teórico nº 19

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA, PARASITOLOGÍA E
INMUNOLOGÍA
1º CÁTEDRA
MICROBIOLOGÍA I. VIROLOGÍA
INTRODUCCIÓN A LA VIROLOGÍA.
VIROSIS ENTÉRICAS
Prof. Dr. Norberto Sanjuan
LOS COMIENZOS
BUJÍA DE CHAMBERLAND
LA ENFERMEDAD DEL MOSAICO DEL TABACO (1892)
Ivanovsky
Beijerinck
EL DESCUBRIMIENTO DE LOS BACTERIÓFAGOS
(Twort y d’Herrelle)
DEFINICIÓN: “AGENTES INFECCIOSOS,
PARÁSITOS INTRACELULARES OBLIGADOS”
ESQUEMA BÁSICO DE UN VIRUS
ENVOLTURA
CÁPSIDE
ÁCIDO NUCLEICO
MORFOLOGÍA GENERAL DE UN VIRUS:
PARTÍCULA DE VIRUS Herpes simplex
100 nM
METODOLOGÍA DEL ESTUDIO DE LOS
VIRUS
INOCULACIÓN EN ANIMALES DE LABORATORIO
INOCULACIÓN DE HUEVOS EMBRIONADOS
INOCULACIÓN DE CULTIVOS CELULARES
NORMAL
INFECTADO (ECP: SINCICIOS)
ESTUDIOS ULTRAESTRUCTURALES:
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE TRANSMISIÓN
¿CÓMO SE VE UN VIRUS?
CORTE ULTRAFINO
TINCIÓN NEGATIVA
VIRUS ENVUELTO. CÁPSIDE ICOSAÉDRICA
VIRUS ENVUELTO. CÁPSIDE HELICOIDAL
VIRUS DESNUDO. CÁPSIDE ICOSAÉDRICA
TITULACIÓN VIRAL POR PLAQUEO
NÚMERO DE PLACAS x DILUCIÓN CON EXPONENTE POSITIVO : VOLUMEN
INOCULADO = NÚMERO DE UFP/ML DE SUSTENSIÓN VIRAL.
ESTUDIO DE LAS PROTEÍNAS VIRALES
DETECCIÓN DE ÁCIDOS NUCLEICOS VIRALES Y DE
PROTEÍNAS EN CORTES HISTOLÓGICOS
INTERACCIÓN DE PROTEÍNAS VIRALES CON
PROTEÍNAS CELULARES:
CO-INMUNOPRECIPITACIÓN
A: CÉLULAS NO INFECTADAS; B Y C: CULTIVOS INFECTADOS CON
POLIOMA. SE INMUNOPRECIPITÓ CON UN SUERO ANTI-TUBULINA, QUE
CO-INMUNOPRECIPITA CON LA VP-1 VIRAL.
DETECCIÓN POR WESTERN BLOT DOBLE.
CARACTERIZACIÓN Y MANIPULACIÓN DEL DNA
VIRAL
REPLICACIÓN VIRAL
TIPOS DE GENOMAS VIRALES
•
•
•
•
•
•
•
DNA DE DOBLE CADENA
DNA DE CADENA SIMPLE
RNA DE DOBLE CADENA
RNA DE CADENA SIMPLE, POSITIVA
RNA DE CADENA SIMPLE, NEGATIVA
RNA SEGMENTADO
RNA POR TRANSCRIPCIÓN INVERSA
TIENEN UN SOLO ÁCIDO NUCLEICO. LOS VIRUS CON DNA
REPLICAN EN EL NÚCLEO CELULAR, Y LOS QUE CONTIENEN
RNA, EN EL CITOPLASMA, CON 2 EXCEPCIONES.
REPLICACIÓN VIRAL: 1 ENCUENTYRO CON EL
RECEPTOR CELULAR
2. INGRESO A LA CÉLULA
POR CLATRINAS
POR CAVÉOLAS
4. MIGRACIÓN POR EL CITOESQUELETO
5. EXPRESIÓN DEL GENOMA: SÍNTESIS DE
PROTEÍNAS TEMPRANAS Y TARDÍAS. ENSAMBLAJE.
6. SALIDA DE LA CÉLULA
TIPOS DE INFECCIONES VIRALES
TIPOS DE INFECCIONES VIRALES
1. PRODUCTIVAS
2. PERSISTENTES
3. TRANSFORMANTES
UTILIDAD DE LOS VIRUS EN EL ESTUDIO DE LA
BIOLOGÍA CELULAR
1.
DESCRIPCIÓN DE LA ESTRUCTURA DEL DNA Y LA CROMATINA
2.
DESCUBRIMIENTO DE LOS PROMOTORES Y “ENHANCERS”.
3.
DESCUBRIMIENTO DE LOS INTRONES Y DESCRIPCIÓN DEL
PROCESAMIENTO DEL RNAm (CAPS, SECUENCIAS POLI-A,
“SPLICING ALTERNATIVO”, ETC).
4.
DESCRIPCIÓN DE LA REGULACIÓN TRADUCCIONAL Y POSTTRADUCCIONAL Y DE LA POLARIZACIÓN CELULAR.
5.
DESCUBRIMIENTO DE LOS ONCOGENES Y DE LOS
GENES SUPRESORES DE TUMORES.
6.
DESCUBRIMIENTO DE LA TRANSCRIPCIÓN INVERSA
PERSPECTIVAS FUTURAS
1. DESCUBRIMIENTO DE VIRUS EMERGENTES.
2. DESCUBRIMIENTO DE LA ETIOLOGÍA VIRAL DE
ENFERMEDADES YA CONOCIDAS.
3. COMPRENSIÓN MOLECULAR DE LA
PATOGÉNESIS DE LAS INFECCIONES VIRALES.
4. VIGILANCIA EPIDEMIOLÓGICA.
5. DESARROLLO DE NUEVAS VACUNAS.
6. EMPLEO DE VIRUS COMO VECTORES.
INFECCIONES ENTÉRICAS LOCALIZADAS:
VIRUS PRODUCTORES DE DIARREAS
MECANISMOS DE DEFENSA DEL APARATO
DIGESTIVO
YEYUNO NORMAL
YEYUNO NORMAL
P.A.S.
YEYUNO NORMAL
INMUNOMARCACIÓN DE LINFOCITOS T
(anti CD45 R0)
YEYUNO NORMAL
INMUNOMARCACIÓN DE PLASMOCITOS
(anti IgA)
EL ENTEROCITO: UNA CÉLULA POLARIZADA
ROTAVIRUS
CULTIVO DE CÉLULAS INTESTINALES
ROTAVIRUS. ESTRUCTURA ANTIGÉNICA Y
CLASIFICACIÓN
• I GRUPOS: Se basan en el antígeno VP-6. Desde el “A”
hasta el “E”. El “A” constituye el 99% de los aislamientos.
• II SUBGRUPOS: Los virus del grupo “A” se dividen en
los subgrupos “I” ó “II”, por otro epitope de VP-6.
• III SEROTIPOS: Los virus del grupo “A” se subclasifican
en serotipos por neutralización en cultivos de tejidos, en
base a los antígenos VP-7 y VP-4
ELECTROFEROTIPOS DE ROTAVIRUS
C
A
B
GOMEZ, J.A.; GRINSTEIN, S. 1998
ROTAVIRUS: IFI EN CULTIVO DE FIBROBLASTOS
HUMANOS
PATOGÉNESIS DE LOS ROTAVIRUS
ALTERACIONES VELLOSITARIAS POR
ROTAVIRUS
ROTAVIRUS: MICROSCOPÍA DE SCANNING DE LA
MUCOSA YEYUNAL
ASTROVIRUS
ADENOVIRUS
VIRUS NORWALK
ENTERITIS POR VIRUS NORWALK
DIAGNÓSTICO: RT-PCR
OTROS MÉTODOS DIAGNÓSTICOS
• ELISA
• AGLUTINACIÓN CON PARTÍCULAS DE LATEX
• LA MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE
TRANSMISIÓN NO SE USA RUTINARIAMENTE
INFECCIONES ENTÉRICAS CON
DISEMINACIÓN SISTÉMICA
VIRUS QUE INGRESAN POR VÍA ORAL Y LUEGO SE
DISEMINAN
•
•
•
•
•
•
POLIO
ECHO
PARECHO
COXSACKIE
HEPATITIS A
HEPATITIS E
ENTEROVIRUS
•
POLIO: 3 SEROTIPOS
•
ECHO: 31 SEROTIPOS
•
COXSACKIE A: 24 SEROTIPOS
•
COXSACKIE B: 6 SEROTIPOS
•
ENTEROVIRUS 68-71
ENTEROVIRUS: PATOLOGÍA COMPARADA
POLIO
COX A COX B ECHO 68 70 71
Parálisis
+
+
+
+
+
+
+
Encefalitis
+
+
+
+
+
+
+
Meningitis
+
+
+
+
+
+
+
Miocarditis
+
Pericarditis
+
Pleurodinia
+
Herpangina
+
Enfermedad pie-mano-boca
+
Exantemas
+
Conjuntivitis
+
Cuadro respiratorio
+
+
+
+
+ +
+
+
+
+
+ +
Síndrome febril inespecífico
+
+
+
+
ENFERMEDAD PIE-MANO-BOCA
MIOCARDITIS
DIABETES DEL TIPO I
POLIO