Garantía de calidad analítica de los indicadores SIVIM

Sistema de Garantía de Calidad Analítica para los datos de análisis generados
por el prototipo del Subsistema de Vigilancia de la Malnutrición
Dora Inés Mazariegos Cordero, Carolina Martínez C., Mireya Palmieri S. y Ana Victoria Román T.
1 Instituto
de Nutrición de Centro América y Panamá, INCAP
Justificación
Resultados
Cuadro 1 Resumen del Control de Calidad Hemocues en
campo Controles Eurotrol™ corridos en Nov.-Dic 2,011
Metodología (cont.)
Hemocue No.
Validación del uso de sangre capilar
Para comprobar que la técnica de punción y recolección de sangre capilar
era adecuada y daba resultados equivalentes a los obtenidos de muestras
de sangre venosa, se realizó la extracción de sangre capilar y venosa, tanto
en condiciones de campo, en un grupo de voluntarios. Se compararon
valores de Hb en sangre y Ft, TfR, AGP, PCR y RBP en plasma capilar y
venoso.
Resultados
1. Desempeño de los equipos Hemocue Hb 301™
Objetivos
Los 4 equipos utilizados en campo fueron HemoCue Hb 301 Analyzer, y
son de HemoCue AB, Angelholm, Suecia.
 Comparar resultados de Hemoglobina en sangre capilar y venosa.
0.1
0.3 0.3 0.2 0.4 0.4 0.2 0.2 0.4 0.2 0.3 0.3
1.6
2.0 1.9 2.2 2.7 2.2 2.1 1.8 2.1 2.0 2.3 1.7
0.0 -0.1 0.1 0.3 0.3 0.5 0.4 0.3 0.5 0.5 0.5 0.8
-0.14 -0.57 0.40 4.27 2.08 2.74 5.21 2.65 2.74 7.37 3.62 4.57
-0.10
3.03
3.53
5.19
Extracción de muestras de sangre
Las muestras de sangre venosa se obtuvieron por punción antecubital y
recolección en sistema Vacutainer. Las muestras de sangre capilar se obtuvieron
por punción mediante lanceta activada por contacto, remoción de las primeras
dos gotas, y recolección de la sangre (500 µL) por capilaridad (sin presión local)
en tubos Microtainer con EDTA. La determinación de Hemoglobina se realizó en
la sangre homogenizada por inversión, con el método de referencia1, o con el
Hemocue 2, llenado por capilaridad de las cubetas de Hemocue, y lectura directa
en los primeros 40 segundos después del llenado de la cubeta. El Hemocue 301
no usa ningún reactivo en la cubeta y realiza la lectura de absorbancia de
Hb/HbO2 directamente a λ 506-880 nm.
El plasma se separó por centrifugación y se congeló a -20˚C hasta el momento
del análisis de indicadores, por ELISA múltiple3 (VitA Iron Tech Lab. Germany) o
equipo Immulite y Nefelometro (Laboratorio INCAP)
1
Cuadro 2 Valores de Hb obtenidos
con Hemocue en sangre venosa y
capilar, y con autoanalizador en s.
venosa
Figura 2 Concordancia entre Hb
Hemocue y Analizador automático
Concordancia Valores Hb por Hemocue contra Lab. Referencia
Hemoglobina, g/dL
Parámetro
Hemocue
S. venosa
S. capilar
14.15
14.55
14.68
DS
1.20
1.28
1.21
IC 95%
13.8-14.5
14.2-15.0
14.3-15.1
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Hb promedio, g/dL
2. Comparación de sangre capilar y venosa
Comparación Valores Hb, Hemocue capilar venoso
Figura 1
DIFERENCIA Hb Venosa-Capilar
Hb S. capilar, g/dL
16
15
14
13
12
11
Rango inferior: 11.8
13.8
Promedio: 13.0
13.6
Rango Superior: 14.2
Hb, g/dL
Promedio de corridas
13.2
13.0
12.8
12.6
12.4
12.2
12.0
11.8
11.6
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Días/Corrida
Hb, g/dL
Hemocue 1
13.4
19.0
18.8
18.6
18.4
18.2
18.0
17.8
17.6
17.4
17.2
17.0
16.8
16.6
16.4
16.2
16.0
15.8
15.6
15.4
15.2
15.0
10
10
1.5
INCAP
0
0.50
0
50
100
DBS
150
200
0.5
0.8
1.0
1.3
DBS
Conclusiones
 Los equipos Hemocue trabajaron en campo con adecuada
precisión y acuerdo con los controles líquidos.
 Los valores de Hb por Hemocue están sobreestimados en 0.4
± 0.2 respecto al método de referencia.
 Con una adecuada técnica de extracción capilar, los
resultados obtenidos de Hb, asi como indicadores bioquímicos
en plasma capilar y venoso fueron comparables y se puede
utilizar cualquiera de las técnicas de extracción para su ensayo
en laboratorio.
 Los resultados de Ferritina y AGP analizados por los
laboratorios VitA Iron Tech y Bioquímica Nutricional de INCAP
son comparables.
Referencias
1. ICSH. Recommendations for Reference Method for
Hemoglobinometry in Human Blood (ICSH standard 1995) and
Specifications for International Hemoglobincyamide Standard (4th
edition). J Clin Pathol 1996;49:271-274.
2. Manual de Hemocue Hb301. van Kempen E J and Zijlstra W G.
Spectrophotometry of hemoglobin and hemoglobin derivativies.
Advances in Clinical Chemistry, vol 23, 199-257 (1983).
3. Erhardt, J; Estes, J; Pfeiffer, C. , Biesalski, K y NE Craft. 2004.
Combined Measurement of Ferritin, Soluble Transferrin Receptor,
Retinol Binding Protein, and C-Reactive Protein by an Inexpensive,
Sensitive, and Simple Sandwich Enzyme-Linked Immunosorbent
Assay Technique. J. Nutr. 134:3127-3132.
Agradecimientos
1.0
0.5
0.0
-0.5
-1.0
-1.5
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Hb promedio, g/dL
11
12
13
14
15
16
17
18
Hb S. venosa, g/dL
Figura 4 Correlación y concordancia entre resultados de Ft y AGP
en sangre venosa y capilar
AGP
Ferritina
1.15
300
1.05
Rango inferior: 15.5
Promedio: 17.0
Rango Superior: 18.5
Hemocue 4
Promedio de corridas
0.95
Plasma capilar
14.2
Control de Calidad de Hemocues
Controles Líquidos Eurotrol Nivel 3
Plasma capilar
14.4
50
Concordancia entre Valores Hemoglobina capilar y venosa
IDENTIDAD
Control de Calidad de Hemocues
Controles Líquidos Eurotrol Nivel 2
100
17
Hojas de control de calidad de Hemocues en campo, ejemplos de
extremos de variación mínima y elevada
14.0
1.25
1.00
Muestras de sangre venosa enviadas a laboratorio de referencia
(n=42), mostraron valores levemente más bajos que los de Hemocue
(Cuadro 2). Se obtuvo una correlación significativa (Pearson 0.9844),
pero la sobreestimación de Hb con los Hemocues fue de :-0.405± 0.231
g/dL (Figura 2). No se realizó corrección de valores de Hb pues el
referente poblacional es medido con Hemocue.
18
14.6
AGP INCAP-DBS TODOS
150
Figura 3 Correlación y concordancia entre valores de Hb en
sangre venosa y capilar
Excepto un punto, de un día, un Hemocue, un nivel de control.
Desempeño de Hemocues
Figura 5 Correlación de resultados laboratorios Vit A Iron Tech (DBS)
e INCAP
Ferritina INCAP-DBS TODOS
La variación promedio entre los 4 valores obtenidos con los equipos
Hemocue, para cada muestra, fue de 0.8% (n=17): La mayor diferencia Los resultados de Hemoglobina de sangre capilar y venosa (Cuadro 2 y Figura 3)
de valores fue de 0.5 g/dL. También se evaluó Hb con equipos
fueron significativamente iguales, (correl. Pearson 0.954), y concuerdan entre sí, con
Hemocue 201+, modelo anterior, y los resultados son comparables
un sesgo de 0.12± 0.38 g/dL, que no es diferente de 0.
entre modelos (Datos no mostrados)
Asimismo, se compararon los resultados de 5 los indicadores bioquímicos para
1.2 Control de calidad (CC) en campo
muestras de plasma venoso y capilar de un mismo paciente, analizados con el método
de
ELISA
simultáneo
del
laboratorio
VitAIron
Tech.
Para
los
5
métodos,
se
La variación (CV%) observada en un mes y medio no excede 2.7% en
el periodo evaluado. Las diferencias entre el promedio de lectura y el encontraron que los valores en plasma capilar y venoso no fueron diferentes entre si
valor esperado variaron entre -0.1 y 0.8 g/dL, con tendencia leve a ser (Análisis de correlación y concordancia). Se ejemplifican los resultados obtenidos
para en la Figura 4. La diferente dispersión en las gráficas puede reflejar diferencias
1
mayores (NS) que el valor esperado, pero todos los Hemocue dieron
en precisión para la estimación de Ferritina y AGP, pero aún con mayor variabilidad, se
valores de Hb dentro de los rangos estipulados por el proveedor. Los
obtiene resultados de AGP compables en plasma capilar y venoso.
resultados se resumen en el Cuadro 1, y se ejemplifican dos gráficas de
CC en la Figura 1.
Metodología
Se compararon los resultados de Hb obtenidos con Hemocue contra el método
de referencia1 con equipo automatizado, en un grupo de voluntarios (n=42).
12.9 17.1 7.4 13.3 17.5 7.5 13.3 17.5 7.6 13.5 17.8
1
7.1
0.75
Media
La variación de resultados de Hb de sangre venosa medidos
repetidamente en cada Hemocue estuvo de acuerdo a especificaciones
del fabricante. La variación máxima observada entre lecturas de la
misma muestra fue de 0.4 g/dL.
 Comparar resultados de análisis de Ferritina y AGP entre
laboratorios
7.1
1
7.1
4
2
3
13.0 17.0
1.3 Exactitud de los valores de Hemocue- Comparación con
método de referencia.
Lab. referencia,
sangre venosa
1.1 Reproducibilidad intra e inter equipo
 Comparar resultados de indicadores en plasma capilar y venoso.
3
2
3
13.0 17.0
Las muestras de plasma venoso que se analizaron en INCAP para
comparar resultados de Ferritina y AGP respecto del laboratorio de
Alemania mostraron adecuada correlación con los resultados de este
laboratorio. La diferencia en precisión analítica del método de ferritina
y AGP se evidencia también en estas gráficas.
INCAP
En las muestras de plasma venoso, se realizaron las determinaciones de Ft
y AGP en el laboratorio de Bioquímica Nutricional de INCAP, y se
compararon con los resultados del laboratorio de VitA Iron Tech Alemania.
 Evaluar el desempeño de los Hemocues Hb301 en campo
1
7.1
1
7.1
2
2
3
13.0 17.0
3. Resultados entre laboratorios
200
Comparación entre laboratorios
Para asegurar el desempeño óptimo de la nueva técnica de extracción
sanguínea, el control de calidad de la medición de Hemoglobina, Hb, en
campo, y comparar los resultados de laboratorio obtenidos por los dos
laboratorios, se realizaron los ensayos cuyos resultados se presentan a
continuación).
Este se midió por la reproducibilidad intra e inter equipos, utilizando sangre
venosa para realizar el llenado de cubetas individuales y realizar la lectura de
Hemoglobina de acuerdo a las instrucciones del fabricante. Se realizó el control
de calidad de los equipos con el uso de controles líquidos específicos Eurotrol ™
(Nivel bajo, medio y alto) realizando mediciones de Hb antes, durante y después
del estudio en campo, con cada Hemocue, para cada uno de los 3 niveles de Hb.
Nivel
Valor esperado
Promedio obtenido
en campo
DS
CV%
Diferencia, g/dL
Diferencia porcentual
%Dif. Promedio por
Equipo.
1
2
3
13.0 17.0
DIFERENCIA Ref-Hemocue
El proyecto para la Vigilancia de la malnutrición en Guatemala planteó,
para la obtención de indicadores bioquímicos un método de extracción
de sangre por punción capilar, en vez de la extracción antecubital de
sangre venosa tradicionalmente utilizada. Además las muestras de
plasma fueron analizados por una metodología de ELISA múltiple en el
laboratorio VitA Iron Tech en Alemania, que permitió la determinación
de dos indicadores del estado de hierro (Ferritina, Ft y Receptores de
transferrina), dos marcadores de infección (Alga glicoproteína ácida,
AGP y Proteína C reactiva) y la Proteína unidora de retinol, RBP, como
estimador del retinol plasmático, usualmente medido directamente
por HPLC. El laboratorio de INCAP ha realizado los análisis de
Ferritina y AGP con equipos automatizados de ELISA y nefelometría,
para los estudios nutricionales realizado en la región.
Resultados (cont.)
200
100
0.85
0.75
0.65
0.55
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25
Días/Corrida
0
0
100
200
Plasma Venoso
300
0.45
0.45
0.55
0.65
0.75
0.85
0.95
Plasma Venoso
1.05
1.15
Las autoras desean expresar su agradecimiento y reconocimiento al
equipo de campo del SIVIM, en particular a los químicos biólogos Patricia
Díaz, Guido Gonzalez, Roxana Arana y Brenda Velázquez, por su dedicado
trabajo.
Los laboratorios clínicos Alvarez (Quetzaltenango) y
AMEDESGUA (Guatemala) realizaron la hematología automatizada
comparativa y el Dr. Juergen Erhardt (VitA Iron Tech Lab.) los análisis de
indicadores bioquímicos.
El equipo del laboratorio de Bioquímica Nutricional del INCAP realizó las
pruebas comparativas de AGP y Ferritina y determinaciones de Hb con
Hemocue.