Apéndice C

MICROBIOLOGIA APLICADA
Manual de Laboratorio
APENDICE “C”
PREPARACION DE SOLUCIONES Y
REACTIVOS
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1. AGUA DE DILUCION CON SOLUCION BUFFER.
Solución I
− Disolver 34 g de fosfato monobásico de potasio (KH2 PO4) en 500 mL de agua
destilada.
− Ajustar el pH a 7.2 con NaOH 1N.
− Aforar a un litro con agua destilada.
Solución II
− Disolver 50 g de sulfato de magnesio (MgSO4.7H2O) en 1000 mL de agua
destilada.
Preparación:
− En un matraz volumétrico añadir 1.25 mL de la solución I y 5 mL de la II.
− Aforar a un litro con agua destilada.
2. VOGES PROSKAUER.
A. Solución de alfa naftol
α-naftol.............................................. 5.0 g
Alcohol etílico (95%)................... cbp 100 mL
Preparación:
− Disolver el alfa naftol en el alcohol.
B. KOH
Hidróxido de potasio químicamente puro.......................... 40 g
Creatina............................................................................. 0.3 g
Agua destilada........................................................... cbp 100 mL
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Preparación:
− Agregar el hidróxido de potasio a 75 mL de agua destilada, agitando y
enfriando constantemente.
− Cuando la solución está más ó menos a temperatura ambiente (25 °C) agregar
la creatina y suficiente agua destilada para obtener un volumen final de 100
mL.
3. REACTIVO DE ROJO DE METILO.
Rojo de metilo............................. 0.1 g
Alcohol etílico (95%).................. 250 mL
Agua destilada........................... 250 mL
Preparación:
− Disolver el colorante en el alcohol.
− Agregar el agua destilada.
− Filtrar la preparación.
4. REACTIVO DE KOVAC.
Para-dimetil-amino-Benzaldehído............................. 1 g
Alcohol amílico ó butílico......................................... 80 mL
Acido clorhídrico químicamente puro...................... 20 mL
Preparación:
−
−
−
−
Disolver el para-dimetil-amino-benzaldehído en alcohol butílico ó amílico.
Añadir el ácido clorhídrico.
Conservar en un frasco ámbar con tapón de vidrio, en sitio oscuro.
También se sugiere que esta solución se refrigere.
NOTA:
El reactivo debe tener una coloración amarillo claro ó café claro.
5. MEZCLA CROMICA.
Dicromato de potasio..................... 6.5 g
Agua destilada................................ 10 mL
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Acido sulfúrico............................... 100 mL
Preparación:
– Disolver el dicromato en agua.
− Calentar la solución ligeramente y dejar enfriar.
− Agregar el ácido poco a poco, mezclando con cuidado.
6. SOLUCION SALINA DE PEPTONA.
Peptona........................................... 1 g
Cloruro de Sodio.......................... 8.5 g
Agua destilada.................... cbp 1000 mL
Preparación:
–
–
–
–
–
Disolver los componentes hirviéndolos en aproximadamente 950 mL de agua.
Ajustar el pH con solución de Hidróxido de Sodio 1 mol/L o Acido Clorhídrico 1
mol/L de modo que después de la esterilización sea de 7.0 ± 0.1.
Aforar a 1000 mL con agua destilada.
Distribuir en volúmenes convenientes.
Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 15 libras de presión (121 °C).
7. SOLUCION SALINA. (Isotónica)
Cloruro de Sodio....................................... 8.5 g
Agua destilada........................................ 1000 mL
Preparación:
–
Disolver el reactivo en el agua destilada.
8. PIROGALOL ALCALINO.
Anaerobiosis.
Usado
para
Pirogalol......................................................... 3 g
Tierra de infusorios...................................... 18 g
Carbonato de Potasio.................................... 3 g
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conseguir
condiciones
de
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Preparación:
–
–
–
Mezclar el pirogalol y la tierra de infusorios y adicionar el carbonato de potasio
en un mortero.
Mezclar al momento de usarse, después de 5 horas pierde actividad.
Para su uso se pone una pequeña porción en un saquito de papel filtro.
9. SULFATO DE ZINC, GRAVEDAD ESPECIFICA DE 1.3.
Sulfato de zinc................................ 800 g
Agua Destilada............................. 1000 mL
Preparación:
− Disolver 800 g de Sulfato de Zinc en 1000 mL de agua destilada y agitar en la
parrilla eléctrica hasta homogeneizar.
− Medir la densidad con un hidrómetro.
− Para alcanzar la densidad deseada, agregar reactivo ó agua según el caso.
10. REACTIVO PARA OXIDASA.
Clorhidrato de tetrametil-p-fenilendiamina................... 0.1 g
Agua destilada................................................... cbp 1000 mL
Preparación:
− Disolver el reactivo en el agua destilada.
NOTA:
Este reactivo no es estable y por consiguiente debe prepararse para utilizarlo
en pequeñas cantidades cada vez que se necesite.
11. REACTIVO PARA OXIDASA. (Alternativa).
N, N-Clorhidrato de dimetil-p-fenilendiamina................... 1.0 g
Agua destilada.......................................................... cbp 100 mL
pH = 5.5
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Preparación:
− Disolver el reactivo en el agua destilada.
NOTA:
Este reactivo deber ser preparado al momento de usarse.
12. REACTIVO PARA LA PRUEBA DE CITOCROMO-OXIDASA.
Solución al 1% de Oxalato de p-aminodimetilanilina.
13. ONPG. Prueba de β -Galactosidasa.
O-nitrofenil β--D-galactopiranósido........................... 1.0 g (0.0003M)
Agua destilada...........................................................1000 mL
Preparación:
− Disolver el reactivo en el agua destilada.
14. REACTIVO PARA LA PRUEBA DE LA CATALASA.
Solución acuosa de Peróxido de Hidrógeno de 10 volúmenes %.
15. ACIDO TRICLOROACETICO. Reactivo para la prueba de la hidrólisis de
gelatina.
Acido tricloroacético químicamente puro......... 5 g
Agua destilada..........................................
100 mL
Preparación:
− Disolver el ácido, agitando constantemente.
NOTA:
También existen preparaciones comerciales de ácido tricloroacético al 5%.
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16. SOLUCION DE (á) NAFTILAMINA. Reactivo para la reducción del nitrato.
á- naftilamina....................................................
5 g
Acido sulfúrico concentrado y Q. P...................
8 mL
Agua destilada............................................... 992 mL
Preparación:
− Agregar el ácido al agua destilada y mezclar perfectamente; luego, introducir el
á-naftilamina y agitar hasta que el ingrediente se disuelva.
17. ACIDO SULFANILICO. Reactivo para la prueba del nitrito.
Acido sulfanílico químicamente puro.................8 g
Acido sulfúrico químicamente puro.................48 mL
Agua destilada...............................................cbp 1000 mL
Preparación:
− Agregar el ácido sulfúrico en 500 mL de agua destilada agitando y enfriando
constantemente.
− A continuación, añadir el ácido sulfanílico, agitando y enfriando también de un
modo constante.
− Por último, agregar agua destilada hasta obtener un volumen final de 1000 mL.
18. PRUEBA PARA LA REDUCCION DE NITRATO. (general).
Disolución A
Acido sulfanílico................................. 8 g
Acido acético 5N.......................... 1000 mL
Disolución B
Alfa-naftilamina............................
5 g
Acido acético 5N....................
1000 mL
Fíltrese a través de algodón absorbente lavado.
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