O-Estreptolisina

O-Estreptolisina
liofilizada
Método hemolítico para la determinación del título de
antiestreptolisina O
SIG­NI­FI­CA­CION CLI­NI­CA
El anticuerpo antiestreptolisina O se encuentra presente en
casi todas las personas en títulos bajos, debido a que las
infecciones estreptocócicas son comunes. Sin embargo un
título alto o creciente de antiestreptolisina O, indica una infección reciente producida por estreptococo β-hemolítico grupo
A, como amigdalitis, escarlatina, sepsis puerperal, erisipela.
Tiene además especial interés en los procesos que aparecen
como segunda enfermedad: fiebre reumática y glomerulonefritis aguda. Por lo tanto, a pesar de no ser una prueba
específica para fiebre reumática, apoya su diagnóstico
cuando lo sugieren la historia y los signos clínicos.
FUN­DA­MEN­TOS DEL ME­TO­DO
La estreptolisina O, producida por el estreptococo β-hemolítico
de grupo A, tiene la propiedad de producir hemólisis cuando
se pone en contacto con glóbulos rojos. Al colocar distintas
diluciones de un suero que contenga antiestreptolisina O en
presencia de dosis constantes de estreptolisina O, se produce
una reacción antígeno-anticuerpo que neutraliza la capacidad
hemolítica de la misma. Este fenómeno se evidencia por una
inhibición de la hemólisis al agregar suspensión de glóbulos
rojos del 3 al 5%. El título de antiestreptolisina será la recíproca de la máxima dilución del suero del paciente capaz de
neutralizar totalmente la estreptolisina.
RE­AC­TI­VOS PRO­VIS­TOS
Estreptolisina-O: estreptolisina liofilizada titulada.
Buffer concentrado: solución de buffer fosfatos conteniendo
fosfatos 0,36 mol/l y cloruro de sodio 1,2 mol/l, para pH final 6,5.
RE­AC­TI­VOS NO PRO­VIS­TOS
- Agua destilada.
- Eritrocitos frescos humanos de grupo O, del mismo paciente
o de conejo.
- Solución fisiológica.
INSTRUCCIONES PARA SU USO
A baja temperatura el Buffer concentrado puede cristalizar.
En tal caso, colocar en baño de agua a 37oC unos minutos
mezclando por inversión hasta disolución completa.
Buffer; preparación: diluir el contenido con 150 ml de agua
destilada.
Estreptolisina-O: disolver el vial con el volumen de Buffer
indicado en el rótulo, mezclando por inversión hasta disolución completa.
Suspensión de eritrocitos: lavar los mismos 3 veces con
solución fisiológica. Luego del último lavado centrifugar a
2.000 r.p.m. durante 15 minutos. En el sobrenadante no
debe aparecer hemólisis; caso contrario desechar. Con los
eritrocitos lavados, una vez descartado el sobrenadante,
preparar una suspensión del 3 al 5% con Buffer pH 6,5.
PRECAUCIONES
Los reactivos son para uso diagnóstico "in vitro".
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales
de trabajo en el laboratorio de química clínica.
Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
acuerdo a la normativa local vigente.
ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE
ALMACENAMIENTO
Reactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)
hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Estreptolisina-O: una vez preparada es estable 2 horas a
temperatura ambiente, 5 días en refrigerador (2-10oC) o 2
meses congelada (-20oC) y fraccionada. Ver LIMITACIONES
DEL PROCEDIMIENTO.
Buffer: estable 1 año en refrigerador (2-10oC).
Suspensión de eritrocitos: los eritrocitos pueden usarse
hasta 48 horas después de preparada la suspensión, si
previamente se lavan una vez con Buffer y no se observa
hemólisis.
MUESTRA
Suero
a) Recolección: debe obtenerse suero libre de hemólisis.
b) Aditivos: no se requieren.
c) Sustancias interferentes conocidas: muestras con hemólisis visible pueden conducir a una interpretación errónea
de los resultados, por lo que deben descartarse.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: la
antiestreptolisina en suero es estable congelada por lo que
puede mantenerse en estas condiciones hasta efectuar el
ensayo.
MATERIAL REQUERIDO (no provisto)
- Tubos de hemólisis.
- Material volumétrico apropiado.
- Centrífuga.
- Baño de agua a 37oC.
CONDICIONES DE REACCION
- Temperatura de reacción: 37oC
- Tiempo de incubación: 60 minutos
- Volumen final de reacción: 2 ml
Si se desea realizar microtécnica en policubetas, solicitar las
instrucciones al Servicio Bibliográfico de Wiener lab.
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PROCEDIMIENTO
Preparar diluciones de la siguiente forma: 1:10 (0,2 ml de suero + 1,8 ml de Buffer), 1:100 (0,5 ml de dilución 1:10 + 4,5 ml
de Buffer), 1:500 (1 ml de dilución 1:100 + 4 ml Buffer). Luego proceder de la siguiente forma:
Dilución del suero
Tubo Nº
1:10
1:100
1:500
CONTROLES
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
Suero diluido (ml)
0,2
1
0,8
0,6
0,4
0,3
1
0,8
0,6
0,4
0,2
-
-
Buffer (ml)
0,8
-
0,2
0,4
0,6
0,7
-
0,2
0,4
0,6
0,8
1,5
1
Estreptolisina-O (ml)
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
-
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
Mezclar y mantener a baño María a 37°C 15 minutos.
Eritrocitos 3-5% (ml)
0,5
0,5
0,5
0,5
Mezclar agitando ligeramente y mantener en baño María a 37oC durante 15 minutos, agitar nuevamente y continuar en
baño María durante 30 minutos más. Centrifugar 3 minutos a 1.500 r.p.m. y leer.
Unidades Todd/ml
50
100
125
166
250
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
El título de la muestra se expresa mediante la inversa de
la mayor dilución en la cual se observa ausencia total de
hemólisis.
El tubo 12 (control eritrocitario) no deberá presentar hemólisis
mientras que el tubo 13 (control Estreptolisina-O) deberá
mostrar hemólisis completa.
METODO DE CONTROL DE CALIDAD
Para controlar el procedimiento y los reactivos es conveniente procesar simultáneamente un suero con cantidad
conocida de antiestreptolisina O.
VALORES DE REFERENCIA
Normalmente pueden existir en suero hasta 200 unidades de
antiestreptolisina O. Títulos superiores son indicativos de un
proceso infeccioso por estreptococo β-hemolítico de grupo A.
333
500
625
833
1250 2500
(-)
(+)
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
En caso de conservar la Estreptolisina-O reconstituida
congelada, se recomienda fraccionarla de modo de evitar
los congelamientos y descongelamientos sucesivos que
ocasionan su deterioro.
PRE­SEN­TA­CION
- 6 x 3 ml (Cód. 1073202).
BI­BLIO­GRA­FIA
- Bennett, C.V. - "Clinical Serology" - Charles Thomas Pub.,
USA (1964).
- Sonnenwirth, A.C.; Jarret, L. - Gradwohl Métodos y Diagnósticos del Laboratorio Clínico - Edit. Panamericana - 8ª
Ed. (1983).
- Rantz, L.A. y Randall, M.F. - Proc. Soc. Exp. Bio. 59:22 (1945).
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EXPLICACION DE LOS SIMBOLOS
Estreptolisina O
Estreptolisina O
Buffer conc
Buffer concentrado
Los siguientes símbolos se utilizan en todos los kits de
reactivos para diagnóstico de Wiener lab.
C
Este producto cumple con los requerimientos previstos
por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios
para el diagnóstico "in vitro"
P Representante autorizado en la Comunidad Europea
V
Uso diagnóstico "in vitro"
X
Contenido suficiente para <n> ensayos
H
Fecha de caducidad
l
Límite de temperatura (conservar a)

No congelar
F
Riesgo biológico
Volumen después de la reconstitución
Cont.
Contenido
g
Número de lote
M
Elaborado por:
Xn
Nocivo
Corrosivo / Caústico
Xi
i
Calibr.
b
b
c
h
Irritante
Consultar instrucciones de uso
Calibrador
Control
Control Positivo
Control Negativo
Número de catálogo
M Wiener Laboratorios S.A.I.C.
Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Téc.: Viviana E. Cétola
Bioquímica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp.. Nº: 737/89-176/99
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Wiener lab.
2000 Rosario - Argentina
UR141117