UNIVERSIDAD DR. JOSÉ MATÍAS DELGADO FACULTAD DE AGRICULTURA E INVESTIGACIÓN AGRÍCOLA JULIA HILL O´SULLIVAN TESIS: “Determinación de bases volátiles en carnes frescas de pescado como índice de calidad y frescura en la degradación proteica” PRESENTADO POR: BR. SABRINA MONTERROSA ARIAS ASESOR: LIC. GUILLERMO ANTONIO BONILLA ANTIGUO CUSCATLÁN, MAYO 2007. RESUMEN En el siguiente estudio se han hecho determinaciones sobre contenido de proteínas a través del método descrito por Lowry, bases volátiles totales (BVT) y trimetilamina (TMA) por el método de semi-microdestilación del músculo de Bagre (Galeichthys felinis), la Corvina (Cynoscion sp.) y el Pargo (Lutjanus novemfasciatus), almacenados en hielo durante tres días; estas muestras fueron recolectadas en los mercados de Antiguo Cuscatlán y Santa Tecla del Departamento de La Libertad. Se transportaron al laboratorio de química de la Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola de la Universidad Dr. José Matías Delgado. La investigación tuvo como objetivo verificar la relación existente entre el contenido de bases volátiles totales (BVT), trimetilamina (TMA) y proteínas presentes en el músculo del pescado y así, poder establecer la utilidad de los indicadores elegidos, para determinar la calidad de los pescados vendidos en los dos mercados en estudio y almacenados en hielo. Se ha podido establecer que durante el almacenamiento en hielo (0°C) las tres diferentes especies, difieren entre si, también que existe una estrecha relación entre el aumento de N-TMA y la disminución de la concentración proteica del pescado. Los resultados expresados en promedios del contenido de N-TMA utilizado como índice de frescura fueron los siguientes: 6.38, 6.88 y 24.24 mg N/100 g para el bagre de Santa Tecla; 5.29, 10.58 y 18.33 mg N/100 g del bagre de Antiguo Cuscatlán. 4.71, 7.81 y 11.33 mg N/100 g valores de la corvina de Santa Tecla y para la muestra de Antiguo Cuscatlán: 1.58, 9.37 y 8.85 mg N/100 g. Por su parte el pargo presentó las siguientes concentraciones: 5.98, 9.73 y 12.17 mg N/100 g proveniente de Santa Tecla y 7.60, 10.27 y 13.76 mg N/100 g para el de Antiguo Cuscatlán. Las proteínas disminuyeron para el bagre de Santa Tecla de 7.2% a 6.0%, el de Antiguo Cuscatlán de 8.3% a 3.6%. La corvina de Santa Tecla demostró tener mayor concentración de proteínas a comparación del de Antiguo Cuscatlán, el primero con el 18.95 bajo a 7.8% y el segundo de 10.3% como concentración inicial disminuyo al 4.7%. El pargo con procedencia de Santa Tecla presentaba 6.6% de concentración inicial y decayó a 3.7%. La muestra de pargo analizada de Antiguo Cuscatlán presentaba un 8.5% y el ultimo día de análisis obtuvo un 4.4% de concentración proteica. Los resultados de los análisis de trimetilamina demostraron, que al avanzar el tiempo de almacenamiento, la concentración inicial aumentaba. Sin embargo, la aceptabilidad del pescado se encontraba dentro de los límites permisibles para el consumo. El comportamiento de las bases volátiles totales logró demostrar la relación de la descomposición de los compuestos nitrogenados no proteicos durante el almacenamiento y pérdida de frescura del pescado. ÍNDICE I. Introducción i II. Generalidades 1 2.1 Planteamiento del problema 1 2.2 Delimitación de la investigación 2 2.3 Justificación de la investigación 4 2.4 Objetivos 5 2.4.1Objetivo General 5 2.4.2 Objetivos Específicos 5 III. Revisión de literatura 6 3.1 Antecedentes 6 3.2 Aspectos biológicos 9 3.3 Corvina 11 3.3.1 Clasificación 11 3.3.2 Fisiología y morfología 11 3.3.3 Zoogeografía de la especie 13 3.4 Bagre 14 3.4.1 Clasificación 14 3.4.2 Fisiología y morfología 14 3.4.3 Zoogeografía de la especie 15 3.5 Pargo 16 3.5.1 Clasificación 16 3.5.2 Fisiología y morfología 17 3.5.3 Zoogeografía de la especie 17 3.6 Anatomía del músculo del pescado 18 3.6.1 Mecanismo de contracción muscular 19 3.7 Composición química 20 3.7.1 Carbohidratos 23 3.7.2 Agua 23 3.7.3 Lípidos 24 3.7.4 Proteínas 26 3.7.5 Vitaminas y minerales 29 3.7.6 Compuestos extractables que contiene nitrógeno 29 3.8 Cambios post morten en el pescado 30 3.8.1 Cambios en el pescado crudo 30 3.8.2 Secreción mucosa en la superficie del pescado 31 3.8.3 Rigor mortis 32 3.8.4 Post rigor 34 3.9 Autólisis 3.9.1 Descomposición microbiana 3.10 Mecanismo del deterioro 34 35 36 3.10.1 Alteración de carbohidratos 36 3.10.2 Degradación de nucleótidos 37 3.10.3 Degradación de compuestos nitrogenados 38 3.10.4 Degradación de lípidos 41 3.11 Evaluación de la calidad del pescado 44 311.1 Calidad 44 3.11.2 Métodos sensoriales 44 3.11.3 Métodos bioquímicos y químicos 47 3.11.4 Métodos físicos 53 3.11.5 Métodos microbiológicos 54 3.12 Conservación del pescado por medio frío 54 3.12.1 Efecto de la temperatura en la putrefacción 55 3.12.2 Duración del pescado en hielo 56 3.12.3 Enfriamiento del pescado en tierra 58 3.12.4 Refrigeración con hielo para el transporte 61 IV. Metodología de la investigación 63 4.1 Metodología 63 4.2 Método cualitativo 65 4.3 Método cuantitativo 65 4.3.1 Selección de muestras 65 4.3.2 Acondicionamiento y preparación de las muestras 66 4.4 Método sensorial 67 4.5 Métodos de análisis 68 4.5.1 Determinación de proteínas 68 4.5.2 Determinación de la Trimetilamina y las Bases Volátiles Totales 74 4.5.3 Determinación de humedad y pH 80 4.6 Métodos microbiológicos V. Análisis e Interpretación de Resultados 81 82 5.1 Diseño experimental 82 5.2 Método cualitativo 82 5.3 Método sensorial 85 5.4 Método cuantitativo 87 5.4.1 Determinación de proteínas 87 5.4.2 Determinación de la Trimetilamina y las Bases Volátiles Totales 93 5.4.3 Determinación de humedad y pH 109 5.6 Métodos microbiológicos 114 VI. Conclusiones 116 VII. Recomendaciones 119 VIII. Fuentes consultadas 121 Glosario Anexos ÍNDICE DE CUADROS Cuadro No.1 Evaluación de la aceptabilidad de la carne de pescado a partir de nitrógeno volátil total. 9 Cuadro No.2 Clasificación taxonómica de la corvina. 11 Cuadro No.3 Tabla de condiciones y requerimientos ambientales de la corvina. 13 Cuadro No.4 Clasificación taxonómica del bagre. 14 Cuadro No.5 Tabla de condiciones y requerimiento ambientales del bagre. 15 Cuadro No.6 Clasificación taxonómica del pargo. 16 Cuadro No.7 Tabla de condiciones y requerimientos ambiéntelas del pargo. 18 Cuadro No.8 Principales constituyentes (porcentaje) del músculo del pescado en 100 g. 21 Cuadro No.9 Composición química de los filetes de varias especies de pescado. 22 Cuadro No.10 Composición porcentual de la porción comestible del pescado en 100 g. 22 Cuadro No.11 Aminoácidos esenciales (porcentaje) de varias proteínas. 28 Cuadro No.12 Algunos constituyentes minerales del músculo del pescado. 29 Cuadro No.13 Secuencia de los cambios que acontecen en los componentes principales de los músculos del pescado capturado. 43 Cuadro No.14 Cartilla de evaluación sensorial en el pescado. 67 Cuadro No.15 Lectura de las absorbancias de las muestras analizadas y curva de calibración para la concentración cuantitativa de proteínas. Cuadro No.16 73 Resumen de las variables obtenidas de las entrevistas de los dos mercados estudio. 82 Cuadro No.17 Procedencia de las especies de pescado en estudio. 85 Cuadro No.18 Resultado de los análisis sensoriales realizados en las tres Cuadro No.19 especies de pescado antes de su compra. 86 Determinación de proteínas de tres especies de pescado 87 comercializadas en los mercados de Tanta Tecla y Antiguo Cuscatlán. Cuadro No.20 Contenido de N-TMA y N-BVT en el bagre procedente de los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán almacenados en hielo. Cuadro No.21 93 Contenido de N-TMA y N-BVT en la corvina procedente de los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán almacenados en hielo. Cuadro No.22 99 Contenido de N-TMA y N-BVT en el pargo procedente de los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán almacenados en hielo. Cuadro No.23 Resumen del porcentaje de humedad y pH en el bagre, la corvina y el pargo. Cuadro No.24 104 109 Resultado de análisis microbiológicos realizados al Bagre, Corvina y Pargo. 114 ÍNDICE DE FIGURAS Figura No.1 Pescado fresco y eviscerado 66 Figura No.2 Tubo de ensayo para las tres especies de pescado a evaluar 70 Figura No.3 Adición de reactivos 70 Figura No.4 Agitación de las muestras 71 Figura No.5 Lectura de las muestras a 500 nm 72 Figura No.6 Tubos de ensayo con las diferentes concentraciones de proteínas 72 Figura No.7 Curva de calibración de proteínas 72 Figura No.8 Filetes de pescado previamente acondicionados para la preparación de la muestra 75 Figura No.9 Peso de la muestra del músculo de pescado 75 Figura No.10 Homogenización de las muestras 75 Figura No.11 Filtrado de la muestra 76 Figura No.12 Matraz de destilación con 5 ml del extracto de la muestra y 5 ml de solución de hidróxido de sodio a temperatura constante a 95°C Figura No.13 Refrigerante de serpentín en donde se condensa el vapor destilado. Figura No.14 Recolección del destilado en 15 ml de ácido clorhídrico estándar al 0.01 M. Figura No.15 Adición del indicador (ácido rosólico al 1%) al Erlenmeyer con solución recolectada en la destilación. 76 77 77 77 Figura No.16 Aparato de semi-microdestilación 78 Figura No.17 Primera titulación de la solución con hidróxido de sodio al 0.1M. 78 Figura No.18 Adición de formaldehído al 16% al matraz de titulación 78 Figura No.19 Segunda titulación de la solución con hidróxido de sodio al 0.01M. 79 Figura No.20 Enfriado de las capsulas 80 ÍNDICE DE ANEXOS Anexo No.1 Género y especie de la corvina específicos de cada país. Anexo No.2 Género y especie del pargo específicos de cada país Anexo No.3 Presentación gráfica de las tres especie de pescado en estudio Anexo No.4 Guía de entrevistas realizadas a los comerciantes de pescado. Anexo No.5 Análisis Sensorial Anexo No.6 Reactivos para la determinación de N-TMA y N-BVT Anexo No.7 Equipo Utilizado para la micro destilación de las Bases Volátiles Totales y Trimetilamina Anexo No.8 Resultados de análisis de proteínas Anexo No.9 Resultado de análisis de N-TMA y N-BVT Anexo No.10 Resultados de análisis microbiológicos I. INTRODUCCIÓN La pesca artesanal en El Salvador, para el año 2002, generó 12 millones de kilogramos de pescado, por un valor de $ 14 millones. Según CENDEPESCA, 26 mil salvadoreños viven de la pesca artesanal e industrial. De acuerdo al Reporte Intermedio de la Misión Japonesa, de la producción pesquera en el Departamento de La Libertad, el 65% se consume en estado fresco. El MAG (Ministerio de Agricultura y Ganadería), en la “Guía Técnica. Pesca Costera de El Salvador” (2003), asegura que el consumo pesquero de la población salvadoreña es de 2 kg por persona y a pesar que estos datos reflejan que la población no es tradicionalmente consumidora de productos marinos se pretende atraer al consumidor potencial innovando con productos de mejor calidad y alto valor nutricional. En los productos marinos, la velocidad de deterioro después de la captura y la muerte es más elevada que la de otro tipo de carnes. La velocidad de deterioro varia según las especies, sexo, estado fisiológico, estación del año, tiempo de comercialización, temperatura, condiciones de venta y almacenamiento. Los cambios bioquímicos que experimenta el pescado dan lugar a diferentes etapas de deterioro y por consiguiente diferentes grados de frescura que son de importancia para la aceptación de la calidad del pescado, estos se encuentran determinados por los compuesto nitrogenados no proteicos de los músculos de los pescados. i En el siguiente trabajo se realizó un estudio de las antes mencionadas bases nitrogenadas no proteicas (NNP) presentes en el proceso de degradación propio del músculo de pescado fresco. La técnica utilizada es la determinación de bases volátiles nitrogenadas totales (NBVT) y trimetilamina (TMA) fue a través del método de análisis químicos de semi microdestilación. Las muestras fueron procesadas en estado fresco tal y como se comercializan en los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán del departamento de La Libertad. Finalmente, los resultados obtenidos en la investigación permitieron afirmar que los indicadores seleccionados fueron los adecuados y en los resultados de laboratorio se pudieron correlacionar los cambios organolépticos presentados por las muestras, aumentando los valores de dichos indicadores a medida que aumentaba tiempo de almacenamiento; se estudió la relación de frescura con la degradación proteica que sufrieron los pescados por los cambios de sus componentes químicos y así se pudo determinar en que condiciones se degradaron las proteínas. ii 1 II. GENERALIDADES 2.1 Planteamiento de la investigación En el músculo de especies marinas existen compuestos nitrogenados no proteicos (NNP) que se utilizan como índices de calidad, estos corresponden al contenido de bases volátiles nitrogenadas totales (NBVT) y sus principales componentes como el óxido de trimetilamina (OTMA) que se encuentra presente en el pescado vivo y como resultado de la degradación, después de la muerte del pescado; se reduce principalmente a trimetilamina (TMA) y otros compuestos como dimetilamina (DMA) y amoniaco. Otro índice de calidad y de gran importancia es el pH, ya que este indica el inicio de las actividades propias de la degradación y representa la etapa en que las proteínas del músculo del pescado son estables. En el siguiente trabajo se determinó estos valores en tres diferentes especies de peces marinos con diferentes grados de frescura. A partir de éstos se realiza una comparación de la autodestrucción ocasionada en la carne de pescado por los compuestos químicos propios del músculo durante el deterioro físico y químico natural. El problema se encuentra en el momento en que estos productos se comercializan en los mercados municipales en donde el consumidor adquiere productos marinos con un bajo estado nutritivo acentuando la desnutrición energético proteica presente en la población salvadoreña; afectando también la calidad desde el punto de vista apariencia estética y frescura, así como el nivel de degradación proteica que sufre el pescado. Se consideran factores que afectan la calidad: el rigor mortis, transporte, condiciones de almacenamiento y el tiempo que prevalece a su 2 medio ambiente, es decir, aquellas condiciones higiénicas en las que se maneja dicho alimento en los mercados. Es importante mencionar que el deterioro ocasionado en el músculo del pescado es influenciado en aquellos sustratos donde se producen las bases volátiles como son los carbohidratos (como el lactado y la ribosa), los nucleótidos (como la inosina monofosfato y la inosina) y otras moléculas de nitrógeno no proteico; así como también los aminoácidos son sustratos parcialmente importantes para la formación de sulfitos y amoniaco. Todos ellos sirvieron de referencia para el desarrollo de esta investigación y conocer de forma mas detallada las condiciones nutricionales en la que la población salvadoreña consume la carne de pescado en estado fresco. Estudios realizados en pescados frescos consideran que el contenido de bases volátiles nitrogenadas totales (NBVT) no debe exceder de 20 mg N/100 g para el pescado fresco, si la cifra llega a 30 mg N/100 g se considera que el pescado esta pasado y no es apto para el consumo humano; por lo que nos planteamos la siguiente pregunta: ¿Es posible que a partir de las mediciones de bases volátiles nitrogenadas totales y la trimetilamina (TMA) determinar el estado de frescura de las muestras de pescado y recomendar un mejor manejo para evitar la degradación proteica? 2.2 Delimitación de la investigación La investigación se delimitó al estudio de las sustancias vinculadas en el deterioro de la carne de pescado que se emplean como índice de calidad, siendo estas las bases volátiles nitrogenadas totales (NBVT) y la trimetilamina (TMA) para determinar el grado de frescura de los peces luego 3 de su captura. Por lo tanto, la determinación de la calidad de las muestras en estado fresco se encuentra dada por estos dos compuestos. Por otra parte, se estableció como punto geográfico de estudio, el departamento de La Libertad, en donde la venta y comercialización de la pesca artesanal se basa del aprovechamiento del pargo, róbalo, corvina, bagre, macarela, camarón, fauna acompañante de camarón y algunos moluscos. De todas las anteriores el Bagre (Galeichthys felinis), la Corvina (Cynoscion sp.) y el Pargo (Lutjanus novemfasciatus) fueron las especies a estudiar en esta investigación ya que demostraron ser de gran consumo por la población salvadoreña debido a la accesibilidad económica y a las cualidades que éstos tienen para diferentes tipos de preparados ya sea en forma casera, restaurantes, hoteles y otros. Estas especies marinas son consideradas carnes magras y grasas de alto contenido proteico y valor biológico. Este estudio se llevó a cabo en dos mercados del departamento de La Libertad: mercado municipal de Antiguo Cuscatlán y Santa Tecla, por considerarse de mayor comercialización y consumo de estas tres especies. Los análisis se efectuaron a través del método químico más adecuado y se utilizaron en la determinación de bases volátiles nitrogenadas totales del pescado, se desarrollaron en la Universidad Dr. José Matías Delgado específicamente en los laboratorios de química de la Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola. 4 2.3 Justificación de la investigación El Salvador es un país con un moderado consumo de pescado fresco per capita y el sector extractivo de este recurso tiene una gran importancia en el tejido económico de nuestro país. En este contexto hay tres especies que tienen relevancia comercial para el sector pesquero y se encuentran en las preferencias de muchos consumidores por su precio relativamente accesible. Estas especies son el Pargo (Lutjanus novemfasciatus), Bagre (Galeichthys felinis) y Corvina (Cynoscion sp.). Estas especies de gran demanda son muy delicadas, en lo que a su conservación se refiere, debido a su alta fragilidad muscular y alta actividad metabólica por ello, la necesidad de verificar el grado de frescura y degradación proteica para garantizar su óptima conservación y por lo consiguiente lograr mayor calidad y valor añadido. Es un hecho que la calidad y frescura, así como el grado de deterioro que sufren las especies marinas durante la captura y la muerte, están relacionadas íntimamente con la calidad nutricional e inocuidad con la que éstos son ofrecidos al consumidor y el impacto que éstos tienen en la salud de la población salvadoreña. Debido a ésta, la investigación se orientó a ofrecer lineamientos de acciones entre las diferentes instituciones del sector público y privado que trabajan en la búsqueda de garantizar la Seguridad Alimentaria y Nutricional del pueblo salvadoreño de manera sostenible para contribuir al desarrollo humano del país. Se investigó para beneficio de los consumidores el estado de frescura en que es ofrecida la carne de pescado y las condiciones a que éstas son sometidas a partir, ya sea de una pesca artesanal o una pesca industrial; 5 también, ofrecer parámetros que ayuden a medir los cambios organolépticos y que sirven como indicadores para aplicar controles que eviten o disminuyan el grado de deterioro que en la actualidad presentan estos productos al ser comercializados en nuestro mercados. De hecho, los procesos de deterioro en pescados frescos se manifiestan desde el momento de la captura hasta que el pez llega al consumidor final, debido a que el pescado sufre fluctuaciones en la temperatura de transporte y almacenamiento cuando se rompe la cadena fría. 2.4 Objetivos de la investigación 2.4.1 Objetivo general Evaluar la degradación proteica que sufren las carnes frescas de pescados, y las condiciones en que éstas son comercializadas en dos diferentes mercados municipales (Antiguo Cuscatlán y Santa Tecla), utilizando como método de calidad y frescura la medición del nitrógeno de bases volátiles totales (N-BVT) y nitrógeno de trimetilamina (NTMA). 2.4.2 Objetivos específicos Evaluar la degradación proteica de la carne fresca de tres especies diferentes de pescado sometidas a las mismas condiciones utilizando como parámetro de medición las bases volátiles nitrogenadas totales (N-BVT) y nitrógeno de trimetilamina (N-TMA) presente en los productos marinos. Evaluar los parámetros de calidad que puedan ser utilizados para analizar la degradación proteica de la carne fresca. 6 Identificar cuales son las condiciones en que las carnes frescas de pescado son comercializadas en los mercados de Antiguo Cuscatlán y Santa Tecla. Evaluar por métodos químicos las bases volátiles nitrogenadas totales (N-BVT) y trimetilamina (TMA) para verificar el grado de deterioro e inocuidad en que los pescados son comercializados en dichos mercados. Verificar la relación existente entre el contenido de bases volátiles nitrogenadas totales (N-BVT), trimetilamina (N-TMA) y proteínas en el periodo de almacenamiento. III. Revisión de literatura 3.1 Antecedentes A) Pesca en El Salvador De acuerdo al Ministerio de Agricultura y Ganadería de El Salvador (MAG), en el documento “Guía técnica. Pesca costera en El Salvador”, (2003), la línea costera de nuestro país tiene una longitud total de 260.1 kilómetros que comprende desde Bola de Monte, en el departamento de Sonsonate, hasta Isla Meanguera, en el Departamento de La Unión. Según la FAO, en el documento “Resumen informativo sobre la pesca por países” de 2001, El Salvador realiza la pesca artesanal a lo largo de todo el litoral del país (Pacífico), bahías y esteros. Se orienta a la captura de especies multiespecíficas (pargos, corvinas, tiburones, bagre, entre otros). 7 El boletín de Estadísticas Pesqueras 2000, da cuenta de la existencia de un total de 9,567 personas dedicadas a esta actividad, sin especificar entre permanentes y temporarios, no obstante se ha estimado que en promedio un 23 por ciento de ellos es cantidad real de pescadores profesionales. A través de la costa se han identificado 34 sitios de desembarque que son utilizados por pescadores individuales, grupos solidarios y cooperativas. De todos ellos sólo cuatro tienen facilidades en tal sentido: Puerto de Acajutla, La Libertad, Puerto El Triunfo y el Puerto Pesquero Industrial de Punta Gorda. Se cuenta con capacidad para la fabricación y reparación de embarcaciones de fibra de vidrio y madera y de los aparejos de pesca. Asimismo es de destacar la operación de la Terminal Pesquera de La Herradura que posee facilidades de manejo y preservación de productos, además de servir de base a la actividad de varias cooperativas. Las pesquerías de El Salvador tienen como componentes principales la pesca industrial y la pesca artesanal (pescadores individuales y organizados en cooperativas y grupos solidarios o en armadores de pequeña escala), que se dedican al aprovechamiento de diversas especies marinas y continentales; ambas modalidades difieren en el tipo de embarcaciones utilizadas y en los medios de captura y en aspectos económicos, sociales, operativos y de organización. Los desembarques pesqueros totales anuales registrados en el período de 1991-2000, refleja un promedio superior a las 13,000 toneladas, aproximadamente un 72 por ciento corresponde a la pesca artesanal y un 28 por ciento a la pesca industrial. (Resumen Informático sobre la Pesca por Países, 2001) 8 B) Trimetilamina (TMA) como índice de frescura En el libro “Tecnologías de los Productos del Mar” Zdzislaw E.S. (1994), sugiere que el limite para el rechace de pescado esta por lo general en 5-10 mg de N-TMA por 100 g y que la tasa de N-BVT de 30 mg N-BVT/100 g se considera como limite de aceptación para el pescado fresco. En los Reglamentos de los Productos Pesqueros y Acuícolas de Honduras en el Articulo 101 de la Inspección de los Productos de la Pesca y la Acuicultura, el Servicio Nacional de Sanidad Agropecuaria (SENASA), establece que los niveles de tolerancia máxima permitida sobre la presencia de sustancias químicas para el nitrógeno básico volátil total (NVBT) es de 25 mg N/ 100 g y para TMA de 5-10 mg N/ 100 g. En el año de 1989, García C., en su texto “Revisión de las Tecnologías de Procesamiento de Crustáceos de Importancia Comercial”, indica que crustáceos muy frescos presentan valores de BVT entre 10-20 mg N/100 g, crustáceos en estado normal entre 20-30 mg N/100 g y con indicio de deterioro los valores hacienden a 30 y 40 mg N/100 g. De la misma manera, se ha sugerido diversas cifras de N-BVT relacionadas con la calidad del pescado; clasificando al pescado en tres categorías: Clase I: N-BVT < 30 mg/100 g Clase II: 30 mg/100 g < N-BVT < 40 mg/100 g Clase III: N-BVT > 40 mg/100 g (un pescado que presenta estas cantidades no seria apto para el consumo humano). Por otro lado, la Unión Europea propone como límite máximo de contenido aceptable para el consumo humano en la mayoría de las especies de 30 a 35 mg/100 g de N-BVT. (eur-lex.europ.eu) 9 Bertullio, E. (2001), propone los siguientes parámetros para pescados blancos de mar: Fresco: 0 a 20 mg de N-TMA/100 g Dudoso: 25 a 30 mg de N-TMA/100 g Alterado: + de 30 mg de N-TMA/100 g Finalmente, Pearson D. (1998), en su obra “Técnicas de Laboratorio para el Análisis de Alimentos” propone el siguiente cuadro para la aceptabilidad de las carnes crudas de pescado: Cuadro No. 1 Evaluación de la aceptabilidad de la carne de pescado a partir de nitrógeno volátil total. Nitrógeno Volátil Total mg N/100 g de Sustancia Aceptabilidad Pescado blanco Fresco ≤ 20 Pescado blanco Aceptable 20-30 Pescado blanco Casi alterado > 30 Pescado blanco Alterado ≥ 50 muestra Fuente: Pearson, D. (1998) 3.2 Aspectos biológicos A) Pescado La FAO (1998), define a los peces generalmente como vertebrados acuáticos, que utilizan branquias para obtener oxigeno del agua y poseen aletas con un numero variable de elementos esqueléticos llamados radios. 10 B) Características biológicas del pescado Zdzislaw, E.S. (1994), describe las características biológicas del pescado de la siguiente manera: La mayoría de los peces poseen forma aerodinámica, tienen forma de huso o torpedo, así como también pueden presentar cuerpo aplastado en sentido lateral o dorsoventral. Hay también peces de forma cilíndrica. El cuerpo de la mayoría de los peces esta cubierto de escamas insertas en la piel. Las escamas están recubiertas a su vez por una epidermis con muchas células mucosas que excretan una sustancia viscosa que constituye una capa protectora del cuerpo del pez. El esqueleto de los peces óseos consta de la columna vertebral, cráneo y huesos que sostienen las aletas. Algunos peces cuentan también con un gran número de finas espinas intramusculares. En los peces cartilaginosos, así como su nombre lo dice, el esqueleto es de naturaleza cartilaginosa. La mayoría de las especies piscícolas cuentan con dos aletas pectorales y dos pélvicas, una gran aleta caudal vertical, y aletas impares bajo la cola (aleta anal) y a lo largo del dorso (aleta dorsal). Las aletas tienen forma distinta, y las aletas impares difieren en número según las especies. El grueso de la musculatura del tronco del pez esta compuesto por dos grandes músculos laterales que discurren a lo largo de ambos lados del cuerpo, desde la cabeza hasta la cola. Cada músculo esta dividido en parte dorsal y parte ventral por un septo horizontal de tejido conjuntivo. (Zdzislaw, E.S. 1994) De acuerdo a Huss, H.H. (1998), cinco clases de vertebrados poseen especies que pueden ser llamados peces, pero solo dos grandes grupos de peces marinos son generalmente importantes y están ampliamente 11 distribuidos en el ambiente acuático, y se clasifican de acuerdo con la naturaleza de su esqueleto; los peces cartilaginosos (Condrictios), como los son los tiburones y las rayas, y los peces óseos (Osteictios), por ejemplo corvinas, pargos y todo el resto de peces. 3.3 Corvina La Corvina pertenece a la gran familia Scianidae, se conocen 70 géneros y 260 especies, residentes de aguas saladas y de aguas semi-saladas en estuarios costeros. (elanzuelo.com) 3.3.1 Clasificación Cuadro No. 2 Clasificación taxonómica de la corvina Grupo: Reino: Phylum: Subphylum: Clase: Subclase: Orden: Familia: Genero: Especies: Nombre común: Pises Animalia Chordata Vertebrata Osteichthyes Actinopterygii Perciformes Scianidae Cynoscion Varias Corvina (Peses) (Animal) (Cordados) (Vertebrados) (Óseos) (Aletas con radios) (Brasil hasta USA) Fuente: López, J.M. (2002 3.3.2 Fisiología y morfología López, J.M. (2002), en el documento “La Pesca de la Corvina”, la describe como un pez de cuerpo comprimido lateralmente lo que le permite generar nado eficiente en las corrientes oceánicas, la mandíbula inferior se proyecta claramente delante de la superior, su aleta dorsal es bastante larga, 12 posee de 20 a 35 radios, la aleta anal posee de 6 a 13 radios y sus vértebras corresponden a un número de 24 a 29. Su colorido, es variable, con tonalidades que van desde los oscuros colores del espectro de banda angosta a colores claros. Sus ojos son bastante grandes para la dimensión de la cabeza lo que es indicativo que utilizan la visión como parte de la identificación de presas y compañeros en el cardumen. La línea lateral sale desde la parte superior del opérculo y termina en la base de la aleta caudal, se ve claramente marcada a un costado del pez y le sirve para identificar los movimientos de los compañeros y las señales vivientes de las presas potenciales. Algunas corvinas presentan pequeñas barbillas en su boca que pueden tener la propiedad de detectar pequeñas oscilaciones de movimiento cuando el pez se encuentra buscando su alimento en los fondos. La corvina es considerada un pez que caza en los fondos en donde encuentra a sus presas favoritas, crustáceos, peces y moluscos. Generalmente nada en cardúmenes de cantidad variable de individuos, aunque los grandes especimenes se les puede observar nadar solitarios por las aguas someras de los estuarios costeros. En algunas de las especies se ha comprobado que las hembras tienen una tasa de crecimiento superior a la de los machos. Existe referencia de corvinas que sobrepasan los diez años de vida lo cual es sorprendente para peces que viven salvajes en los océanos. (López J.M. 2002) 13 3.3.3 Zoogeografía de la especie Las corvinas tienen una amplia distribución a nivel mundial pudiéndose encontrar en los mares tropicales y subtropicales de los Océanos Atlántico e Indo Pacífico. Siendo una familia tan amplia es relevante mencionar que pueden ser encontradas en el continente Americano desde Argentina hasta los Estados Unidos de Norteamérica y en países de otras zonas geográficas tales como: Alemania, Arabia, Bulgaria, Egipto, España, Francia, Israel, Libia, Mónaco, Malta, Portugal, Rusia, Siria, Turquía, entre otros. Las corvinas pueden ser encontradas cerca de las bocas de los ríos, en zonas rocosas y en zonas con vegetación marina, asimismo en zonas de aguas profundas. Parte de la clave para encontrarlas es la posibilidad que tengan las especies de encontrar alimento adecuado para su sobrevivencia y desarrollo. (elanzuelo.com) Cuadro No. 3 Tabla de condiciones y requerimientos ambientales de la corvina Oxígeno Aguas con menos de 4 a 9 ppm de oxígeno disuelto. pH 7.5 a 8.5 Turbidez Menos de 10 ppm Temperatura Salinidad Habita en temperaturas que van de los 26 a los 32 °C Se encuentra en áreas que van de moderada a alta salinidad de 0 a 45 ppt Fuentes: fwie.fw.vt.edu y nicovita.com.pe Tipo de Sustrato Crustáceos y pescados 14 3.4 Bagre El bagre pertenece a la familia Ariidae y se conocen unas 2,200 especies de peces, de las cuales unas 1,200 viven en América del Sur. 3.4.1 Clasificación Cuadro No. 4 Clasificación taxonómica del bagre Nombre común: Reino: Phylum: Clase: Orden: Familia: Nombre científico: (género y especie) Bagre (pez gato) Animalia Chordata (Cordados) Osteichthyes Siluriformes Ariidae Galeichthys (=Arius) felis Fuente: redescolar.ilce.edu (2002) 3.4.2 Fisiología y morfología El nombre de pez gato se deriva de los tentáculos o barbillas que se extienden a cada lado de la mandíbula superior e inferior, semejantes a los bigotes de un gato. Las aletas dorsales y pectorales están provistas a menudo de espinas puntiagudas, algunas veces venenosas, que utilizan como defensa y que pueden ocasionar heridas graves. Están cubiertos de placas óseas embutidas bajo la piel lisa; sus dientes son menudos y abundantes y su boca es amplia; el dorso y flanco es color gris pardo y el vientre plateado; su talla máxima puede llegar a los 39 cm., y su peso por lo general va hasta casi los 8 kilos. Uno de los sentidos que tiene más desarrollado es el del gusto, y lo logra a través de su barba, en cuya superficie hay una serie de botones gustativos con los que puede saborear los fondos barrosos de los ríos, 15 detectando las sobras barrosas que se encuentran en él. Se ha descubierto que no sólo la barba le sirve para saborear, sino también lo hace con su cuerpo falto de escamas y con su cola que le sirve como lengua. (redescolar.ilce.edu) 3.4.3 Zoogeografía de la especie Su período de vida es de 6 a 8 años como máximo. Su habitat es acuático (de agua salada y dulce). Viven en ambientes vegetales de fondos blandos y fangosos, escasa corriente y aguas turbias. Vive en el agua dulce y salada, pero pasa la mayor parte de su vida en el mar; es muy común verlo en las costas y ríos en verano y otoño. (elanzuelo.com) Se desarrolla en el agua templada, y en temporada de frío casi no se le ve, pues se esconde entre las rocas y plantas acuáticas. De acuerdo a Hernández, L.A. (1982), su distribución geográfica es desde Isla Altamira (México) hasta Perú. Cuadro No. 5 Tabla de condiciones y requerimientos ambientales del bagre. Oxígeno pH Turbidez Temperatura Salinidad La tasa de consumo de oxigeno del bagre varia con la concentración de oxigeno disuelto, estado de alimentación, peso del pez y El rango tolerable para el bagre es de 6.5 a 9, con un optimo de 7.5 El bagre del mar tiende ser encontrado en aguas turbias, bajas, costeras con la arena o substrato El bagre del mar prefiere temperaturas del agua sobre 25 grados °C, pero evita las aguas sobre 37 grados °C. El rango El bagre del mar se ha capturado de las aguas con las salinidades que se extienden a partir de 0 a 40 ppt. Tipo de Sustrato Caracoles, crustáceos (camarones y cangrejos) algas y microorganis mos. 16 temperatura del agua. Se citan niveles de oxígeno de de 4 a 6 mg/L para esta especie. del fango. Hay una preferencia por fondos fangosos o arenosos costeros del alto contenido orgánico. 80 mg/L óptimo de crecimiento es de 22 a 30 °C Fuente: fwie.fw.vt.edu 3.5 Pargo El Pargo pertenece a una inmensa familia llamada Lutjanidae, y ésta a su vez la conforman más de 350 especies, divididas en prácticamente 17 géneros, siendo el más representativo a nivel mundial Lutjanus. (elanzuelo.com) 3.5.1 Clasificación Cuadro No. 6 Clasificación taxonómica del pargo Grupo: Reino: Phylum: Subphylum: Clase: Subclase: Orden: Familia: Especies: Nombre Común: Pises Animalia Chordata Vertebrata Osteichthyes Actinopterygii Perciformes Lutjanidae Lutjanus Pargo (Peses) (Animal) (Cordados) (Vertebrados) (Óseos) (Aletas con radios) (USA hasta Ecuador) Fuente: Hernández, I. (2001) 17 3.5.2 Fisiología y morfología De acuerdo a Hernández, I. (2001), en el documento “La Pesca del Pargo”, debido a que se trata de una familia, las características no varían mucho de una especie a otra, a excepción de los colores o tonalidades de los mismos. Por lo general la cabeza y la altura del cuerpo siempre será de 2.5 a 3 veces la longitud total de su cuerpo; la aleta dorsal tiene 10 espinas con 12 radios; la aleta anal con tres espinas y 8 radios; entre 47 y 52 escamas en serie horizontal bajo la línea lateral. Su cuerpo generalmente es elongado y comprimido, lo que le permite ser un poderoso nadador. Su hocico es puntiagudo, con boca alargada y grande en posición horizontal con mandíbula inferior ligeramente proyectada hacia delante. Su hocico es duro y resistente, en su mandíbula superior posee una línea interior con dientes tipo canino y cuatro dientes de mayor tamaño sobresalen de la mandíbula superior. (elanzuelo.com) 3.5.3 Zoogeografía de la especie Esta especie esta distribuida en los Océanos Índico, Atlántico y Pacífico desde el sur de California hasta Corozal, Colombia. Existiendo registros de capturas hasta la zona Norte de Perú. Son residentes de las zonas del litoral, incluyendo manglares, arrecifes, lagunas costeras, estuarios y áreas con agua dulce con salinidades hasta de un 50 ppm (partes por millón). (Hernández, I. 2001) El pargo es una especie adaptada del todo a las condiciones presentes en los Trópicos y Subtrópicos del planeta. 18 Cuadro No. 7 Tabla de condiciones y requerimientos ambientales del pargo. Oxígeno pH Temperatura Salinidad 5 a 7.5 mg/l 7a8 De 25 a 37 °C <500 ppt Tipo de Sustrato Son carnívoros se alimentan de peces y crustáceos. Fuente: scielo.cl 3.6 Anatomía del músculo del pescado Zdzislaw, E.S. (1994), explica que la principal parte comestible de los animales marinos se conforma por los músculos corporales de mayor tamaño. Los músculos que forman los filetes de los peces reciben el nombre de grandes músculos laterales (la parte superior del filete se denomina músculo dorsal y la parte inferior músculo ventral – Huss, H.H. 1998) y por lo general son de tonalidad blanquecina a los que se le domina músculos blancos u ordinarios. Están cubiertos por capas musculares más delgadas, que se extienden por debajo de la piel. El músculo subcutáneo contiene mucha mioglobina, recibiendo el nombre de músculo rojo u oscuro. La cantidad y distribución de la carne oscura en el cuerpo del pez es una característica de las diferentes especies. Los músculos del pescado están divididos por delgadas membranas de tejido conjuntivo (miocomata) en segmentos llamados miotomos. El número de miotomos se corresponden con el de vértebras de la columna vertebral. Cada miotomo esta compuesto por numerosas células llamadas fibras musculares, que discurren en paralelo a lo largo del eje longitudinal del pez. Las fibras musculares suelen tener una longitud inferior a 20 mm, y 0.02-1.0 de diámetro. Cada fibra esta rodeada por membrana llamada sarcolema, 19 contiene finas fibrillas colágenas, las cuales se funden con la miocomata en la unión miotomo-miocomata. (Zdzislaw, E.S. 1994) Estas finas fibrillas o miofibrillas contienen proteínas contráctiles, actina y miosina. Estas proteínas o filamentos están ordenadas en forma alternada muy característica, haciendo que el músculo parezca estriado. (Huss, H.H. 1998) Las miofibrillas están segmentadas en sarcómeros, constituidos por miofilamentos delgados y gruesos y limitados por líneas z, las interacciones de los filamentos son la base de la contracción muscular y de la rigidez cadavérica que adquiere el cuerpo post mortem. (Zdzislaw, E.S. 1994) 3.6.1 Mecanismo de contracción muscular Huss, H.H. (1998), explica que la contracción muscular comienza cuando un impulso nervioso libera Ca++ del retículo sarcoplasmático y lo lleva a las miofibrillas. Cuando la concentración de Ca++ aumenta en las enzimas activas situadas en el filamento de la miosina, la enzima ATP-asa degrada el ATP que se encuentra entre los filamentos de actina y miosina, originando liberación de energía. La mayor parte de la energía es utilizada como energía de contracción, haciendo que los filamentos de actina se deslicen entre los filamentos de miosina, a menudo en enchufe, con lo cual la fibra muscular se contrae. Cuando la reacción se invierte (o sea, cuando el Ca++ es impulsado a su lugar de origen, la actividad contráctil de la ATPasa se detiene y permite que los filamentos se deslicen pasivamente recuperando cada uno su estado inicial, el músculo se relaja. La fuente de energía para la generación de ATP en el músculo blanco es el glucógeno, mientras que en el músculo oscuro también puede ser 20 obtenida a partir de los lípidos. La mayor diferencia radica en que el músculo oscuro posee muchas mas mitocondrias que el músculo blanco, permitiéndole al músculo oscuro operar extensivamente un metabolismo de energía aeróbico, resultando en la producción de CO2 y H2O como productos finales. El músculo blanco, genera la energía principalmente mediante el metabolismo anaeróbico, acumulando ácido láctico, el cual debe ser transportado al hígado para su metabolización. Luego de la muerte, las funciones bioquímicas y fisicoquímicas regulatorias que operan en el pez vivo cesan y se agotan las fuentes de energía del músculo. Cuando el nivel de ATP alcanza su mínimo, los filamentos de miosina y actina quedan unidos en forma irreversible, produciendo el rigor mortis. (FAO, 1998) 3.7 Composición química La composición química de los peces varia considerablemente entre las diferentes especies, dependiendo de la edad, sexo, medio ambiente y estación del año. (Huss, H.H., 1998) Debido a los períodos de inanición a los que se somete el pez, ya sea por razones naturales y fisiológicas (como el desove o migración) o bien por factores externos como la escasez de alimento; los peces que tienen energía almacenada en forma de lípidos y proteínas recurrirán a ella, agotando las reservas y originando una reducción de la condición biológica del pez. (Huss, H.H. 1998) El músculo del pescado contiene principales constituyentes químicos como son agua, proteína bruta y lípidos (fundaciondelcorazon.com); en conjunto forman hasta el 98% del peso total de la carne. Estos tienen máxima 21 importancia en lo referente a valor nutritivo, propiedades texturales, calidad organoléptica y capacidad de almacenamiento de la carne. Los restantes constituyentes, es decir, los hidratos de carbono, vitaminas y sales minerales, aunque se presentan en menor cantidad, también desempeñan un significativo papel en los procesos bioquímicos que tienen lugar en los tejidos post mortem. (Zdzislaw, E.S. 1994) A continuación veremos una tabla donde se aprecian los componentes más importantes con los respectivos rangos porcentuales presentes en el músculo del pescado: Cuadro No. 8 Principales constituyentes (porcentaje) del músculo de pescado en 100 g. Constituyente Proteínas Lípidos Carbohidratos Cenizas Agua Mínimo 6 0,1 0,4 28 Pescado (filete) Variación normal 16-21 0,2 – 25 < 0,5 1,2-1,5 66-81 Máximo 28 67 1,5 96 Fuente: Huss H.H. (1998) A continuación se muestran las variaciones en el contenido de agua, lípidos y proteínas de varias especies de pescados. 22 Cuadro No. 9 Composición química de los filetes de varias especies de pescados Especie Anguila Salmón Trucha Atún Pargo Pejerrey Carpa Corvina Bagre Nombre científico Agua (%) Lípidos (%) Proteínas (%) Anguilla anguilla 60-71 8,0-31,0 14,4 Salmo salar 67-77 0,3-14,0 21,5 Salmo trutta 70-79 1,2-10,8 18,8-19,1 Thunnus spp. 71 4,1 25,2 Umbrina canosai 75.4 3.9 19.1 Basilichthys bornariensis 80 0,7-3,6 17,3-17,9 Cyprinus carpio 81,6 2,1 16,0 Micropogonias undulatus 77.0 1.9 19.5 Ageneiosus spp. 79,0 3,7 14,8 Fuente: Huss H.H. (1998) Cuadro No. 10 Composición porcentual de la porción comestible del pescado en 100 g. Agua Grasa Proteína (%) (%) (%) Blanco redondo Bacalao, merluza, pescadilla 79-84 0.1-0.9 15-20 Blanco plano Platija, lenguado 77-81 0.5-4.0 16-19 Blanco plano Hipogloso 75-80 0.5-9.5 15-19 Graso Arenque 60-75 7-30 14-20 Graso Caballa 60-75 2-20 17-23 Pescado graso Anguila 57-82 2-28 17 De agua dulce Salmón 67 0.3-15 16-25 Mariscos Cangrejo, langosta, camarón 62-73 2-5 17-24 Elasmobranquio Raya 77-82 0.2-2 18-23 Tipo de Pescado Especie Fuente: Kirk R.S., Sawyer R., Egan H. (2002) 23 3.7.1 Carbohidratos El contenido de carbohidratos en el músculo de pescado es muy bajo, generalmente inferior al 0,5–6% por ciento. Esto es típico del músculo estriado, en el cual los carbohidratos se encuentran en forma de glucógeno y como parte de los constituyentes químicos de los nucleótidos. Estos últimos son la fuente de ribosa liberada como una consecuencia de los cambios autolíticos post mortem. (Huss, H.H., 1998) 3.7.2 Agua Los músculos de los peces contienen desde el 50 al 85% de agua, dependiendo de la especie y del estado del animal en particular. El agua desempeña el importante papel de solvente de solutos orgánicos e inorgánicos, creando el medio idóneo para los procesos bioquímicos que acontecen en las células, a la vez intervienen activamente en muchas reacciones; participa también en la conformación y reactividad de las proteínas: la hidratación de éstas es responsable de las propiedades reológicas y jugosidad de los alimentos musculosos. (Zdzislaw, E.S. 1994) El estado del agua en la carne de pescado depende de diversas interacciones de las estructuras hídricas con diferentes solutos y, particularmente, con las proteínas. Los residuos aminoácidos hidrófilos participan en la fijación de hidrógeno a moléculas y estructuras acuosas, mientras que los grupos hidrófobos de lípidos y proteínas actúan como creadores de estructuras. Por lo anterior, dentro de la carne de pescado, sólo una parte del medio acuoso puede considerarse como agua libre. El resto se ve implicado en diferente proporción en las interacciones de las soluciones agua-proteína-lípidos. (Zdzislaw, E.S., 1994) 24 3.7.3 Lípidos Desde el punto de vista químico los pescados se pueden clasificar según contenido de grasa siendo magros, semigrasos y grasos: Pescados Azules o Grasos: son las especies que almacenan lípidos en células grasas distribuidas en los tejidos del cuerpo. Su contenido de grasa puede alcanzar hasta el 10%. Pescados Semigrasos: son especies que almacenan lípidos solo en limitadas partes de sus tejidos corporales o en menor cantidad que las especies grasas típicas. Contiene un nivel de grasa superior al 2.5% sin sobrepasar el 6%. Pescados Blancos o Magros: son aquellas especies que almacenan lípidos sólo en el hígado. Su contenido de grasa no sobrepasa el 2.5%. (sabormediterraneo.com) El contenido de grasa en el pescado, independientemente de que sea magro o graso, tiene consecuencias sobre las características tecnológicas post mortem. Los cambios que ocurren en el pescado magro fresco pueden ser anticipados mediante el conocimiento de las reacciones bioquímicas en la fracción proteica, mientras que en las especies grasas deben incluirse los cambios en la fracción lipídica. (Huss, H.H. 1998) Los lípidos presentes en las especies de peces óseos pueden ser divididos en dos grandes grupos: los fosfolípidos y los triglicéridos. Los fosfolípidos constituyen la estructura integral de la unidad de membranas en la célula, por lo tanto, a menudo se le denomina lípidos estructurales. Los triglicéridos son lípidos empleados para el almacenamiento de energía en depósitos de grasas, generalmente dentro de células especiales rodeadas por 25 una membrana fosfolipídica y una red de colágeno relativamente débil. Los triglicéridos son a menudo denominados depósitos de grasa. Algunos peces contienen ceras esterificadas como parte de sus depósitos de grasa. (FAO, 1998) El músculo blanco de un pez magro, contiene menos del 1 por ciento de lípidos. De este porcentaje, los fosfolípidos constituyen el 90 por ciento. La fracción fosfolipídica en el pescado magro consiste en un 69 por ciento de fosfatidil-colina, 19 por ciento de fosfatil-etanolamina y 5 por ciento de fosfatidil-serina. Adicionalmente, existen otros fosfolípidos pero en cantidades inferiores. Todos los fosfolípidos se encuentran almacenados en las estructuras de la membrana, incluyendo la membrana celular, el retículo endoplasmático y otros sistemas tubulares intracelulares, como también en membranas de los organelos como las mitocondrias. Además de fosfolípidos, las membranas también contienen colesterol, que contribuye a la rigidez de la membrana. En el tejido muscular de pescados magros se puede encontrar colesterol hasta en un 6 por ciento del total de los lípidos. Este nivel es similar al encontrado en los músculos de mamíferos. (Huss, H.H. 1998) Las células grasas (que constituyen los depósitos de lípidos en las especies grasas) están localizadas generalmente en el tejido subcutáneo, en los músculos del vientre y en los músculos que mueven las aletas y la cola. En algunas especies que almacenan cantidades extraordinariamente elevadas de lípidos, la grasa también puede ser depositada en la cavidad ventral. Dependiendo de la cantidad de ácidos grasos poliinsaturados, la mayor parte de las grasas en el pescado son más o menos líquidas a baja temperatura. (Huss, H.H. 1998) 26 El músculo oscuro contiene algunos triglicéridos dentro de las células musculares, incluso en peces magros, dado que este músculo es capaz de metabolizar directamente lípidos para la obtención de energía. Las células del músculo claro dependen del glucógeno como fuente de energía para el metabolismo anaeróbico. En el músculo oscuro las reservas de energía son catabolizadas completamente a CO2 y agua, mientras en el músculo claro se forma ácido láctico. La movilización de energía es mucho más rápida en el músculo claro que en el oscuro, pero la formación de ácido láctico genera fatiga, dejando el músculo incapacitado para trabajar por largos períodos a máxima velocidad. De esta forma, el músculo oscuro es usado para actividades de nado continuo y el músculo claro para movimientos súbitos. (Huss, H.H. 1998) Desde el punto de vista nutritivo los lípidos o grasas del pescado se consideran esenciales, ya que algunos ácidos como el linoleico y linolénico no son sintetizados por el organismo. En los peces estos ácidos grasos solamente constituyen alrededor del 2 por ciento del total de lípidos, un porcentaje pequeño comparado con muchos aceites vegetales. Sin embargo, los aceites de pescado contienen otros ácidos grasos poliinsaturados que pueden curar las enfermedades de la piel del mismo modo que el ácido linoleico y el ácido araquidónico. Finalmente, los lípidos del pescado transportan las vitaminas liposolubles (A, D, E y K). (fundaciondelcorazon.com) 3.7.4 Proteínas De acuerdo a Huss, H.H. (1998), las proteínas del músculo del pez se pueden dividir en tres grupos: 27 Proteínas estructurales (actina, miosina, tropomiosina y actomiosina), que constituyen el 70-80 por ciento del contenido total de proteínas (comparado con el 40 por ciento en mamíferos). Estas proteínas son solubles en soluciones salinas neutras de alta fuerza iónica (0,5 M). Proteínas sarcoplasmáticas (mioalbúmina, globulina y enzimas), que son solubles en soluciones salinas neutras de baja fuerza iónica (0,15 M). Esta fracción constituye el 25-30 por ciento del total de proteínas. Proteínas del tejido conectivo (colágeno), que constituyen aproximadamente el 3 por ciento del total de las proteínas en teleósteos y cerca del 10 por ciento en elasmobranquios (comparado con el 17 por ciento en mamíferos). Las proteínas estructurales conforman el aparato contráctil responsable de los movimientos musculares. La composición de aminoácidos es aproximadamente la misma que en las correspondientes proteínas del músculo de mamíferos, a pesar de que las propiedades físicas pueden ser ligeramente diferentes. El punto isoeléctrico (pI) está alrededor del pH 4.55.5. A estos valores de pH las proteínas presentan su menor solubilidad. La estructura conformacional de las proteínas de los peces es fácilmente modificada mediante cambios en el ambiente físico. Tratamientos con altas concentraciones salinas o calor pueden ocasionar la desnaturalización, causando cambios irreversibles en la estructura nativa de la proteína. La mayor parte de las proteínas sarcoplasmáticas son enzimas que participan en el metabolismo celular, como en el caso de la conversión de energía anaeróbica del glucógeno a ATP. Si los organelos dentro de las 28 células musculares se rompen, pueden también estar presentes en la fracción proteica las enzimas metabólicas localizadas dentro del retículo endoplasmático, las mitocondrias y los lisosomas. (Huss, H.H. 1998) Cuando los organelos se rompen, ocurren cambios en la composición de la fracción de proteínas sarcoplasmáticas. Las proteínas son sustancias organizas que contienen carbono, hidrogeno, oxigeno y nitrógeno. Están compuestas de aminoácidos (sus unidades mas simples), algunos son esenciales para nuestro organismo; es decir que necesariamente deben ser ingeridos, y que el cuerpo no es capaz de producirlos por si solo. (consumer.es) Las proteínas del pescado contienen todos los aminoácidos esenciales por lo que se considera un alimento de alto valor biológico. (nutrición.org) Cuadro No. 11 Aminoácidos esenciales (porcentaje) de varias proteínas Aminoácido Pescado Lisina Triptófano Histidina Fenilalanina Leucina Isoleucina Treonina Metionina-cisteína Valina 8,8 1,0 2,0 3,9 8,4 6,0 4,6 4,0 6,0 Fuente: Huss, H.H. (1998) 29 3.7.5 Vitaminas y minerales El contenido de vitaminas en el pescado puede variar según el estado de madurez sexual, el grado de desarrollo, habita y especie. El pescado contiene vitaminas liposolubles e hidrosolubles. (fundaciondelcorazon.com) En general, la carne de pescado es una buena fuente de vitamina B y en el caso de las especies grasas, también de vitaminas A y D. (Huss, H.H. 1998) El músculo del pescado es rico en minerales, se considera una fuente particularmente valiosa de calcio y fósforo, así como también de hierro y cobre. Los peces de mar tienen un alto contenido de yodo. A continuación, se indican los contenidos de algunos minerales. Cuadro No. 12 Algunos constituyentes minerales del músculo de pescado. Elemento Sodio Potasio Calcio Magnesio Fósforo Valor promedio (mg/100g) 72 278 79 38 190 Rango (mg/100g) 30 – 134 19 – 502 19 – 881 4,5 – 452 68 – 550 Fuente: Huss, H.H. (1998) 3.7.6 Compuestos extractables que contienen nitrógeno El pescado también contiene otros componentes nitrogenados no proteicos disueltos en su plasma y líquidos intercelulares que contribuyen grandemente a su sabor característico y a su olor cuando está en proceso de deterioro. (nutricion.org) Los compuestos extractables que contienen nitrógeno pueden definirse como compuestos de naturaleza no proteica, solubles en agua, de bajo peso 30 molecular y que contienen nitrógeno. Esta fracción NNP (nitrógeno no proteico) constituye en los teleósteos entre un 9 y un 18 por ciento del nitrógeno total. (Huss, H.H. 1998) Los principales componentes de esta fracción son: bases volátiles como el amoniaco y el óxido de trimetilamina (OTMA), creatina, aminoácidos libres (así como la histidina en los peces grasos, la histidina ha concentrado la mayor atención debido a que la misma puede descarboxilarse microbiológicamente a histamina), nucleótidos y bases purínicas y, en el caso de los peces cartilaginosos, urea. (Huss, H.H., 1998) 3.8 Cambios post mortem en el pescado 3.8.1 Cambios en el pescado crudo Los primeros cambios asociados con la pérdida de frescura que sufre el pescado están relacionados con la textura y la apariencia. En la muerte del pesado, según Bykowski, P. y Dutkiewiz, D. (1996), los procesos que involucran cambios físicos y químicos causados por enzimas y microorganismos comienzan a ocurrir. El completo decaimiento del pescado es el resultado final de esos cambios. Según Oliveira, C. (2004), uno de los cambios considerado como importante antes del proceso de rigor mortis es el estadio de Irritabilidad o pre rigor: este estadio comprende el período que va desde la muerte del pescado hasta que comienza el rigor mortis. En esta etapa denotamos excitabilidad muscular marcada. Empieza la glucólisis anaerobia, con acumulación de ácido láctico y degradación del ATP a ADP y otros nucleótidos. El pH del músculo se encuentra en valores cercanos a 7 y a la palpación, notamos un músculo elástico. 31 Los cambios post-mortem que toman lugar en la textura del pescado ocurren en las siguientes fases: Secreción mucosa en la superficie del pescado. Rigor mortis Autólisis enzimática en la descomposición de los tejidos. Descomposición microbiana. La duración de cada etapa puede variar, ésto depende de las condiciones de almacenamiento, especialmente la temperatura que tiene una gran influencia en estos procesos. 3.8.2 Secreción mucosa en la superficie del pescado Bykowski, P., y Dutkiewicz, D. (1996), describen en su obra “Freshwater Fish Processing and Equipment in Small Plants”, que esta secreción es formada en ciertas células de la piel del pescado y el proceso se convierte muy activo justo después de la muerte del pescado. Algunos peces secretan más que otros. Aquellos peces que secretan grandes cantidades tienen escalas de desarrollo pobre; comúnmente la cantidad de secreción alcanza 2-3% de la masa del pescado. Este proceso se detiene con el inicio del rigor mortis. Esta sustancia contiene gran cantidad de compuestos nitrogenados y ésto provee buen alimento para los microorganismos provenientes del medio ambiente. Por lo tanto, esta secreción mucosa deteriora rápidamente: primero dando un desagradable olor al pescado y en segundo lugar abriendo el camino a una futura y profunda penetración de bacterias en el pescado. (FAO, 1996) 32 3.8.3 Rigor mortis Bykowski, P., y Dutkiewicz, D. (1996), definen el rigor mortis como el resultado de complicadas reacciones bioquímicas que tiene como resultado el acortamiento y endurecimiento de las fibras musculares, causando la rigidez en el pescado. Así mismo, de acuerdo a Oliveira, C. del Instituto de Investigaciones Pesqueras en Uruguay (2004), el cambio más dramático es el ataque del rigor mortis. Sucede después de la captura y muerte del pescado, éste sufre inmediatamente un deterioro. Este proceso de degradación es llevado a cabo en una primera etapa, por enzimas propias del músculo del pescado y posteriormente por enzimas producidas por los microorganismos que ingresan al músculo. La velocidad de deterioro varía según las especies dependiendo de diversos factores, tales como tamaño, estado fisiológico, alimentación métodos de captura, temperatura y otros. Al morir comienza una serie de cambios encaminados a la descomposición, al menos que se interponga un método de conservación que de todas formas modifica las características iniciales del pez. (Yeannes, M.A. 2001) Producida la muerte, las funciones fisiológicas normales que se llevaban a cabo en estado vivo cambian, iniciándose el proceso de degradación. Los procesos de deterioro se ven favorecidos por las siguientes causas: Al morir el pescado, se comienza a alterar la estabilidad de las membranas celulares, liberándose enzimas de los lisosomas. 33 Los mecanismos de defensa cesan, posibilitando la invasión de microorganismos desde la piel y vísceras. Al capturar un pescado, le cambiamos el medio en el que se encuentra y por lo tanto su flora microbiana normal también va a variar. Ésta, normalmente es psicrótrofa, luego de la captura se le suma por la manipulación una flora microbiana fundamentalmente mesófila. (Oliveira, C. 2004) En el rigor mortis, inmediatamente después de la muerte el músculo del pescado está totalmente relajado, la textura flexible y elástica generalmente persiste durante algunas horas y posteriormente el músculo se contrae. Cuando se torna duro y rígido, todo el cuerpo se vuelve inflexible por la contracción de las proteínas miofibrilares y se dice que el pescado está en rigor mortis. Esta condición generalmente se mantiene durante uno o más días y luego se resuelve el rigor. La resolución del rigor mortis hace que el músculo se relaje nuevamente y recupere la flexibilidad, pero no la elasticidad previa al rigor. La proporción entre el comienzo y la resolución del rigor varía según la especie y es afectada por la temperatura, la manipulación, el tamaño y las condiciones físicas del pescado. (Huss, H.H. 1998) Durante esta etapa los valores de pH del músculo llegan a su valor mínimo. Aquí los sarcómeros se encuentran contraídos y existe una formación irreversible de actomiosina. El pH del músculo se encuentra en el entorno de 6. El rigor comienza en la región de la cabeza, propagándose luego, a la región de la cola, desapareciendo luego en el mismo sentido que se instala. 34 Este estado comienza de 1 a 7 horas post-mortem y su duración es variable. (Oliveira, C. 2004) 3.8.4 Post rigor Este se inicia, según Oliveira, C. (2004), cuando el músculo empieza a ablandarse nuevamente. En esta etapa, se produce la liberación de catepsinas (enzimas proteolíticas que se encuentran en los lisosomas), las que degradarán las proteínas y péptidos provocando un ablandamiento del músculo. (Yeannes, M.I. 2001) Como resultado de esta acción enzimática sobre las proteínas estructurales del músculo, se verá facilitada la actividad microbiana. Una vez finalizado el rigor mortis comienzan a instalarse los procesos que llevan a la putrefacción del producto. A diferencia de las carnes rojas, el pescado, no pasa por el estado de maduración. 3.9 Autólisis Autólisis significa "auto-digestión". Se sabe desde hace muchos años que existen por lo menos dos tipos de deterioro en el pescado: bacteriano y enzimático. (Bender, A.E. 1994) La autólisis es un cambio asociado con la perdida de frescura del pescado. En la muerte del pescado, comienza un complicado proceso bioquímico, conduciendo a la descomposición de los compuestos básicos presentes en el músculo bajo la influencia de las enzimas. (Bykowski, P. y Dutkiewiz, D., 1996) esta descomposición involucra proteínas, lípidos y 35 carbohidratos. La intensidad no es la misma para todos los compuestos y la alteración de uno puede influir en la descomposición de otros. La calidad del pescado crudo para consumo o procesado depende ampliamente de la proteólisis, es decir, la descomposición de las proteínas. Este proceso sigue después del rigor mortis. El producto final de la hidrólisis de las proteínas, bajo la influencia de enzimas, son: aminoácidos y otras sustancias de bajo peso molecular que causan cierto impacto en las características sensoriales del pescado. Una situación similar afecta a los productos de la autólisis lipidia: por lo tanto la autólisis no puede ser medida como una fase en el proceso de deterioro. (FAO, 1996) 3.9.1 Descomposición microbiana El tejido muscular de un pescado vivo es generalmente estéril pero las bacterias se desarrollan en el tracto alimenticio y en la piel, y desde ahí penetran en el músculo; por ejemplo, a través de bazos sanguíneos. Este proceso es mas favorecido por los cambios estructurales en el tejido como resultado del rigor mortis y la autólisis. Las bacterias son capaces de descomponer proteínas, pero los productos de la autólisis así como los aminoácidos y otros compuestos nitrogenados de bajo peso molecular proveen un mejor alimento. Los microorganismos causan la descomposición de no solo las proteínas sino que también de otros compuestos que contienen nitrógeno, lípidos y peróxidos, aldehídos, cetonas y ácidos alifáticos. Sin embargo, la descomposición de compuestos nitrogenados ocurre mucho más rápido que en el caso de los lípidos. (Bykowski, P. y Dutkiewiz, D. 1996) 36 3. 10 Mecanismo del deterioro Según Oliveira, C. (2004), cuando el pescado muere, deja de funcionar el sistema normal de regulación (homeostasis), se detiene el suministro de oxígeno y la producción de energía. Las células comienzan una serie de procesos caracterizados por el metabolismo del glucógeno y la degradación de los compuestos ricos en energía. Seguidamente especificaremos los mecanismos intrínsecos del deterioro del pescado. 3.10.1 Alteración de los carbohidratos En condiciones fisiológicas aeróbicas normales, las reacciones glucolíticas son llevadas a cabo a partir del glucógeno, el que constituye una de las reservas energéticas del organismo. Estas reacciones metabólicas proveen la glucosa, la que es oxidada por el oxígeno proveniente de la sangre, vía ciclo de Krebs, liberando anhídrido carbónico y agua. Además por esta ruta metabólica se obtiene la energía para la fosforilación del ADP con la consecuente formación de ATP. (Huss, H.H. 1998) Al morir el pescado las reacciones aeróbicas van decreciendo paulatinamente hasta que se agotan las reservas de oxígeno. Debido a que no existe una nueva provisión de oxígeno, ya que cesó la respiración, la glucólisis en el tejido muscular post mortem tiene lugar en condiciones anaeróbicas y el glucógeno da lugar a la formación y acumulación de ácido láctico siguiendo la ruta de Embden Meyehoff. (Oliveira, C. 2004) 37 Éste, va a producir un descenso de pH del músculo dando así, la zona de "protección ácida", que en el caso del pescado, es de poca efectividad, debido a la escasa concentración de glucógeno debido a que este se consume durante la agonía. Por esta razón el músculo de pescado es más susceptible al ataque microbiano que las carnes rojas. (Huss, H.H. 1998) 3.10.2 Degradación de nucleótidos Cuando el organismo está vivo, el ATP se regenera a partir del ADP a expensas de la energía que se produce en la glucólisis. Este ATP cumple diversas funciones de trabajo en el organismo vivo. Una de estas funciones, es la de mantener separados los filamentos musculares de actina y miosina, dándole de esta manera, plasticidad al músculo. Producida la muerte del pescado y cuando se ha consumido toda la reserva de fosfocreatina, el ATP no puede ser resintetizado y sigue una ruta degradativa. Por lo tanto, el ATP se degrada por una serie de reacciones de defosforilación y desaminación a IMP, el que continúa degradándose a Inosina (HxR) y Hipoxantina (Hx). (Oliveira, C., 2004) Sabido es, que cuanta más cantidad de ATP exista y menos compuestos de degradación se hayan formado, más fresco estará el pescado. ATP ADP AMP IMP HxR Hx | Pi l Pi l NH3 l Pi Por lo tanto si logramos medir la relación entre la cantidad de Inosina (HxR) e Hipoxantina (Hx) formada y el contenido total de los compuestos relacionados con el ATP, obtendremos una medida de frescura. El método 38 empleado para medir esta relación se conoce como valor K y se expresa en porcentaje. HxR + Hx Valor K % = -------------------------------------------------------- * 100 ATP + ADP + AMP + IMP + HxR + Hx Es así, que el pescado muy fresco, tiene un valor K bajo, aumentando éste, gradualmente a medida que avanza la putrefacción a una velocidad que depende de la especie. Asegura Zdzislaw, E.S. (1994), que el valor inicial de K inmediatamente después de la captura no excede del 10% y al principio aumenta de forma gradual como consecuencia del desdoblamiento enzimático. Más tarde, experimenta de nuevo un rápido incremento, esta vez ocasionado por la acción bacteriana. Un valor K del 20% se considera limite de frescura, siendo el 60% el valor de rechace. 3.10.3 Degradación de los compuestos nitrogenados La degradación de estos compuestos va a producir alteraciones organolépticas importantes en el pescado. Para una mejor comprensión de los mecanismos que aquí intervienen, los dividiremos en las alteraciones sufridas por el nitrógeno proteico y las que suceden sobre el nitrógeno no proteico. (Oliveira, C. 2004) 39 A) Nitrógeno proteico Los cambios autolíticos de las proteínas, se deben a la acción de catepsinas (enzimas proteolíticas que se encuentran localizadas en los lisosomas). Éstas producen la degradación (hidrólisis) de la proteína a péptidos y a aminoácidos. El aumento de la concentración de aminoácidos libres en el músculo, constituye un medio adecuado para el crecimiento microbiano. Por acción enzimática producida por éstas bacterias se degradan los aminácidos, descarboxilando o desaminando, originando de ésta manera, diferentes aminas biógenas que se acumulan o entran en proceso de putrefacción. (Huss, H.H. 1998) Éstos productos finales nos van a influír fundamentalmente en el olor que vamos a percibir al examen organoléptico. A modo de ejemplo de algunos compuestos finales de la degradación de los aminoácidos mencionamos: Arginina dará como producto final NH3. Histidina dará como producto final Histamina. Lisina dará como producto final Cadaverina. Glutamina dará como producto final Putrescina. (Oliveira, C., 2004) B) Nitrógeno no proteico Según Oliveira, C. (2004), la determinación de estos compuestos tiene amplia aplicación práctica, ya que éstos, son indicadores de frescura. En el pescado de mar existe el óxido de trimetilamina (compuesto que tendría funciones de osmoregulador) que por reducción bacteriana, pasa a trimetilamina y luego por acción enzimática (no necesariamente bacteriana), se reduce a Dimetilamina, Monometilamina y Amoníaco. Todos estos compuestos son volátiles y se les conoce como Bases Nitrogenadas Volátiles 40 Totales (NBVT), su determinación en una muestra analizada, nos indica la frescura de la misma, cuánto más fresco esté el producto más bajos serán los valores de NBVT. Los métodos empleados para la determinación de ellas son el método de microdifisión de Conway, el de destilación directa y el de destilación por arrastre de vapor conocido como método de Antonacopoulus. (Bertullo, E., 2001) Los compuestos nitrogenados no proteicos tienen un valor adicional ellos tienen un papel sumamente importante en las características organolépticas del pescado, son los responsables del famoso "olor a pescado” (este es debido a la trimetilamina). Por otra parte se le atribuyen efectos secretagogos positivos para los jugos gástricos preparando a nuestro tracto digestivo para digerir a los alimentos. El responsable de este efecto es el óxido de trimetilamina que es el responsable del "olor a mar" del pescado fresco. (Huss, H.H., 1998) Según Zdzsilaw, E.S. (1994), el OTMA es uno de los componentes nitrogenados no proteicos más abundante en los peces. El OTMA constituye una parte característica e importante de la fracción NNP en las especies de agua de mar y merece, por lo tanto, una mención más amplia. Este compuesto se encuentra en todas las especies de peces de agua de mar en cantidades del 1 al 5 por ciento del tejido muscular (peso seco), el nivel de OTMA fluctúa con el tamaño de los peces, estación del año y condiciones ambientales; está virtualmente ausente en especies de agua dulce y en organismos terrestres. Según Huss, H.H. (1998), el OTMA se forma por biosíntesis de ciertas especies del zooplancton. Estos organismos poseen una enzima (TMA monooxigenasa) que oxida la TMA a OTMA. La TMA comúnmente se 41 encuentra en plantas marinas, al igual que otras aminas metiladas (monometilamina y dimetilamina). El pez que se alimenta de plancton puede obtener OTMA de su alimentación (origen exógeno). Debido a que el OTMA es responsable de la osmorregulación en los músculos, un descenso en la salinidad del agua del medio natural origina una baja concentración de OTMA en el músculo de estos animales. El OTMA confiere un dulce sabor a gambas frescas. 3.10.4 Degradación de lípidos El pescado presenta en su composición lipídica ácidos grasos de cadenas largas (20 a 22 carbonos) poliinsaturados, es decir, con una cantidad importante de dobles enlaces C=C (4 a 6). Estas características los hacen muy inestables y fácilmente combinables con el oxígeno. (Oliveira, C. 2004) Los procesos alterativos que encontramos en los lípidos son dos: A) Rancidez oxidativa Debida a las características mencionadas, el oxígeno se combina y reacciona con facilidad con los ácidos grasos del pescado, oxidándolos. Esta reacción produce una alteración conocida como enranciamiento el que es detectable al examen organoléptico debido a que produce un olor picante y un color amarillento característico. El mecanismo por el cual se desarrolla el enranciamiento es muy complejo. Oliveira, C. (2004), sugiere que básicamente comprende tres fases: Inicio: Aquí se forman los radicales libres. 42 Propagación: Aquí se forman más radicales libres y los ya formados se combinan con el oxígeno formando peróxidos. Resolución: Culmina la reacción con formación de compuestos finales tipo aldehídos y cetonas. La oxidación puede ser iniciada y acelerada por la luz y diversas sustancias orgánicas e inorgánicas como trazas metálicas (Cu, Fe, etc.) que tienen alto efecto pro-oxidante. La determinación del grado de rancidez de los lípidos del pescado puede efectuarse por la determinación del Índice de Peróxidos (el cual no es muy confiable ya que depende en que momento hacemos la determinación puesto que su formación no tiene un crecimiento lineal sino curvilíneo) y la determinación por el método colorimétrico del Ácido Tiobarbitúrico (TBA). Los compuestos resultantes de la rancidez pueden ser perjudiciales para el consumidor especialmente los peróxidos, dependiendo de su concentración final pueden provocar diversos trastornos gastrointestinales, siendo uno de los más frecuentes diarrea. (Oliveira, C. 2004) B) Hidrólisis Las grasas del pescado están compuestas por triglicéridos y éstos a su vez, por glicerol y ácidos grasos. Luego que comenzó la degradación enzimática y bacteriana, las lipasas bacterianas actúan sobre los triglicéridos produciendo la hidrólisis de los mismos. Éstos son descompuestos en glicerol y ácidos grasos. (Oliveria, C. 2004) 43 Cuadro No. 13 Secuencia de los cambios que acontecen en los componentes principales de los músculos del pescado capturado. Etapa siguiente a la captura Esfuerzos en las artes de pesca y abordo Asfixia Fosfatos orgánicos y glucógeno Desfosforilacion, formación de glucosa, fosfato-azucares y ácido láctico; disminución del pH Procesos enzimáticos iniciales Rigor mortis Perdida de frescura Rápido crecimiento bacteriano la Desdoblamiento enzimático posterior; utilización de los productos de degradación por la microflora Utilización por la microflora Descomposición bacteriana Cambios en los componentes principales Agotamiento ante mortem de las reservas. Instauración gradual de anoxia en el músculo. Compuestos nitrogenados Cambios en las proteínas hematicas; descomposición de la urea. Interacción del sistema contráctil, liberación de hidrolasas, disminución de la hidratación Primeras etapas de la autólisis; descomposición del OTMA; formación de bases volátiles; aumento del pH Descomposición bacteriana; incremento de la hidratación; formación de compuestos volátiles Acumulación de productos oloroso volátiles, formación de mucus incoloro Fuente: Zdzislaw, E.S. (1994) Lípidos Hidrólisis e iniciación de la oxidación Hidrólisis y oxidación; efectos de los microbios Inhibición de la oxidación por algunos metabolitos 44 3.11 Evaluación de la calidad del pescado 3.11.1 Calidad El CODEX Alimentarius describe el término calidad como un grado de excelencia. Una colección de características de un producto que confiere su habilidad de satisfacer necesidades indicadas o implícitas. Ababouch, L. en el documento “Quality of fish and fish products”, expone que de acuerdo a la norma ISO 8402 calidad es "la totalidad de características de un producto o de un servicio que refieran a su capacidad de satisfacer necesidades indicadas o implicadas". Generalmente en el caso del pescado, la calidad se refiere a la apariencia estética (aspecto de los filetes) y frescura, o al grado de deterioro que ha sufrido el pescado e incluso también puede involucrar aspectos de seguridad como ausencia de bacterias peligrosas, parásitos o compuestos químicos. (Huss, H.H., 1998) Diversos métodos son utilizados para determinar la calidad del pescado. Estos pueden ser convenientemente clasificados en Métodos Sensoriales y Métodos Instrumentales (comprende métodos químicos, físicos y microbiológicos). 3.11.2 Métodos Sensoriales Dicen Pedrero, D.L. y Pangborn, R.M. (1997), que “la evaluación sensorial se ocupa de la medición y cuantificación de las características de un producto, ingrediente o modelo, las cuales son percibidas por los sentidos humanos (medios con los que el ser humano detecta lo que lo rodea: vista, oído, olfato y tacto)”. Entre dichas características se pueden mencionar por su importancia: 45 Apariencia: color, tamaño, forma, conformación, uniformidad. Olor: los muchos compuestos volátiles que contribuyen al aroma. Gusto: dulce, amargo, salado, ácido (posiblemente también metálico, astringente y otros) Textura: las propiedades físicas como dureza, viscosidad y granulosidad. Sonido: se relaciona con la textura, crujido, tronido y efervescencia. En el caso del pescado fresco y entiéndase por pescado fresco, aquel que no ha sido sometido desde su captura a ningún proceso de conservación (no se considera conservación la adición de hielo o refrigerado); la evaluación sensorial posee una ventaja comparativa sobre los métodos objetivos de la evaluación de la calidad. (Madrid, A. y Cenazo, I. 1994). Las pruebas analíticas objetivas, usadas en el control de calidad, pueden ser divididas en dos grupos: pruebas descriminativas y pruebas descriptivas. Las pruebas descriminativas son usadas para evaluar si existe una diferencia entre las muestras. Las pruebas descriptivas se emplean para determinar la naturaleza e intensidad de las diferencias (perfiles y pruebas de la calidad). (Huss, H.H. 1998) A) Análisis Sensorial Es importante saber identificar productos de buena calidad ya que el pescado es un producto perecedero y puede ser vehículo de microorganismos y toxinas causantes de enfermedades; para esto se han creado métodos sensoriales basados en la determinación de la apariencia, aroma y textura del 46 pescado, que permiten a través de la inspección macroscópica de la especie determinar el grado de frescura y la calidad del mismo. Para la identificación del pescado fresco existen una serie de zonas que siempre deben ser examinadas ya que son las que pueden determinar el grado de frescura de un pescado: Ojos: éstos deben ser esféricos, salientes en la mayor parte, transparentes y de cornea limpia. Agallas: deben ser de color vivo y limpio, rojo vivo en la mayor parte de las especies y rosadas en otras. Suaves y resbaladizas al tacto. Cavidad abdominal: la telilla interna que la recubre debe ser brillante, limpia suave y se retira con dificultad. Piel o escamas: la piel es resbaladiza, suave, brillante y limpia, se separa de la carne con dificultad. Las escamas deben ser abundantes y difíciles de retirar en algunas especies; en otras las escamas flojas se quitan con facilidad. Los recién pescados son muy resbaladizos debido a la mucosa que producen. Espina central o vértebra: la telilla interna que la recubre debe ser brillante, limpia suave y se retira con dificultad. Carne: debe ser firme y consistente. Su color tiene características diferentes según las especies. Olor: tiene que oler a humedad limpia, a mar o a agua dulce según la clase. (consumer.es) Todas estas zonas se analizan individualmente para finalmente clasificarlas de la siguiente manera: a. Pescado muy fresco 47 b. Pescado fresco c. Pescado poco fresco d. Pescado en mal estado (Anexo No. 5) En la revista electrónica consumer.es de la Fundación EROSKI (2006), se presenta una guía practica que pretende dar a conocer los lineamientos a seguir al momento de realizar la compra del pescado, siguiendo el examen minucioso de todos los atributos antes mencionados para que de esa manera asegurarse de las condiciones de compra del pescado. 3.11.3 Métodos bioquímicos y químicos El control de calidad de la frescura de los productos pesqueros debe ser relativamente rápido, coincidente con la apreciación sensorial, barato y aplicable a todos los alimentos marinos. De acuerdo a Pearson D. (1998), los métodos no sensoriales o métodos analíticos pueden ser más objetivos y confiables que los métodos sensoriales y son útiles cuando se trata de valorar el grado de alteración o aceptabilidad. El atractivo de los métodos bioquímicos y químicos, en la evaluación de la calidad de los productos pesqueros, está relacionado con la capacidad para establecer estándares cuantitativos. El establecimiento de niveles de tolerancia, a través de indicadores químicos de deterioro, eliminaría la necesidad de sustentar en opiniones personales las decisiones relacionadas con la calidad del producto. De esta forma, los métodos bioquímicos/químicos pueden ser usados para resolver temas relacionados con la calidad marginal del producto. Estos métodos objetivos deben, sin embargo, mostrar correlación con las evaluaciones sensoriales de la calidad y, además, el compuesto químico a ser 48 medido debe incrementar o disminuir de acuerdo al nivel de deterioro microbiológico o de autólisis. También es importante que el compuesto a medir no pueda ser afectado por el procesamiento (por ejemplo, degradación de aminas o nucleótidos en el proceso de enlatado como resultado de las altas temperaturas). (Torry Research Station. 2001) Según Zdzislaw E.S. (1994), para determinar la frescura se utilizan frecuentemente índices químicos indirectamente relacionados con la actividad microbiana. Entre estos indicadores de frescura tenemos el amoníaco, el nitrógeno de bases volátiles (N-BVT), el nitrógeno de trimetilamina (N-TMA), ácidos volátiles, pH, capacidad buffer, sulfuros, productos de desdoblamiento nucleótido y otros que determinan la perdida de frescura como la Hipoxantina (Hx) y el valor K. Pearson D. (1998), explica que la reacción que primero afecta a las propiedades organolépticas varía con el tipo de sustancia: La ruptura de las proteínas se produce normalmente antes del deterioro de las grasas. En los pescados blancos, las primeras señales de enranciamiento están asociadas a la formación de trimetilamina. En los pescados grasos, el enranciamiento precede a la producción de bases volátiles. A) Aminas-Bases volátiles totales La determinación de bases volátiles totales (BVT) es uno de los métodos más ampliamente usado en la evaluación de la calidad de los productos pesqueros. Es un término general que incluye la medición de trimetilamina 49 (producida por deterioro bacteriano), dimetilamina (producida por enzimas autolíticas durante el almacenamiento en congelación), amoníaco (producido por desaminación de aminoácidos y catabolitos de nucleótidos) y otros compuestos nitrogenados básicos volátiles asociados con el deterioro de los productos pesqueros. (Torry Research Station, 2001) Estas bases son conocidas como aminas y la combinación total de éstas se conoce como bases volátiles totales contenidas en el pescado y se usan comúnmente para estimar el deterioro. Los términos alternativos usados para las BVT son nitrógeno de bases volátiles totales (N-BVT) y nitrógeno total volátil (NVT), dado que el resultado del análisis siempre es dado en términos del nitrógeno contenido en las bases. (Torry Research Station, 2001) Según Huss, H.H. (1998), para la determinación del N-BVT, tradicionalmente se utilizan métodos basados en la microdifusión o en la destilación. Los métodos de microdifusión se fundamentan en el método descrito por Conway en 1962; que consiste en la adición de carbonato potásico a un extracto de jugo de pescado desproteinizado, situado en uno de los compartimientos de la célula Conway. Con ello se libera el N-BVT, que será recogido sobre una solución de ácido bórico que se encuentra e el compartimiento continuo de la célula. Por destilación la AMC (Analytical Methods Comitte of the Royal Society of Chemistry, 1979), propone el método para determinar N-BVT y N(TMA) que se basa en un procedimiento de semimicrodestilación. Los extractos o soluciones se alcalinizan con hidróxido de sodio. Las bases se destilan al vapor y se reciben en ácido estándar y se titulan por retroceso con álcali estándar. Se agrega formaldehído a la mezcla neutralizada y el ácido 50 que se libera equivale a las bases volátiles que no son trimetilamina. (Kirk, R.S.; Sawyer, R.; Egan, H., 2002) B) Amoníaco El amoníaco se forma por degradación bacteriana/desaminación de proteínas, péptidos y aminoácidos. También es producido por la degradación autolítica del adenosina monofosfato (AMP) en productos marinos enfriados. A pesar de que el amoníaco ha sido identificado como un componente volátil es posible determinar su contribución relativa al incremento en las bases volátiles totales y por conveniencia analítica, las bases volátiles (amoníaco + aminas) se estiman, a menudo como un grupo. (Torry Research Station 2001) Pearson D., (1998), explica que las bacterias pueden generar pequeñas cantidades de amoníaco en el pescado deteriorado, mayormente de los aminoácidos libres, por ejemplo la formación de amoníaco a partir de urea: CO(NH2)2 + H2O 2 NH3 +CO2 Urea amoníaco C) Trimetilamina (TMA) La mayoría de los pescados contiene una sustancia llamada óxido de trimetilamina (OTMA). Ciertas bacterias que se dan naturalmente en la piel y en las vísceras de los pescados marinos pueden provocar el desdoblamiento de OTMA a TMA. La cantidad de TMA producida es una medida de la actividad del deterioro microbiano y enzimático en la carne y por lo tanto es un indicador del grado de deterioro. (Torry Research Station, 2001) La trimetilamina es una amina volátil pungente, generalmente asociada con el olor típico “a pescado” del pescado deteriorado. La TMA es formada 51 en pescado de mar y éstos se degradan como resultado de la reducción bacterial del OTMA. La reacción envuelve la oxidación simultánea del ácido láctico o ácido acético y dióxido de carbono. (Salas, W.F., “Deterioro e Índice de Deterioro”) Esta reacción depende del pH. Vivo o cercanamente muertos los pescados son alcalinos, pero después de la muerte hay una rápida caída del pH cuando el glucógeno se rompe produciendo ácido láctico. Pescado fresco y sus constituyentes (particularmente OTMA) son buffers fuertes (el pH del pescado empieza a envejecer), el OTMA es reducido por las bacterias a TMA, el cual no es un buffer a este pH, por lo tanto el pH cae lentamente. Eventualmente el ácido láctico desaparece y más material alcalino (incluyendo amonio) es producido y el pH alcanza un valor de 8 ó más en el pescado en estado de putrefacción. (Salas, W.F., “Deterioro e Índice de Deterioro”) Pearson D. (1998), describe la reacción de la formación de trimetilamina a partir del óxido de trimetilamina por reducción bacteriana: CH3-CHOH-COOH + (CH3)3NO CH3-COOH +CO2 + H2O + 2(CH3)3N ácido láctico Y el OTMA desdoblamiento ácido acético enzimático endógeno dimetilamina (DMA) y formaldehído: (CH3)3NO (CH3)2NH + HCHO OTMA DMA TMA del OTMA hasta 52 La DMA es producida autolíticamente durante el almacenamiento congelado. Por estar asociada con las membranas del músculo, su producción se incrementa por la manipulación tosca y por las fluctuaciones de temperatura durante el almacenamiento en frío. La DMA tiene poco o ningún efecto en el sabor o la textura del pescado, pero es un indicador indirecto de la desnaturalización de las proteínas. (Huss, H.H. 1998) D) Aminas biógenas La degradación del músculo del pescado conlleva a un aumento de aminoácidos libres que posteriormente pueden convertirse en las correspondientes aminas por descarboxilación. (Huss, H.H. 1998) La histamina, la putrescina, la cadaverina y la tiramina son producidas a partir de la descarboxilacion de la histidina, ornitina, lisina y tirosina, respectivamente. El interés inicial por la histamina de los alimentos surgió por su posible acción tóxica, directa o indirecta, tras el consumo de alimentos que la contenía en cantidades relativamente elevadas. La toxicidad de histamina parece ser reforzada por la presencia de otras aminas semejantes como cadaverina y putrescina. (Torry Research Station, 2001) La histamina es una sustancia con múltiples efectos biológicos y que su ingestión a concentraciones elevadas puede originar problemas tóxicos y de inducción de reacciones alérgicas por lo que la determinación de aminas biógenas es interesante en aquellas especies en las que el contenido de histidina libre sea alto. 53 E) Hipoxantina (Hx) La hipoxantina (Hx) es el indicado mas útil en la pérdida de frescura. La FAO explica que: (Huss, H.H., 1998), el adenosina trifosfato (ATP) cuando el pescado muere es reducida por medio de enzimas que actúan en un período de días a diferentes sustancias. La etapa final de este proceso es la formación de un compuesto llamado hipoxantina, que aumenta gradualmente a medida que avanza el tiempo. (Torry Research Station, 2001) Según Zdzislaw E.S., (1994), la tasa de Hx se corresponde bien con los caracteres organolépticos, el aroma en particular y las cifras siguientes se han propuesto como limite de aceptación para el pescado y mariscos: 2 a 3.5 µm/g. F) Valor K Al igual que la hipoxantina es un indicador de la pérdida de frescura. El valor K grado de reducción del ATP: es el porcentaje inicial de ATP presente en la muerte que se ha convertido por acción enzimática en hipoxantina y su precurso inmediato, llamado inopina, en la cadena de descomposición del ATP. (Torry Research Station, 2001) Según Zdzislaw E.S. (1994), un valor K del 20% se considera como limite de frescura, siendo el 60% el valor de rechace. 3.11.4 Métodos Físicos Estos métodos involucran la medida del pH del pescado, textura y propiedades eléctricas. Los métodos físicos se usan raramente ya que no son suficientemente contables o requieren calibración dependiendo de las especies de pescado. (oceansatlas.com) 54 3.11.5 Métodos Microbiológicos La finalidad del análisis microbiológico de los productos pesqueros es evaluar la posible presencia de bacterias u organismos de importancia para la salud pública, y proporcionar una impresión sobre la calidad higiénica del pescado, incluyendo el abuso de temperatura e higiene durante la manipulación y el procesamiento. Éstos incluyen un recuento total de bacterias aeróbicas (RTA), deterioro bacteriano y varias bacterias patógenas. (oceanatlas.com) 3.12 Conservación del pescado por medio de frío Recordemos que tan pronto muere el pescado, este comienza el proceso de descomposición. El deterioro es el resultado de una serie de reacciones físicas y químicas en las que intervienen el oxígeno y la grasa de la carne dando lugar a olores y sabores rancios. También las alteraciones causadas por las enzimas en el pez vivo continúan luego de la muerte y estas reacciones enzimáticas intervienen, particularmente en los cambios organolépticos que ocurren en los primeros días de almacenamiento antes de que se haya manifestado plenamente la putrefacción bacteriana. (Oliveira, C. 2004) Las bacterias del pescado existen en la mucosidad de la superficie, en las branquias y en los intestinos del pez vivo; a pesar de que son agentes potenciales de la putrefacción, mientras el pez se encuentra con vida no producen ningún daño, una vez el pez muere las bacterias comienzan a invadir los tejidos a lo largo de los vasos sanguíneos y directamente a través de la piel y de la membrana de la cavidad ventral. (Zdzislaw, E.S. 1994) 55 No obstante de que la putrefacción es una reacción normal tras la muerte del pez, se puede frenar y prolongar la vida útil por medio de la aplicación de frío. (FAO, 1993) 3.12.1 Efecto de la temperatura en la putrefacción En la revisión realizada por Graham, J., Johnston, W.A. y Nicholson, F.J. (1993), en el documento “Hielo en las pesquerías” se puntualiza que el cuidado, la limpieza y el enfriamiento son tres métodos importantes para retrasar la acelerada descomposición que sufre el pescado tras su muerte. El cuidado durante la manipulación se considera esencial ya que daños innecesarios pueden facilitar el acceso de las bacterias acelerando el proceso de putrefacción en la carne. Se considera importante la limpieza por dos razones: la primera, porque las fuentes naturales de bacterias pueden ser eliminadas, en gran parte poco después de la captura del pescado eviscerándolo y suprimiendo por lavado la mucosidad de la superficie; y en segundo lugar, porque las probabilidades de contaminación se pueden reducir al mínimo asegurando que el pescado se manipule siempre de manera higiénica. La velocidad con la que se desarrollan las bacterias es favorecida por la temperatura del medio por lo que lo más importante es enfriar el pescado lo más pronto posible y mantenerlo refrigerado. La velocidad de descomposición se frena con este proceso, entre mayor sea la temperatura, más rápido se multiplican las bacteria. Si la temperatura es bastantemente baja, la acción bacteriana se detiene, estas mueren o quedan inactivadas y las otras formas de putrefacción avanzan con mucha lentitud. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) 56 3.12.2 Duración del pescado en hielo Usualmente, todos los tipos de pescado se alteran de manera muy parecida, distinguiéndose cuatro fases de putrefacción. En la primera fase apenas hay deterioro, existe una ligera pérdida del sabor y olores naturales o característicos. En la segunda fase tiene lugar una pérdida considerable de sabor y olor. En la tercera fase, el pescado comienza a tener un sabor a rancio, su aspecto y textura empiezan a mostrar señales evidentes de deterioro y las branquias y la cavidad ventral huelen mal. Todas estas alteraciones, que en las últimas etapas del almacenamiento se deben casi por completo a las bacterias, ocurren a un ritmo cada vez mayor hasta el día 15, en que comienza la fase cuarta, el pescado está podrido y por lo general se considera incomestible. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) Otras especies con distintos tiempos de conservación pueden presentar diferencias en cuanto a la duración de las fases de putrefacción, pero el patrón general será parecido. Incluso los ejemplares de una misma especie pueden estropearse a ritmos diferentes, ya que en la calidad de la conservación influyen factores tales como el método de captura, el emplazamiento de los caladeros, la estación del año, el contenido de grasa y la talla del pescado. (Huss, H.H. 1998) La duración en almacén ha sido debidamente estudiada y documentada, y se han sacado varias conclusiones de carácter general. Normalmente, el pescado plano dura más que el de forma redondeada; el pescado de carne roja se conserva mejor que el de carne blanca; el magro dura más que el graso, y los teleósteos (óseos) más que los elasmobranquios (cartilaginosos). (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) 57 El hielo como medio de enfriamiento del pescado ofrece numerosas ventajas: tiene una capacidad refrigerante muy grande con respecto a un peso a volúmenes determinados, y es inocuo, portátil y relativamente barato. Es especialmente apropiado para refrigerar pescado, porque permite un enfriamiento rápido. Cuando se utiliza este método, la transferencia de calor se produce por contacto directo del pescado con el hielo, por conducción entre ejemplares adyacentes y por el agua de fusión que se desliza sobre la superficie del pescado. El agua de fusión fría absorbe calor del pescado y al fluir sobre el hielo se vuelve a enfriar. Así pues, la mezcla íntima del pescado con el hielo no sólo reduce el espesor del estrato de pescado que se ha de enfriar, sino que promueve también esta interacción refrigerante convectiva entre el agua de fusión y el pescado. (CODEX Alimentarius) Tan pronto como se coloca hielo sobre el pescado caliente, el calor de éste fluye hacia el hielo y lo derrite. Este proceso continúa mientras exista una diferencia de temperatura entre ambos, a condición de que haya suficiente hielo. Toda fusión que se produzca después se deberá a calor procedente de otras fuentes, por ejemplo del aire caliente circundante durante el posterior período de almacenamiento. (CODEX Alimentarius) El hielo es, en sí mismo, un termostato, y como el pescado está constituido principalmente por agua, el hielo lo mantiene a una temperatura apenas superior al punto en que empezaría a congelarse. El punto de equilibrio en el caso del pescado marino enfriado con hielo poco después de la captura se aproxima a -0,5 °C, ya que la mezcla suele contener algo de sal y de sangre. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) 58 3.12.3 Enfriamiento del pescado en tierra A) En el muelle El pescado debe manipularse en tierra de tal modo que la temperatura del hielo se mantenga en lo posible durante toda la cadena de distribución; una vez que se ha calentado resulta muy difícil enfriarlo otra vez. Cuando el pescado se descarga sin hielo debe enfriarse con hielo lo antes posible después del desembarque. (CODEX Alimetarius) Si el tratamiento adecuado con hielo no es factible en el muelle, habrá que evitar cualquier retraso en el transporte del pescado a otro lugar. El pescado no tratado con hielo puede alcanzar los 15 °C en el momento del desembarque en los climas templados, y hasta 30 °C o 35 °C en las zonas tropicales. A menos que se pueda enfriar rápidamente en tierra, la captura se deteriorará en muy poco tiempo. El hielo debe distribuirse por todos los ejemplares, para obtener un enfriamiento efectivo. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) La refrigeración sigue siendo igualmente importante después de que el pescado se ha vendido; debe retirarse del mercado lo antes posible y mantenerse en hielo hasta que se venda al consumidor o hasta que comience la elaboración. (CODEX Alimentarius) B) En los locales del comerciante portuario Cuando el pescado se vende en el muelle a un comerciante o elaborador del puerto, debe trasladarse a los locales respectivos con la mayor velocidad posible. (CODEX Alimetarius) Tan pronto como el pescado llega a los locales del comerciante desde el muelle, debe enfriarse o reenfriarse con hielo, si no ha de someterse a una 59 elaboración inmediata. No basta poner el pescado en una cámara frigorífica sin hielo; el enfriamiento sería muy lento, porque el aire es un mal conductor térmico. El pescado debe mezclarse primero con trozos pequeños de hielo y luego ponerse en una cámara de refrigeración, de modo que la misión del hielo quede limitada a enfriar el pescado y no el aire caliente exterior. La cámara frigorífica puede utilizarse para conservar el pescado que ya haya sido enfriado a la temperatura del hielo, pero, incluso entonces, se necesitará algo de hielo encima del pescado expuesto para evitar que se seque. (CODEX Alimentarius) El pescado que no ha sido eviscerado puede tener que someterse a esta operación como primera medida en tierra, ya que los intestinos se alteran rápidamente y pudren la carne contigua. El resto de las operaciones, como el descabezado, el fileteado o la apertura, dependerán de las necesidades del mercado. Todas las operaciones deben efectuarse en un ambiente frío; en los tiempos de espera la materia prima debe protegerse mediante el uso acertado de hielo y frigoríficos. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) Cuando el fileteado es manual, el pescado se mantiene normalmente en un tanque o artesa de agua y se va sacando un ejemplar por vez. Es frecuente que el agua de la artesa esté a una temperatura más alta que la del pescado, en cuyo caso éste se calentará. Cuando sea posible, deberá añadirse hielo al agua de la artesa de filetear con objeto de enfriarla; otra posibilidad consiste en hacer pasar toda el agua del proceso de elaboración por un sistema de refrigeración central. En cuanto se hayan cortado suficientes filetes para llenar una caja, hay que cubrirla con hielo y transportarla a un almacén refrigerado. Cualesquiera que sean las otras operaciones que se realicen, ya sea manuales o mecánicas, los principios que se aplican son los mismos. Los 60 intervalos entre las distintas operaciones deben ser lo más breves posible y, siempre que sea factible, debe emplearse hielo para mantener el producto frío en todo momento. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) Normalmente, el pescado se calienta mucho durante la manipulación y elaboración. Incluso en climas templados, aunque el pescado llegue a los locales a una temperatura cercana a 0° C, los filetes producidos al cabo de pocas horas pueden estar a 10° C o más en el momento del envasado. Estas variaciones de temperatura se traducen en un aumento mesurable de la velocidad de putrefacción o pérdida de calidad. (CODEX Alimentarius) C) En la pescadería (mercados municipales) El pescado que se expone en los mostradores de las tiendas debe mantenerse sobre un lecho de hielo. Un rociado adicional de trozos de hielo sobre el producto y a su alrededor contribuirá a mantenerlo bien refrigerado y a mejorar su aspecto. (CODEX Alimentarius) El aislamiento en la parte inferior del mostrador ayuda a conservar el hielo; también puede utilizarse un mostrador refrigerado, siempre que la temperatura se mantenga por encima del punto de fusión del hielo. Los productos no deben exponerse sin hielo en este tipo de mostrador. Al igual que en la cámara frigorífica, el pescado sin hielo se deshidrata, adquiere un aspecto mortecino y poco atractivo y puede congelarse parcialmente. La regulación de la temperatura de los mostradores refrigerados puede resultar difícil e imprecisa, pero el hielo actúa como termostato (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 199). Un protector de vidrio o plástico transparente en torno al mostrador ayuda a mantener una reserva de aire húmedo alrededor y por encima del 61 pescado y reduce las corrientes de aire caliente que pueden secar el producto. El pescado debe exponerse en capas finas, de manera que esté siempre debidamente enfriado; si se dispone en pilas altas, se calienta y permanece caliente. El mostrador debe estar diseñado de manera que reúna las condiciones de higiene y ha de tener un buen drenaje, a fin de que el pescado no quede sumergido o se contamine con el agua de fusión sucia. Los productos de pescado ahumado no deben estar en contacto directo con el hielo, pero pueden exponerse en el mismo mostrador que el pescado fresco, colocándolos en bandejas encima del lecho de hielo. Al igual que en el caso del pescado fresco, la reserva de pescado ahumado debe mantenerse en una cámara refrigerada, exponiendo cada vez sólo cantidades pequeñas para la venta. (CODEX Alimentarius) Por último, debe recordarse que el pescado permanece fresco sólo durante un tiempo limitado, incluso si está rodeado de abundantes cantidades de hielo. La reserva de pescado debe reponerse a intervalos frecuentes, y, si no se está del todo seguro de que esté fresco, no debe venderse. En caso de duda debe ser desechado. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) 3.12.4 Refrigeración con hielo para el transporte Una vez que el pescado se ha preparado o fileteado según las necesidades del mercado, se envasa en recipientes para su distribución desde el puerto. Es muy frecuente que la cantidad de hielo utilizada sea insuficiente y su colocación inadecuada. El hielo que se coloca en una caja de pescado tiene dos funciones: primero, enfriar el pescado a 0 °C y, segundo, mantenerlo a dicha temperatura a pesar del calor que penetre en la caja desde el entorno. El 62 pescado fresco es un mal conductor del calor, lo que significa que éste tarda mucho tiempo en atravesarlo. En algunas pesquerías es una práctica corriente envasar los filetes en estratos de unos 10 cm. de profundidad en una caja con una capa de hielo de 2 a 3 cm. de espesor en la parte superior; de esta manera los filetes tardan aproximadamente 24 horas en enfriarse de 10 °C a 0 °C. El tiempo que tarda un pescado o filete en enfriarse depende de lo alejado que esté de la capa de hielo, de modo que los filetes del fondo de la caja se enfriarán con mucha lentitud; la caja puede muy bien llegar a su destino con hielo sobrante encima del pescado y, sin embargo, contener filetes que estén a 5° C o más. Lo ideal es que el pescado o los filetes se enfríen hasta una temperatura próxima a los 0 °C antes del envasado. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) Así pues, es muy importante que el hielo se coloque en los sitios apropiados. Si se pone hielo sólo en los extremos de la caja, por ejemplo, el pescado del centro puede tardar varios días en enfriarse, o incluso no llegar a enfriarse en absoluto. En otras palabras, lo que hay que hacer es utilizar el hielo de manera correcta y controlar la temperatura con la mayor frecuencia posible, verificando asimismo durante el transporte que quede hielo en las cajas. (Graham, J.; Johnston, W.A.; Nicholson, F.J. 1993) 63 IV. METODOLOGÍA DE LA INVESTIGACIÓN 4.1 Metodología Con el objetivo de establecer un diseño para la recolección de datos, en esta investigación fue recurrir a fuentes de información primaria y secundaria que respondieron a un método mixto (cuantitativo y cualitativo); a continuación se presentan las etapas que se desarrollaron, y posteriormente se explicara los métodos de investigación para cada una de estas etapas: Primera etapa: se hizo una recolección de información bibliográfica sobre procesamientos, manipulación y control de calidad de pescado en libros, revistas, folletos, Internet y otros. Segunda etapa: consistió en la elaboración y estructuración del anteproyecto de la investigación con la información anteriormente recopilada. Tercera etapa: se efectuó entrevistas en los dos mercados en estudio (mercado de Santa Tecla y mercado de Antiguo Cuscatlán), con dueños y encargados de puestos de venta de pescado y productos marinos frescos. Con el objetivo de determinar en que estado de frescura comercializan los productos y de esta forma determinar el tiempo en que las muestras se sometieron a los diferentes análisis y las condiciones que se debieron recrear para el almacenamiento. Cuarta etapa: Se compran las muestras del pescado. Estas adquisiciones se realizaron en los mercados anteriormente mencionados. En cada uno de éstos se hizo la compra de tres muestras de pescado una de cada especie (Bagre, Corvina y Pargo). 64 Quinta etapa: luego de la compra de los pescados, se trasportaron al Laboratorio de Química de la Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola “Julia Hill O´Sullivan” de la Universidad Dr. José Matías Delgado ubicado en el campus No.1, para realizar las pruebas de N-BVT y N-TMA. Sexta etapa: durante tres días las muestras se sometieron a análisis químicos, físicos y microbiológicos. Para la determinación de concentración proteica en los músculos de pescado las muestras se trasportaron al laboratorio clínico Cruz Muñoz, en donde se realizaron los análisis durante los tres días consecutivos a su compra y así determinar el grado de frescura de las proteínas durante ese periodo de tiempo a una temperatura de 4° C. Luego a las muestras de pescado fresco se les realizó la determinación de pH y porcentaje de humedad, estos análisis químicos se realizaron en el Laboratorio de Química mencionado anteriormente. Para la determinación de la humedad el método empleado es por Secado en Cápsula Abierta. Séptima etapa: consistió en realizar los diferentes análisis microbiológicos a las muestras de pescado después de los tres días de almacenamiento en hielo. Estos análisis microbiológicos se realizaron en la Universidad Salvadoreña Alberto Masferrer. Octava etapa: Análisis e interpretación de datos por medio de pruebas estadísticas. 65 4.2 Método Cualitativo Se realizo una serie de entrevistas en los dos mercados en estudio: el mercado de Santa Tecla y el mercado de Antiguo Cuscatlán. Los entrevistados fueron los propietarios y encargados de los puestos de venta de pescados y productos marinos. Las preguntas se orientaron principalmente sobre las condiciones de almacenamiento y condiciones de transporte (desde el lugar de origen y los puntos de venta), la procedencia de los pescados; el tiempo en que normalmente mantienen el pescado expuesto a la venta hasta el consumidor y las condiciones de almacenamiento en el local y exposición de los productos durante su venta. (Anexo No. 4) En el mercado de Santa Tecla se realizaron entrevistas a los puestos más grandes en relación con la cantidad de producto que manejan, haciendo un total de 6 puntos de venta. En el mercado de Antiguo Cuscatlán solamente se observo 2 puntos de venta por lo que la entrevista se hizo solamente a estos dos propietarios o encargados. 4.3 Método Cuantitativo 4.3.1 Selección de Muestras Se seleccionó las tres especies de pescados en estudio como son: Bagre, Corvina y Pargo, teniendo en cuenta la calidad e higiene de éstos. Las tomas de muestras consistieron en un pescado entero de un peso de aproximadamente 2 libras en estado fresco. Para comprobar que el pescado se encontraba en estado fresco, se determinaron las cualidades organolépticas justo antes de la compra y tomando en cuenta que la muestra cumpliera con los requisitos necesarios para los análisis. Posteriormente a 66 esta inspección los pescados fueron eviscerados por el encargo del punto de venta, envueltos en papel periódico y entregado en bolsas pláticas, tal como realmente es comprado por el consumidor a manera de mantener esa condición de manipuleo y obtener datos mas reales. Luego las muestras se colocaron en una caja isotérmica con 10 libras de hielo machacado para transportar las muestras desde los puntos de venta hasta el momento de su análisis. 4.3.2 Acondicionamiento y preparación de las muestras Los pescados ya eviscerados, se trasladaron en hielera, al Laboratorio de Química de la Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola “Julia Hill O´Sullivan” de la Universidad Dr. José Matías Delgado ubicado en el campus No.1. El pescado entero se fileteo para separar piel y músculo. Los filetes fueron pesados en ± 100 gramos con una báscula gravatoria marca OHAUS con capacidad de 2610 gramos; colocados en bolsas plásticas tipo Ziplock y rotulados. Se rotularon 4 bolsas por cada especie y por cada mercado, con la siguiente información: nombre de la especie, mercado de procedencia, día de análisis y peso del filete en gramos. Las muestras se almacenaron a temperatura de 2 °C, durante el tiempo en que dichas muestras fueron analizadas en el laboratorio. Fig. No.1 Pescado fresco y eviscerado. 67 4.4 Método Sensorial El análisis sensorial estuvo determinado por las características o atributos que posee el pescado fresco; como a continuación se presenta en el siguiente cuadro. Cuadro No. 14 Cuadro de evaluación sensorial para el pescado fresco. Fuente: CONSUMER.es EROSKI. (2006) 68 4.5 Métodos de Análisis Las muestras se analizaron en tres días consecutivos química, física y microbiológicamente a partir del primer día de compra. 4.5.1 Determinación de Proteínas Para la determinación de concentración proteica en los filetes de pescado las muestras se trasportaron al laboratorio clínico Cruz Muñoz ubicado en la colonia Medica, en donde se realizaron dichos análisis. La determinación de la concentración de proteínas se realizo a través del método calorimétrico llamado Método de Lowry. El método de Lowry consiste en determinar por colorimetría las valoraciones cuantitativas de las proteínas. A la muestra se le añade un reactivo que forma un complejo coloreado con las proteínas, siendo la intensidad de color de la disolución resultante proporcional a la concentración de proteínas, según la ley de Lambert-Beer. Este fenómeno consta de dos etapas en la primera, los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las proteínas formando complejos con los átomos de nitrógeno de los enlaces peptídicos. Estos complejos Cu2+ y proteína tienen un color azul claro. Además, provocan el desdoblamiento de la estructura dimensional de la proteína, exponiéndose los residuos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reacción. El Cu2+ se mantiene en solución alcalina en forma de su complejo con tartrato. En la segunda etapa, el cobre actúa como catalizador de la reducción, también en medio básico, del reactivo de Folin- Ciocalteau, por parte de los grupos fenólicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayoría de las proteínas. El principal constituyente del reactivo de Folin-Ciocalteau es el 69 ácido fosfomolibdotúngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los residuos fenólicos dá lugar a un complejo de color azul intenso. (Anexo No.8) A continuación se describe la técnica utilizada: a) Reactivos: 1. Reactivo de formación compleja. Se prepara inmediatamente antes de usarse, mezclando las soluciones A, B y C en proporción 100:1:1 respectivamente. Folin-Ciocalteau. 2. Solución A: 2% (P/V) Na2CO3 en agua destilada. 3. Solución B: 1% (P/V) CuSO4.5H2O en agua destilada. 4. Solución C: 2% (P/V) Tartrato de sódico-potásico en agua destilada. 5. Solución de Hidróxido de sodio 2 N. 6. Reactivo de Folin (disponible comercialmente diluido a 1/4): en concentración 21 N. 7. Estándares: se usa una solución madre de proteína estándar (por ejemplo fracción V de albúmina de suero bovino) conteniendo 2 mg/ml de proteína en agua destilada, almacenada a -20 °C. Preparar los estándares diluyendo la solución madre con agua destilada tal como se indica en la siguiente tabla: b) Técnica de Lowry H2O 0 1 2 3 4 5 6 7 8 200µl 175µl 150µl 100µl 50µl 25µl - 175µl 150µl 25µl 50µl 100µl 150µl 175µl 200µl - - - - - - - - 25µl 50µl Patrón Problema Folin A+C - 1000 µl 70 Agitar bien. Esperar 10 minutos F. Ciocalteur 100 µl diluido 1:2 Agitar bien. Esperar 30 minutos en OSCURIDAD Leer en ABS (absorbancia) a 580 nm c) Procedimiento para la determinación de proteínas: 1. Numerar los tubos de ensayo del 0 al 8. Figura No.2 Tubos de ensayo para las tres muestras de especies de pescado a evaluar. 2. Se pipetean las cantidades de agua, solución patrón de albúmina y solución problema que corresponden a las tres especies de pescado a estudiar. Figura No.3 Adición de reactivo 71 3. Se prepara el reactivo C, a partir de A, B1 y B2. Se pipetean a todos los tubos el reactivo C. Todos los tubos se agitan con un mezclador de vórtice y se dejan reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos en la oscuridad. (no exceder este tiempo). Posteriormente, a todos los tubos se le añade el reactivo de Follin diluido a 1/4. Se mezclan bien y nuevamente se dejan reposar 30 minutos en oscuridad para que se desarrolle completamente la reacción coloreada. Figura No.4 Agitación de las muestras 4. Se leen las absorbancias a en el colorímetro a 580 nm. Previamente en el aparato se ajusta la absorbancia a cero con el blanco (tubo nº 0); de esa forma sólo se determina la absorbancia producida por las proteínas modificadas, puesto que se resta la absorbancia debida a los reactivos. 72 Figura No. 5 Lectura de las muestras a 500 nm 5. Se traza una curva estándar de absorbancia como función de concentración inicial de proteína y se usa para la determinación del contenido de proteína en la muestra. Figura No.6 Tubos de ensayo con las diferentes concentraciones de proteínas Figura No.7 Curva de calibración de proteínas 73 Cuadro No.15 Lectura de la absorbancia de las muestras analizadas y curva de calibración para la concentración cuantitativa de proteínas. Especie Lunes Martes Miércoles Bagre 1 Bagre 1 Bagre 2 Bagre 2 Bagre 3 Bagre 3 Especie Lunes Martes Miércoles Corvina 1 Corvina 1 Corvina 2 Corvina 2 Corvina 3 Corvina 3 Especie Lunes Martes Miércoles Pargo 1 Pargo 1 Pargo 2 Pargo 2 Pargo 3 Pargo 3 Santa Tecla ABS Muestra 580 nm 25µl 98 50µl 87 25µl 89 50µl 79 25µl 84 50µl 78 Santa Tecla ABS Muestra 580 nm 25µl 78 50µl 65 25µl 88 50µl 75 25µl 71 50µl 65 Santa Tecla ABS Muestra 580 nm 25µl 91 50µl 93 25µl 76 50µl 64 25µl 66 50µl 62 DO 0.009 0.061 0.051 0.102 0.076 0.108 DO 0.108 0.187 0.056 0.125 0.149 0.187 DO 0.041 0.032 0.119 0.194 0.18 0.208 Antiguo Cuscatlán ABS Especie Muestra 580 nm Bagre 1 25µl 82 Bagre 1 50µl 90 Bagre 2 25µl 87 Bagre 2 50µl 76 Bagre 3 25µl 94 Bagre 3 50µl 86 Antiguo Cuscatlán ABS Especie Muestra 580 nm Corvina 1 25µl 82 Corvina 1 50µl 92 Corvina 2 25µl 90 Corvina 2 50µl 83 Corvina 3 25µl 83 Corvina 3 50µl 58 Antiguo Cuscatlán ABS Especie Muestra 580 nm Pargo 1 25µl 81 Pargo 1 50µl 96 Pargo 2 25µl 85 Pargo 2 50µl 72 Pargo 3 25µl 96 Pargo 3 50µl 80 DO 0.089 0.046 0.061 0.119 0.027 0.066 DO 0.086 0.036 0.046 0.081 0.081 0.237 DO 0.092 0.018 0.071 0.143 0.018 0.097 74 4.5.2 Determinación de la Trimetilamina y las Bases Volátiles Totales El análisis para la determinación de las bases volátiles totales (N-BVT) y la trimetilamina (N-TMA) se realizó en el Laboratorio de Química de la Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola “Jullia Hill de O´Sullivan”de la Universidad Dr. José Matías Delgado ubicado en el campus No.1. Para dicho análisis se utilizó el método de la AMC (Comité de Métodos Analíticos de la Real Sociedad de Química, 1979) para determinar N-BVT y N-TMA, el cual se basa en un procedimiento de semi-microdestilación. Los extractos o soluciones se alcalinizan con hidróxido de sodio. Las bases se destilan al vapor y se reciben en ácido estándar y se titulan por retroceso con álcali estándar. Se agrega formaldehído a la mezcla neutralizada y el ácido que se libera equivale a las bases volátiles que no son trimetilamina. En la realización de este análisis se tuvo que construir un aparato de semi-microdestilación utilizando diferentes equipos y materiales para realizar la semi-microdestilación. (Anexo No. 6 y Anexo No.7) Para la determinación de N-BVT y N-TMA se describe el siguiente procedimiento: 1. Preparación de la muestra: se tomó 100 ± 0.5 g de muestra preparada, luego se colocó en una licuadora marca Oster de tipo eléctrico, con capacidad de 1.25 litros, cuchilla de acero inoxidable y motor de 600 watts, de igual forma se colocó 300 ml de ácido tricloroacético al 5 por ciento m/v, con el objetivo de obtener una mezcla uniforme o pasta homogénea. 75 Figura No.8 Filetes de pescado previamente acondicionados para la preparación de la muestra. 2. Posteriormente se filtró con ayuda de filtros para obtener un extracto claro. Figura No.9 Peso de la muestra del músculo del pescado. Figura No.10 Homogenización de la muestra. 76 Figura No.11 Filtrado de la muestra. 3. Con pipeta, se transfirieron 5 ml del extracto al aparato de semimicrodestilación. Se agregaron 5 ml de solución de hidróxido de sodio 2M. Se destiló con vapor. El destilado se recolectó en 15 ml de ácido clorhídrico estándar 0.01M. Se agregó solución indicador (1 por ciento de ácido rosólico en etanol al 10 por ciento v/v). Figura No.12 Matraz de destilación con 5 ml del extracto de la muestra y 5 ml de solución de hidróxido de sodio a temperatura constante de 95 °C. 77 Figura No.13 Refrigerante de serpentín en donde se condensa el vapor destilado. Figura No.14 Recolección del destilado en 15 ml de ácido clorhídrico estándar al 0.01 M. Figura No.15 Adición del indicador (ácido rosólico al 1%) al Erlenmeyer con solución recolectada en la destilación. 78 Figura No.16 Aparato de semi-microdestilación 4. Se tituló hasta un punto final color rosa claro con hidróxido de sodio 0.1M. Se agregó 1 ml de formaldehído neutralizado al 16 por ciento m/v por cada 10 ml de líquido en el matraz de titulación. Se tituló el ácido liberado con hidróxido de sodio 0.01M. Figura No.17 Primera titulación de la solución con hidróxido de sodio al 0.1M. Figura No.18 Adición de formaldehído al 16% al matraz de titulación. 79 Figura No.19 Segunda titulación de la solución con hidróxido de sodio al 0.01M. Cálculos: Nitrógeno Básico Total = 14 (300 + W) x V1 mg/100g 500 Nitrógeno de trimetilamina= 14 (300 + W) x V2 mg/100g 500 En donde: ml de V1 = volumen del ácido estándar que se consume en la primera titulación. ml de V2 = volumen del ácido estándar que se libera para la segunda titulación. W = contenido de agua de la muestra g/100 g. Esta determinación se realizó a cada especie de pescado durante tres días consecutivos, los análisis se hicieron dos veces por cada muestra para comprobar que el método aplicado es correcto, ya que si la diferencia entre los dos análisis es superior a 2mg/100 g el método no es correcto. (eurlex.europa.ue)(Anexo no.9) 80 4.5.3 Determinación de Humedad y pH a) Humedad Se siguió el siguiente procedimiento: 1. Se colocan dos capsulas numeradas en la estufa a105ºC.durante 2 horas. 2. Las capsulas se secan en el desecador y luego se pesan con cuatro decimales aproximadamente. 3. Se coloca en la capsulas 5 gramos de muestra de pescado fresco y se pesan en una balanza analítica, 4. Se ponen en la estufa a temperatura de 105 °C, durante un tiempo de media hora de secado. 5. Se coloca en un desecador. 6. Se pesa la cápsula fría mas la muestra en una bascula analítica. Fórmulas: Humedad de Agua (%) = Pérdida de peso (g) x 100 Peso se muestra tomada (g) Figura No. 20 Enfriado de las capsulas. 81 b) pH Para la determinación del pH se utilizó agua destilada de pH comprendido entre 4 y 7. Para todas las muestras de pescado se realizó el siguiente procedimiento: 1. Se pesan 10 g de muestra de pescado fresco. 2. Se pica en un procesador marca Windmere y se mezcla con 100 ml de agua hasta obtener una masa suave y homogénea. 3. Se deja reposar durante 15 minutos. 4. Se filtra en un vaso de precipitados y se procede a realizar la lectura con un potenciómetro digital. 5. Se calibra el pH-metro con buffer 4 y 7. 6. Se introducen los electrodos en tres puntos de la muestra. 7. Se hace la lectura sacando la media 4.6 Métodos Microbiológicos Estos se realizaron en el Laboratorio de Control de Calidad de la Universidad Salvadoreña Alberto Masferrer (USAM), ubicada en la 19 avenida norte, entre 3ra calle poniente y Alameda Juan Pablo II. Para estos análisis microbiológicos se realizaron las siguientes determinaciones: Coliformes Totales y Fecales, Escherichia coli, Salmonella sp., Pseudomona sp. y Staphylococcus aereus, todos con el objetivo de determinar la calidad sanitaria del pescado después de tres días de almacenamiento en hielo. Los análisis se efectuaron a 6 muestras correspondientes a las tres especies de los dos mercados. (Anexo No.10) 82 V. ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS 5.1 Diseño experimental Es preciso hacer una clara distinción entre dos tipos de mediciones experimentales: 1. Estimación auténtica de las estadísticos descriptivos de las variables en estudio, la cual será utilizada en una estimación cuantitativa 2. Correlación de las variables: proteína, nitrógeno de bases volátiles totales y nitrógeno de trimetilamina en función de establecer respuestas concluyentes del comportamiento de dichas variables. 5.2 Método Cualitativo Se ha hecho uso del método cualitativo (entrevista), a continuación se presentan las variables que se utilizaron para las entrevistas a los vendedores en el mercado. Cuadro No 16 Resumen de las variables obtenidas de las entrevistas de los dos mercados en estudio. 83 84 Como se puede observar en el cuadro “Resumen de variables obtenidas de las entrevistas de los dos mercados en estudio”, las especies de pescado más vendidas son la corvina, boca colorada (pargo), queen y bagre. En el transporte del pescado fresco generalmente se utiliza hieleras o guacales con abundante hielo. La procedencia o el lugar de abastecimiento para éstos mercados son: del departamento de Sonsonate y la tienda de mayoreo la Tiendona. También se puede concluir que los distribuidores (puestos de venta) compran el pescado a diario. Si los productos no son vendidos, los entrevistados aseveran que almacenan el pescado en hieleras y lo venden al día siguiente. En el cuadro resumen de variables también se observa que el tiempo máximo de almacenamiento que se otorga a este pescado varia entre dos y tres días. En las entrevistas realizadas se pudo concluir que las condiciones de venta para los pescados frescos en los dos mercados varían entre pescado entero o fileteado en cubetas de plástico a aluminio con trozos de hielo y hojas de plátano con hielo (mercado de Santa Tecla) y para el mercado de Antiguo Cuscatlán el pescado se exhibe sobre bloques de hielo dentro de vitrinas de vidrio. Se logró apreciar que el uso de equipo adecuado (gabacha, redecilla y guantes) para asegurar la inocuidad de los productos esta básicamente limitado, en su mayoría usan delantales (aunque solamente en el mercado de Antiguo Cuscatlán de percibió el uso de gorro o redecilla para cubrir el pelo del empleado). Los pescados para su venta habitualmente son consumidos enteros y (normalmente la mayoría se venden eviscerados) y fileteados. 85 Finalmente, todos los puntos de venta usan agua y hielo de los mismos mercados donde distribuyen sus productos. 5.3 Método Sensorial Los resultados de la evaluación de los siete atributos analizados en cada una de las especies procedentes de los mercados de Santa Tecla y Cuscatlán se presentan a continuación: En la presente tabla se puede apreciar la procedencia de las muestras y su determinación estadística, donde las muestras de las tres especies fueron tomadas en la misma cantidad y el mismo número de veces, teniendo cuidado de que estas fueran homogéneas de los dos mercados en estudio. Cuadro No.17 Procedencia de las especies de pescado en estudio Procedencia tipos de pescado bagre Válidos Corvina Válidos Pargo Válidos Antiguo Cuscatlan Santa tecla Total Antiguo Cuscatlan Santa tecla Total Antiguo Cuscatlan Santa tecla Total Frecuencia 1 1 2 1 1 2 1 1 2 Porcentaje 50,0 50,0 100,0 50,0 50,0 100,0 50,0 50,0 100,0 Porcentaje válido 50,0 50,0 100,0 50,0 50,0 100,0 50,0 50,0 100,0 Porcentaje acumulado 50,0 100,0 50,0 100,0 50,0 100,0 Para la identificación del pescado fresco antes de su compra se procedió ha realizar una evaluación sensorial del pescado, para dicha evaluación la revista electrónica consumer.es de la fundación EROSKI, en 86 una publicación en el Diario Oficial del Consumidor sugiere la inspección de siete atributos que conllevan a obtener una clasificación mas clara del estado de frescura en que se encuentra el pescado al momento de su compra. Para dicha evaluación se examinan siete atributos a los que se les coloca una nota de la siguiente manera: clasificación para el estado del pescado, “0” para Muy fresco, “1” para Fresco, “2” para Poco Fresco y “3” para Mal Estado. (Anexo No. 5) A continuación se describen los resultados para todas las especies según su precedencia y atributos analizados. Cuadro No.18 Resultados de los análisis sensoriales realizados en las tres especies de pescado antes de su compra. ATRIBUTOS Forma Ojos Córnea Pupila Color Agallas Mucus Corte de la carne Cavidad Abdominal Órganos y sangre Color de la piel Piel o escamas Mucus en la piel Espina central o Espina vertebral vértebra Color a su largo Al tacto Carne Superficie Olor Santa Tecla Bagre Pargo Corvina 1 0 2 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 0 2 0 1 1 1 0 0 0.71 0.64 1.00 Antiguo Cuscatlán Bagre Pargo Corvina 0 1 0 0 1 0 0 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 0 0 0 1 0 0.36 0.79 0.43 87 En el cuadro anterior se puede observar que en el mercado de Santa Tecla el bagre y el pargo fue adquirido en estado “Muy Fresco” a excepción de la corvina que se encontraba en estado “Fresco” al momento de la compra. En el mercado de Antiguo Cuscatlán las tres especies de pescado se adquirieron en estado “Muy Fresco”. 5.4 Método Cuantitativo 5.4.1 Determinación de Proteínas La concentración de proteínas para las tres especies de pescados (bagre, corvina y pargo), provenientes de los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán, evaluadas durante tres días presentan los siguientes resultados: Cuadro No.19 Determinación de proteínas de tres especies de pescado comercializados en el mercado de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán Porcentaje de proteínas por especies Mercado Santa Tecla Antiguo Cuscatlán Día Fecha Bagre Corvina Pargo Lunes 24/10/2006 7.20% 18.90% 6.60% Martes 25/10/2006 6.90% 9.40% 5.60% Miércoles 26/10/2006 6.00% 7.80% 3.70% Lunes 24/10/2006 8.30% 10.30% 8.50% Martes 25/10/2006 5.30% 8.70% 7.20% Miércoles 26/10/2006 3.60% 4.70% 4.40% 88 En el cuadro anterior se puede observar que la concentración de proteínas en los tres días de análisis, sufre una clara disminución a medida que avanza el tiempo de almacenamiento para las tres especies. Dicha disminución se hace evidente para cada especie de la siguiente manera: A) Análisis de contenido de proteínas en el Bagre: Especie Día Fecha Bagre Lunes Martes Miércoles 24/10/2006 25/10/2006 26/10/2006 Porcentaje de proteínas por Mercado Santa Antiguo Tecla Cuscatlán 7.20% 8.30% 6.90% 5.30% 6.00% 3.60% Como se observa en la tabla anterior la especie del bagre proveniente del mercado de Santa Tecla presentó una concentración de 7.20% al iniciar el análisis, la muestra del mercado de Antiguo Cuscatlán varió su concentración con 1.1% más, presentando para el día 24/10/2007 el 8.30%. Ambas muestras disminuyeron su concentración proteica en el segundo día de análisis viéndose una disminución mas significativa en el bagre proveniente de Antiguo Cuscatlán (5.30%). En el tercer día de análisis la caída de la concentración proteica en el bagre de Antiguo Cuscatlán fue más significativa llegando a 3.60%, que la de Santa Tecla cuya disminución fue solo del 0.90%. A continuación en el gráfico, se puede observar la tendencia de disminución en ambas especies durante los tres días de almacenamiento en hielo. 89 % Proteinas Comportamiento de las proteinas en el Bagre proveniente de los dos mercados en estudio. 9.00% 8.00% 7.00% 6.00% 5.00% 4.00% 3.00% 2.00% 1.00% 0.00% 8.30% 7.20% 24/10/2006 Lunes 6.90% 5.30% 6.00% 3.60% Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 25/10/2006 Martes 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento B) Análisis de contenido de proteínas en la Corvina: Especie Día Fecha Corvina Lunes Martes Miércoles 24/10/2006 25/10/2006 26/10/2006 Porcentaje de proteínas por Mercado Santa Antiguo Tecla Cuscatlán 18.90% 10.30% 9.40% 8.70% 7.80% 4.70% Del cuadro anterior concluimos que la muestra de corvina procedente del mercado de Santa Tecla presentó una concentración proteica inicial significante, del 18.90% en comparación de la muestra tomada en Antiguo Cuscatlán cuya carga inicial fue de 10.30%, ambas muestras disminuyeron después del segundo día de almacenamiento en 9.40% y 8.70% 90 respectivamente; finalmente las proteínas de la corvina del mercado de Santa Tecla bajan hasta 7.80% y la muestra de Antiguo Cuscatlán a un 4.70%. En la siguiente gráfica se aprecia la precipitada disminución de proteínas que sufre la corvina del mercado de Santa Tecla para el segundo día de análisis, a pesar que las concentraciones proteicas son diferentes ambas disminuyen significativamente para el último día de análisis. Se puede apreciar de igual forma que la concentración de proteínas en mas elevada en la muestra proveniente de Santa Tecla. Comportamiento de las proteinas en la Corvina proveniente de los dos mercados en estudio % Proteinas 20.00% 18.90% 15.00% 10.30% 8.70% 9.40% 10.00% 7.80% 4.70% 5.00% Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 0.00% 24/10/2006 Lunes Almacenamiento 26/10/2006 Miércoles 91 C) Análisis de contenido de proteínas en el Pargo: Especie Día Fecha Pargo Lunes Martes Miércoles 24/10/2006 25/10/2006 26/10/2006 Porcentaje de proteínas por Mercado Santa Antiguo Tecla Cuscatlán 6.60% 5.60% 3.70% 8.50% 7.20% 4.40% Como se observa en el cuadro anterior la muestra del pargo del mercado de Santa Tecla que fue analizada el primer día contenía 6.60% de proteínas, presentando la muestra de Antiguo Cuscatlán el 1.90% más, es decir 8.50%. Ambas muestras disminuyeron un poco mas del 1%, siendo para el mercado de Santa Tecla el 5.60% y para el mercado de Antiguo Cuscatlán el 7.20%. Para el tercer día la muestra que presentó una mayor disminución fue la de Antiguo Cuscatlán ya que bajó hasta un 4.40% contrario a la de Santa Tecla ya que disminuyó solo un 1.90% llegando a un valor final de 3.70% En la siguiente gráfica se puede observar que el pargo proveniente de Antiguo Cuscatlán contenía unas concentraciones más altas de proteínas que la de Santa Tecla a pesar de lo anterior la disminución de las concentraciones proteicas es evidente desde a lo largo de los tres días de análisis. 92 Comportamiento de las proteinas en el Pargo proveniente de los dos mercados en estudio. 10.00% 8.50% % Proteinas 8.00% 6.00% 7.20% 6.60% 5.60% 4.00% 4.40% 3.70% 2.00% Antiguo Cuscatlán 0.00% 24/10/2006 Lunes Santa Tecla 25/10/2006 Martes Almacenamiento 26/10/2006 Miércoles En las tres especies se puede apreciar una disminución gradual del contenido de proteínas desde el primer día hasta el tercer día de análisis. La especie que presenta más contenido de proteínas en su composición es la corvina, en ambos mercados el porcentaje obtenido en el primer día de análisis, es bastante elevado en comparación con las especies analizadas: bagre y pargo. 93 5.4.2 Determinación de la Trimetilamina y las Bases Volátiles Totales Los resultados de las determinaciones del contenido de las bases volátiles totales (N-VBT) y la trimetilamina (N-TMA) en las carnes de bagre, corvina y pargo almacenados en hielo durante tres días se presentan a continuación: A) Bagre Cuadro No.20 Contenido de N-TMA y N-BVT en el Bagre procedente de los Especie Mercado Día N- TMA en mg/100 g N-BVT en mg/100 g Bagre mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán almacenados en hielo. Santa Tecla Santa Tecla Santa Tecla Antiguo C. Antiguo C. Antiguo C. 1 2 3 1 2 3 6.38 6.88 24.48 5.29 10.58 18.32 27.66 24.87 18.23 11.64 8.47 10.47 a. Análisis del comportamiento de la Trimetilamina en el músculo del pescado del bagre según su procedencia. i) Mercado de Santa Tecla: Especie Mercado Almacenamiento N-TMA mg/100 g Bagre Santa Tecla Lunes Martes Miércoles 6.38 6.88 24.48 94 En el primer día de almacenamiento en hielo se pudo apreciar un contenido de N-TMA en el bagre bastante avanzado para ambos mercados. En el mercado de Santa Tecla el incremento en promedio del N-TMA en los dos primeros días es de 0.5 mg/100 g y para el tercer día de almacenamiento bajo las mismas condiciones el contenido aumentó hasta un valor promedio de 24.48 mg/100 g de N-TMA. N-TMA mg/100 g Contenido de N-TMA en el bagre almacenado en hielo. Mercado de Santa Tecla. 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 24.48 6.88 6.38 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 Almacenamiento ii) Mercado de Antiguo Cuscatlán: Especie Mercado Almacenamiento Bagre Antiguo Cuscatlán Lunes Martes Miércoles N-TMA mg/100 g 5.29 10.58 18.32 3.5 95 En el mercado de Antiguo Cuscatlán el aumento del contenido de NTMA se desarrolló menos acelerado que la muestra del mercado de Antiguo Cuscatlán presentando como valor inicial 5.29 mg/100 g y hasta un valor final en el tercer día de 18.32 mg/100 g de N-TMA como promedio entre los dos experimentos realizados. N-TMA mg/100 g Contenido de N-TMA en el bagre almacenado en hielo. Mercado de Antiguo Cuscatlán 20.00 18.32 15.00 10.58 10.00 5.29 5.00 0.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento A continuación se puede apreciar que a pesar que las cantidades de NTMA son diferentes para cada muestra hay una tendencia de crecimiento a medida que avanza el tiempo. 96 Gráfico comparativo de la concentración de N-TMA en el bagre procedente de los dos mercados en estudio. N-TMA mg/ 100g 25.00 24.48 18.32 20.00 15.00 10.00 5.00 10.58 6.38 5.29 6.88 Antiguo Cuscatlán 0.00 24/10/2006 Lunes Santa Tecla 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento b. Análisis del comportamiento de las Bases Volátiles Totales en el músculo del pescado del bagre según su procedencia. i) Mercado de Santa Tecla: Especie Mercado Almacenamiento Bagre Santa Tecla Lunes Martes Miércoles N-BVT mg/100 g 27.66 24.87 18.23 Para la especie del bagre el comportamiento del N-BVT en los días de almacenamiento fue de una leve disminución de su contenido. Se observa que para el tercer día de almacenamiento la concentración bajo en un 18.23 mg/100 g. 97 N-BVT mg/100 g Contenido de N-BVT en el bagre almacenado en hielo. Mercado de Santa Tecla 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 27.66 24.87 18.23 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento ii) Mercado de Antiguo Cuscatlán: Especie Mercado Almacenamiento Bagre Antiguo Cuscatlán Lunes Martes Miércoles N-BVT mg/100 g 11.64 8.47 10.47 El bagre adquirido en Antiguo presentaba una concentración de 11.64 mg/100 g de N-BVT en la determinación inicial para el segundo día dicha concentración disminuyó a 8.47 mg/100 g y finalmente en el tercer día de análisis la concentración incrementó a 10.47 mg/100 g de N-BVT. 98 15.00 11.64 10.00 10.47 8.47 5.00 0.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 Almacenamiento Gráfico comparativo de la concentracion de N-BVT en el bagre procedente de los dos mercados en estudio. 30 27.66 25 N-BVT mg/ 100 g N-BVT mg/100 g Contenido de N-BVT en el bagre almacenado en hielo. Mercado de Antiiguo Cuscatlan 24.87 20 15 11.64 8.47 10 18.23 10.47 5 Antiguo Cuscatlán 0 24/10/2006 Lunes Santa Tecla 25/10/2006 Martes 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento 3.5 99 B) Corvina Cuadro No.21 Contenido de N-TMA y N-BVT en la Corvina procedente de Especie Mercado Corvina los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán almacenados en hielo. Santa Tecla Santa Tecla Santa Tecla Antiguo C. Antiguo C. Antiguo C. N- TMA N-BVT en en mg/100 mg/100 g g Lunes 4.71 23.04 Martes 7.81 21.35 Miércoles 11.33 29.37 Lunes 1.59 22.76 Martes 9.37 20.31 Miércoles 8.85 22.92 Día a. Análisis del comportamiento de la Trimetilamina en el músculo del pescado de la corvina según su procedencia. i) Mercado de Santa Tecla: Especie Mercado Almacenamiento Corvina Santa Tecla Lunes Martes Miércoles N-TMA mg/100 g 4.71 7.81 11.33 La corvina analizada, procedente del mercado de Santa Tecla presentaba valores iniciales de 4.71 N-TMA mg/100 g, para el segundo día la concentración ascendió hasta 7.81 mg/ 100 g hasta que finalmente el tercer día se presentó un aumento casi del triple a comparación del primer día de análisis de 11.33 mg/100 g. 100 N-TMA mg/100 g Contenido de N-TMA en la corvina almacenada en hielo. Mercado de Santa Tecla. 15.00 11.33 10.00 7.81 5.00 4.71 0.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento ii) Mercado de Antiguo Cuscatlán Especie Mercado Almacenamiento Corvina Antiguo Cuscatlán Lunes Martes Miércoles N-TMA mg/100 g 1.59 9.37 8.85 La muestra de corvina tomada del mercado de Antiguo Cuscatlán presentaba niveles de N-TMA bastante bajos en el primer día de análisis representado por 1.59 mg/100 g a un así el aumento se dió paulatinamente hasta llegar a un contenido final de 8.85 mg/100 g. 101 N-TMA mg/100 g Contanido de N-TMA en la corvina almacenada en hielo. Mercado de Antiguo Cuscatlán 10.00 8.00 6.00 4.00 2.00 0.00 9.37 8.85 1.59 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento Gráfico comparativo de la concentracion del N-TMA en la corvina procedente de los dos mercados en estudio. N-TMA mg/ 100 g 12.00 9.37 10.00 8.00 6.00 4.00 11.33 8.85 7.81 4.71 1.59 2.00 Antiguo Cuscatlán 0.00 24/10/2006 Lunes Santa Tecla 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento b. Análisis del comportamiento de las Bases Volátiles Totales en el músculo del pescado del bagre según su procedencia. 102 i) Mercado de Santa Tecla: Especie Mercado Almacenamiento Corvina Santa Tecla Lunes Martes Miércoles N-BVT mg/100 g 23.04 21.35 29.37 La corvina del mercado de Santa Tecla presentó inicialmente 23.04 mg/100 g, el primer día; para el segundo día la concentración después del análisis presentó una disminución de 1.69 mg/100 g y para el tercer día incrementó nuevamente a una concentración de 29.37 mg/100 g. N-BVT mg/ 100g Contenido de N-BVT en la Corvina almacenada en hielo. Mercado de Santa Tecla. 40.00 30.00 29.37 23.04 20.00 21.35 10.00 0.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 Almacenamiento ii) Mercado de Antiguo Cuscatlán Especie Mercado Almacenamiento Corvina Antiguo Cuscatlán Lunes Martes Miércoles N-BVT mg/100 g 22.76 20.31 22.92 3.5 103 Se puede apreciar que el contenido inicial era de 22.76 mg/100 g de NBVT el primer día de análisis, luego de 24 horas la concentración bajó de manera significarte a 20.31 mg/100 g incrementando para el ultimo día de análisis a 22.92 mg/100 g. N-BVT mg/ 100 g Contenido de N-BVT en la Corvina almacenada en hielo. mercado de Antiguo Cuscatlán. 24.00 23.00 22.92 22.76 22.00 21.00 20.31 20.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento Grafico comparativo de la concentracion de N-BVT en la Corvina procedente de los dos mercados en estudio. 30 N-BVT mg/ 100g 25 29.37 22.76 23.04 20 20.31 22.92 21.35 15 10 5 0 Antiguo Cuscatlán 24/10/2006 Lunes Santa Tecla 25/10/2006 Martes 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento 104 C) Pargo Cuadro No.22 Contenido de N-TMA y N-BVT en el Pargo procedente de los Especie Mercado Día Pargo mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán almacenados en hielo. Santa Tecla Santa Tecla Santa Tecla Antiguo C. Antiguo C. Antiguo C. 1 2 3 1 2 3 N- TMA N-BVT en mg/100 en mg/100 g g 4.35 23.90 7.60 22.81 9.73 21.62 9.73 20.54 10.58 24.34 13.76 21.17 a. Análisis del comportamiento de la Trimetilamina en el músculo del pescado del bagre según su procedencia. i) Mercado de Santa Tecla Especie Mercado Almacenamiento Pargo Santa Tecla Lunes Martes Miércoles N-TMA mg/100 g 5.98 9.73 12.17 Los valores iniciales del contenido de N-TMA en el pargo para las muestra de ambos mercados, fueron bastante altas 5.98 y 7.60 mg/100 g pero el aumento en el segundo y tercer día no fue bastante drástico; permaneciendo los valores inferiores a 13.76 mg/100 g. 105 N-TMA mg/100 g Contanido de N-TMA en el Pargo almacenado en hielo. Mercado de Santa Tecla 15.00 12.17 10.00 9.73 5.98 5.00 0.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento ii) Mercado de Antiguo Cuscatlán Especie Mercado Almacenamiento Antiguo Pargo Cuscatlán Lunes Martes Miércoles N-TMA mg/100 g 7.60 10.27 13.76 El pargo analizado del mercado de Antiguo Cuscatlán presentó como concentración inicial de N-TMA 7.60 mg/100 g, luego aumentó para el segundo día de almacenamiento a 10.27 M/100 g hasta que finalmente el tercer día acrecentó hasta 13.76 mg/100 g. 106 15.00 13.76 10.27 10.00 7.60 5.00 0.00 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 Almacenamiento Gráfico comparativo de la concentracion de N-TMA en el Pargo procedente de los dos mercados en estudio. 15.00 N-TMA mg/ 100g N-TMA mg/100 g Contenido de N-TMA en el Pargo almacenado en hielo. Mercado de Antiguo Cuscatlán 10.00 5.00 13.76 10.27 12.17 7.60 9.73 5.98 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 0.00 24/10/2006 Lunes 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento 107 b. Análisis del comportamiento de las Bases Volátiles Totales en el músculo del pescado del bagre según su procedencia. i) Mercado de Santa Tecla Especie Mercado Almacenamiento Lunes Martes Miércoles Santa Tecla Pargo N-BVT mg/100 g 23.36 21.08 22.76 El comportamiento de las Bases Volátiles Totales en el músculo del pargo proveniente de Santa Tecla muestras que para el primer día (lunes) la concentración inicial era de 23.36 mg/100 g de N-BVT y para el segundo día esta concentración cayo a 21.08 mg/100 g el ultimo día de análisis (miércoles) la cantidad aumentó en 1.68 mg/100 g, es decir a 22.76 mg/100 g. Contenido de N-BVT en el Pargo almacenado en hielo. Mercado de Santa Tecla N-BVT mg/100 g 23.50 23.36 23.00 22.76 22.50 22.00 21.50 21.08 21.00 20.50 0 0.5 1 1.5 2 Almacenamiento 2.5 3 3.5 108 ii) Mercado de Antiguo Cuscatlán Especie Mercado Almacenamiento Antiguo Pargo Cuscatlán Lunes Martes Miércoles N-BVT mg/100 g 24.44 19.99 18.52 El pargo de Antiguo Cuscatlán se comportó de la siguiente manera: la concentración inicial en el músculo era de 22.44 mg/100 g, para el segundo día esta decayó a 19.99 mg/100 g y finalmente el tercer día a concentración de igual manera bajo a 18.52 mg/100 g. N-BVT mg/ 100 g Contenido de N-BVT en el Pargo alamcenado en hielo. Mercado de Antiguo Cuscatlám 30.00 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 24.44 19.99 0 0.5 1 1.5 2 Almacenamiento 2.5 18.52 3 3.5 109 N-BVT mg/100 g Gráfico comparativo de la concentración de N-BVT en el Pargo proveniente de los dos mercados en estudio 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 0.00 24.44 23.36 19.99 22.76 21.08 18.52 24/10/2006 Lunes Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 26/10/2006 Miércoles Almacenamiento 5.4.3 Determinación de Humedad y pH Los parámetros de humedad y pH obtenidos en cada una de las muestras durante los días de almacenamiento se presentan a continuación: Cuadro No.23 Resumen del porcentaje de humeada y pH en el Bagre, Corvina y Pargo. CORVINA BAGRE Especie Mercado Santa Tecla Santa Tecla Santa Tecla Antiguo C. Antiguo C. Antiguo C. Santa Tecla Santa Tecla Santa Tecla Antiguo C. Antiguo C. Día 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 Humedad (%) 80 78 72 78 78 74 74 72 68 78 72 pH 7 7 7 6 7 7 6.5 6 6 6 6 110 PARGO Antiguo C. Santa Tecla Santa Tecla Santa Tecla Antiguo C. Antiguo C. Antiguo C. 3 1 2 3 1 2 3 72 88 86 78 88 82 78 7 6.5 7 8 7 6.5 6 a) Humedad La humedad presente el músculo del bagre proveniente del mercado de Santa Tecla fluctuó del 80% el primer día de análisis hasta un 72% el tercer día. En el mercado de Antiguo Cuscatlán el bagre estudiado permaneció con una humedad del 78% el primer y segundo día hasta disminuir a un 74% el último día de almacenamiento. Comparación del contenido de humedad en el bagre porcedente del mercado de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán 80 Humedad (%) 80 78 78 78 78 76 74 74 72 72 70 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 68 1 2 3 Almacenamiento La corvina adquirida en el mercado de Santa Tecla el primer día de análisis presento un 74% en el contenido de humedad luego para el segundo 111 día de almacenamiento disminuyó a un 72% bajando hasta el tercer día a un 68% en el último análisis. Por el contrario, la muestra adquirida en Antiguo Cuscatlán presentaba 78 g/100 g de agua el primer día y permaneciendo constante el segundo y tercer día con un 72 %. Comparación del contenido de humedad en la corvina procedente del mercado de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán 78 Humedad (%) 80 75 74 72 70 72 72 68 65 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 60 1 2 3 Almacenamiento Las muestras de pargo se mantuvieron en valores similares para las dos muestras procedentes de Santa Tecla y de Antiguo Cuscatlán; el primer día ambas muestras examinadas presentaron el 88% de humedad, para el segundo día, esta disminuyó para el proveniente de Santa Tecla en un 86% y para el de Antiguo Cuscatlán en 82%, observándose un cambio del 2%, finalmente, para el último día la humedad permaneció estable nuevamente para ambas en un 78%. 112 Comparación del contenido de humedad en el pargo procedente del mercado de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán Humedad (%) 90 88 88 86 85 82 80 78 78 75 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 70 1 2 3 Almacenamiento b) pH El bagre proveniente del mercado de Santa Tecla durante los tres días de análisis no presentó cambios, los tres días permaneció el pH, a diferencia del bagre del mercado de Antiguo Cuscatlán que durante los dos primeros días se mantuvo a 6 y luego aumento ligeramente a 7. Comparacion del pH en el bagre procedente del mercado de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán 5.5 6 6 pH 6 6.5 7 7 1 7 2 Almacenamiento 7 7 3 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 113 En la corvina proveniente de Santa Tecla, el pH observado en el músculo, inicialmente se encontraba en 6.5 permaneciendo en 6 durante el segundo y tercer día de almacenamiento. Al contrario de la muestra anterior el pH de la carne de corvina de Antiguo Cuscatlán en su primer día se representó con un valor de 6 incrementando y permaneciendo estable un pH de 7, el segundo y tercer día. Comparación del pH en la corvina procedente del mercado de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán 5.5 6 pH 6 6.5 6 6 6.5 7 7 1 2 7 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 3 Almacenamiento La carne de pargo procedente de Santa Tecla tuvo variaciones considerables de su pH en los tres días de almacenamiento, el primer día el pH se encontró en 6.5, para el segundo día el aumento fue hasta un valor de 7 y posteriormente para el último día el pH ascendió a 8. Las muestras de Antiguo Cuscatlán variaron de la siguiente forma: el primer día de determinación el pH se encontraba en 7, luego el segundo día el pH descendió a 6.5 y para el tercer día volvió a descender a 6. 114 Comparacion del pH en el pargo procedente del mercado de Santa Tecla y Antiguo cuscatlán 8 pH 6 7 8 7 6.5 6.5 6 4 2 Antiguo Cuscatlán Santa Tecla 0 1 2 3 Almacenamiento 5.5 Métodos Microbiológicos Los resultados de las muestras microbiológicas analizadas en el Laboratorio de Control de Calidad USAM se representan por las siguientes determinaciones: Coliformes Fecales, Coliformes Totales, Escherichia coli, Salmonella sp, Estaphylococcus aureus, Pseudomona aereginosa Las muestras fueron codificadas e identificadas previamente a las determinaciones de la siguiente manera: Cuadro No.24 Resultado de análisis microbiológicos realizados al Bagre, Corvina y Pargo. Determinaciones Coliformes Fecales Coliformes Totales Escherichia coli Salmonella sp Estaphylococcus aureus Pseudomona aeruginosa Santa Tecla Bagre Pargo Limites 6251 6250 400 NMP/g >110 NMP/g 2.31 NMP/g 400 NMP/g >110 NMP/g 0.918 NMP/g Ausencia CUMPLE NO CUMPLE Ausencia en 25 g NO CUMPLE NO CUMPLE Ausencia Ausencia Corvina 6249 > 110 NMP/g >110 NMP/g NO CUMPLE NO CUMPLE NO CUMPLE NO CUMPLE NO CUMPLE CUMPLE CUMPLE CUMPLE 115 Determinaciones Coliformes Fecales Coliformes Totales Escherichia coli Salmonella sp Estaphylococcus aureus Pseudomona aeruginosa Antiguo Cuscatlán Bagre Pargo Corvina Limites 6254 6253 6252 400 NMP/g >110 NMP/g >110 NMP/g >110 NMP/g 400 NMP/g >110 NMP/g >110 NMP/g >110 NMP/g Ausencia NO CUMPLE CUMPLE CUMPLE Ausencia en 25 g NO CUMPLE NO CUMPLE NO CUMPLE Ausencia NO CUMPLE NO CUMPLE NO CUMPLE Ausencia NO CUMPLE NO CUMPLE NO CUMPLE 116 VI. CONCLUSIONES Con respecto a la calidad del pescado que se comercializa en los mercados de Santa Tecla y Antiguo Cuscatlán del departamento de La Libertad, se demostró que después del análisis sensorial realizado a las tres especies de pescado antes de la compra, éstos se encontraban entre el estado “muy fresco” y “fresco”, según tabla de evaluación de atributos. De acuerdo a los exámenes realizados para determinar el contenido de proteínas en los músculos de los pescados, se puede apreciar una disminución de la concentración inicial encontrada el primer día de análisis hasta el tercer y ultimo día. Las proteínas disminuyen su concentración inicial durante el almacenamiento en hielo no importando la especie o procedencia del pescado. Existe una estrecha relación entre el aumento de trimetilamina y la disminución de proteínas. El almacenamiento en hielo demuestra ser insuficiente para mantener la calidad proteica presente en el músculo del pescado. Los cambios que se presentan en el músculo de pescado durante el almacenamiento en hielo son similares en cada especie. Según la tabla de aceptabilidad de Pearson, todas las especies de los pescados en estudio (bagre, corvina y pargo), se encontraban en un nivel de aceptabilidad FRESCO ya que todos los valores encontrados durante los tres días de análisis se hallaban en un rango ≤ a 20 mg 117 N/100 g, a excepción del bagre proveniente del mercado de Santa Tecla, que para el tercer día de estudio se encontraba en 24.48 mg N/100 g considerándose como ACEPTABLE. Se ha comprobado que durante el almacenamento en hielo del pescado fresco el contenido de nitrógeno de trimetilamina (N-TMA) y nitrógeno de bases volátiles totales (N-BVT) difieren entre si para las tres especies en estudio y durante los tres días de almacenamiento. Se demostró que el músculo sufre cambios importantes en los valores de N-TMA y N-BVT durante los tres días de análisis. La evaluación determinó variabilidad en los estados fisicoquímicos. El método de semi-microdestilación demostró ser el más adecuado para la evaluación de bases volátiles totales ya que al realizar los destilados de las muestras por duplicado los resultados no excedieron los 2 mg /100 g de diferencia entre si, según la norma del Diario Oficial de la Unión Europea NoL097 del 29/04/1995. La semi-microdestilación de las bases volátiles totales a una temperatura constante de 95°C durante 15-20 minutos dá como resultado un destilado que al recolectarlo en un acido demuestra ser la concentración de BVT y TMA presentes en el músculo del pescado. No siempre hay paralelismo entre el desarrollo microbiano y la formación de nitrógeno de trimetilamina porque son pocas las bacterias que producen la oxidación del óxido de trimetilamina a trimetilamina. 118 El comportamiento de las bases volátiles totales nos demuestra que el contenido de éstas va cambiando de acuerdo al tiempo y condiciones de almacenamiento. La medición de N-TMA como índice de frescura demostró ser adecuada porque durante los tres días de evaluación de las tres especies de pescado en estudio hubo variaciones en aumento a partir de la concentración inicial. Sobre el contenido de nitrógeno de bases volátiles totales (N-BVT), se concluye, que las muestras de las tres especies de pescados analizadas durante tres días consecutivos almacenados en hielo, los valores se encontraron bajo el limite establecido por la Unión Europea, en donde el contenido aceptable para el consumo humano es de 30 a 35 mg/ 100 g de N-BVT. El pH del pescado inmediatamente después de su captura es 7. Posteriormente desciende a 6 por el acúmulo de ácido láctico y por último aumenta ligeramente debido a la formación de compuestos básicos. 119 VII. RECOMENDACIONES Para los encargados de la manipulación de pescado fresco en los mercados municipales se recomienda el uso de equipo de protección adecuada, como el uso de guantes especiales que faciliten el corte de los productos y a su vez impidan que el manipulador tenga contacto directo con ellos, para ésto mismo se recomienda el uso de redecillas, uniformes y delantales limpios. Para el transporte de pescado fresco y productos marinos, se recomienda hacerlo en unidades refrigeradas o también el uso de hieleras con abundante hielo limpio para que no se rompa la cadena fría y así prevenir o retardar la descomposición de la carne. Cubrir el pescado con abundante hielo limpio durante la exposición al consumidor para evitar que la temperatura del músculo del pescado aumente y acelerar la descomposición. Al consumidor en general, conocer los diferentes atributos descritos para el análisis sensorial para la compra del pescado fresco y hacer una identificación previa antes de su adquisición para asegurarse de no consumir productos que se encuentran alterados y no aptos para el consumo humano. De igual manera se recomienda no comprar pescados frescos y productos marinos para ser almacenados durante largos períodos de tiempo antes de consumirse, ya que durante esta investigación se ha demostrado que la calidad proteica disminuye a (0°C) y a su vez hay una pérdida de frescura en su composición. 120 El método de semi-microdestilación demuestra ser fácil y confiable para la destilación de las Bases Volátiles Totales (BVT) y de trimetilamina (TMA) y por lo tanto se recomienda su uso para dichos análisis ya que también se puede adaptar con equipo y materiales básicos que se encuentran en un laboratorio de química y al mismo tiempo los reactivos necesarios para la determinación son de uso comercial y fáciles de adquirir y económicos. Se recomienda hacer investigaciones individuales para cada especie de pescado durante tiempos mayores de almacenamiento para que de esta forma se pueda establecer los limites mínimos y máximos de las concentraciones de N-BVT y N-TMA presentes en el músculo de las especies provenientes de las costas salvadoreñas. Hacer un estudio de todas las especies comerciales de El Salvador y su contenido proteico durante todo el año. Realizar una investigación sobre el impacto microbiológico que tienen las bacterias en el músculo del pescado y la relación que ejerce sobre las proteínas. 121 VIII. FUENTES CONSULTADAS ABABOUCH, L. “Quality of Fish and Fish Products”. www.oceansatlas.com BELTRÁN, C.L (2001). “Promoción de la Pesca Costera. Aspectos Socioeconómicos y Técnicos de la Pesca Artesanal en El Salvador, Costa Rica, Panamá, Ecuador y Colombia”. Circular de Pesca No. 957/c. Roma, FAO. p. 20 – 22. BENDER, A.E. (1994). "Diccionario de Nutrición y Tecnología de los Alimentos” 1ª Edición. Zaragoza, España. Editorial Acribia. BERTULLO, E. (2001). “Guía de Trabajos Prácticos. Tecnología de los Productos de la Pesca”. Edición Electrónica. www.pes.fvet.edu.uy BYKOWSKI, P.; DUTKIEWICZ, D. (1996). "Freshwater Fish in Small Processing and Equipment in Small Plants". Roma, FAO. 59 p. CODEX ALIMENTARIOS. “Código de Prácticas para el pescado fresco”. CAC/RCP 9-1976 EUR-LEX. “Diario Oficial de la Unión Europea n°L 097 de 29/04/1995”. www.eur-lex.europa.eu GARCIA, C. (1989). “Revisión de las tecnologías de Procesamiento de Crustáceos de Importancia Comercial”. Facultad de Recursos Naturales. Escuela de Alimentos. Universidad Católica de Valparaíso. Valparaíso, Chile. GRAHAM, J.; JOHNSTON, W.A.; NICHOLSON, F.J. (1993). “El Hielo en las Pesquerías”. Documento Técnico de Pesca No. 331. Estación de Investigaciones Torry. Roma, FAO. 95 p. 122 HERNÁNDEZ, I. (2001). “La Pesca del Pargo”. Costa Rica. www.elanzuelo.com HERNANDEZ, L.A. (1982). “Acuicultura Experimental Guatemala. Catálogo de Peces e Invertebrados Marinos de la Costa del Pacifico de Guatemala”. Guatemala, FAO. RAmboux. A.C. HUSS, H.H. (1998). “El Pescado Fresco: su Calidad y Cambios de su Calidad”. Documento Técnico de Pesca No. 348. Roma, FAO. 202 p. LÓPEZ, J.M. (2002). “La Pesca de la Corvina”. Costa Rica. www.elanzuelo.com LOWRY, O.H.; ROSENBROUGH, N.J.; FAR, A.L.; RANDALL, U.L. (1951). “Protein measurement whit the Folin Phenol Reagent”. Biological Chemistry. 193: 265-275. MADRID, A.; CENZANO, I.; VICENTE, J.M. (1994). "Nuevo Manual de Industrias Alimenticias”. Madrid, España. Iragra, S.A. OLIVEIRA, C. (2004). “Deterioro del Pescado”. www.pes.fvet.edu.uy PEARSON, D. (1998). "Técnicas de Laboratorio para Análisis de Alimentos”. Zaragoza, España. Editorial Acribia. PEDRERO, D.L.; PANGBORN, R.M. (1997). “Evaluación Sensorial de los Alimentos. Métodos Analíticos”. 2ª edición. México D.F. Longman de México Editores. QUITRAL, V. (2003). "Efecto de Tratamiento Térmico sobre las Características Químicas de Carne de Jaiba mora (Homalaspis plana)”. www.scielo.org.ve SALAS, W.F. “Deterioro e Índice de Deterioro”. Universidad Nacional Agraria La Molina. 123 SENASA (Servicio Nacional de Sanidad Agropecuaria); SAG (Secretaria de Agricultura y Ganadería) (1994). “Reglamento para la Inspección y Certificación Zoosanitaria de Productos Pesqueros y Acuícola. Capitulo VII”. Tegucigalpa. Honduras. www.oirsa.org VICCETTI, R. (1997). “Química y Bioquímica Pesquera”. Callao Perú. YEANNES, M.A. (2001). "La Evaluación Sensorial y los Productos Pesqueros”. CONICET. www.infopesca.org ZDZISLAW, E.S. (1994). "Recursos, Composición Nutritiva y Conservas. Tecnología de los Productos del Mar”. Zaragoza, España. Editorial Acribia. "Elaboración de Filetes de Merluza Empanados”. www.fagro.edu.uy "Guía Técnica. Pesca Costera en El Salvador”.(2003) www.agronegocios.gob.sv “El Pescado”. www.fudaciondelcorazon.com “La Importancia de las Proteínas”. www.consumer.es “La Pesca en el Mundo”. (1999). www.dinara.gub.uy “Non-Sensory Assement of Fish Quality”. (2001) Torry Research Station. www.fao.org “Pescados Azules”. www.sabormediterraneo.com “Valor Proteico del Pescado”. www.nutricion.org Gobierno de El Salvador. (2002). “Propuesta de Política de Seguridad Alimentaria y Nutricional”. www.coreca.org La República de El Salvador. (2001). "Resumen Informático sobre la Pesca por Países”. www.fao.org 124 Fundación EROSKI. (2006). “Como Identificar el Pescado Fresco”. www.consumer.es “Bagre” (2002), www.redescolar.ilce.edu Alimento: Todo aquello que aporte sustancias nutritivas a un organismo. Aminoácido: Compuesto químico que contiene un grupo amino NH2 y un ácido CO.OH. Componente de las proteínas. Análisis/Evaluación Sensorial: Examen de las propiedades organolépticas de un producto a través de los sentidos. Antioxidante: químico que reduce la tasa de oxidación de los lípidos, proceso que al final induce al sabor a rancio en los productos. El músculo del pescado contiene antioxidantes naturales, por ejemplo, άtocoferol (vitamina E), pero en pequeñas concentraciones por lo tanto no son efectivos en la prevención de la rancidez durante el almacenamiento en frío de los productos del pescado. Autolisis: rompimiento de proteínas, lípidos y otros compuestos del pescado por la acción de enzimas presentes en el pescado especialmente causando cambios de deterioro. El proceso comienza inmediatamente después de la muerte y la taza de crecimiento depende de la temperatura. Bacteria: Grupo de organismos unicelulares pequeños que carecen de núcleo. Algunas producen enfermedades (las patógenas), mientras que otras son beneficiosas para el hombre. Bases Volátiles Totales (BVT): también llamadas Bases Volátiles Totales Nitrogenadas (BVTN) o Bases Volátiles Nitrogenadas (BVN), este término corresponde al contenido de los compuestos nitrogenados no proteicos que se usan como índice de calidad y frescura presentes en el músculo de los productos marinos. Caloría: Unidad de medida de la energía que todos los alimentos proporcionan al organismo. Carbohidratos: Son los azúcares y los almidones, también se les conoce como glúcidos, y constituyen la fuente más abundante de energía y calorías Especie: Categoría de la clasificación taxonómica por debajo del género, definida por la capacidad de cruzamiento génico. Género: Categoría de la clasificación taxonómica entre especie y familia; grupo de especies muy semejantes Hipoxantina: Compuesto formado por reacciones químicas ocurridas en el músculo del pescado después de su muerte. Lípidos o grasas: Compuestos químicos formados por alcoholes y ácidos grasos. Fuente de calorías que además proporciona vitaminas tales como la A y la D. Metabolismo: Conjunto de reacciones químicas que se desarrollan en los seres vivos durante sus funciones. Comprende la fase de construcción de materia orgánica o anabolismo y la de destrucción o catabolismo. Método de Índice de la Calidad: (MIC), sus siglas en ingles QIM (Quality Index Method), Sistema de puntuación de deméritos para clasificar la calidad del pescado. Este sistema fue desarrollado en Nueva Zelanda, pero ha sido adoptado en los últimos años por laboratorios en Europa y Escandinavia. El método ha sido desarrollado especialmente para pescado deteriorado almacenado en frío. y pescado Microorganismo: Organismo pequeño que no se ve a simple vista (bacteria, virus). Minerales: Nutrientes esenciales que regulan el buen funcionamiento del organismo. Además intervienen en la formación de algunas partes del cuerpo, como los huesos y la sangre Nutrientes: Sustancias que contienen los alimentos y que sirven a los organismos para obtener energía, crecer, mantenerse en buen estado de salud y regular sus funciones. Oxido Trimetilamina: (OTMA) un compuesto de fórmula (CH3)3NO de gran ocurrencia en animales y en bacterias. Se encuentra presente en la carne de especies marinas y crustáceos, pero generalmente no en músculos de pescado fresco. Es metabolizado por especies del deterioro de pescado, y es dividido enzimaticamente en formaldehído y dimetilamina en el músculo de ciertas especies de pescado, incluso durante el almacenamiento congelado. Potenciómetro: instrumento que mide magnitudes eléctricas, como intensidad de corriente, carga, potencial, energía, resistencia eléctrica, capacidad e inductancia. El resultado de estas medidas se expresa normalmente en una unidad eléctrica estándar. Preservación: Método para que el pescado, los mariscos y sus productos se conserven, por largos períodos de tiempo, en condiciones aceptables en cuanto a sus propiedades nutritivas, sabor, olor e higiene. Procesamiento: Actividades del sector secundario de la industria pesquera para preparar los recursos acuáticos para su consumo, tales como el secado, salado, curado, ahumado, enlatado, etcétera. Proteína: Compuesto químico que tiene como función principal la de contribuir a la formación de los tejidos y el organismo en general. Se considera como el más importante de todos los nutrientes y el pescado representa una gran fuente de proteínas. Proteólisis: Rompimiento de las proteínas a sus aminoácidos por enzimas. Las proteínas pueden ser desnaturalizadas a sus aminoácidos por la acción de ácidos y alcalinos, pero este proceso es mejor referido como hidrólisis. Refrigeración: Proceso en el cual el frío actúa sobre el producto, retardando o suspendiendo la acción bacteriana. Rigor Mortis: es el término en latín para describir la rigidez o muerte, la rigidez de un animal después de la muerte. Generalmente, los pescados vertebrados comienzan el rigor después de 8-24 horas después de la muerte., pero este periodo puede acortarse o alargarse. Vitaminas: Nutrientes esenciales para el buen funcionamiento del organismo. Entre las más importantes están la A y la C, y el complejo B, formado por tiaminas o B1, la riboflavina o B2, la niacina, etcétera. Volátiles: Que se evapora rápidamente. ANEXO No. 1 Género y especie de la corvina específicos de cada país. GÉNERO Y ESPECIE LUGAR DE ORIGEN Cynoscion albus Colombia, Costa Rica, Ecuador, El Salvador, Guatemala, Honduras, México, Nicaragua, Panamá Argentina, Aruba, Barbados, Brasil, Colombia, Curazao, Grenada, Guyana, Nicaragua, Panamá, St Lucia, St Vincent, Suriname, Trinidad y Tobago, Uruguay , Venezuela Chile, Ecuador, Nicaragua, Perú Cynoscion acoupa Cynoscion analis Cynoscion arenarius Cinoscion jamaicensis Cynoscion leiarchus Cynoscion macdonaldi Cynoscion nannus Cynoscion nebulosus Cynoscion nothus Cynoscion phoxocephalus Cynoscion praedatorius Cynoscion reticulatus Cynoscion regalis Cynoscion squamipinnis Cynoscion stolzmanni Cynoscion striatus Cynoscion virescens México, Nicaragua, Honduras Antigua, Argentina, Aruba, Barbados, Brasil , Colombia, Curazao, Dominica, Grenada , Guyana, Jamaica, Nicaragua, Panamá, Puerto Rico, Sta Lucía, St Vincent, Suriname, Trinidad y Tobago, Uruguay, Venezuela Aruba, Brasil, Curazao, Fr Guiana, Grenada, Guyana, Nicaragua, Panamá, St Vincent, Suriname, Trinidad y Tobago, Venezuela México México Cuba, México, USA Cuba, México, Trinidad y Tobago, USA Perú, Colombia, Costa Rica, Ecuador, Guatemala, Honduras, México, Nicaragua, Panamá Costa Rica, Panamá Costa Rica , El Salvador, Guatemala, Honduras, México, Nicaragua, Panamá Canadá , USA Colombia, Costa Rica, Ecuador, El Salvador, Honduras, México, Guatemala, Nicaragua, Panamá, Perú Colombia, Costa Rica, Ecuador, El Salvador, Guatemala, Honduras, México, Panamá, Perú Argentina, Brasil, Uruguay Aruba, Brasil, Colombia, Costa Rica, Curazao, Grenada, Guyana, Nicaragua, Panamá , Suriname, Trinidad y Tobago, Venezuela Fuente: López, J.M. (2002). ANEXO No. 2 Género y especie del pargo específicos de cada país ESPECIE Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus Lutjanus GÉNERO Aratus(Mullet Snapper) Apodus (*) (Schoolmaster Snapper) PAISES USA, México, Guatemala, Honduras, Nicaragua, El Salvador, Costa Rica, Panamá, Colombia, Ecuador Argentiventris (Yellow Snapper) USA, México, Guatemala, El Salvador, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia, Perú, Ecuador Colorado (Colorado Snapper) Guttatus (Spotted Rose Snapper) Jordani (Jordan´s Snapper) Novemfasciatus (Pacific Cubera Snapper) Peru (Pacific Red Snapper) Viridis (Blue and Gold Snapper) Jocu (**) (Dog Snapper) USA, México, Guatemala, El Salvador, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia, Perú, Ecuador USA, México, Guatemala, Costa Rica, Panamá Colombia, Perú, Ecuador USA, México, Guatemala, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia, Perú Hopplopagrus Guentherii (Mexican Barred Snapper) USA, México, Belice, Guatemala, Honduras, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia, Venezuela, Brasil USA, México, Guatemala, El Salvador, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia USA, México, Guatemala, Nicaragua , Costa Rica, Panamá, Colombia, Perú, Ecuador USA, México, Guatemala, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia En el Atlántico desde Massachussets, USA, hasta el norte de Brasil. Desde Bermuda hasta Bahamas, incluyendo el Golfo de México y el Mar Caribe México, Guatemala, Honduras, Nicaragua, Costa Rica, Panamá, Colombia Fuente: Hernández, I. (2001) (*) Especie exclusiva del Océano Atlántico. (**) Especie que se encuentra indistintamente en el Atlántico y en el Pacífico ANEXO No. 3 Presentación gráfica de las tres especie de pescado en estudio Corvina (Cynoscion sp.) Bagre (Galeichthys felinis) Pargo (Lutjanus novemfasciatus) ANEXO No.4 Guía de entrevistas realizadas a los comerciantes de pescado. Universidad Dr. José Matías Delgado Facultad de Agricultura e Investigación Agrícola “Determinación de bases volátiles en carnes frescas de pescado como índice de calidad u frescura en la degradación proteica” Día: ___________________________ Entrevista Hora: ____________ Mercado: _______________________ Nombre propietario o negocio: _________________________ 1. ¿Cuales son las especies de pescado que mas se venden? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 2. ¿Como transportan el pescado hacia el mercado? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 3. ¿De donde proviene el pescado que usted vende? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 4. ¿Cada cuanto tiempo compra el pescado? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 5. Si el pescado de la compra del día le llegara a sobrar, ¿Qué hace con el? y ¿Cómo lo almacenaría? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ _______________ 6. ¿Cuál es el tiempo máximo que usted almacenaría sus productos? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 7. ¿Cómo exhibe el pescado? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 8. ¿Usa algún tipo de protección especial para manipular el pescado? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 9. ¿En que presentación se vende mas el pescado (entero, eviscerado, fileteado, etc.)? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ 10. ¿De donde proviene el agua y el hielo que usted usa? ___________________________________________________________________ ___________________________________________________________________ ANEXO No. 5 Análisis Sensorial Consumer.es Fundación EROSKI (2006) ANEXO No. 6 Reactivos para la determinación de N-TMA y N-BVT Para cada uno de los experimentos se utilizaron los siguientes reactivos: Reactivo Para una muestra Para 18 muestras a analizar Acido tricloroacético al 5% m/v 300 ml 5,400 ml 5 ml 90 ml 15 ml 270 ml 3 gotas por análisis 54 gotas Hidróxido de sodio 2 M. Acido clorhídrico estándar 0.01 M Indicador: 1% de ácido rosólico en etanol al 10% v/v) Hidróxido de sodio 0.1 M. Formaldehído neutralizado al 16% m/v Hidróxido de sodio 0.01 M Gasto en la titilación De estos tres reactivos se preparó una 1 ml por cada 10 ml de cantidad considerada líquido en el matraz de necesaria para titilación realizar todos los análisis. Gasto en la titilación Nota: para la preparación de todos los reactivos se utilizó agua destilada, hervida. Esta se preparó de la siguiente manera: se hirvió en un beaker con la ayuda de un mechero y un trípode, al llegar a ebullición se apartó del fuego, se tapó con papel aluminio y luego se esperó a que enfriara para ser utilizada. 1. Acido tricloroacético al 5% Para 18 muestras fue necesario hacer 5,400 ml de ácido tricloroacético al 5% (m/v). Para ésto se necesitó 270 gramos de ácido tricloroacético grado reactivo. Se preparó por partes en balones de 500 ml (12 en total): 5 g------ 100 ml X g------ 6,000 ml X= 300 gramos Técnica: Se agregó el ácido y posteriormente se aforó el balón con agua destilada. 1. Hidróxido de Sodio a) al 2M Para un balón de 100 ml Gramos de soluto = (2M) (40.0 mol/L) (0.1L) = 0.8 gramos. Técnica: Primero se agrega el NaOH en el balón, luego se afora con agua destilada. b) al 0.1M Para un balón de 100 ml. Fórmula: V1C1=V2C2 V2= [100 ml] [0.1M] / [2M] V2= 5 ml de NaOH al 2 M Técnica: Con ayuda de una pipeta se toman 5 ml de NaOH y se vacían en el balón de 100 ml, luego se afora con agua destilada para obtener NaOH al 0.1 M. c) al 0.01 M Para un balón de 100 ml. Formula: V1C1=V2C2 V2= [100 ml] [0.01M] / [0.1M] V2= 10 ml de NaOH al 0.01 M Técnica: Con ayuda de una pipeta se toman 10 ml de NaOH y se vacían en el balón de 100 ml, luego se afora con agua destilada para obtener NaOH al 0.01 M. 3. Acido clorhídrico estándar Al 32% y ρ= 1.15 g/cm³ HCL = 1.0079 + 35.453 = 36.4609 ≈ 36.5 uma Primera preparación: Para 250 ml al 0.01 M Número de gramos = (0.25 L)(0.01 M)(36.4609 mol) Número de gramos = 0.0911 32 g --------- 100 gr de solución 0.0911 g ------------ X X= 0.28485 g de solución D = M/V V= M/D = 0.28485g de solución / 1.15 g / L = 0.2477 ml 20 gotas ------ 1 ml X -------------- 0.2477 X= 4.95 gotas ≈ 5 gotas Segunda preparación: Para 100 ml al 0.01 M Numero de gramos = (0.1 L)(0.01 M)(36.4609 mol) Numero de gramos = 0.03646 32 g --------- 100 gr de solución 0.03646 g------------- X X= 0.1139 g de solución D = M/V V= M/D = 0.1139 g de solución / 1.15 g / L = 0.09908 ml 20 gotas ------ 1 ml X -------------- 0.09908 X= 4.95 gotas ≈ 2 gotas 4. Etanol Pureza 100% a) al 10 % VICI = V2C2 VI= [100 ml] [10 %] / [100%] = 10 ml Técnica Se agrego en un balón volumétrico de 100 ml, 10 ml de etanol puro y luego se aforó hasta 100 ml con agua destilada. En el frasco para el indicador (color ámbar) con capacidad de 60 ml se prepara el ácido rosólico al 1%. 60 ml de etanol al 10% ------------- 100 % de volumen del frasco X ------------- 1 % g de acido rosólico X= 0.6 gramos de acido rosólico 5. Formaldehído a) al 16% V1C1 =V2C2 V1 = [100 ml] [16 %] / [35 %] V1 = 45.71 ml ANEXO No. 7 Equipo Utilizado para la micro destilación de las Bases Volátiles Totales y Trimetilamina Materiales Balanza Balones Aforados 25, 100 y 200 ml Balón de fondo redondo Bureta 50 ml Condensador refrigerante Erlenmeyer Espátula Matraz de destilación Mechero Pinzas Pinzas para bureta Pipeta 5 y 10 ml Probetas 25 y 50 ml Rejilla de asbesto Soporte de metal Termómetro Trípode Vaso de precipitados Vidrio de reloj Equipo (foto) Nombre Uso Soporte Universal Es un utensilio de hierro que permite sostener varios recipientes. Tela de alambre Es una tela de alambre de forma cuadrangular con la parte central recubierta de asbesto, con el objeto de lograr una mejor distribución del calor. Se utiliza para sostener utensilios que se van a someter a un calentamiento y con ayuda de este utensilio el calentamiento se hace uniforme. Tripié Son utensilios de hierro que presentan tres patas y se utilizan para sostener materiales que van a ser sometidos a un calentamiento. Pinzas de sujeción. Estas pinzas permiten sujetar refrigerantes Matraz de destilación Son matraces de vidrio con una capacidad de 250 ml. Se utilizan junto con los refrigerantes para efectuar destilaciones. Mechero bunsen Son utensilios metálicos que permiten calentar sustancias. Presentan una base, un tubo, una chimenea, un collarín y un vástago. Con ayuda del collarín se regula la entrada de aire. Para lograr calentamientos adecuados hay que regular la flama del mechero a modo tal que ésta se observe bien oxigenada (flama azul). Refrigerante de serpentín. Es un refrigerante que también recibe el nombre de refrigerante de Graham. Su nombre se debe a la característica de su tubo interno en forma de serpentín. Se utiliza para condensar líquidos (destilación). Matraz Erlenmeyer Es un utensilio de vidrio que se empleaPara contener sustancias los hay de varias capacidades. Termómetro Es un utensilio que permite observar la temperatura que van alcanzando algunas sustancias que se están calentando y a la vez si este es un factor que afecte facilita el ir controlando la temperatura. Pipetas. Este material existe en dos presentaciones: a. Pipetas aforadas. b. Pipetas volumétricas. Las primeras permiten medir diversos volúmenes según la capacidad de esta, las segundas no están graduadas y sólo permiten medir un volumen único. ANEXO No.8 ANEXO No.9 Resultado de análisis de N-TMA y N-BVT Muestra Mercado Día Experimento 1er 1er 2do 1er 2do 2do 1er 3er 2do Muestra Mercado Día Bagre Santa Tecla Experimento 1er 1er 2do 1er 2do 2do 1er 3er 2do Vol. V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 2.6 0.6 2.6 0.6 2.1 0.7 2.6 0.6 1.7 2.6 1.8 2.1 H 80 80 80 80 78 78 78 78 72 72 72 72 Promedios 14(300+H)xV/500 N-BVT N-TMA 27.664 6.384 27.66 6.38 27.664 6.384 22.2264 7.4088 24.87 6.88 27.5184 6.3504 17.7072 27.0816 18.23 24.48 18.7488 21.8736 H 78 78 78 78 78 78 78 78 74 74 74 74 Promedios 14(300+H)xV/500 N-BVT N-TMA 11.6424 5.292 11.64 5.29 11.6424 5.292 8.4672 10.584 8.47 10.58 8.4672 10.584 10.472 17.8024 10.47 18.33 10.472 18.8496 Bagre Antiguo Cuscatlán Vol. V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 1.1 0.5 1.1 0.5 0.8 1 0.8 1 1 1.7 1 1.8 Nota: V1 = V2 = H= Corresponde al volumen para el calculo de N-BVT Corresponde al volumen para el calculo de N-TMA Corresponde a la humedad de la muestra Muestra Mercado Día Experimento 1er 1er 2do 1er 2do 2do 1er 3er 2do Muestra Mercado Día Experimento 1er 1er 2do 1er 2do 2do 1er 3er 2do Corvina Santa Tecla Vol. V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 2.1 0.4 2.3 0.5 2.1 0.8 2 0.7 2.9 1.2 2.8 1 Promedios N-BVT N-TMA H 74 74 74 74 72 72 72 72 68 68 68 68 14(300+H)xV/500 21.9912 4.1888 24.0856 5.236 21.8736 8.3328 20.832 7.2912 29.8816 12.3648 28.8512 10.304 H 78 78 78 78 72 72 72 72 72 72 72 72 Promedios 14(300+H)xV/500 N-BVT N-TMA 22.2264 1.0584 22.7556 1.5876 23.2848 2.1168 19.7904 7.2912 20.3112 9.3744 20.832 11.4576 20.832 9.3744 22.9152 8.8536 24.9984 8.3328 23.0384 4.7124 21.3528 7.812 29.3664 11.3344 Corvina Antiguo Cuscatlán Vol. V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 2.1 0.1 2.2 0.2 1.9 0.7 2 1.1 2 0.9 2.4 0.8 Nota: V1 = V2 = H= Corresponde al volumen para el calculo de N-BVT Corresponde al volumen para el calculo de N-TMA Corresponde a la humedad de la muestra Muestra Mercado Día Experimento 1er 1er 2do 1er 2do 2do 1er 3er 2do Muestra Mercado Día Experimento 1er 1er 2do 1er 2do 2do 1er 3er 2do Pargo Santa Tecla Vol. V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 2.2 0.4 2.1 0.7 2 0.9 1.9 0.9 2.3 1 2 1.3 H 88 88 88 88 86 86 86 86 78 78 78 78 Promedios 14(300+H)xV/500 N-BVT N-TMA 23.9008 4.3456 23.36 5.98 22.8144 7.6048 21.616 9.7272 21.08 9.73 20.5352 9.7272 24.3432 10.584 22.76 12.17 21.168 13.7592 H 88 88 88 88 86 86 86 86 78 78 78 78 Promedios 14(300+H)xV/500 N-BVT N-TMA 26.0736 7.6048 24.44 7.60 22.8144 7.6048 19.4544 9.7272 19.99 10.27 20.5352 10.808 17.9928 13.7592 18.52 13.76 19.0512 13.7592 Pargo Antiguo Cuscatlán Vol. V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 V1 V2 2.4 0.7 2.1 0.7 1.8 0.9 1.9 1 1.7 1.3 1.8 1.3 Nota: V1 = V2 = H= Corresponde al volumen para el calculo de N-BVT Corresponde al volumen para el calculo de N-TMA Corresponde a la humedad de la muestra ANEXO No.10