variabilidad genómica entre cepas del herpes virus bovino tipo

VARIABILIDAD GENÓMICA ENTRE CEPAS DEL HERPES
VIRUS BOVINO TIPO I AISLADAS DE CASOS CLINICOS
DE IBR
N. DA SILVA 1, C. ESCARMIS 2, A. SOLANA 3, J. M.ª CASTRO 3
1
Escola de Veterinária da UFMG. C.P. 567 - CEP 30.161-970, Belo Horizonte, Brasil.
[email protected]
2
3
Centro de Biología Molecular (CSIC-UAM), Cantoblanco-Madrid, España.
Dpto. de Patología Animal I (Sanidad Animal), Facultad de Veterinaria –UCM–
Madrid, España.
RESUMEN
En este trabajo se ha secuenciado un fragmento de la glicoproteína de infección gB de cepas del herpes virus bovino tipo 1 (BHV-1) aisladas de casos clínicos de IBR, en España y otros países. En este sentido, un total
de 19 cepas del virus BHV-1, han sido sometidos a amplificación y secuenciación por PCR. Se amplificó un
fragmento de 511 pb comprendido entre las regiones 1302 hasta 1813 del gen de la gB. Los resultados muestran
una homología de un 100 % entre 16 cepas secuenciadas, sin embargo, fueron detectadas diferencias en tres cepas (dos cepas españolas) clasificadas como BHV-1,1, aisladas de casos con entidad clínica respiratoria. La frecuencia de mutación es del orden de 3,6 × 10–4 y las modificaciones en la secuencia nucleotídica con mayor frecuencia dan lugar a cambios aminoacídicos. No se puede determinar el grado de importancia de estos cambios,
pero se puede suponer que ellos estan relacionados el pasaje del vírus por los animales huéspedes y/o los distintos grados de patogenicidad de las cepas.
PALABRAS CLAVE:
IBR
Herpesvirus bovino –1
Glicoproteína gB
Genoma de Herpesvirus
INTRODUCCIÓN
La Rinotraqueítis Infecciosa Bovina (IBR) es una enfermedad de distribución mundial que clínicamente afecta al ganado vacuno y ocasionalmente al caprino. La infección
Recibido: 8-4-99
Aceptado para su publicación: 3-12-99
Invest. Agr.: Prod. Sanid. Anim. Vol. 15 (1-2), 2000
60
N. DA SILVA et al.
es producida por el herpes virus bovino tipo 1 (BHV-1) que se caracteriza por cursar con
trastornos respiratorios, aunque también puede cursar con conjuntivitis, vulvovaginitis,
mastitis, abortos, encefalitis (predominantemente en terneros) e infecciones generalizadas
(Hernán-Pérez et al., 1995; Suárez et al., 1995).
En los viriones, el genoma de los BHV-1 es una doble cadena lineal de ácido desoxirribonucleico (ADN) de 137 a 139 kilobases (Kb), subdividido en un único y largo segmento (Ul) de 104-105 Kb y otro más corto (Us) de 11 kb, que está franqueado por dos
secuencias repetidas e invertidas (interna - IRs y terminal - TRs) de 12 kb cada una (Frapel et al., 1993). El tamaño de las secuencias invertidas y del segmento corto (Us) son similares entre las cepas del BHV-1 y estarían relacionadas con la replicación intracelular
del virus. En ello, el ADN vírico se circulariza en sus extremos y sirve como cadena molde para su propia duplicación. La replicación del ADN vírico ocurre dentro del núcleo celular y, según Hammerschmidt et al. (1990), el virus utiliza partes del ADN celular para
ese proceso, una vez que se comprobó por microscopia electrónica que el genoma vírico
contiene una secuencia de nucleótidos un 10 % mayor. Esta recombinación podría explicar algunos de los aspectos relacionados con las infecciones por el BHV-1.
Un aspecto muy importante en los BHV-1 es su capacidad de producir latencia. Variaciones en el genoma de los BHV-1, relacionadas al fenómeno de latencia, fueron detectadas por Whetstone et al. (1993). Según estos autores, estas diferencias son visibles tras
la reactivación vírica a partir de un estado de latencia o de una superinfección con un subtipo diferente. Esto significa que existe variabilidad in vivo en el genoma de los BHV-1,
pero que no se detectan en las manipulaciones del virus in vitro. Estas posibles recombinaciones de ADN en el curso de la infección aguda o de las reactivaciones víricas, dificultaría los análisis por las ER (Endonucleasas de restricción) y por el tamaño de los RFLPs
(«Restriction Fragments Length Polymorphisms»), en cepas aisladas de un mismo subtipo
de BHV-1 (Bulach y Studdert, 1990; Castro et al., 1990; Hamelin et al., 1990).
En función de estos hechos se planteó hacer un estudio de variabilidad a partir de un
fragmento de la glicoproteína de infección B (gB) en cepas de BHV-1, aisladas en diferentes casos clínicos de IBR, en España y otros países.
MATERIAL Y MÉTODOS
Cepas del virus de la Rinotraqueítis Infecciosa Bovina
Todas las cepas de BHV-1 utilizadas en este trabajo fueron mantenidas en congelación a –80° C. Las 19 cepas de BHV-1 incluyen dos cepas de referencia (cepas 1 y 2), dos
cepas atenuadas utilizadas en vacunas comerciales (cepas 3 y 4), siete aislados a partir de
casos con entidad clínica respiratoria (cepas 5 hasta la 12), cuatro aislados de casos con
entidad clínica de vulvovaginitis (cepas 13 hasta la 17) y dos cepas aisladas en casos clínicos que cursaban con encefalitis. La descripción de las cepas de BHV-1 con sus principales características se muestran en la Tabla 1.
Extracción del ADN vírico
La extracción del ADN para la amplificación por la técnica de la reacción en cadena
de la polimerasa (PCR), a partir de sobrenadantes de cultivos celulares infectados con el
61
VARIABILIDAD GENÓMICA DEL BHV I
TABLA 1
CARACTERÍSTICAS DE LAS CEPAS DE BHV-1 EMPLEADAS
EN ESTE EXPERIMENTO
Characteristics of BHV-1 strains examined in this experiment
Cepas
Identificación
Año de
aislamiento
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
Cooper 1
Los Ángeles
IBR—FM
IBR-LAM
IBR-MO3
BV 246/5
Iowa
Babiuk
Marberink
Oxford
León
IBR-177/81
BV-66
BV-68
IPV-ST 2193
IPV-48/71
IPV-BFA
AV-151
IBR-BV 90
1956
1956
1956
—
1980
1969
—
—
—
—
1981
1981
1973
1973
—
1971
1971
1972
1973
Origen
Comentarios *
EEUU
EEUU
Holanda
Holanda
España
Bélgica
EEUU
EEUU
EEUU
Reino Unido
España
España
Cepa ATCC-VR 864
Cepa ATCC-VR 188
Cedida por el Dr. Espuña - Lab. Hipra - Girona.
Cedida por el Dr. Espuña - Lab. Hipra - Girona
Primer aislado en España..
Aislada de un caso clínico respiratorio
Cedida por el Dr. Espuña - Lab. Hipra, Girona
Cedida por el Dr. Espuña - Lab. Hipra, Girona
Cedida por el Dr. Espuña - Lab. Hipra, Girona
Origen: Lab. Sanidad Animal, Algete
Cedida por el Dr. J.M. Castro
Cedida por el Dr. J.M. Castro
Aislada a partir de útero
Aislada a partir de útero
Aislada a partir de útero
Aislada a partir de útero
Aislada a partir de útero
Aislada en caso clínico de encefalitis
Aislada en caso clínico de encefalitis
Las cepas 13 a 19 fueron cedidas por el Dr. Wellemans del Instituto Nacional de Investigaciones Veterinarias de
Bélgica, a través del Dr. Zygraich, del Lab. Smith Klein. No se conoce el origen de las mismas.
(Strains 13 to 19 were provided by Belgian Veterinary Research Institute from Dr. Wellemans and Dr.
Zygraich-Smith Klein Labs. There were no informations about the origin of the others strains).
BHV-1, se realizó a través de la resina Chelex-100 (Bio-Rad, Hércules, EEUU), según la
técnica descrita por Santurde et. al. (1996).
Reacción en Cadena de la Polimerasa
Se amplificó un fragmento de 511 pb comprendido entre las regiones 1302 hasta
1813 del gen de la gB, cuya secuencia fue descrita por Whitbeck et al. (1988). Para ello
se utilizó dos primers denominados Herpes A y Herpes B. El primer Herpes A (sense) tiene 21 nucleótidos, comprendidos entre las regiones nt 1302 1323 y su secuencia se describe a continuación: 5’ TAC ATG TCG CCC TTT TTA CGG G 3’. El otro «primer», Herpes
B (anti-sense), está formado por 17 nucleótidos (regiones nt 1813 - 1797) y tiene la siguiente secuencia: 5’ TGC AGG TAC AGC TTG GC 3’. La síntesis del «primer» Herpes
A se realizó en los Laboratorios de ISOGEN Bioscience BV (Maarssen - Holanda) y el
«primer» Herpes B fue sintetizado a través de un sintetizador automático (Pharmacia
LKB. Gene Assembler Plus programa «Gene Assembler Plus», versión 1.4 - Pharmacia)
en el laboratorio de secuenciación de la Facultad de Farmacia de la Universidad CompluInvest. Agr.: Prod. Sanid. Anim. Vol. 15 (1-2), 2000
62
N. DA SILVA et al.
tense de Madrid. Las concentraciones se determinaron por espectrofotometría, a una densidad óptica de 260 nm de longitud de onda, según lo descrito por Sambrook et al. (1989).
Para la amplificación genómica del fragmento de la gB se utilizó la enzima AmpliTaq
DNA Polymerase (Perkin Elmer, Cetus, Ca, EEUU) y se empleó las condiciones descritas
por el fabricante de la enzima. Las amplificaciones se hicieron en el termociclador de la
misma casa comercial, según el programa: 1 ciclo de 94° C durante 3 min. y 30 ciclos de
3 segmentos (desnaturalización a 94° C durante 30 s., anillamiento a 60° C durante 30 s. y
extensión a 72° C durante 30 s.). Al final se realizó 1 ciclo de 72° C durante 10 min.
La reacción de la PCR se realizó en un volumen final de 100 µl [10 µl Tampón 10X;
1 µl de la solución de 10mM de dNTPs; 2,0 µl de cada «primer» (A y B) concentración
final de 50 ng/µl; 1 µl de BSA (1 mg/ml); 0,5 µl de AmpliTaq DNA Polymerase (5 U/µl);
20 µl de ADN del BHV-1 extraído con Chelex-100; 63,5 µl de agua dde MILIQ). Todas
la reacciones se hicieron en tubos eppendorf especiales y estériles de 500 µl en el termociclador.
Los productos del ADN amplificado por la PCR se visualizaron a través de electroforesis en geles de agarosa tenidos en bromuro de etidio 0,5 µg/ml, siguiendo la técnica descrita por Sambrook et al. (1989). El ADN del bacteriofago φ 29 cortado por la enzima
Hind III, fue utilizado como marcador de peso molecular para los productos amplificados
del BHV-l.
Las bandas de ADN fueron visualizadas bajo la luz ultravioleta (302 nm de longitud
de onda) en un transiluminador y, fotografiadas con una camera Polaroid (Direct Screen
Instant Camera DS 34, Polaroid UK Ltd, St Albans, Hertfordshire, Inglaterra).
Secuenciación del fragmento de ADN amplificado por la PCR
Se empleó el XTreme Spin Column Kit (Pierce - Perstorp Biotec Company) para quitar las contaminaciones de dNTPs, «primers» y sales. La secuencia genómica del fragmento de 511 pb de la glicoproteína gB se realizó a través del fmol DNA sequencing
system (Promega) empleandóse el siguiente programa de amplificación: 1 ciclo de 1 segmento a 94° C durante 2 min y a continuación 40 ciclos de 3 segmentos (1 segmento a
94° C durante 30 s., 1 segmento a 60° C durante 30 s. y 1 segmento a 72° C durante
60 s.).
La electroforesis se realizó en geles de poliacrilamida a 70 W durante 4 h (corrida larga) y durante 2 h (corrida corta). Los geles fueron transferidos para papel de filtro grueso
(Whatman 3 MM), secados y expuestos sobre película para autorradiografia durante 7-10
días. Después de revelados se llevó a un lector de radiografías. Del fragmento de 511 pb
ha sido posible leer hasta 433 bases nucleotidícas en el área de mejor visibilidad en la autorradiografia.
Análisis de secuencias
Las secuencias de los fragmentos amplificados fueron analizadas y comparadas con
la secuencia descrita para la gB de la cepa Cooper del BHV-1 (Whitbeck et al., 1988) a
través del «GCG program package» (Devereux et al., 1984). El cálculo de la frecuencia
de mutaciones fue establecido por la división del número de mutaciones encontradas por
el número total de nucleótidos secuenciados.
63
VARIABILIDAD GENÓMICA DEL BHV I
RESULTADOS
En la Fig. 1 se encuentra la secuencia de 433 nucleótidos del fragmento de la gB amplificado por la PCR de la cepa Cooper y su comparación con la secuencia del BHV-1 publicada en la literatura. Esta secuencia contiene 3.426 pb y la glicoproteína contiene aproximadamente 1.000 aminoácidos empezando el codón ATG en el nucleótido 384 y de ella
se ha secuenciado un fragmento de 433 nucleótidos entre las regiones 1.347 y 1.780 del
gen que codifica para la proteína, a que nosotros hemos nombrado bovineherpes.seq.
1301
CTACATGTCGCCCTTTTACGGGCTGCGCGAGGGCGCGCACCGCGAGCACA
1350
||||
1
..............................................................................................................................CACA
4
1351
CCAGCTACTCGCCGGAGCGCTTCCAGCAGATCGAGGGCTACTACAAGCGC
1400
5
CCAGCTACTCGCCGGAGCGCTTCCAGCAGATCGAGGGCTACTACAAGCGC
54
1401
GACATGGCCACGGGCCGGCGCCTCAAGGAGCCGGTCTCGCGGAACTTTTT
1450
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
55
GACATGGCCACGGGCCGGCGCCTCAAGGAGCCGGTCTCGCGGAACTTTTT
104
1451
GCGTACACAGCACGTGACGGTAGCC TGGGACTGGGTGCCCAAGCGCAAAA 1500
105
GCGTACACAGCACGTGACGGTAGCC TGGGACTGGGTGCCCAAGCGCAAAA 154
1501
ACGTGTGC TCGCTGGCCAAGTGGCGCGAGGCGGACGAAATGCTGCG AGAC 1550
155
ACGTGTGC TCGCTGGCCAAGTGGCGCGAGGCGGACGAAATGCTGCG AGAC 204
1551
GAGAGCCGCGGGAACTTCCGC TTCACGGCCCGC TCGCTC TCGGCGACC TT 1600
205
GAGAGCCGCGGGAACTTCCGC TTCACGGCCCGC TCGCTC TCGGCGACC TT 254
1601
TGTGAGCGACAGCCACACC TTCGCG TTGCAGAATGTGCCGC TGAGCGACT 1650
255
TGTGAGCGACAGCCACACC TTCGCG TTGCAGAATGTGCCGC TGAGCGACT 304
1651
GCGTGATCGAAGAGGCCGAGGCCGCGGTCGAGCGCGTCTA CCGCGAGCGC 1700
305
GCGTGATCGAAGAGGCCGAGGCCGCGGTCGAGCGCGTCTA CCGCGAGCGC 354
1701
TACAACGGCACGCACGTGCT GTCGGGCAGC TTGGAGACGTACCTGGCGCG 1750
355
TACAACGGCACGCACGTGCT GTCGGGCAGC TTGGAGACGTACCTGGCGCG 404
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
1751
CGGCGGCTTTGTCGTGGCC TTCCGGCCGATGCTCAGCAACGAGCTGGCCA
1800
|||||||||||||||||||||||||||||
405
CGGCGGCTTTGTCGTGGCC TTCCGGCCGA............................................................
433
Fig. 1.–Secuencias de nucleótidos del fragmento de la gB amplificado por PCR de la cepa del
BHV-1 (cepa Cooper) comparada con la secuencia del BHV-1 publicada y almacenada en el
GenBank (Whitbeck et al., 1988). Esta secuencia de 433 nucleótidos se ha denominado
bovineherpes.seq
Nucleotide sequence of a 511 bp PCR fragment from the glycoprotein gB gene of the BHV-1 (Cooper
Strain) compared with the sequence previously published (Whitbeck et al. 1988). This sequence of 433
nucleotides was denominated as bovineherpes.seq
Invest. Agr.: Prod. Sanid. Anim. Vol. 15 (1-2), 2000
64
N. DA SILVA et al.
Los resultados muestran una homología de un 100 % entre 16 cepas secuenciadas
(cepas 1, 2, 3, 4, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 y 19). En tres cepas clasificadas
como BHV-1.1, aisladas de casos con entidad clínica respiratoria (cepas M03, BV 246/5
y León), fueron detectadas diferencias que se muestran en la Fig. 2. La frecuencia de mutación es del orden de 3,6 × 10–4.
Cepa Cooper
1701
1748
TAC AAC GGC ACG CAC GTG CTG TCG GGC AGC TTG GAG ACG TAC CTG GCG
Tyr Asn Gly Thr
His
Val Leu
Ser
Gly
Ser Leu Glu Thr
Tyr Leu Ala
Cepa M03
1701
1748
TGC AAC GGC ACG CAC GTG CTG TCG GGC AGC TTG GAG ACG TAC CTG GCG
Cys Asn Gly Thr
His
Val Leu
Ser
Gly
Ser
Leu Glu Thr
Tyr Leu Ala
Cepa BV 246/5
1701
1748
TAC AAC GGC ACG CAC GTG CTG TCG GGC AGC CTG GAG ACG TAC CTG GCG
Tyr Asn Gly Thr
His
Val Leu
Ser
Gly
Ser Leu Glu Thr
Tyr Leu Ala
Cepa León
1701
1748
TAC AAC GGC ACG CAC GTG CTG TCG GGC AGC TTG GCG ACG TAC CTG GCG
Tyr Asn Gly Thr
His
Val Leu
Ser
Gly
Ser
Leu Ala Thr
Tyr Leu Ala
Fig. 2.–Alineamiento entre las secuencias de la gB de las cepas MO3, BV 246/5 y León del BHV-1
y la secuencia de la cepa Cooper publicada por Whitbeck y cols. (1988). Los nucleótidos están
numerados a la derecha de la secuencia (regiones 1701 y 1748). Observar las modificaciones en la
secuencia nucleotídica que dan lugar a cambios aminoacídicos
Alignment of the BHV-1 gB genomic sequences from MO3, BV 246/5 and León strains compared with
this described by Whitbeck et al. (1988) for the Cooper strains. Several changes in the nucleotidic
sequence corresponding to changes in the aminoacide composition were observed.
DISCUSIÓN
Las secuencias de nucleótidos de los fragmentos de la gB amplificados por la PCR de
las 19 cepas del BHV-1 fueron comparadas con la secuencia del BHV-1 (cepa Cooper)
publicada y almacenada en el GenBank (Whitbeck et al., 1988). Los resultados muestran
una gran homología entre las cepas secuenciadas.
En el caso de la cepa BV 246/5 se comprobó un cambio de una T (timina) por una C
(citosina) en el nucleótido 1731, correspondiente al codón inicial TTG que codifica para
el aminoácido leucina. Este cambio para CTG en el inicio del codón no significa una alteración en la estructura de la glicoproteína y se puede definir como una mutación silenciosa, una vez que los dos codones codifican para el mismo aminoácido. Sin embargo, en la
cepa M03, el cambio en la posición del nucleótido 1702 de una A (adenina) por una G
(guanina), posiblemente puede significar una modificación en la estructura de la glicoproteína gB, puesto que el nuevo codón TGC codifica para el aminoácido cisteína y no para
el aminoácido tirosina, como está descrito en la literatura (Whitbeck et al., 1988). Lo mis-
VARIABILIDAD GENÓMICA DEL BHV I
65
mo ocurre en relación a la cepa León donde en el nucleótido 1735 hay un cambio de una
A por una C, o sea un cambio de un ácido glutámico por una alanina.
La cepa M03 fue aislada en 1980 a partir de un caso clínico de IBR, sin embargo
fue sometida a muy pocos pases en cultivos celulares en laboratorio. De la misma manera, la cepa León ha sido aislada a partir de un caso agudo de enfermedad respiratoria.
Así, se puede considerar que estas cepas aún conservan sus características iniciales, no
siendo cepas que estén adaptadas a cultivos celulares. En cepas adaptadas a los cultivos
celulares no se detectaron alteraciones en los patrones de los RLFPs obtenidos por los
cortes con las ER como está descrito por diversos autores (Misra et al., 1983; Whetstone et al., 1989). Sin embargo, según Whetstone et al. (1993) el genoma de los BHV-1
está alterado después de pases por un animal huésped. Por otro lado, estas alteraciones
también ocurren después de una reactivación del virus tras permanecer en el estado de
latencia o en las superinfecciones asociadas con otras cepas del BHV-1 (Whetstone et
al., 1989).
Las diferentes manifestaciones clínicas resultantes de las infecciones por el BHV-1 y
la existencia de diferentes subtipos del virus, hacen suponer la posibilidad de que existan
variaciones en su genoma, responsables de diferentes grados de patogenicidad. Estudios
realizados por Whetstone et al. (1989) detectaron variaciones en el genoma de los
BHV-1.1 y BHV-1.2 en las regiones internas repetidas y en la parte izquierda del fragmento largo, caracterizadas por la existencia de diferentes RFLPs. Sin embargo estos autores trabajaron con pocas cepas, un total de siete en las que se incluyeron dos cepas aisladas en casos de encefalitis (BHV-5), lo que no excluye que puedan ocurrir otras variaciones en el genoma vírico en el fragmento largo de estos virus, a pesar de que el BHV-1 sea
un virus ADN.
Por tanto, aunque es posible que exista variabilidad en el genoma vírico, no se puede
establecer cual es el grado de alteración estructural resultante de este cambio de aminoácidos, detectado en este trabajo, una vez que solamente se ha secuenciado una parte del genoma de esta glicoproteína. Tampoco se puede estimar si esta alteración significa que estas cepas presentan un grado de virulencia diversificada de las otras cepas de BHV-1 aquí
secuenciadas y analizadas. Lo más correcto debe ser la secuenciación completa de todo el
genoma de la gI para establecer las diferencias entre estas dos cepas. A pesar de que Seal
et al. (1991) afirmaron no haber encontrado diferencias en la región del genoma de los
BHV-1 dónde se encuentra el gen de la gB, el análisis de toda la secuencia genómica de
esta glicoproteína revela diferencias entre la secuencia publicada de la cepa Cooper
(Whitbeck et al., 1988) y la cepa P-8.2 publicada por Misra et al. (1988). Por otro lado, la
propia frecuencia de mutaciones encontradas en este experimento sugiere que existen variaciones en el genoma de esta glicoproteína. Es posible que al analizar un mayor número
de cepas y, principalmente, si se hace una secuenciación a partir de cepas recién aisladas
de casos clinicos se puede detectar un cierto grado de variabilidad en el genoma de ésta y
quizás de otras glicoproteínas de este virus.
Finalmente, y en función de lo anteriormente expuesto, se puede deducir que es muy
probable que el grado de variabilidad detectado en algunas cepas del BHV-1 posiblemente esté relacionado con el pasaje del agente patógeno por los animales huéspedes, lo que
puede exacerbar la virulencia de las cepas del virus. Sin embargo, es necesario secuenciar
todo el genoma de esta glicoproteína para determinar el grado de extensión de estas alteraciones en el genoma y realizar el intento de correlacionar estos datos con la virulencia
de las cepas.
Invest. Agr.: Prod. Sanid. Anim. Vol. 15 (1-2), 2000
66
N. DA SILVA et al.
AGRADECIMIENTOS
Al Dr. E. Domingo por permitir realizar gran parte de este trabajo en su laboratorio del Centro de Biología
Molecular (CSIC-UAM).
SUMMARY
Variability in the bovine herpesvirus 1 genome among strains isolated from
clinical manifestations of IBR
The nucleotide and predicted amino acid sequence of a 511 bp fragment of the glycoprotein gB gene of a
bovine herpes virus (BHV-1) was determined and compared with 19 strains isolated in Spain and other countries. Strinking differences were observed between nucleotide sequences of the 3 strains (including two Spanish
strains) and that reported for BHV-1 (Cooper strain). The frequency of mutation was 3.6 × 10–4 as was observed
in strains isolated from clinical respiratory cases. These strains had been submitted to only a few passages in tissue culture, when compared with nucleotide sequences from conserved strains. The ability of the strains to change their amino acid sequences may suggested differences in the pathogenicity of the BHV-1.
KEY WORDS:
IBR
Bovine-Herpesvirus-1
Glycoprotein gB
Herpesvirus genome
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
BULACH D.M., STUDDERT M., 1990. Comparative genome mapping of bovine encephalitis herpesvirus, bovine herpesvirus 1, and buffalo herpesvirus. Arch. Virol., 113: 17-34.
CASTRO J.M., GÓMEZ-TEJEDOR C., DEL POZO M., SIMARRO I., SOLANA A., 1990. Aplicación de las
endonucleasas de restricción (fingerpriting) en la diferenciación de cepas vacunales de herpes-bovino tipo
1 (BHV-1). Med. Vet., 7 (4): 225-236.
DEVEREUX J., HAEBERLI P., SMITHIES O. 1984. A comprehensive set of sequence analysis programs for
the VAX. Nucleic Acids Res., 12: 387-395.
FRAPEL C., WIRTH U.R.S., VOGT B., SCHWYZER M., 1993. Immediate-Early transcription over covalently
joined genome end of bovine herpesvirus 1: the circ gene. J. Virol., 67(3): 1328-1333.
HAMELIN C., JACQUES C., ASSAF R., 1990. Differentiaton of vaccine and field strains of bovine herpesvirus type 1 by restriction endonuclease analysis. Jpn. J. Vet. Sci., 52 (3): 461-467.
HAMMERSCHMIDT W., LURZ R., LUDWIG H., BUHK H.J., 1990. Recombination of genomic terminus of
bovine herpesvirus type 1 with cellular DNA. J. Gen. Virol., 71: 2043-2051.
HERNÁN-PÉREZ M.L.S., RODRÍGUEZ G.F., RESPALDIZA E.Y., 1995. Cuadro clínico y lesiones. Bovis,
64: 41-50.
MISRA V., BABIUK L.A., DARCEL C. LE Q. 1983. Analysis of bovine herpes virus-type 1 isolates by restriction endonuclease fingerprinting. Arch. Virol., 76 (4): 341-354.
MISRA V., NELSON R., SMITH M., 1988. Sequence of a bovine herpesvirus type1 glycoprotein gene that is
homologous to the herpesvirus simplex gene for the glycoprotein gB. Virology, 166: 542-549.
SAMBROOK J., FRITSCH E.F., MANIATIS T., 1989. Molecular cloning. A laboratory manual, 2nd edition.
Ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York.
SANTURDE G., SILVA N., VILLARES R., TABARÉS E., SOLANA A., BAUTISTA J.M., CASTRO J.M.,
1996. Rapid and high sensitivity test for direct detection of bovine herpesvirus-1 genome in clinical samples. Vet. Microbiol., 49 (1): 81-92.
SEAL B.S., IRVING J.J., WHETSTONE C.A., 1991. Transcriptional analysis of the bovine herpesvirus 1 Cooper isolate: Temporal analysis and characterization of immediate-early, early and late RNA. Arch. Virol.,
121: 55-73.
VARIABILIDAD GENÓMICA DEL BHV I
67
SUÁREZ P., DA SILVA N., PRIETO C., CASTRO J.M., 1995. Aspectos epizootiologicos y patogenia de la infección por herpesvirus bovino tipo 1. Bovis, 64: 29-40.
WHETSTONE C.A., MILLER J.M., BORTNER D.M., VAN DER MAATEN, M.J., 1989. Changes in the bovine herpesvirus 1 genome during acute infection, after reactivation from latency, and after superinfection in
the host animal. Arch. Virol., 106: 261-279.
WHETSTONE C.A., SEAL B.S., MILLER J.M., 1993. Variability occurs in the inverted repeat region of genomic DNA from bovine herpesvirus 1 respiratory, genital and bovine herpesvirus 5 encephalitic isolates.
Vet. Microbiol., 38: 181-189.
WHITBECK J.C., BELLO L.J., LAWRENCE W.C., 1988. Comparison of the bovine herpesvirus 1 gI gene and
the herpesvirus simplex vírus type 1 gB gene. J. Virol., 62(9): 3319-3327.
Invest. Agr.: Prod. Sanid. Anim. Vol. 15 (1-2), 2000