Glucosa Nitrato Medio - Laboratorios Britania

B0211305
B0211306
Glucosa Nitrato Medio
USO
Medio desarrollado por Casellas para estudiar simultáneamente
la movilidad, reacciones de oxidación y fermentación de glucosa y
la reducción de nitratos a nitritos o gas nitrógeno libre por bacilos
Gram negativos de fácil desarrollo. Permite diferenciar especies
bacterianas.
FUNDAMENTO
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de carne aportan
nutrientes para el desarrollo bacteriano. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, la glucosa es la fuente de energía y el
azul de bromotimol es el indicador de pH. El nitrato de potasio es
el sustrato de la enzima nitrato reductasa. El bajo contenido de
agar, otorga la propiedad de ser un medio semisólido que permite
determinar la movilidad bacteriana y también la distribución de los
productos ácidos en la superficie, profundidad o en todo el medio
de cultivo.
El metabolismo de la glucosa puede ser fermentativo u oxidativo.
En ambos casos se acidifica el medio y se produce el viraje del
indicador azul de bromotimol del color verde al amarillo.
La movilidad se evidencia por el enturbiamiento del medio o por
crecimiento que difunde mas allá de la línea de siembra del microorganismo en estudio.
La reducción de nitratos a nitritos o gas nitrógeno por medio de la
enzima nitrato reductasa, es un proceso de oxidación por el cual
el nitrato proporciona oxígeno para ser usado como aceptor de
electrones. El nitrito presente en el medio puede detectarse con el
agregado de los reactivos “Griess A y Griess B” por la formación
de un compuesto diazoico coloreado.
Si se observan burbujas en el medio, éstas corresponden a nitrógeno gaseoso, ya que el nitrito intermediario inhibe las decarboxilaciones.
CONTENIDO Y COMPOSICIÓN
Código B0211305: envase x 100 g.
Código B0211306: envase x 500 g.
FÓRMULA (en gramos por litro)
INSTRUCCIONES
Suspender 33 g de polvo en 1 litro de agua purificada. Dejar reposar 5 minutos.
Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta disolver
completamente.
Distribuir en tubos de 10 mm de diámetro, 10 ml por tubo. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
Enfriar y solidificar en posición vertical.
Si no se usa de inmediato, hervir el medio antes de usarlo, a fin de
eliminar el oxígeno.
CARACTERÍSTICAS DEL PRODUCTO
Medio de cultivo deshidratado: color amarillo verdoso, homogéneo,
libre deslizamiento.
Medio de cultivo preparado: color verde.
ALMACENAMIENTO
Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC.
Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC.
PROCEDIMIENTO
Siembra
Por punción en profundidad con ansa recta, a partir de un cultivo
puro de 24 horas.
Incubación
En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 48 horas.
Algunos microorganismos requieren hasta 4 días, y otros hasta 14
días de incubación.
INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
Observar la movilidad y el color del medio de cultivo. Luego realizar
el ensayo para determinar la reducción de nitratos.
Movilidad
Resultado positivo: presencia de turbidez que se extiende mas
allá de la línea de siembra.
Resultado negativo: solo se observa turbidez en la línea de siembra.
PEPTONA DE CARNE......................................................................................................10.0 .
CLORURO DE SODIO.......................................................................................................... 5.0.
EXTRACTO DE CARNE...................................................................................................... 3.0.
GLUCOSA....................................................................................................................................10.0.
AZUL DE BROMOTIMOL...............................................................................................0.01.
NITRATO DE POTASIO......................................................................................................... 1.0.
AGAR................................................................................................................................................... 4.0.
pH FINAL: 7.4 ± 0.2
Color del medio: metabolismo de la glucosa:
Microorganismos oxidativos: color amarillo en la superficie del
medio de cultivo (parte superior del tubo).
Microorganismos fermentadores: color amarillo en todo el medio
de cultivo.
Microorganismos que no fermentan y no oxidan la glucosa: el
medio permanece verde o adquiere un color azulado.
HOJA 1 DE 2
Glucosa Nitrato Medio
Reducción de nitratos:
Agregar 5 gotas de Griess Reactivo solución A (REF B1550161)
y 5 gotas de Griess Reactivo solución B (REF B1550261). Agitar
suavemente.
Observar el color que se forma e interpretar como resultado positivo
o negativo.
Resultado positivo: desarrollo de color rosado-rojo luego del
agregado de los reactivos Griess A y B. El microorganismo reduce
los nitratos a nitritos.
Resultado negativo: ausencia de color rosado-rojo luego del agregado de los reactivos Griess A y B. En este caso se debe agregar
unas granallas de Zinc y observar el color desarrollado:
- Ausencia de color rosado rojo luego del agregado de Zinc. El microorganismo redujo los nitratos a gas nitrógeno. Prueba positiva.
- Desarrollo de color rosado-rojo luego del agregado de Zinc: El
microorganismo no reduce los nitratos. Prueba negativa.
CONTROL DE CALIDAD
MICROORGANISMO
O-F
COLOR DEL MEDIO
MOVILIDAD
REDUCCIÓN DE NITRATOS
Amarillo
+
+
+
+
-
+
+
+
-
-
Escherichia coli
ATCC 25922
O-F
O-F
O-F
Enterobacter cloacae
Amarillo
ATCC 13047
Klebsiella pneumoniae
Amarillo
ATCC 700603
Pseudomonas aeruginosa
Amarillo en superficie
ATCC 27853
O
Azul verdoso en el fondo
O
Azul verdoso en el fondo
Amarillo en superficie
ATCC 19606
O: Oxidación.
F: Fermentación.
Notas: frecuentemente, en la reducción de nitratos a nitritos, los
productos finales pueden ser nitritos (NO2), amoníaco (NH3),
nitrógeno molecular (N2), óxido nítrico (NO), oxido nitroso (N2O) o
hidroxilamina (R-NH-OH).
CONTROL DE ESTERILIDAD RESULTADO
Medio sin inocular
Sin cambios
LIMITACIONES
Ante un resultado negativo al agregar los reactivos de Griess A y
Griess B, se debe confirmar mediante el agregado de granallas de
Zinc.
MATERIALES NECESARIOS NO PROVISTOS
Equipos y material de laboratorio, microorganismos para control de
calidad, reactivos y medios de cultivo adicionales según requerimiento.
PRECAUCIONES
- Solamente para uso diagnóstico in vitro. Uso profesional exclusivo.
- No utilizar el producto si al recibirlo su envase está abierto o
dañado.
- No utilizar el producto si existen signos de contaminación o deterioro, así como tampoco si ha expirado su fecha de vencimiento.
- Utilizar guantes y ropa protectora cuando se manipula el producto.
- Considerar las muestras como potencialmente infecciosas y manipularlas apropiadamente siguiendo las normas de bioseguridad
establecidadas por el laboratorio.
- Las características del producto pueden alterarse si no se conserva apropiadamente.
- Descartar el producto que no ha sido utilizado y los desechos del
mismo según reglamentaciones vigentes.
REFERENCIAS
- Casellas.José María.Tesis Master en Bacteriología.
- MacFaddin. 2000. Biochemical tests for identification of medical
bacteria, 3rd ed., Lippincott Williams & Wilkins, Baltimore, Md.
INDICACIONES AL CONSUMIDOR
Utilizar el producto hasta su fecha de vencimiento.
Conservar el producto según las indicaciones del rótulo.
02/2010 - REV .00
Acinetobacter baumannii
SÍMBOLOS UTILIZADOS
DIAGNÓSTICO
IN VITRO
CÓDIGO Nº
ELABORADOR
LABORATORIOS BRITANIA S.A.
LOS PATOS 2175 (C1283ABI)
CABA - ARGENTINA
TEL/FAX 54 11 4306 0041
ESTÉRIL
Nº DE
DETERMINACIÓNES
LOTE Nº
FECHA DE
VENCIMIENTO
LÍMITE DE
TEMPERATURA
INSTRUCCIONES
DE USO
HOJA 2 DE 2