Resistencia a fungicidas.

Objetivos de la clase
„ Definir la resistencia a fungicidas.
Resistencia a fungicidas.
„ Conocer los diferentes tipos de resistencia.
Conceptos y manejo
Curso de Control Químico de enfermedades de plantas.
12 de abril de 2012
Dr. Pedro Mondino
Objetivos de la clase
Resistencia natural o inherente
„ Conocer que clases o grupos de fungicidas poseen
„
„
„
„
riesgo de desarrollo de resistencia.
Conocer en que tipos de enfermedades existe mayor
riesgo de desarrollo de resistencia.
Comprender como se desarrolla la resistencia en
individuos y en poblaciones de hongos.
Comprender que el desarrollo de la resistencia es
una respuesta al patrón de uso del fungicida.
Estar capacitado para retrasar o manejar el
desarrollo de resistencia en las enfermedades de alto
riesgo.
Espectro de acción
Benomil (p.a.)
Patógeno
DE50 mg/l
Pythium ultimum
100
Mucor mucedo
100
Penicillium chrysogenum
0,2
Botrytis cinerea
0,4
Fusarium oxysporum
4
Espectro de acción
Typhula Blight (Gray)
Take-All Patch
Snow Molds
Microdochium Patch
(Pink)
Yellow Patch
ETRI
Summer Patch
Waitea Patch
Brown Patch
Leaf Spot
Pythium Blight
Fairy Ring
Dollar Spot
Algae
Anthracnose
Efectividad
Resistencia adquirida
Rhizoctonia Diseases
mancozeb
1.
% P. italicum resistentes a TBZ
50
40
%
+++ --
+
---
+++
+
+++
?
?
---
---
++
++
+++ ++
+++
---
++
---
+++
+++
++
---
---
++
++
30
20
10
chlorothalonil
0
<0.125
1
16
256
>4096
ppm TBZ
Ej. Sclerotinia homoeocarpa,
Fuente: Vero, S. et al. 2001.
1
Resistencia
„ La resistencia a fungicidas es consecuencia de la
No solo los fungicidas generan
resistencia
„ Resistencia a productos biológicos
capacidad de adaptación de los seres vivos a
condiciones adversas.
„ No es un problema exclusivo del control químico,
ni de los fungicidas.
Biocontrol de Agalla de corona
„ Producida por Agrobacterium tumefaciens
„ Antagonista :Agrobacterium radiobacter
„ Descubierto por Kerr en 1970
Biocontrol de agalla de corona
Biocontrol de agalla de corona
„ Agrobacterium radiobacter K84
produce un antibótico (agrocin 84)
activo contra Agrobacterium
tumefaciens
„ Esta información genética está
codificada en un plásmido
„ Agrobacterium radiobacter K84posee
la información necesaria para resistir a
agrocin 84
Nuevas variantes capaces de quebrar la
resistencia en las plantas.
„ El Fusarium raza 4 amenaza los cultivos
„ Han aparecido cepas de Agrobacterium
tumefaciens resistentes al agrocin 84 por
transferencia de la información de resistencia
„ Se ha creado por ingeniería genética la cepa
Agrobacterium radiobacter K1026 a partir de la
cepa K84 impidiendo la transferencia de genes de
resistencia al agrocin 84
„ Está registrada como biopesticida por la EPA
Jorge Luis Alonso · 13/08/08
El peligroso hongo Fusarium oxysporum, nueva raza
4, se ha convertido en una amenaza en las zonas sub
tropicales de Asia. Investigador Asociado de la
CATIE y asistente Coordinador Regional para
América Latina y el Caribe de Biodiversity
International, responde algunas inquietudes sobre a
cómo prevenir el ingreso de este mal a la zona andina.
2
Nuevas variantes capaces de quebrar la
resistencia en las plantas.
Variedades de tomate pierden resistencia
frente a nuevas razas de Fusarium
Razas nuevas de la roya del trigo capaces de
enfermar a las variedades existentes.
Resistencia a fungicidas
Origen de la resistencia
„ Es una característica estable y heredable que
resulta en una reducción de la sensibilidad a
un fungicida en un hongo individual.
Origen de la resistencia
„ Fuerzas evolutivas:
„
MUTACIÓN
„
SELECCIÓN
Evolución de la resistencia
„ Mutaciones que ocurren en forma azarosa
„ MUTACIÓN
Provee las fuentes de la resistencia
„ SELECCIÓN
Determina la frecuencia
en que se encontrarán
los genotipos
pueden tener como resultado alguna modificación
en las proteínas disminuyendo de ese modo su
capacidad de unirse a la molécula del fungicida
resultando entonces en una resistencia
bioquímica.
„ Esas mutaciones son transmitidas a la siguiente
generación.
„ Aplicaciones repetidas del fungicida seleccionan
esos mutantes dentro de la población del hongo.
„ Cuando la frecuencia de esos mutantes
resistentes es suficientemente grande se está
ante lo que se denomina Resistencia Práctica
3
La resistencia sólo ocurre si se
aplica un fungicida.
La resistencia es un proceso
s
s
s
ss
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s R
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Población sensible
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EN AUSENCIA DEL FUNGICIDA
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Población resistente
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R
EN PRESENCIA DEL FUNGICIDA
Resistencia adquirida a benzimidazoles
Evolución de la resistencia
Ocurrencia natural
de un individuo
resistente
Población inicial
Población resistente
POBLACIÓN DE SALTO
POBLACIÓN DE MELILLA
El desarrollo de la resistencia práctica es un proceso que
ocurre paso a paso
9
diámetro de la colonia (cm)
diámetro de la colonia (cm)
n
uc
ció
ro
d
Re
p
n
uc
ció
ro
d
Re
p
n
uc
ció
ro
d
Re
p
uc
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ro
d
a
a
a
a
Re
p
d
ici
ng
Fu
d
ici
ng
Fu
d
ici
ng
Fu
d
ici
ng
Fu
Población
sobreviviente
n
9
6
3
0
6
3
0
0 ppm
0,1 ppm
1 ppm
10 ppm
0 ppm
0,1 ppm
1 ppm
10 ppm
Leoni, C., 2004
Resistencia práctica
Resistencia práctica.
„ Hablamos de resistencia práctica cuando las
dosis indicadas en la etiqueta del fungicida
no logran brindar un control comercialmente
aceptable de la enfermedad.
4
Resistencia práctica
Desarrollo de la resistencia
„ Como resultado de mutaciones ocurridas al azar
„ Comisión técnica de producción integrada de Brasil
informa de resistencia a estrobilurinas.
Riesgo de resistencia
„ Varios factores contribuyen al riesgo de
algunas proteínas pueden ser modificadas en su
capacidad de unirse al fungicida en lo que se
denomina resistencia bioquímica.
„ Estas mutaciones se transmiten a la siguiente
generación.
„ Las aplicaciones repetidas del fungicida
seleccionan a los mutantes en la población.
„ Cuando la frecuencia de la mutación es
suficientemente alta se alcanza lo que se
denomina resistencia práctica
Riesgo de resistencia
„ Riesgo de resistencia asociado al fungicida.
resistencia
„ Riesgo de resistencia asociado al patógeno.
Modo de
Biología del
Acción del
Patógeno
fungicida Riesgo
„ Combinación de ambos riesgos nos indica el riesgo
real o riesgo asociado a la enfermedad.
„ A este riesgo hay que sumarle el riesgo asociado al
Patrón de uso
Riesgo inherente o asociado al
fungicida
padrón de uso del fungicida.
Fungicidas de alto riesgo
„ Benzimidazoles
„ Clase o grupo al que pertenece el fungicida
„ Sitio de acción (unisitio o multisitio)
„ Estrobilurinas
„ Antibióticos
„ Inhibidores de la biosíntesis del ergosterol
http://www.frac.info/frac/publication/anhang/FRAC-Code-List2011-final.pdf
5
Acción de un fungicida sitio específico
Fungicidas con sitio de acción específico
„ Biosíntesis de lípidos
„ Síntesis de Aminoácidos
„
y Proteínas.
„ Anilinopyrimidinas
„ Inhibidores de la
biosíntesis del ergosterol
„ IBEs
„ Respiración
(complejo III)
„ Estrobilurinas
„ Respiración
desconocido)
„ Phenylpyrroles
sustrato
Dicarboximidas
producto
„ Síntesis de ARNm
producto
sustrato
Fenilalaninas
„ Division nuclear
„ Bencimidazoles
„
enzima
enzima
enzima
Cambios en la forma de una proteína
impiden que el fungicida actúe.
Acción de un fungicida sitio específico
sustrato
sustrato
sustrato
producto
producto
sustrato
sustrato
F
F
F
enzima
enzima
F
enzima
enzima
enzima
enzima
F
F
Fungicidas de bajo riesgo
Riesgo inherente o asociado al
patógeno
„ Con que rapidez se reproduce?
„ Cúpricos
„ Azufrados
„ Dithiocarbamatos
„
„
Corto ciclo de vida
abundante esporulación
„ Cuan variable es?
„
„
Mutaciones
Presencia de reproducción sexual
„ Se dispersa fácilmente?
„
Aislamiento de la población
6
Riesgo asociado a la enfermedad
Riesgo asociado a la enfermedad
Concentración
de conidios de
5x105 esporas
por mL
50 manchas
50 mL de agua destilada
„ 500.000 conidios de Venturia inaequalis por
mancha.
Una sola mancha produce más
de ½ millón de esporas.
Bajo
Riesgo inherente al Fungicida
Alto
Riesgo de resistencia
Riesgo asociado al patógeno
Bencimidazoles
Estrobilurinas
Zona de
riesgo
„ Mutaciones ocurren continuamente
IBEs
Dicarboximidas
Dithiocarbamatos
Azufre
Cúpricos
Rizoctonia
Sclerotium rolfsii
Bajo
Alternaria
Mildius
Penicillium
Botrytis
Venturia
Oidios
Riesgo inherente al patógeno
en frecuencia de 1 x 10-6 a 1 x 10-9
„ Los problemas comienzan cuando la
frecuencia sube a 1 x 10 -2
Se detecta
evaluando 300
individuos
Alto
Riesgo asociado al patógeno
„ Mutaciones expontáneas por resistencia a
Benomil en Guignardia citricarpa agente
causal de la mancha negra de los citrus
suceden en una frecuencia de 1,25 x10-7.
La proporción de mutantes
resistentes se incrementa por:
„ extensa área tratada.
„ efectiva aplicación o dosis.
„ alta población del patógeno previa.
„ alta producción de propágulos.
„ alta frecuencia de los tratamientos.
„ menor tiempo de generación
7
Efectividad del fungicida vs. Selección
Extensión del área tratada
Una aplicación de fungicida a un cultivo:
„
„
50% efectiva
80% efectiva
„ los resistentes quedarán distribuidos en el 20% de
sobrevivientes
„ A mayor área tratada – mayor presión de
selección
„ su frecuencia se habrá incrementado 5 veces.
„ Cuanto más efectivo sea el tratamiento más rápida
será la selección.
Efectividad vs. evolución de
la resistencia
Efectividad vs. evolución de
la resistencia
Fungicida 50 %
eficiente
Fungicida 80 %
eficiente
Población
sobreviviente
Población
sobreviviente
5%
5%
10%
„ Una aplicación 50% efectiva duplica el porcentaje de
resistentes
Nº de aplicaciones vs.
evolución de la resistencia
de resistentes
Perdida de la efectividad de un
fungicida (resistencia cualitativa)
Fungicida 80 %
eficiente
Control de la enfermedad
Fungicida 80 %
eficiente
25%
„ Una aplicación 80% efectiva quintuplica el porcentaje
5%
25%
Población
sobreviviente
100%
Población
sobreviviente
„ 2 aplicaciones 80% efectivas solo dejan resistentes
Repetición de las aplicaciones
„ caída teórica de la eficiencia de un fungicida
8
Tamaño de la Población vs. evolución
de la resistencia.
Tipos de Resistencia
„ Cualitativa
paso simple
„
discreta
disruptiva
discontinua
„
„
„ Cuantitativa
pasos múltiples
„
continua
direccional
progresiva
„
„
Resistencia cualitativa
„ Los individuos resistentes son inmunes al fungicida.
Sensible
% P. italicum resistentes a TBZ
Tolerante
50
40
%
Inmune
30
20
10
0 ppm
10 ppm
1000 ppm
0
<0.125
Resistencia cualitativa
1
16
ppm TBZ
Concentraciones crecientes de fungicida
256
>4096
Fuente: Vero, S. et al. 2001.
Resistencia cualitativa
Carbendazim
60
Nº de aislamientos
50
Arándano
40
Eucalyptus
Frutilla
30
Rosa
Tomate
20
Vid
10
Testigo S/F
0
<4
16
32
64
>128
Concentración m ínim a inhibitoria (ppm )
0,1 ppm
10 ppm
„ Colletotrichum sensible a benomil.
Resistencia de Botrytis cinerea en diferentes cultivos en Uruguay. (Gepp et al 2012)
9
Resistencia cuantitativa
Resistencia cuantitativa
Crecimiento de Fusarium graminearum en diferentes
concentraciones de difenoconazole (Rekanovic et al., 2010)
„ Venturia creciendo en diferentes
concentraciones de difenoconazole
Resistencia cualitativa
Resistencia cuantitativa
30
Frecuency of isolates (%)
25
40
20
35
15
30
10
25
5
20
0
0,00010,0018
0.00180,0032
0,00320,0058
0,00580,0105*
0,01050,0189
0,01890,034
0,0340,0612
0,06120,1102
0,11020,1984
0,19840,357
0,3570,6427
0,64271,1568
1,15682,0823
2,08233,7481
3,74816,7466
ED50 difenoconazole
15
30
10
5
20
0
07
-0
,0
00
86
0,0
*
00
86
-0
,0
10
5*
0,0
10
5-0
,0
18
9
0,0
18
9-0
,0
34
0,0
34
-0
,0
61
2
0,0
61
2-0
,1
10
2
0,1
10
2-0
,1
98
4
0,1
98
4-0
,3
57
0,3
57
-0
,6
42
7
0,6
42
7-1
,1
56
8
1,1
56
8-2
,0
82
3
2,0
82
3-3
,7
48
1
3,7
48
1-6
,7
46
6
6,7
46
6-1
2,1
44
15
10
6,8
61
28
13
20
11
77
E-
Frecuency of isolates (%)
25
5
0
0,00010,0018
0.00180,0032
0,00320,0058
0,00580,0105*
0,01050,0189
0,01890,034
0,0340,0612
0,06120,1102
0,11020,1984
0,19840,357
0,3570,6427
0,64271,1568
1,15682,0823
2,08233,7481
3,74816,7466
ED50 difenoconazole
Resistencia de dos poblaciones de Venturia inaequalis
a difenoconazole en Uruguay (Mondino et al., 2012)
Resistencia a difenoconazole en tres poblaciones de Venturia inaequalis en Uruguay
Resistencia a Iprodione en Botrytis
Perdida de la efectividad de un
fungicida (resistencia cuantitativa)
100
Nº de aislamientos
25
Arándano
20
Eucalyptus
Frutilla
15
Rosa
Tomate
10
Vid
5
Control de la enfermedad
Iprodione
30
80
60
40
20
0
<1
2
4
8
>16
Concentración m ínim a inhibitoria
10
„ Resistencia de poblaciones de Botrytis cinerea a
Iprodione en Uruguay (Gepp et al., 2012)
20
30
40
50
Repetición de las aplicaciones
„ caída teórica de la eficiencia de un fungicida
10
Evolución de la resistencia
Frecuencia en la población
Bajo
Aplicaciones repetidas del fungicida
Estrobilurinas, bencimidazoles
Tipos de resistencia
Inhibidores de la biosíntesis del ergosterol
Alto
„ Resistencia
„ Resistencia cruzada
„ Resistencia cruzada negativa
„ Resistencia múltiple
Bajo
„ Resistencia
Alto
Resistencia cruzada
„ La selección por resistencia a un principio activo
implica automáticamente resistencia a otros
principios activos.
„ Ocurre generalmente entre fungicidas que tienen el
mismo sitio de acción.
Resistencia cruzada
„ Hablamos de resistencia cruzada cuando un
patógeno resistente a un fungicida exhibe
resistencia a otros fungicidas del mismo
grupo, aún aunque nunca haya estado
expuesto a esos otros fungicidas.
„
Benomil, Carbendazim, TBZ
Iprodione, Proximidione
„ Krexosim metil trifloxystrobin azoxystrobin
„
Resistencia cruzada
Resistencia cruzada
„ Los fungicidas del mismo grupo poseen similar
modo bioquímico de acción.
„ El mecanismo bioquímico de resistencia impedirá
que todos los fungicidas del grupo puedan unirse
al sitio de acción.
„
Por ejemplo: Individuos resistentes a Krexosim
metil también serán resistentes a Trifloxystrobin y
a azoxystrobin.
„ Individuos resistentes a benomil lo serán también a
Carbendazim o a Methiltiofanato.
11
Resistencia cruzada negativa
Resistencia múltiple
„ Cuando en una población resistente aparecen
¿Cómo evitar la resistencia?
„ No utilizar fungicidas.
„ Utilizar fungicidas de bajo riesgo.
„ Minimizar el uso de fungicidas de alto riesgo.( ej.
estrobilurinas) Utilizarlos solamente cuando es
indispensable.
„ No enfrentar al fungicida con altas poblaciones de
patógeno.
„ Integrar al control químico con otras medidas que
mantengan baja la población del patógeno.
„ Monitorear la población resistente.
Fungicidas de bajo riesgo
La resistencia sólo ocurre en
presencia del fungicida
s ss s
s
s R s s
s s s s s
s
s
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s R
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s
s
s
s s
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s s
s
s s s
s
s
s R
s s s
s s
s
s
EN AUSENCIA DEL FUNGICIDA
„ La única manera 100% efectiva para evitar el
desarrollo de resistencia es
NO USAR EL FUNGICIDA
Minimizar el numero de aplicaciones
Población resistente
n
uc
ció
ro
d
Re
p
n
uc
ció
ro
d
Re
p
uc
ció
ro
d
a
a
Re
p
d
ici
ng
Fu
d
ici
ng
Fu
a
a
probable que el hongo encuentre maneras de evitar los
múltiples formas de ataque
d
ici
ng
Fu
d
ici
ng
Fu
Población
sobreviviente
n
Población inicial
„ Cuando el fungicida actúa en múltiples sitios es muy poco
s s
s s s
s s
s
s s s
s
n
Carbendazim y Diethofencarb
uc
ció
„
ro
d
activo implica automáticamente susceptibilidad
a otro principio activo.
„ Solamente se conoce un caso.
individuos con resistencia a un segundo principio
activo de diferente modo de acción.
„ Es una resistencia debida a mutaciones
independientes y que ha sido seleccionada por
exposición a uno y luego a otro de los fungicidas.
„ Ej. Botrytis con resistencia a Benzimidazoles y
dicarboximidas.
Re
p
„ La selección por resistencia a un principio
El desarrollo de la resistencia práctica es un proceso que
ocurre paso a paso
12
Riesgo de resistencia está asociado al
patrón de uso
„ Cada aplicación es un evento de selección.
„ El camino más rápido hacia la resistencia es
la repetición de las aplicaciones.
„ Fungicidas de alto riesgo no deben
aplicarse mas una vez en la temporada.
„ Recomendación de etiqueta de Iprodione
Evitar enfrentar grandes poblaciones
„ Recomendaciones de etiqueta de estrobilurinas
Se debe evitar aplicar cuando las poblaciones del patógeno son
grandes
recomendaciones…..
„ Recomendaciones de etiqueta de estrobilurinas
Evitar alta presión de enfermedad
„ Recomendaciones de etiqueta de estrobilurinas
13
Integrar el uso de fungicidas en
sistemas de Manejo Integrado
„ Fungicidas
Se puede hacer algo luego del proceso
de selección por resistencia?
„ ¿Qué sucede cuando dejamos de aplicar el
fungicida?
„ ¿Es posible volver a utilizar un fungicida
„ Métodos biológicos
luego de algún tiempo?
„ ¿Es conveniente aplicarlo en mezcla con otro
fungicida?
„ Métodos culturales
„ Variedades resistentes
Riesgo de resistencia asociado al tipo
de mutación
Habilidad competitiva de los
genotipos resistentes
„ Cuando las mutaciones no afectan el normal
„ Cuando los individuos resistentes no ven
funcionamiento del elemento mutado el
riesgo de resistencia es alto.
„ Cuando el elemento mutado sufre algún
cambio en el funcionamiento, el riesgo es
medio.
„ Cuando la mutación hace que el individuo
sea menos apto el riesgo es bajo.
Realizar un manejo anti-resistencia
„ Debemos saber que la población sensible es un
recurso a conservar.
„ Es necesario hacer un balance entre el objetivo de
controlar la enfermedad evitando pérdidas y
conservar la población sensible del patógeno.
afectada su capacidad competitiva frente al
resto de la población no disminuirán su
número en la población cuando se retira el
fungicida.
„ Cuando los individuos resistentes ven
afectada su habilidad competitiva en
ausencia de la presión de selección
comienzan a retroceder en número en la
población.
Estrategias de manejo
1) No aplicar el fungicida en forma aislada.
„ Aplicar mezclas de fungicidas de modos de acción
diferentes
„ Aplicar el fungicida en rotaciones o alternándolo
con otros de modos de acción diferentes
14
Alternar fungicidas
Uso de mezclas
„ El uso de una mezcla de dos fungicidas con
modo de acción diferente retarda el proceso
de resistencia.
„ La probabilidad inicial de encontrar un doble
resistente (individuo con dos mutaciones) es
la multiplicación de ambas probabilidades.
Fungicida A Fungicida B
„ 1x10-6 X 1 x 10-6 = 1 x 10-12
Cada fungicida control sin discriminar los resistentes al otro
Mezcla de fungicidas
Mezclas de fungicidas
Fungicida A
+
Fungicida B
Fungicida B
+
Fungicida A
Resistentes a B
Resistentes a A
Doble resistentes AB
„ Si luego de seleccionar por resistencia a un
Cada fungicida control sin discriminar los resistentes al otro
¿Altas dosis de fungicida?
fungicida comienzo a mezclar, se
seleccionará la poblacion de dobles
resistentes
¿Bajas dosis de fungicida?
% P. italicum resistentes a TBZ
50
40
%
30
20
10
0
<0.125
1
16
256
>4096
ppm TBZ
„ Altas dosis nos aseguran eliminar por
completo a los sensibles.....
„ Bajas dosis solo eliminan a los más
sensibles.....
15
Monitoreo de la resistencia
Se trata de la toma de muestras de la población de
campo de un patógeno para medir el grado de
sensibilidad a uno o más fungicidas.
Monitoreo de la resistencia
„ Debe ser realizado lo más temprano posible a
efectos de poder tomar medidas para evitar la
situación de resistencia.
„ La resistencia monogénica solo es detectable
cuando alcanza niveles mayores al 1%.
„ N = 300 para detectar con 95% de confianza
Monitoreo de la resistencia
Monitoreo de la resistencia
„ Otro objetivo es analizar el funcionamiento de
las estrategias de manejo antiresistencia.
„ Es necesario realizar monitoreos periódicos.
„ Grandes áreas en donde se aplica el
producto.
„ Tamaño de muestra y area necesarios para
detectar la presencia de resistentes
Monitoreo de la resistencia
„ Para investigar las causas de fallas en el
control.
„ Guiar con que producto realizar el próximo
tratamiento.
16
Monitoreo de la resistencia
„ Los métodos utilizados para testar resistencia
deben ser: reales, cuantitativos,
reproducibles y sus resultados fácilmente
entendibles.
„ FRAC ha publicado métodos recomendados
Ejemplo: Venturia inaequalis
OBJETIVOS
„ Determinación de los niveles de resistencia “in vitro”
a trifloxystrobin en poblaciones de Venturia
inaequalis.
„ Temporada 2007-2008 existieron grandes
pérdidas por esta enfermedad en manzanos.
OBJETIVOS
OBJETIVOS
Obtención de una colección de aislamientos de Venturia
inaequalis de diferentes montes con diferente
historial de uso a IBEs (Difeconzole).
Determinación de los niveles de resistencia en planta a
Difeconzole y Trifloxistrobin en poblaciones de
Venturia inaequalis.
Determinación de los niveles de resistencia “in vitro” a
Difeconzole en poblaciones de Venturia inaequalis.
.
17
Determinacion de
la resistencia a trifloxystrobin
Puntos de muestreo
„ Se realizo un muestreo de predios con diferentes historiales de
uso de estrobilurina en la temporada 2010, ubicados en las
zonas de Melilla, Juanicó y Sayago.
„ El método de evaluación de resistencia a trifloxystrobin se
realizo siguiendo el protocolo del test de germinación de
esporas de los Dres. Gerd Strammler y Kristin Klappach,
recomendado por el FRAC (Fungicide Resistanse Action
Committee).
„ El procedimiento se llevo a cabo en el laboratorio de
fitopatología en la Facultad de Agronomía.
METODOLOGÍA
Muestreo de hojas con síntomas
Concentración de
conidios de 5x105
esporas por mL
„ Solo alguna hoja
presenta síntomas
en la rama.
„ En algunos
montes solo a
caída de hoja se
pudo muestrear
Contar 100 esporas
24 horas a 20ºC
TESTIGO 2ppm 20ppm
Cálculo del porcentaje de
resistencia
Nº de esporas germinación con fungicida
x 100
Nº de esporas germinación sin fungicida
18
Resistencia práctica
Resultados 2010
Predio
% de esporas resistentes
1
94,97
4
67,51
2
60,49
3
54,14
10
36,18
5
13,75
6
12,66
8
10,13
9
8,55
7
3
„ Comisión técnica de producción integrada de Brasil
informa de resistencia a estrobilurinas.
Puntos de muestreo
METODOLOGÍA
24 hs a 20 º C
•
•
Los aislamientos fueron conservados en papel de filtro a una temp. de -20º C.
Se obtuvieron 33 aislamientos de cada monte.
19
aislamientos
Determinación de la resistencia a
difenoconazole
aislamientos
„ Se utilizaron 33 aislamientos de cada monte, los
cuales fueron obtenidos de los aislamientos
conservados.
Cada aislamiento fue sembrado en PDA y fueron
colocados en estufa( aprox. 20días) a 20ºC.
Las concentraciones utilizadas fueron:0, 0.05, 0.1, 5
y 10 ppm
Para cada concentración se hicieron 4 repeticiones
por aislamiento.
Metodología
Experimento
„ 3 montes X 33 aislamientos = 99
„ 99 aislamientos X 5 concentraciones= 495
24hs antes se preparo el
medio (PDA) con diferente
concentración de fungicidas
„ Todo repetido 4 veces
„ 495 x 4 = 1980 placas
30 días a
20 ºC
20
Facultad
Moizo
Cirefice
Resistencia
Resultados
DISTRIBUCIÓN DE LAS POBLACIONES DE DIFERENTES MONTES
40
35
Frecuencia en %
30
M.F
25
M.M
M.C
20
15
10
5
0
SF
0,05
0,1
5
10
6,86E-070,00086
0,000860,0105
0,01050,0189
0,01890,034
0,0340,0612
0,06120,1102
0,11020,1984
0,19840,357
0,3570,6427
0,64271,1568
1,15682,0823
2,08233,7481
3,74816,7466
6,746612,144
DL50 en ppm
Preguntas?
21