TP 9 (06-09
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T.P. N° 9: Tejido sanguíneo Objetivos: 1) Conocimiento y aplicación de técnicas apropiadas para el estudio de este tejido. 2) Observación, reconocimiento y esquematización de los elementos figurados de la sangre de anfibio y mamífero. 3) Observación y análisis de microfotografías de MET. Vertebrados SANGRE Transporte de nutrientes y oxígeno. Transporte de desechos y CO2 desde las células. Tejido sanguíneo Distribución de hormonas y otras sustancias reguladoras hacia y desde las células y tejidos. Participación en el proceso de coagulación. Transporte de agentes humorales y células del sistema inmune. NO CONSIDERAMOS AL TEJIDO SANGUINEO COMO TEJIDO CONECTIVO 1) La matriz extracelular no es sintetizada por las células sanguíneas. 2) La proporción de los tipos celulares es constante en condiciones fisiológicas normales. 3) Las células sanguíneas se originan en un lugar distinto del cuerpo. TODOS los elementos sanguíneos se originan en la médula ósea (origen mesodérmico). Tejido fluido, constituido por: Proteínas Matriz extracelular (PLASMA, 60% del volumen) 90 % agua 9 % sustancias orgánicas Lípidos 1% sustancias inorgánicas H. De C. Na, Ca, K, Cl, P Células (elementos figurados, 40% del volumen) 99 % glóbulos rojos 1% glóbulos blancos Lipoproteínas Albúminas Globulinas Protrombina Fibrinógeno Forma de transporte del oxígeno: VERTEBRADOS Pigmentos respiratorios en los glóbulos rojos: HEMOGLOBINA. Elementos sanguíneos inmaduros en sangre. Vertebrados no amniotas (Peces y anfibios) Glóbulos rojos de gran tamaño (hasta el triple que en mamíferos) Elementos figurados Anucleados sólo en mamíferos (menos en camelidos) Glóbulos rojos o eritrocitos o hematíes Glóbulos blancos o leucocitos: todas con granulaciones inespecíficas en su citoplasma (azurófilas lisosomas). Linfocitos Agranulocitos Monocitos Eosinófilos Granulocitos Basófilos Neutrófilos Heterófilos sólo en humanos Trombocitos Plaquetas o tromboplástidos sólo en mamíferos Originadas a partir del megacariocito (médula ósea) GLÓBULOS BLANCOS (LEUCOCITOS) TODOS TIENEN GRANULACIONES INESPECIFICAS EN SU CITOPLASMA (azurófilas lisosomas) Linfocitos (sólo granulaciones inespecíficas). Monocitos (sólo granulaciones inespecíficas: hidrolasas ácidas). Gr. Eosinófilos (gr inespecíficas + (mieloperoxidasa y enzimas lisosómicas). gr específicas ácidófilas Gr. Basófilos (gr inespecíficas + gr específicas basófilas (heparina, histamina, enzimas lisosómicas y peroxidasa). Gr. Heterófilos (gr inespecíficas + gr específicas basófilas y acídófilas (fosfatasa alcalina, lactoferrina, colagenasa, lisozima)). En humanos las granulaciones especificas (basófilas y acidófilas) de los heterófilos no se distinguen al M.O. y por eso se los denomina GR. NEUTROFILOS. MÉTODOS DE ESTUDIO INMEDIATOS In vivo: Observación de circulación en vasos pequeños (ej: oreja, mesenterio). In vitro: Gota de sangre sobre un portaobjeto para observar los movimientos ameboidales de los leucocitos. Con coloración supravital: 1) Rojo neutro (granulaciones) Colorantes básicos 2) Verde jano (mitocondrias) 3) Azul brillante de cresil (reticulocitos) se colorean los ribosomas Glóbulos rojos antes de la maduración final. Sangre humana: método in vitro. Microscopio de contraste por interferencia diferencial o microscopio Nomarski. A= 400x Sangre humana coloreada con azul brillante de cresil (ABC) A=400x Los reticulocitos son células anucleadas predecesoras de los eritrocitos. Tiene una vida media de 2 días en médula ósea, de allí salen a la circulación donde requieren de 1 día para convertirse en eritrocito maduro. Durante este período sintetizan el 20% de la hemoglobina contenida en la célula. Diámetro:10-15 µm El punteado que se observa con la técnica de azul brillante de cresil (ABC) se debe a que los restos de ARN (proveniente del núcleo del eritroblasto) precipitan con ciertos colorantes vitales como el ABC o el azul de metileno. La cantidad de precipitando va disminuyendo al ir madurando el reticulocito. Sangre humana coloreada con rojo neutro-verde jano. Método in vitro. Microscopio de campo claro. A=400x Sangre humana: método in vitro. Microscopio de contraste por interferencia diferencial o microscopio Nomarski. MEDIATOS (preparado definitivo) Frotis de sangre PARTES DE UNA EXTENSIÓN CABEZA. Es la zona inicial de la extensión. Es la región más gruesa. En ella se encuentra una mayor proporción de linfocitos, y los hematíes forman aglomerados (pilas de monedas). CUERPO. Es la zona media del frotis. Su espesor es el apropiado. En ella existe una adecuada proporción entre los distintos tipos de leucocitos. Contiene la "zona ideal" de observación, que corresponde a la porción que limita con la cola. COLA. Es la zona final de la extensión. Suele tener un aspecto redondeado. Es la región más fina. En ella se encuentra una mayor proporción de leucocitos grandes (granulocitos y monocitos), y además los hematíes están deformados y presentan una tonalidad uniforme. En su porción terminal suelen ser más abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes. BORDES. Contienen una mayor proporción de leucocitos grandes. Si están deshilachados, en ellos las células son difíciles de reconocer por estar deformadas o destruidas 2.CARACTERÍSTICAS DE UNA BUENA EXTENSIÓN. La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta. La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a él. El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado. Ese fino deshilachamiento recibe el nombre de "barbas". Toda la extensión ha de ser fina y homogénea. Los bordes laterales de la extensión deben estar separados de los bordes del porta por 1 mm aproximadamente. Una extensión normal ha de tener una longitud de las ¾ partes del portaobjetos. DEFECTOS DE UNA EXTENSIÓN. Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud y excesivo grosor. Esto se debe a un inadecuado tamaño de la gota de sangre o/y a un error en la velocidad o/y a un fallo en el ángulo de extensión de la misma. Presencia de escalones o estrías. Esto está ocasionado por una falta uniformidad en el deslizamiento de la gota. de Existencia de abundantes zonas redondeadas que carecen de sangre. Esto se produce por la presencia de restos de grasa o de suciedad en el porta. Extremo final excesivamente dentado. Fijación: física (secado a T. amb.) y luego química (metanol). Coloración: May Grünwald-Giemsa PANÓPTICA: Dos colorantes neutros combinados sucesivamente. May Grünwald Eosianato de azul de metileno Granulaciones citoplasmáticas acidófilas: rosa, anaranjado. Granulaciones citoplasmáticas basófilas: violeta Giemsa Eosianato de tiazina Núcleos: violeta, algo rosados. Varía con el grado de empaquetamiento de la cromatina. Granulaciones azurófilas: azules. Abundancia de células sanguíneas en un frotis de sangre humana + Eritrocitos 99% del total Neutrofilos 60% Linfocitos 30% Monocitos 5% Eosinófilos 3% Basófilos 0,5% 1 % del total May Grünwald-Giemsa. A=1000x ERITROCITOS Transporte de oxígeno asociado a la HEMOGLOBINA. Forma de disco bicóncavo Diámetro: 7.5 µm Anucleados en mamíferos. Escasas organelas. Intervienen en infecciones parasitarias, liberando sus gránulos. Asociados con las alergias. Diámetro: 12-15 µm GRANULOCITO EOSINÓFILO Núcleo bilobulado unido por fina hebra de cromatina. Los grumos de cromatina son gruesos. Gránulos citoplasmáticos grandes, parejos, eosinófilos, refringentes. No tapan al núcleo. Granulaciones específicas. azurófilas + acidófilas May Grünwald-Giemsa A=1000x “Fagocito profesional”. Alta movilidad. Característicos de inflamaciones agudas. GRANULOCITO NEUTRÓFILO Núcleo con 3-5 lóbulos unidos por finos filamentos de cromatina. Cromatina forma grumos gruesos fuertemente coloreados. Granulaciones finas. No tapan al núcleo. Gr. Azurófilas (color púrpura) + gr. Acidófilas + gr. Basófilas. Diámetro: 12-15 µm Corpúsculo de Barr. GRANULOCITO BASÓFILO Relacionados con procesos inflamatorios. Liberan heparina e histamina. Núcleo voluminoso, irregular y central enmascarado por los gránulos citoplasmáticos. Gránulos basófilos de tamaño desigual. Rojo violáceos oscuros. Metacromáticos. Diámetro: 12-15 µm. May Grünwald-Giemsa A=1000x 10 a 12 h en circulación antes de convertirse en MACRÓFAGOS (en tejido conectivo) aumentando su capacidad fagocítica. MONOCITO “Fagocitos profesionales”. Núcleo excéntrico con forma reniforme. Cromatina dispuesta en gránulo fino. Granulaciones inespecíficas en el citoplasma. Diámetro: 16-20 µm (células mas grandes del frotis). LINFOCITO Linfocitos T y B, involucrados en la respuesta celular y humoral respectivamente. Diferenciables por MET o inmunohistoquímica. Núcleo redondeado con cromatina muy condensada. Citoplasma escaso y muy basófilo. Diámetro: 8-10 µm May Grünwald-Giemsa A=1000x PLAQUETAS O TROMBOPLÁSTIDOS Intervienen en el proceso de coagulación. Exclusivas de los mamíferos. Son fragmentos celulares formados a partir de un precursor ubicado en médula ósea (Megacariocito). Región central granular= cromómero Región periférica= hialómero Diámetro: 3 µm May Grünwald-Giemsa A=400x Frotis de Sangre de Sapo Rhinella arenarum Diferencias con la sangre de mamíferos: Eritrocitos nucleados, de gran tamaño con forma elíptica. Elementos inmaduros en sangre. Granulocitos más viejos tienen el núcleo más lobulado y gránulos más gruesos. Trombocitos en lugar de plaquetas. Hematíes: Célula con forma elipsoidal. Núcleo central esférico o elíptico, con cromatina condensada en grumos. Maduros (a): cromatina gruesa, citoplasma acidófilo. Tamaño: 22 x 15 µm Inmaduros (b): cromatina delicada, citoplasma levemente basófilo. Trombocitos: Células con forma redondeada o fusiforme. Tamaño aprox.: 10 µm Núcleo elíptico con posición central. Célula joven: citoplasma ligeramente basófilo (celeste claro). Célula vieja: citoplasma acidófilo y reducido. Cromatina “costrosa”. Granulocitos Heterófilos: Célula con forma esférica. Tamaño aprox.: 10 µm Núcleo excéntrico redondeado, reniforme o lobulado. Cromatina gruesa. Citoplasma con finas granulaciones basófilas y acidófilas de distintos tamaños. Se observan en distintos estadios de maduración. Función fagocítica. Granulocitos Eosinófilos: Célula con forma esférica. Tamaño aprox.: 10 µm Núcleo excéntrico redondeado o escotado, menos lobulado. que el heterófilo. Cromatina con grumos gruesos. Citoplasma cubierto por grandes granulaciones acidófilas redondeadas. Función: incierta, aunque está documentado su reacción ante infección por trematodes. Granulocitos Basófilos Difíciles de encontrar. Tamaño pequeño. Núcleo en forma de “S” con una cromatina laxa (claro). Difícil de observar ya que está cubierto por granulaciones basófilas (símil-heparina). Citoplasma ligeramente basófilo. Función: actividad pro-inflamatoria. Linfocitos: Célula con forma esférica. Tamaño aprox.: 7 µm Núcleo grande redondeado con cromatina condensada. Escaso citoplasma, muy basófilo. Función: parecen actuar en el sistema inmune. Monocitos: Célula con forma esférica. Tamaño aprox.: 15 µm (aunque su tamaño varía mucho) Relación citoplasma/núcleo alta en relación a los linfocitos. Núcleo excéntrico, oval o reniforme. Cromatina laxa. Citoplasma grisáceo. Función fagocítica y presentadores de antígenos. Invertebrados HEMOLINFA INVERTEBRADOS Pigmentos respiratorios disueltos en el plasma. Ej: hemocianina en crustáceos. Ej: clorocruonina en anélidos. HEMOLINFA DE INSECTO: Tenebrio molitor Células sanguíneas HEMOCITOS Prohemocito o linfoidocito: Forma redondeada, semejante a un linfocito pequeño. Citoplasma muy basófilo. Núcleo con cromatina laxa. Función: progenitora. Plasmatocito Forma ahusada. Núcleo central con cromatina laxa. Citoplasma ligeramente basófilo. Puede tener algunas (?) granulaciones acidófilas. Función: fagocítica. Oenocitoide Célula con forma ovalada. Citoplasma basófilo, ligeramente grisáceo, homogéneo. Núcleo excéntrico con cromatina densa. Función: interviene en el proceso de muda. Célula eruptiva o De Hardy Célula de tamaño grande. Citoplasma con granulaciones grandes basófilas. Núcleo grande con cromatina ligeramente grumosa. Función: relacionada con el proceso de coagulación. Se inicia la coagulación por fragmentación del citoplasma. Hemocito granular Célula ovalada. Citoplasma hialino, celeste claro. Granulaciones esféricas acidófilas situada próxima a los polos del núcleo. Núcleo pequeño central con la cromatina condensada en la periferia. Citocito o coagulocito Célula redondeada. Citoplasma hialino, algo basófilo. Granulaciones acidófilas esféricas. Núcleo central con la cromatina condensada como rueda de carro. Esferoidocito o célula globular Célula redondeada pequeña. Citoplasma con muchas granulaciones acidófilas grandes que pueden enmascarar al núcleo. Núcleo central y pequeño. Todas las células son de origen mesodérmico a excepción del oenocitoide que es de origen ectodérmico. En el T.P. 1. Obtención de sangre humana. 2. Observación de una gota de sangre entre portaobjeto y cubreobjeto. 3. Técnicas de coloración: a) azul brillante de cresil. b) rojo neutro-verde jano. c) May Grünwald Giemsa. 4. Observación y completar esquemas en Guía de Dibujos de frotis humano. 5. Observación y completar esquemas en Guía de Dibujos de frotis de sapo. 6. Observación y completar esquema de hemolinfa de Tenebrio.
