MANUAL DE PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN DE CAPSAICINA DE CHILE HABANERO SOLIHAGUA S.A DE C.V. MAYO DE 2014 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO ESTE DOCUMENTO ES DE CARÁCTER PÚBLICO, NO ES PATROCINADO NI PROMOVIDO POR PARTIDO POLÍTICO ALGUNO Y LOS RECURSOS CON QUE HA SIDO ELABORADO, PROVIENEN DE LOS IMPUESTOS QUE PAGAN TODOS LOS CONTRIBUYENTES. ESTÁ PROHIBIDO EL USO DE ESTE DOCUMENTO CON FINES POLÍTICOS, ELECTORALES, DE LUCRO Y OTROS DISTINTOS A LOS ESTABLECIDOS POR LA LEY FEDERAL DE TRANSPARENCIA Y ACCESO A LA INFORMACIÓN PÚBLICA GUBERNAMENTAL. QUIEN HAGA USO INDEBIDO DE ESTE DOCUMENTO, DEBERÁ SER DENUNCIADO DE ACUERDO CON LA LEY APLICABLE Y ANTE LA AUTORIDAD COMPETENTE. SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO DIRECTORIO DE LA FUNDACIÓN PRODUCE QUINTANA ROO A.C. C. José Luis Sánchez Chau Presidente de la Fundación Quintana Roo Produce A.C. Lic. Sorobabel Moreno Guerrero Gerente General de la Fundación Quintana Roo Produce A.C. SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO DIRECTORIO DE SOLUCIONES INTEGRALES DE INGENIERÍA HIDROAGRÍCOLA SOLIHAGUA S.A. DE C.V Ing. Claudio Lobato de la Cruz Director Corporativo M.C. Sergio Miguel Ramírez López Director Administrativo Ing. Alberto Gerónimo Iglecias Gerente Operativo SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Personal Técnico Responsable: Ing. Claudio Lobato de la Cruz Responsable del Proyecto Ing. Alberto Gerónimo Iglecias Coordinador del Proyecto Ing. Vladimir Lenin Reyes de la Cruz M.C. Alejandro Martínez Velasco M.C. Armando Magdaleno Torres Chocolatl M.I. Telésforo Martínez Castellanos Ing. Ararita Carmelita Payajo Saldaña Colaboradores de investigación Chetumal, Quintana Roo, mayo de 2014 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Tabla de contenido PROCESO DE EXTRACCIÓN DE CAPSAICINA DE CHILE HABANERO ................................ 1 I. 1. Introducción ........................................................................................................................................ 1 2. Justificación ......................................................................................................................................... 2 3. Objetivos ............................................................................................................................................. 3 4. Materiales y Reactivos ........................................................................................................................ 3 5. Equipos ................................................................................................................................................ 3 6. Diagrama de Proceso .......................................................................................................................... 4 7. Metodología de extracción ................................................................................................................. 4 8. Resultados ........................................................................................................................................... 7 9. Conclusiones........................................................................................................................................ 8 10. Referencia Bibliográfica................................................................................................................... 8 ELABORACIÓN DE UNA CREMA CON A PARTIR DEL EXTRACTO DE CAPSAICINA ..... 10 II. 1. Introducción ...................................................................................................................................... 10 2. Justificación ....................................................................................................................................... 11 3. Objetivos ........................................................................................................................................... 11 4. Materiales y Reactivos ...................................................................................................................... 11 5. Metodología de Elaboración ............................................................................................................. 12 6. Diagrama de Proceso ........................................................................................................................ 13 7. Resultados ......................................................................................................................................... 14 8. Conclusiones...................................................................................................................................... 14 9. Referencias Bibliográficas ................................................................................................................. 14 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO I. PROCESO DE EXTRACCIÓN DE CAPSAICINA DE CHILE HABANERO 1. Introducción Los chiles, como el habanero (Capsicum chinense Jacq.), son una fuente rica de valiosos fitoquímicos como la capsaicina. La capsaicina, un alcaloide o capsaicinoide, es el principal componente pungente o irritante de los chiles que son ampliamente utilizados como aditivos alimentarios y por poseer propiedades antimicrobianas (Peña-Álvarez, 2009). Estos compuestos se encuentran principalmente en la placenta de los chiles, la parte blanca interna, la cual se encuentra unida a las semillas. La investigación se ha enfocado a variedades mejoradas de tipos de chile (Kumar et al., 2003), en especial de tipo habanero (C. chinense Jacq.) por su mayor contenido de alcaloides. Los capsaicinoides también poseen propiedades analgésicas, antiinflamatorias, antioxidantes e incluso anticancerígenas al inhibir el crecimiento dependiente de andrógenos en células cancerígenas de seno, colon, adenocarcinoma gástrico y de próstata (Djamgoz e Isbilen, 2006; Mori et al., 2006). En 1912 se estableció la escala de picor en USP, basada en diluciones de extractos de diversos chiles (Ishikawa, 2003) y métodos analíticos como la espectrofotometría y cromatografía de gases. Además, con la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) los análisis del tipo y cantidad de estos alcaloides son más precisos (Collins et al., 1995) para evaluar capsaicinoides. En la zona de la península de Yucatán, México, el contenido de capsaicinoides en los morfotipos de chile nativos de las especies C. chinense y C. annuum varía de 1000 a más de 235 000 USP (Casanova et al., 2006). Tal variación estaría determinada por el genotipo, las condiciones climáticas y las prácticas de cultivo en cada localidad, asociadas a su vez con la selección, multiplicación e intercambio tradicional de semillas, así como con el uso culinario de cada tipo de chile, pues los consumidores identifican características organolépticas específicas. El empleo de solventes orgánicos en la extracción de productos naturales representa un proceso que debe ser cuidadosamente desarrollado por los impactos que tiene sobre el 1 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO ambiente y sobre la salud de operarios y consumidores. La Comisión Europea en la directiva 94/45/CE (Comisión Europea, 2007) establece que los solventes que pueden emplearse para la extracción de oleorresinas de pimentón son metanol, etanol, acetona, hexano, acetato de etilo, diclorometano y dióxido de carbono. La extracción con solventes entrega como producto final una oleorresina en la cual están concentrados los principios activos de la fuente natural. Esta oleorresina debe purificarse eliminando al máximo los residuales de solvente antes de ser aplicada en productos para consumir. Estas oleorresinas por lo general se extraen de sustratos aromáticos o con principios colorantes y aromatizantes como en el caso de algunas hierbas medicinales y productos vegetales (Ingle de la Mora, 2006). 2. Justificación En Quintana Roo, situado en la Península de Yucatán, existen regiones dedicadas a la producción de chile habanero. Tradicionalmente, se ha utilizado como materia prima para la elaboración de salsas, pastas, en aderezos para algunos platillos típicos de la región. Los retos actuales involucran la innovación de procesos con el fin de generar valor agregado y diversificar los usos tradicionales de productos de la región, como lo es el chile habanero. Existen diversos métodos utilizados para la extracción de capsaicinoides, dentro de los cuales se encuentra la extracción por solventes, el cual debido a su practicidad y bajo costo, podría ser utilizado para obtener oleorresinas, específicamente capsaicinas del chile habanero. Al mismo tiempo, este proceso permitiría procesar aquellos chiles habaneros que no son aceptados por la industria para sus procesos de obtención de salsas, principalmente; reduciendo en gran medida las pérdidas de la producción de habanero en la región. 2 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO 3. Objetivos Obtener capsaicina a partir de las oleorresinas extraídas del chile habanero. Diversificar los usos del chile habanero de la región de Quintana Roo. Utilizar aquellos frutos que no cubren requerimientos de calidad para las empresas de la región que procesan el chile habanero. Dar valor agregado al chile habanero, para incrementar su demanda y por tanto su precio. Conservar la producción de chile habanero en la región de Quintana Roo, como patrimonio cultural. 4. Materiales y Reactivos Chile habanero en fresco 1 L de acetona Cuchillos Tabla de poliuretano o madera 1 espátula metálica 1 termómetro de mercurio 2 probetas, una de 500 y otra de 250 mL 5 láminas de papel filtro 1 paquete de papel aluminio 1 hielera. 2 frascos de vidrio, color ámbar. 5. Equipos Rotavapor Estufa de secado Equipo de agitación Caframo® Balanza Analítica Ohauss 3 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO 6. Diagrama de Proceso 7. Metodología de extracción Nota: Antes de iniciar a manipular los chiles habaneros es importante colocarse guantes de nitrilo (preferentemente), bata y cubreboca. Figura 1. Se Realiza la eliminación del pedúnculo de los chiles habaneros, para tomar el peso real de la cantidad de pulpa a procesar. 4 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Figura 2. Con ayuda de un cuchillo se realizan cortes para obtener fracciones de chile y con ello aumentar la superficie de de contacto y facilitar la eliminación de humedad durante el proceso de secado. Figura 3. Los trozos de chile habanero troceado son colocados en charolas metálicas, para iniciarse el proceso de secado en una estufa de convección a una temperatura de 60° C, durante 24 h. Es recomendable no tocar el chile habanero, sin antes colocarse los guantes en las manos. Figura 4. Las muestras de chile habanero secas, se trituran con ayuda de un mortero o una licuadora, hasta obtener un polvo fino. 5 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Figura 5. Se Pesa la cantidad de chile habanero en polvo obtenido, para medir 5 veces la cantidad de solvente (acetona) y tener una relación 5:1, de solvente, respecto a la muestra de chile, se adiciona el solvente en un vaso de precipitados, y se agita la mezcla por 15 min. Figura 6. Después, la mezcla chile-acetona se lleva a un embudo y se pasa por papel filtro. De esta manera, se obtiene un extracto de chile habanero con la solución de acetona En la etapa de concentración de la capsaicina se puede utilizar un baño de agua caliente (35°C) por un periodo de tiempo mayor, pero siempre cuidando la temperatura de la muestra. 6 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Figura 7. El filtrado obtenido se lleva a baño maría a 35° C por 15min, en un rotavapor para la evaporación del solvente (acetona) y así obtener capsaicina concentrada. La capsaicina se guarda en refrigeración a 4°C y se cubre con aluminio hasta su utilización en la elaboración de la crema (Borges-Gómez et al., 2010). Es indispensable aislar la capsaicina del sol y mantenerse a baja temperatura, porque podría degradarse fácilmente. 8. Resultados 8.1. Rendimiento. Se realizó el cálculo del rendimiento de capsaicina en dos etapas; en la primera se determino el contenido de materia seca del chile habanero (Cuadro 1) y en la segunda etapa se determinó el rendimiento de capsaicina extraída a partir del chile habanero previamente secado (Cuadro 2). Cuadro 1. Rendimiento del chile habanero en porcentaje de masa seca. No. Pchile P pedúnculo Pchilef Pchileseco Rend (%) 1 2,689.4 g 79.6 g 2,609.8 g 295 11.3 % Cuadro 2. Rendimiento de capsaicina obtenida a partir de chile habanero. No. Pchilepolvo Pacetona (5:1) P (capsaicina) % capsaicina 1 295 g 1475 mL 12.5 g 4.23 % 7 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO 9. Conclusiones Es posible obtener una oleorresina de chile habanero, que contiene una gran cantidad de capsaicinas, a parte del proceso de extracción por solventes. La extracción de capsaicina diversifica ampliamente los usos tradicionales del chile habanero, aumentando su valor agregado y por ende incentivando su cultivo y explotación en la región de Quintana Roo. 10. Referencia Bibliográfica Borges-Gómez L., Cervantes C. L., Ruíz N. J., Soria F. M., Reyes O. V., Villanueva C. E. 2010. Capsaicinoides en chile habanero (Capsicum chinensi Jacq.) bajo diferentes condiciones de humedad y nutrición. Terra Latinoamericana 28 (1): 35-41. Casanova C., C., L. Gutiérrez P., L. Torres T., S. Peraza S., y T. González E. 2006. Caracterización química y molecular de la pungencia de los chiles (Capsicum spp.) de Yucatán. In: Memoria de la Tercera Convención Mundial del Chile. 9-11 de julio. Chihuahua y Delicias, Chih., México. pp: 27. Collins M. D., L. M. Wasmund, and P. W. Bosland. 1995. Improved method for quantifying capsaicinoids in Capsicum using Highperformance Liquid Chromatography. Hortscience 30: 137-139. Comisión Europea Directiva 94/45/CE (26 de Julio de 2007): [Online: 23-Feb-2010] URL disponible en http://ec.europa.eu/food/fs/sfp/addit_flavor/flav13_es.pdf Ishikawa, K. 2003. Biosynthesis of capsaicinoids in Capsicum. In: De, A. K. (ed). Capsicum. The Genus Capsicum. Taylor and Francis. London. pp: 87-95. Ingle de la Mora G. Comparison of red chili (Capsicum annuum) oleoresin and astaxanthin on rainbow trout (Oncorhyncus mykiss) fillet pigmentation. In: Aquaculture. No. 258 (2006); p.487-495. 8 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Kumar, B. K., A. D. Munshi, S. Joshi, and C. Kaur. 2003. Note on evaluation of chilli (Capsicum annuum L.) genotypes for biochemical constituents. Capsicum and Eggplant Newsletter 22: 41-42. Peña-Alvarez A., Ramírez-Maya E., Alvarado-Suárez L.A. 2009. Analysis of capsaicin and dihydrocapsaicin in peppers and pepper sauces by solid phase microextraction –gas chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1216: 2843-2847. 9 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO II. ELABORACIÓN DE UNA CREMA CON A PARTIR DEL EXTRACTO DE CAPSAICINA 1. Introducción Las pomadas, también llamadas ungüentos, que tienen relación con las cremas, son preparaciones semisólidas con características de flujo plástico, tienen una tensión de fluencia definida, es decir, si la fuerza de masaje aumenta, el flujo disminuye, su composición es de materiales hidrofóbicos o bien con aditivos para hacerlos eventualmente aceptores de agua; la FEUM (Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos) define a la pomada como una preparación de consistencia blanda que contiene el o los principios activos incorporados a una base apropiada que le da masa y consistencia. Se adhiere a la piel y mucosas. Esta base puede ser liposoluble o hidrosoluble, generalmente es anhidra o con un máximo de 20 por ciento de agua (Lachman et al., 1976). La palabra pomada antiguamente traía a la imaginación la idea de un remedio grasiento, pero en la actualidad puede significar un producto suave, cremoso o una preparación relativamente no grasienta y lavable. Las bases para pomadas son formulaciones que no contienen ingredientes activos, la elección de la base puede ejercer alguna influencia sobre su acción terapéutica, así como en su apariencia, estabilidad y sus propiedades físicas. Las primeras bases para pomadas fueron indudablemente grasas, cremas y otros materiales oleosos; formas clásicas que aún son usadas en la actualidad. La capsaicina ha sido ampliamente estudiada a través de investigaciones experimentales y clínicas, debido a sus prominentes propiedades farmacéuticas y antioxidantes. Además, la capsaicina ha sido ampliamente utilizada en cremas antiinflamatorias y ungüentos, y como un contra-irritante en apósitos quirúrgicos y medicamentos (Peña-Álvarez, 2009). 10 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO 2. Justificación El empleo de medicamentos para el alivio de malestares, principalmente de tipo corporal es una situación muy común en un gran sector de la población. En este sentido, existen compuestos como la capsaicina, los cuales podrían tener un efecto benéfico en el cuerpo, principalmente en situaciones de artritis; reduciendo con ello, la ingesta de gran cantidad de medicamentos. El empleo de la capsaicina como compuesto activo no se podría realizar directamente, debido a su sensibilidad a condiciones ambientales como oxígeno y luz, las cuales pueden provocar cambios en su composición y pérdida de compuestos activos y por tanto disminuir su eficiencia. En este sentido, la elaboración de una una crema o pomada, adicionada con el ingrediente activo capsaicina, en bajas concentraciones (0.075 g/100 g de crema), sería una buena alternativa para la utilización de este compuesto, ya que permitiría la protección de los compuestos activos de la capsaicina, con su consecuente liberación al romper la capa de protección, mediante el frotamiento o aplicación de un esfuerzo. 3. Objetivos Utilizar la capsaicina extraída del chile habanero para su aplicación en la elaboración de una crema. Generar un uso alternativo del chile habanero, que sirva de complemento para su uso tradicional. 4. Materiales y Reactivos Muestra de capsaicina de habanero Glicerina 500mL Crema, marca comercial 5 tubos Vacutainer®. 1 balanza Vaso de precipitados Agitador de vidrio. 11 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO Jeringas de 10 mL 5. Metodología de Elaboración Nota: Antes de empezar a manipular la capsaicina, colocarse cubreboca, guantes de nitrilo y bata porque podría irritar las fosas nasales. 1. Atemperar la capsaicina por 15 min a temperatura ambiente. 2. Pesar 100 g de crema (marca comercial) y colocarla en un vaso de precipitados. 3. Por separado, en un tubo Vacutainer®, realizar la mezcla de 0.025 mL del extracto de capsaicina y 0.025 mL de glicerina, agitar la mezcla hasta lograr una mezcla homogénea. La mezcla de la capsaicina/glicerina también puede realizarse en un vaso de precipitados de 20 mL, y mezclar con ayuda de una espátula. 4. Colocada la crema en el vaso de precipitados se mezcla con ayuda de un equipo de agitación Caframo® hasta obtener una mezcla homogénea. Enseguida, se adiciona la mezcla de extracto capsaicina-glicerina hasta incorporar por completo, utilizando agitación constante hasta obtener una fase homogénea (Nota: Evitar que la capsaicina toque las paredes del recipiente) 12 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO 5. Envasar la mezcla obtenida en un recipiente pequeño de plástico no transparente. 6. Diagrama de Proceso 13 SOLIHAGUA S. A DE C.V TRANSFERENCIA DE TECNOLOGÍA PARA LA OBTENCIÓN DE CAPSAICINA EN CHILE HABANERO 7. Resultados De acuerdo a lo encontrado en la literatura, se utilizó la referencia de 0.15 g/200 g de crema, que corresponde a un 0.075% de oleorresinas de chile habanero en la que se encuentran concentradas los capsaicinoides. A nivel comercial, se encuentran ya presentaciones de cremas con capsaicina en concentración de 0.075 g/100 g de crema, cuya evaluación en la piel ha tenido resultados satisfactorios, principalmente en el alivio de dolores musculares. Sin embargo, en las oleorresinas extraídas desconocemos con exactitud la cantidad de capsaicina pura presente, por lo cual se optó por utilizar la cantidad de oleorresina como porcentaje. 8. Conclusiones Fue posible incorporar la capsaicina y obtener una crema con buenas características de consistencia y color homogéneos. La elaboración de cremas con capsaicinas podría ser una alternativa de uso del chile habanero de la región de Quintana Roo. 9. Referencias Bibliográficas Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (FEUM). 2004. Comisión Nacional para la Protección contra Riesgos Sanitarios. Secretaría de Salud, México. Octava Edición, México. D.F. Lachman, L., Lieberman, H., Kanin, J. 1976. The Theory and Practice of Industrial Pharmacy. Lippincott Williams & Wilkins, London, UK. Peña-Álvarez A., Ramírez-Maya E., Alvarado-Suárez L.A. 2009. Analysis of capsaicin and dihydrocapsaicin in peppers and pepper sauces by solid phase microextraction –gas chromatography-mass spectrometry. Journal of Chromatography A. 1216: 2843-2847. 14