Presentación

Diagnóstico prenatal no
invasivo de aneuploidias
mediante ADN libre fetal
en sangre materna
Dr. Waldo Leiva L.
Screening prenatal
Screening combinado
trimestre
er
1
Screening prenatal
Diagnóstico prenatal no
invasivo
• Enfoque clínico actual: Cribado
aneuploidias (PAPA-A, fBHCG, TRN) CRL
45-84 mm. . TD: 90%
TFP: 5%.
• Se debe hacer en TODA LA POBLACIÓN,
bajo y alto riesgo
• Si se agrega HN, DV, RT, TD: 93-96% TFP
2,5%
• Si el riesgo ajustado es >1/100 se debe
realizar procedimiento invasivo Dg (CVS o
AMCT)
Prenat Diagn 2011; 31: 7–15.
Screening prenatal
Edad
T21
Obstet Gynecol. 2007 Dec;110(6):1459-67.
Otras
American Journal of Obstetrics and Gynecology (2004) 191, 45e67
Diagnóstico prenatal no invasivo
Prenat Diagn 2011; 31: 7–15.
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
cfDNA en sangre materna
• ADN libre fetal (cfDNA) constituye el 10-15% del
total en sangre materna (feto+madre).
• Se detecta desde la 4ª semana de embarazo.
• cfDNA tiene una vida media corta, indetectable
post parto.
• El tamaño de cfDNA es de 150 pares de base.
• Se origina de la apoptósis de celulas
trofoblásticas.
• Su concentración aumenta con Edad gestacional
y es inversamente proporcional peso materno.
Hum Reprod. 2003;18(8):1733.
Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33
¿A quienes ofrecer?
¿Qué existe en el mercado?
NIPT metodos DNA libre fetal:
Sequenciacion
masiva
(MPSS)
Sequenom
MaterniT21
Verinata
Verifi
Sequenciacion
dirigida
(DANSR)
Ariosa
Harmony
Recuento de secuencias
especific
a ms a cromosomas
Sequenciacion
dirigida
Natera
Panorama
SNPs
Polimorfiso s
de nucleo dos
7
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
(1) Zimmermann et al. Prenat Diag 2012, (2) Natera, internal data, (3) Rabinowitz et al. Presented at ASHG 2012, (4) Zimmermann et
al. Presented at SMFM 2013.
Métodos cuantitativos
(Verifi test)
MPS
Obstet Gynecol 2012;119:890–901
Recuento
Chrom 21
Chrom 3
Recuento
Chrom 21
Cantidad esperada:
Cantidad obtenida:
Chrom 3
20%
25%
80%
75%
18
Secuenciación dirigida
Harmony test
Metodología SNP
• SNP = Single
Nucleotide
Polymorphism
• Estudia
simultaneamente
19.500 SNPs
21
Metodología SNP
SNP
Sequencing
Plasma =
DNA Materno +
DNA fetal
Sangre
materna
SNP
Sequencing
Buffy coat =
DNA Materno
Materno + Fetal
Genotype
Fetal
Genotype
Materno
Genotype
22
Metodología SNP
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
Prenatal Diagnosis 2013, 33, 514–520
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
Prenatal Diagnosis 2013, 33, 514–520
Resultados
Tipo de informe
Sequenom
MaterniT21 Plus
Verinata
Verifi
Ariosa
Harmony
Natera
Panorama
Positive
Negative
Detected
Not Detected
Suspected
Risk score
(mat age, fetal fraction, 1 metric)
Risk Score
(mat age, fetal fraction, multiple metrics)
Resultados
Harmony test
Natera-Panorama test
Natera-Panorama test
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33.
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 15–33.
cfDNA el diagnóstico de aneuploidias
• Tasa de falsos positivos
aumenta:
‰ > peso materno.
‰ Mosaicismo confinado placenta
‰ Gemelo evanescente.
‰ Fracción fetal cfDNA < de 4%
Futuro screening 1er trimestre
propuesto
10 sem: Marcadores
Bioquímicos + cfDNA
12 sem: TN, DV, RT, HN
Ultrasound Obstet Gynecol 2013; 42: 34–40
Otras aplicaciones
Otras aplicaciones
• Determinación sexo fetal:
– Enfermedades ligadas cromosoma X.
– Hiperplasia suprarrenal congénita.
• Determinación status RhD del feto en
madres RhD (-).
• Defectos monogénicos.
– Sd Marfan
– Acondroplasia.
– Riñón poliquístico, etc
• Preeclampsia - RCIU
¿Que costo tiene?
Prenatal Diagnosis 2013, 33, 521–531
Consecuencias clínicas y económicas
del uso cfDNA
• Se usaron datos obtenidos del estudio
MELISA.
• Se evaluó el impacto de incorporar cfDNA en
los exámenes de rutina de control prenatal:
– En mujeres catalogadas de alto riesgo.
– Como test de screening 2ario.
• 66% de reducción en procedimientos
invasivos (riesgo de aborto).
• 38% aumento en diagnóstico de T21.
• Los costos totales de screening y test
diagnósticos disminuyó 1% anualmente.
Garfield, Journal of Managed Care Medicine | Vol. 15, No. 2 | www.namcp.org
En Chile?
• 1 Laboratorio privado
• Verifi y Harmony test
• Costo aproximado 500.000 a 600.000
pesos.
• Muestra es enviada a EEUU para análisis.
• Requiere orden médica.
• La muestra se toma en domicilio de la
paciente.
• El resultado demora 15 días aprox.
Conclusiones
• cfDNA en sangre materna es un examen
promisorio dado su alta TD y baja TSF en
dg aneuploidias en mujeres mujeres de
alto riesgo.
• De utilidad en múltiples patologías.
• Utilidad como test de screening avanzado
en conjunto con screening combinado en
población de alto riesgo.
• No reemplaza a test Dg como CVS o
AMCT.
• Limitado por su alto costo actual.
Gracias