratorio de Análisis Clínicos
de la Facultad de Química UADY recolectadas en condiciones adecuadas para su procesamiento.
2.- ALCANCE
Aplica a muestras biológicas de semen, que cumplan con las condiciones para el procesamiento de la
espermatobioscopía.
3.- DESCRIPCIÓN DE LA OPERACIÓN
Para el procesamiento de Espermatobioscopías, el químico responsable de realizar el análisis deberá:
1. Portar la bata de laboratorio, así como material de protección y guantes.
2. Registrar los datos del usuario (nombre, edad, sexo), número de orden de la muestra, fecha y hora de
recolección y motivo del análisis en el formato F-FQUI-LAC-06
Para el procesamiento de Espermatobioscopías, el usuario deberá cumplir los siguientes criterios de aceptación:
3. Cumplir como mínimo, con tres días de abstinencia sexual previos al estudio.
4. Realizar un aseo del área genital previo a la recolección de la muestra biológica.
5. Recolectar la muestra mediante masturbación en un frasco limpio y estéril, debidamente identificado
con el nombre del usuario, fecha y hora de recolección de la muestra.
Se rechazará la muestra para el análisis cuando el usuario tenga:
1. Abstinencia menor a 3 días y mayor a 7 días.
PASOS PARA EL ANÁLISIS DE ESPERMATOBIOSCOPIAS
EXAMEN DE LOS CARACTERES ORGANOLÉPTICOS
El líquido seminal está formado por la secreción de los conductillos seminíferos, del aparato seminal y de las
glándulas relacionadas (vesículas seminales, glándulas prostáticas y bulbouretrales). En esencia el contenido
líquido se origina en la próstata y vesículas seminales. Recién eyaculado el semen es líquido; coagula con
rapidez y experimenta una licuación alrededor de los 15 minutos después de haber sido emitido. No contiene ni
protrombina, ni trombina, pero si fibrinógeno y tromboplastina; aún cuando no se conoce muy bien el mecanismo
de la coagulación, este parecería producirse por la transformación del fibrinógeno en fibrina. La licuación ocurre
por la actividad enzimática de la fibrinolisina.
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Incubar inmediatamente la muestra luego de ser recepcionada a 37 °C durante 60 minutos.
SUPERVISAR LA MUESTRA Y REGISTRAR EL TIEMPO DE LICUEFACCIÓN
Tiempo de licuefacción.- La muestra de esperma normal puede contener cuerpos gelatinosos que no se licuan.
La presencia de moco puede interferir en el análisis. Una vez licuada la muestra, se debe mezclar suavemente
con un movimiento rotatorio para reducir el error en la determinación de la concentración espermática. Tiempo
normal alrededor de 60 minutos a 37 °C.
Después de los 60 minutos observar la muestra y determinar:
1. Color.- Las muestras deben ser evaluadas a temperatura ambiente, dentro de la primera hora después
de emitida. Una muestra normal tiene una apariencia homogénea, un color blanco opalescente a gris
amarillento. En el caso en los que existe leucocitos, se observa un color amarillo intenso. El rojo indica
hemospermia (sangre) y puede ser consecuencia de neoplasia o un traumatismo en los conductos
seminales. Un color verdoso está relacionado con infección de Pseudomonas.
2. Reacción.- Medir el pH de la muestra con tiras indicadoras del pH.
3. Viscosidad.- Esto se realiza introduciendo un aplicador de madera en la muestra y con la ayuda de una
regla se mide el tamaño del filamento formado. Se reporta en cm.
4. Volumen.- Se refiere a la cantidad de muestra y se realiza midiendo la muestra en un tubo cónico
graduado. El volumen se reporta en mL.
EXÁMEN MICROSCÓPICO (MOTILIDAD)
1. Realizar la observación microscópica colocando directamente una gota de semen en un portaobjetos.
2. Poner un cubreobjetos y se observa al microscopio óptico la morfología y la motilidad de los
espermatozoides.
3. Dependiendo del movimiento, se reportan en: Motilidad progresiva (movimiento lineal ya sea rápido lento
o incluso círculos grandes), Motilidad no progresiva (movimiento en el mismo lugar o en círculos
pequeños) e inmóviles. Se cuentan 100 células y se saca el porcentaje de acuerdo a la cantidad de cada
una de las características anteriores.
Prueba de Vitalidad:
Esta prueba se realiza utilizando eosina, ya que este colorante tiñe solo células muertas.
1. En un porta objetos colocar una gota de la muestra y una gota de colorante eosina.
2. Se mezcla con un aplicador de madera y se coloca un cubreobjetos.
3. Se observa al microscopio óptico en aumento de 40X y se realiza un conteo aproximado de los
espermatozoides no teñidos (vivos) y teñidos (muertos) dentro de las primeras dos horas. Se reporta en
porcentaje.
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RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES:
Se realiza en cámara de Newbauer y solución de Macomber y Saunders. El formol del reactivo inmoviliza a los
espermatozoides, mientras que el bicarbonato al fluidificar el moco, facilita la observación.
La cantidad normal por mL varía entre 28 a 225 millones y se considera en general como límite inferior de la
fecundidad un mínimo de 60 millones por mL.
1. En un tubo de ensayo de 15 x 1.5 cm, se realiza una dilución 1:20 tomando 50 μL de la muestra
espermática + 950 μL de la solución de Macomber y Saunders. Se homogeniza y se carga la cámara de
Neubauer con una pipeta automática. Se deja reposar 10 minutos en cámara húmeda.
2. Se coloca la cámara de Neubauer en el microscopio óptico y se ubica la zona para recuento de glóbulos
blancos con el objetivo de 40x (Figura 1).
3. Con la ayuda de un contador de células se realiza el conteo de los espermatozoides.
4. El conteo se realiza por duplicado de la misma forma descrita para el recuento de los glóbulos rojos (los
cuatro cuadrantes periféricos y el central).
5. El cálculo de la concentración se efectúa de acuerdo a la siguiente formula. (N/n)(1/20) X Factor de
dilución.
Donde “N” corresponde a la suma de ambos conteos y “n” al número total de las cuadriculas contadas.
El resultado se expresa en Espermatozoides por mL.
Espermatozoides por mL x Vol. Eyaculado = Espermatozoides por eyaculación
DETERMINACIÓN DE FRUCTOSA:
Está basada en la reacción de Selivanoff, que consiste en provocar la formación de furfural, que origina con la
resorcina una coloración rosada.
1. Se atempera el reactivo de resorcina previamente elaborado.
2. Se toman tres tubos de ensayo de vidrio de 15 x 1.5 cm.
3. Con la ayuda de una pipeta automática, se realizar una dilución 1:10 colocando en un tubo de ensayo
1800 μL de agua destilada + 200 μL de muestra espermática. Centrifugar a 1000 G durante 20 minutos y
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tomar el sobrenadante.
4. En un segundo tubos se coloca 1 mL de la solución estándar (200 mg/dL).
5. En un tercer tubo, colocar 1 mL de agua destilada.
6. A los tres tubos, se añade 1 mL de resorcina al 0.1% y 3 mL de HCl al 30% como se muestra en la
siguiente tabla.
PACIENTE
(P)
ESTANDAR
(St)
BLANCO
(B)
Dilución de Esperma
(1:10)
1 mL
--
--
Estándar (200 mg/dL)
--
1 mL
--
Agua destilada
--
--
1 mL
Resorcina
1 mL
1 mL
1 mL
HCl al 30%
3 mL
3 mL
3 mL
7. Mezclar los tubos y colocar en baño maría a 80º C durante 10 minutos.
8. Retirar los tubos, atemperar y leer las absorbancias del paciente y estándar frente al blanco a 546 nm.
9. Realizar los siguientes cálculos:
Abs de Paciente
Abs de Estándar
x Conc. de Estándar
= Conc. de Fructosa seminal en mg/dL.
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Valores de referencia de acuerdo a los criterios de la OMS 2010
ESPERMATOBIOSCOPÍA
CARACTERES ORGANOLEPTICOS
COLOR
pH
TURBIDEZ
VISCOCIDAD
VOLUMEN
LICUEFACCION
MOTILIDAD
MOTILIDAD PROGRESIVA
MOTILIDAD NO PROGRESIVA
MOTILIDAD TOTAL ( PROGRESIVA + NO PROGRESIVA)
INMOVILES
VITALIDAD
ESPERMATOZOIDES MUERTOS COLOREADOS
ESPERMATOZOIDES VIVOS MOVILES NO COLOREADOS
RECUENTO DE ESPERMATOZOIDES
ESPERMATOZOIDES POR MILILITRO
ESPERMATOZOIDES POR EYACULACION
DETERMINACIONES BIOQUIMICAS
FRUCTOSA
RESULTADO
LIMITE DE REFERENCIA
DE BLANCO GRISACEO A
BLANCO AMARILLENTO
≥ 7.2
MARCADA
˂ 2 cm
1.4 – 1.7
Total a los 60’
31-34%
≤8%
38-42 %
≤ 58%
˂ 43%
55- 63 %
12-15 X 106 / mL
33-46 X 106
178 a 380 mg/dL
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PREPARACIÓN DE REACTIVOS
1.- Reactivo de eosina azul.
Eosina azul
Solución Fisiológica
0.5 g.
100 mL.
Vigencia: 1 año a partir de su fecha de elaboración
2.- Solución de Macomber y Saunders.
Bicarbonato de Sodio
5g
Formol
1 mL
Agua destilada
100 mL
Vigencia de 1 año a partir de su fecha de elaboración
3.- Solución de Resorcina al 0.1% en alcohol etílico de 95º
Vigencia 3 meses a partir de su fecha de elaboración
4.- Solución clorhídrica al 30% (para 100 mL)
HCl concentrado
30 mL
Agua destilada.
70 mL
Vigencia de 1 año a partir de su fecha de elaboración
5.- Solución estándar de fructosa
Pesar 200 mg de fructosa y aforar a 100 ml con agua destilada. Este estándar corresponderá a la
concentración de 200 mg/dL de fructosa.
Vigencia de 1 año a partir de su fecha de elaboración
Control y preservación de reactivos.
Todos los reactivos usados, seran debidamente etiquetados, indicando el nombre del rectivo, la fecha de
elaboración y la fecha de vencimiento, y se llevara un registro para su control mediante el formato F-FQUI-LAC52.
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4.- DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Código
Nombre del documento
Lugar de almacenamiento
P-FQUI-LAC-04
Procedimiento para el análisis de muestra
LACSC
LACSC
N/A
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002 Protección
ambiental – Salud ambiental – Residuos peligrosos
biológico infecciosos – Clasificación y
especificaciones de manejo.
N/A
Manual de procesamiento del semen humano.
Manual OMS 5a edición 2010.
LACSC
MGC-DGPLANEI -CC-01
Manual de Gestión de la Calidad
PAGINA WEB DEL SGC
5.- CONTROL DE REGISTROS
Identificación
Nombre del registro
F-FQUI-LAC-06
Espermatobioscopía
F-FQUI-LAC-24
F-FQUI-LAC-19
F-FQUI-LAC104
F-FQUI-LAC-99
F-FQUI-LAC107
F-FQUI-LAC103
Formato para el
registro diario de la
temperatura de la
refrigerador
Formato para el
registro diario de la
temperatura de la
estufa
Bitácora de uso y
mantenimiento de la
placa de
calentamiento
Bitácora de uso y
mantenimiento de la
incubadora
Bitácora de uso y
mantenimiento de
micropipetas
Bitácora de uso y
mantenimiento de
Lugar de
almacenamiento
Responsable de
su protección
Tiempo de
retención
Disposición de
los registros
Uroanálisis y
Coproanálisis
Responsable de
área
1 año
Archivo muerto
LACSC
Responsable de
área
1 año
Impreso
Microbiología
Responsable de
área
1 año
Impreso
Microbiología
Responsable de
área
1 año
Electrónico
Microbiología
Responsable de
área
1 año
Electrónico
Uroanálisis y
Coproanálisis
Responsable de
área
1 año
Electrónico
Uroanálisis y
Coproanálisis
Responsable de
área
1 año
Electrónico
F-DGPLANEI-CC/GA-39/REV:01
Instructivo para el procesamiento de espermatobioscopias
F-FQUI-LAC-98
Código: I-FQUI-LAC-08
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Fecha de emisión:5/enero/2009
Fecha de modificación: 12/Septiembre/2016
microscopios
Bitácora de uso y
mantenimiento de
contadores celulares
Uroanálisis y
Coproanálisis
Responsable de
área
1 año
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Electrónico
6.- GLOSARIO
6.1 .- SIGLAS
UADY: Universidad Autónoma de Yucatán
LACSC: Laboratorio de Análisis Clínicos de Servicio a la Comunidad.
OMS: Organización Muldial de Salud
6.2 .- DEFINICIONES
Muestra biológica. Parte anatómica o fracción órganos o tejido, excreciones o secreciones obtenidas de un ser
humano o animal vivo o muerto para su análisis.
Usuario. Cualquier persona que acuda al laboratorio para solicitar algún análisis clínico
Formato de Trabajo. Término que engloba a todos los formatos utilizados para reportar los resultados de sus
análisis.
F-DGPLANEI-CC/GA-39/REV:01
Instructivo para el procesamiento de espermatobioscopias
Código: I-FQUI-LAC-08
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7.- CONTROL DE REVISIONES
Sección y/o
página
Descripción de la modificación y mejora
Fecha de modificación
01
Pág. 4, 7, 10, 11
Se cambió el término “muestras biológicas de origen seminal” por
“muestras de esperma”. Se modificó el diagrama. Se volvió a redactar
el paso 1 del recuento de espermatozoides. Se volvió a redactar el
paso 1 de la determinación de fructosa
26 de Abril de 2010
02
Pag. 1
Cambio de responsable de área
Nivel de
revisión
03
04
05
06
Pág. 5
Pág. 8
02 de Febrero de 2011
Modificación de la preparación de reactivos (Solución clorhídrica al
30% y Solución estándar de fructosa)
Cambio al nuevo formato para instructivos
Cambio de responsable sanitario
Pág. 1-5
Pág. 8
Cambio de redacción en todo el documento
Cambio de Director.
Pág. 8
Cambio de responsable sanitario.
Pág. 3
Se anexan instrucciones para recuento espermático.
Se cambia la dilución de muestra para medir fructosa y se anexan
instrucciones para un mejor proceso.
Se modifica preparación de solución estándar de fructosa.
Cambio de elaborador del documento. Modificación de interlineado en
toda la hoja.
Pág. 4
Pág. 5
Pág. 8
16 de Agosto de 2013
12 de Noviembre de 2013
17 de Julio 2014
15 de Enero 2015
Pag. 4
Se cambió uso de pipeta pasteur graduada por tubos cónicos
graduados.
Se corrigió dilución.
08
Todo el
documento
Se cambió el formato del instructivo de la DGPLANEI.
Se anexaron los valores de referencia.
25 de Marzo 2015
09
Todo el
documento
Pag. 8
Revisión ortográfica
Cambio de responsable sanitario.
07 de Septiembre 2015
10
Todo el
documento
Actualización de formatos y bitácoras
12 de Septiembre 2016
07
Pag. 2
09 de Julio de 2013
Nota: Ésta sección será utilizada a partir de la primera modificación a este documento. La revisión 00, se
mantendrá en blanco.
Elaboró
Revisó
Aprobó
QFB. Ángel Silva Pérez
EBC Ricardo Jesús May Castillo
Responsable sanitario
Dra. Zulema Osiris Cantillo Ciau
Directora de la Facultad de Química
Responsable del análisis de
espermatobioscopias
Las firmas avalan la responsabilidad de las personas que: elaboran el documento, revisan su
adecuación y aprueban para su implementación dentro del Sistema de Gestión de la Universidad
Autónoma de Yucatán.
F-DGPLANEI-CC/GA-39/REV:01