1 MAMITIS Y CÉLULAS SOMÁTICAS EN CABRAS

Como citar este capítulo: CONTRERAS, A., MARTIN, A.G., AMORES, J., FÉ, C., CORRALES, J.C., S.A. Mamitis y células somáticas em cabras lecheras.
In: BARBOSA, S.B.P., BATISTA, A.M.V., MONARDES, H. III Congresso Brasileiro de Qualidade do Leite.
Recife: CCS Gráfica e Editora, 2008, v.1, p. 215-228.
MAMITIS Y CÉLULAS SOMÁTICAS EN CABRAS LECHERAS
Antonio Contreras, Angel Gómez Martín, Joaquín Amores, Christian De La Fe, Juan Carlos
Corrales, Antonio Sánchez,
Grupo de investigación Sanidad Caprina. Departamento de Sanidad Animal. Facultad
de Veterinaria. Universidad de Murcia. Campus de Espinardo, 30100 Murcia (España)
e-mail: [email protected]
INTRODUCCIÓN
Las mamitis son un problema de índole sanitario, que determinan una
disminución en la producción lechera, principal soporte económico de la explotación
caprina. Este argumento debería ser suficiente para abordar programas de control de
mamitis en las explotaciones caprinas, pero existen otros aspectos que justifican su
control, sobre todo basados en la calidad de la leche y la seguridad de los consumidores.
Por ello, algunos países han legislado determinadas normativas que persiguen vigilar y
mejorar la calidad de la leche y que la industria ha incorporado a sus esquemas de pago
de la leche, por lo que la existencia de estas normativas incrementa la importancia
económica de la calidad de la leche y refuerza el interés por el control de las mamitis.
Además, resulta muy necesario recordar la obligación de mantener un nivel sanitario
óptimo, en relación a las mamitis, en aquellos colectivos selectos que están incluidos en
programas de mejora genética. Esta mejora genética, en la que se invierte una gran
cantidad de esfuerzo, recursos económicos e implicación de los ganaderos, se hace
mediante la valoración de los parámetros productivos, que se ve directamente afectado
en los casos de mamitis. Por ello, es responsabilidad de sus gestores utilizar rebaños
que se encuentren en una situación óptima en cuanto a mamitis, o al menos, instaurar
programas de control de mamitis en los rebaños que se encuentren inscritos en el
programa de mejora.
Aunque en su inicio la mayoría de los esquemas de control de mamitis y
normativas legales se transponían de la experiencia con el ganado vacuno, actualmente
existe suficiente conocimiento que permite un tratamiento individualizado, no sólo de
los pequeños rumiantes, sino de la oveja y la cabra entre sí. Este trabajo revisará los
aspectos más específicos de las mamitis y la problemática asociada al elevado recuento
de células somáticas en el ganado caprino.
IMPORTANCIA Y CARACTERÍSTICAS DE LAS MAMITIS CAPRINAS
Mamitis clínicas
Las mamitis clínicas deben ser minimizadas en cualquier explotación
caprina moderna ya que anulan la producción lechera aprovechable y suponen un riesgo
zoonósico evidente para el consumidor. En los países en desarrollo donde no se realizan
tratamientos térmicos esto supone un riesgo elevado, pero no olvidemos que incluso en
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condiciones de pasterización, algunas toxinas termoestables pueden vehiculares a través
de los productos lácteos. Esto es particularmente frecuente ante la presencia de
Staphylococcus aureus, agente responsable de mamitis clínicas (que pueden llegar a ser
gangrenosas), pero también responsable de mamitis subclínicas y otras infecciones en el
ganado caprino. Tras la aparición de casos de mamitis clínicas graves, la afección de la
ubre puede ser irreversible, los tratamientos no consiguen recuperar la producción y los
animales pueden convertirse en portadores crónicos, por lo que la eliminación de los
mismos es a veces la decisión más acertada. La aparición de una mamitis clínica
coincidiendo con cabritos lactantes agrava las consecuencias del proceso, produciendo
una menor ganancia de peso en el cabrito o incluso favoreciendo infecciones que
pueden ser de índole septicémico en los casos graves.
La importancia de S. aureus no estriba únicamente en la gravedad de sus
cuadros clínicos agudos, sino en la presencia de portadores asintomáticos o animales
con mamitis subclínicas, pues pueden estar eliminando a través de la leche,
inadvertidamente, este agente junto con sus enterotoxinas termoestables Estas
enterotoxinas, pueden estar presentes en la leche y el queso pasteurizados y producir
intoxicaciones en los consumidores.
Entre otros patógenos responsables de mamitis clínicas en el ganado caprino
debemos destacar los micoplasmas. Las mamitis por micoplasmas, especialmente M.
agalactiae, pero también otras especies como Mycoplasma mycoides mycoides biotipo
LC y M. capricolum capricolum pueden suponer un verdadero problema para la
viabilidad productiva de la explotación, sobre todo cuando aparece de forma epidémica
y son necesarios programas específicos de lucha dada su complejidad diagnóstica,
epidemiológica (diseminación rápida y aparición de portadores) y de control (ausencia
de pared celular y resistencia a los antibióticos habituales). Estas especies de
micoplasmas, además de producir mamitis, producen otras afecciones sistémicas que se
agrupan en el síndrome conocido como agalaxia contagiosa (AC) de los pequeños
rumiantes, de distribución mundial y especialmente en la cuenca mediterránea, con una
triada sintomatológica basada en mamitis, artritis y queratoconjuntivitis, pero que puede
producir también otros síntomas entre los que destacan los respiratorios y los
reproductivos. La diferencia entre ambas especies de pequeños rumiantes estriba en que
la oveja se afecta mayoritariamente por M. agalactiae, mientras que el ganado caprino
se infecta por más especies de micoplasmas, entre las que se incluyen las arriba
mencionadas. A pesar de que la AC es una enfermedad que incluye otros síntomas
además de las mamitis, la vigilancia de las mamitis es el primer eslabón en los
programas de lucha contra la AC, especialmente en las zonas endémicas en las que la
enfermedad se manifiesta con menor intensidad.
Los bacilos Gram negativos son otro de los grupos importantes de agentes
responsables de mamitis clínicas en el ganado caprino y está representado
mayoritariamente por Pseudomonas spp, y por especies de la familia
Enterobacteriaceae, como Escherichia coli, Klebsiella spp. y Serraria spp, entre otros.
Dadas las características epidemiológicas del ganado caprino, los planes de
control de mamitis resultan más efectivos que en vacuno y ovino, cuando las
explotaciones están bien manejadas, si lo comparamos con el ganado bovino. Esta
mayor “resistencia” de la cabra a las mamitis se relaciona con una mayor tasa basal de
células somáticas, a las mejores condiciones ambientales en las que se suele
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desenvolverse el ganado caprino, y a una mayor facilidad de ordeño como consecuencia
de una elevada fracción de leche cisternal en la glándula mamaria caprina, a diferencia
de las otras especies rumiantes de aptitud láctea.
Mamitis subclínicas
La evidencia de una mamitis clínica juega a favor de su control, pero los
ganaderos no suelen ser conscientes de las pérdidas generadas por las mamitis
subclínicas, que suelen pasar inadvertidas y persistir en el tiempo. Además el hecho de
que la mayor parte de la leche de cabra se destine a fabricación de queso hace que la
disminución de su calidad disminuya el valor industrial de la leche procedente de
cabras con mamitis subclínicas. Diferentes autores han estimado que un 20% es una
buena aproximación a la pérdida de producción de leche que producen las infecciones
subclínicas que, como ya hemos indicado, persisten en el tiempo. Aunque la etiología
de las mamitis subclínicas es diversa, un porcentaje mayoritario de los casos son
causados por especies de estafilococos coagulasa negativos (ECN) (Tabla 1). En
muchas ocasiones un aumento de casos de mamitis subclínicas debidas a ECN va a estar
relacionado con una alteración de las rutinas y condiciones de ordeño. Aunque en una
primera etapa las explotaciones de ganado caprino fueron heredando la tecnología y los
materiales desarrollados para vacuno lechero primero y para ovino lechero después, en
la actualidad existe en el mercado una aceptable especificidad en cuanto a materiales y
tecnología de ordeño para el ganado caprino. Esta especificidad no solo respeta los
parámetros de ordeño aceptables para esta especie en cuanto a pulsación, nivel de vacío
y relación de pulsación (90 a 120 ppm y 38-42 Kpa, y 60-40 ó 50-50 respectivamente)
sino que ya hay todo un mercado de pezoneras y otro tipo de material específicamente
adaptado para ella. Por ello, superadas las primigenias limitaciones técnicas en el
ordeño del ganado caprino, hoy en día una explotación con ordeño mecánico intensiva,
puede satisfacer los mejores niveles de rendimiento en tiempo y adecuación al objetivo
productivo, con una evidente mejora en las condiciones del trabajo de los operarios.
Control de las mamitis caprinas
Con independencia de la motivación que los ganaderos puedan tener para
abordar programas de control de mamitis subclínica, la realidad normativa de algunos
países está imponiendo un control indirecto de las mamitis como consecuencia de la
aparición de reglamentaciones basadas en los recuentos celulares, y de los que
hablaremos en el siguiente apartado. Es de destacar que aunque los estamentos
nacionales responsables de poner en marcha las correspondientes normativas suelen
establecer los programas a largo plazo, la industria reacciona rápidamente e impone
condiciones al pago de la leche en relación a la normativa de referencia, lo que genera a
su vez una reacción en los colectivos de ganaderos que necesitan mejorar la sanidad
mamaria de sus animales para obtener un mejor precio por su leche.
Los programas de control de mamitis son esfuerzos a largo plazo en los que
hay que combinar diferentes infraestructuras y equipos técnicos entre los que pueden
encontrarse los técnicos de campo, laboratorios interprofesionales, técnicos del control
lechero o de la mejora genética de la raza en cuestión, pero en los que hay que
involucrar en primera fila al ganadero. En una gran parte de las situaciones un manejo
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TABLA 1: Porcentajes de especies de estafilococos aislados de mamitis subclínicas caprinas (tomado de Contreras et al., 2007)
Staphylococcus
spp.
S. aureus
Poutrel
1984
(n=218)
Maisi,
1990
(n=198)
Contreras et al.,
1995
(n=49)
Deinhofer &
Pernthaner, 1995
(n=303)
Poutrel et al.,
1996
(n=2641)
Contreras et al.,
1997
(n=130)
Leitner et al.,
2004b
(n=79)
-
KalogridouVassiliadou,
1991
(n=665)
3.1
11
Moroni et al.,
2005
(n=1529)
4.1
-
-
-
32.9
N.C.
-
4.1
-
18
-
6.1
-
17.6
-
19.7
-
7.7
-
-
7.3
47.7
19.7
2.8
0.9
44.5
0.5
-
14.7
13.2
4.5
3.6
20.4
8.2
22.5
12.3
4.1
32.3
2.6
16.5
1.3
-
27.4
18.8
6.9
4.6
9.2
10.8
23
0.7
13.9
2.5
3.8
-
37.5
1.4
10.1
-
2
11.6
26.3
2
3
-
6
12.1
9.9
1.9
-
2
8.2
2
2
1.3
2.3
8.9
0.7
1
4.3
17.7
-
2.4
5.4
7.7
-
7.6
-
0.4
-
3.6
2
-
-
-
-
-
-
7.8
-
0.3
-
-
-
3.2
0.5
-
-
0.7
-
0.7
-
2.8
1.5
-
6.1
1.6
5.2
23.8
39.2
-
-
1.6
-
12.9
-
4.6
-
S. auricularis
ECN
Novobiocinasensibles
S. epidermidis
S. capitis
S. caprae
S. chromogenes
15.2
17.2
S. haemolyticus
S. hominis
S. hyicus
S. intermedius
S. lugdunensis
S. simulans
S. warneri
9.3
13.5
S. arlettae
S. cohnii
S. saprophyticus
ECN
Novobiocinaresistentes
S. sciuri
S. xylosus
S. lentus
N.C. No considerados
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higiénico y correcto del ordeño, con equipos específicos y bien regulados, y una buena
higiene de las instalaciones y de las condiciones generales de los animales son
suficientes para reducir las mamitis subclínicas caprinas por debajo de niveles
inalcanzables para el ganado vacuno. Además de estas condiciones de manejo optimas,
la realización rutinaria del baño o pulverización del pezón tras el ordeño con u na
solución desinfectante (yodo, clorhexidina, etc.) resulta una estrategia indispensable
para proteger de nuevas infecciones intramamarias a las cabras (disminución de la
incidencia). En nuestro ámbito (cabra Murciano-Granadina) la instauración de la
lactancia artificial como medida de control de otras infecciones en los animales de
reposición ha mejorado sustancialmente la salud mamaria. El cabrito lactante supone un
factor de riesgo para la salud de la ubre, tanto por su papel en las lesiones que produce
en la glándula mamaria como por ser portador de infecciones. Este papel de portador de
patógenos no sólo tiene importancia en la transmisión vertical de la infecciones sino que
también tiene carácter horizontal ya que los cabritos maman de otras hembras además
de su madre.
El diagnóstico etiológico de las infecciones presentes en cada explotación es
una base necesaria para afrontar específicamente los problemas. Recurrir a un
laboratorio de diagnóstico supone una importante inversión de recursos y si bien no
siempre está al alcance de todos lo ganaderos de forma individual, si que se pueden
articular estrategias en base a los programas para la mejora de la calidad de la leche.
Estos programas colectivos pueden tener diferente estructura como son las de las
cooperativas de comercialización de la leche, empresas particulares de recogida y
transformación de la leche o incluso los núcleos para el control lechero. Aprovechando
estas infraestructuras, contando con la complicidad del ganadero, se pueden ir
realizando seguimientos de los recuentos celulares de todo el rebaño (leche de tanque),
individuales (control lechero periódico) pero también articular un sistema para recogida
de información y procesado laboratorial de las muestras de las mamitis clínicas. La
toma aséptica de la muestra de leche es una condición indispensable para su posterior
envío al laboratorio. La congelación de las muestras hasta su procesado laboratorial
permite un diagnóstico viable mediante cultivo de los principales patógenos
involucrados en las mamitis caprinas (ECN y bacilos gram negativos) y la
determinación de micoplasmas mediante PCR. La información generada con este
sistema, no sólo es una primera barrera de vigilancia de patógenos importantes (S.
aureus, Pseudomonas spp., Mycoplasma spp.) sino que va a permitir reorientar los
tratamientos antibióticos en el secado para luchar contra las infecciones intramamarias y
evitar el uso innecesario de antibióticos. La terapia antibiótica en el ganado caprino
debe ser la última estrategia introducida en un programa de control de mamitis y hacerse
de forma controlada para evitar la contaminación de la leche con residuos de inhibidores
y la aparición de resistencias. Una incorrecta aplicación de la cánula no sólo puede
lesionar el epitelio y favorecer infecciones sino que a veces puede desencadenar
procesos colectivos (en todos los animales tratados) cuando este tratamiento no se ha
realizado con las debidas garantías, como los brotes de mamitis por Aspergillus spp. o
por Pseudomonas spp. Hay que tener en cuenta que el tratamiento antibiótico en el
secado no parece tener efecto en disminuir la incidencia de infecciones intramamarias
(prevención de nuevas infecciones) y que el grado de autocuración es elevado (Tabla
2). Por ello, es razonable limitar y controlar el uso de antibióticos en las cabras lecheras
a las situaciones realmente necesarias, y que deben ser marcadas por el veterinario
especializado.
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TABLA 2. Validez del tratamiento antibiótico del secado para disminuir la prevalencia
(curación de infecciones presentes) y la incidencia (prevención de nuevos casos)
Patógenos
Global
Global
SCN
P. mayores
Patógenos
Total
Total
Tasas de curación tras antibioterapia de secado en cabras.
Curaciones (%)
Fuente
Lote Control
50.0
19.7
25.0
Lote Tratado
78.9
72.5
77-88.5
66.6-100
Fox et al., 1992
Corrales et al., 1998
Poutrel et al., 1997
Tasa de nuevas infecciones tras la antibioterapia de secado en cabras.
Nuevas Infecciones (%)
Fuente
Lote Control
4.2
9.7
Lote Tratado
6.7
12.1
Fox et al., 1992
Corrales et al., 1998
RECUENTO DE CELULAS SOMÁTICAS EN LECHE DE CABRA
Importancia de las células somáticas
El recuento de células somáticas (RCS) es un indicador ampliamente
utilizado para definir la calidad de la leche y, por lo tanto, para establecer el precio de la
leche por parte de la industria. Tras una infección intramamaria, y la consiguiente
inflamación, existe un incremento significativo del RCS, pero en el ganado caprino
otros factores no infecciosos pueden tener un importante efecto sobre el RCS. Durante
décadas ha habido mucha confusión en relación a la naturaleza y aplicabilidad del RCS
en el ganado caprino debido a la ausencia de estudios específicos y a la extrapolación de
los conocimientos obtenidos en el ganado vacuno.
Características de la secreción láctea caprina en relación con el recuento celular
Una de las características específicas de la secreción láctea caprina es su
naturaleza mayoritariamente apocrina, en oposición a la naturaleza marcadamente
merocrina de la oveja y de la vaca. Como consecuencia de este carácter apocrino, la
secreción láctea caprina es extremadamente rica en partículas citoplasmáticas (PC) que
pueden alterar los recuentos celulares cuando las técnicas de recuento o tinción no son
específicas de ADN. Estas PC alcanzan un tamaño similar a los leucocitos presentes en
la leche pero son fácilmente diferenciables por su ausencia de material nuclear, aunque
un pequeño porcentaje de éstas (menos del 1%) pueden albergar restos de ADN
Otra de las confusiones originadas en relación al RCS era una supuesta
participación del componente epitelial (no inflamatorio) en la secreción láctea caprina,
que ha persistido en la bibliografía. Esta naturaleza “epitelial” puede tener su origen en
la utilización inadecuada de técnicas de tinción, o recuento celular automatizado, que no
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es específico de ADN. Los contadores de partículas (“tipo Coulter”) utilizados
inicialmente para el RCS en ganado vacuno y algunas técnicas de tinción avaladas por
la legislación internacional (tinción de Breed) no diferencian las PC de las células
inflamatorias y sobrevaloran los RCS caprino. Por ello es imprescindible, para trabajar
con ganado caprino, utilizar técnicas específicas de ADN (verde metilo-rojo pironina;
tricómico de Gallego, …) o contadores del tipo fluor-opto-electrónico que no inducen a
estos errores. Una de las técnicas de campo habitualmente utilizadas para trabajar en
programas de control de mamitis (el Test de California, CMT) no se ve influenciada por
la naturaleza apocrina de la secreción mamaria caprina por lo que puede ser utilizada sin
problemas, si bien será necesario adaptarse al elevado nivel basal celular de la cabra.
Factores de variación del recuento celular caprino y consecuencias prácticas
El elevado recuento celular de la cabra es una característica que define de
forma diferencial el RCS en esta especie. Como puede observarse en la tabla 3, en
diferentes estudios los RCS de las cabras sanas pueden encontrarse muy elevados, sobre
todo si lo comparamos con los criterios habitualmente utilizados en bovino u ovino.
Para entender estos resultados hay que tener en cuenta la falta de estandarización de los
estudios que valoran la infección intramamaria (IMI) por lo que sólo deberíamos
comparar estudios realizados con similar metodología. Entre estos factores, destaca la
necesidad de establecer el umbral para considerar la glándula infectada (unidades
formadoras de colonias en relación al tamaño del inóculo), tipo de patógeno (menor o
mayor), tipo de infección (puntual o persistente) y expresión de los resultados (media
geométrica y media aritmética). Si bien todos los autores coinciden en destacar que el
IMI es el principal factor del incremento del RCS caprino, también indican que otros
factores no infecciosos pueden producir importantes elevaciones del recuento celular,
incluso tan elevadas como las inducidas por la IMI. Entre estos debemos destacar la
edad del animal y el momento de lactación, pero también otros factores han sido
considerados como el celo, el número de cabritos nacidos, vacunaciones, estrés
alimentario, etc. Una de las explicaciones para integrar todas estas variaciones es el
volumen de leche producida, que produce un efecto concentración de los leucocitos que
migran desde el sistema circulatorio al lumen alveolar, pero otras explicaciones como
interacciones hormonales han sido también estudiadas. Sin lugar a dudas, los factores
que suponen un estrés para la cabra producen un efecto sobre la producción de leche, lo
que incrementa de forma indirecta el RCS, ya que este se expresa en céls/ml de leche.
Esta relación del RCS con el momento productivo se refleja de forma estacional, ya que
en la mayor parte de las cuencas productivas suele existir una estacionalidad de los
partos.
A veces estas variaciones son tan importantes, especialmente al final de la
lactación, que algunos autores han propuesto que no se utilice el RCS en el ganado
caprino en estas etapas productivas y algunos proponen que no se utilicen nunca. En
nuestra experiencia entendemos que el RCS en el ganado caprino tiene un valor más
limitado que en otras especies pero es una aceptable referencia que puede tenerse en
cuenta cuando se disponen de los RCS de los animales (control lechero), aunque no
deberían utilizarse de forma aislada los RCS de animales a final de lactación, ni realizar
tampoco pruebas basadas en el CMT en este periodo por falta de validez diagnóstica.
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Aunque son varios los efectos del elevado RCS en el ganado caprino, la
principal consecuencia va a residir en la pérdida de precio de la leche. Algunos
componentes de la leche parecen afectarse con el incremento del RCS, aunque existen
aún algunas controversias por resolver. En general, con el incremento del RCS
aumentan las proteínas séricas, inmunoglobulinas, sodio, potasio y cloro, mientras que
otros elementos no varían (pH, sólidos totales y caseínas) y existen resultados
discrepantes para otros parámetros como lactosa, grasa y proteínas totales. Para
profundizar en los efectos analíticos, sanitarios, productivos y tecnológicos de los RCS
de la cabra (y de la oveja) recomendamos la revisión de Raynal-Ljutovac et al., (2007).
Con independencia de los efectos del RCS en la industria quesera, el efecto de los
elevados recuentos, especialmente con carácter estacional, lo están padeciendo los
ganaderos de países con normativas muy restrictivas, como EEUU (1,000,000 céls/ml)
y también aquellos a los que la industria aplica penalizaciones al precio de la leche en
función del RCS (táctica frecuente en países europeos). Esta situación ha
desencadenado un incremento del control de las mamitis caprinas en estos países,
aunque siempre se deberían hacer valer las características diferenciales del ganado
caprino y no igualar los umbrales para ambas especies de “pequeños rumiantes”
TABLA 3. Recuentos celulares caprinos en cabras sanas e infectadas 1,2
Cells × 103/ml
Tipo Sana
Fuente
Infectada
Dulin et al., 1982
Dulin et al., 1983
Poutrel and Lerondelle, 1983
MA
MG
MA
0280
0481
0614
1690
1778
1293
Timms and Schultz, 1985
Lerondelle et al., 1992
Kalogridou-Vassiliadou et al., 1992
MG
MA
MA
0337
0520
0270
0659
1040 ECN
3800
Wilson et al., 1995
Contreras et al., 1996
LS
MG
MA
MA
MG
MA
MA
MG
MG
MA
MG
MA
MA
MG
MG
SCS
MG
0303–650
0396
1115
1235
0493
0973
0349–571
1059
0272
0687
0341
0938
0332
2000
645
3,9
2259
373–800
0873
1909
2186
1078 ECN– 2731 PM
1564ECN– 3591 PM
1900–3393
2511
0932 ECN– 2443 PM
1462ECN - 4213PM
1218
2147
0708
2500
1023ECN – 4073 PM
5,6
4761
Corrales et al., 1996
De Cremoux et al., 1996
Ferrer et al., 1996
Le Mens et al., 1996
Poutrel et al., 1996
Sánchez et al., 1996
Vihan, 1996
Contreras et al., 1997
Luengo et al., 2004
Moroni et al., 2005
Min et al., 2007
1
Adaptado de Paape et al., 2001.
MA = Media Aritmética MG = Media Geométrica LS = linear score; ECS = Glándulas
infectadas con Estafilococos coagulasa negativos PM = glándulas infectadas con patógenos
mayores.
2
Disponível em: http://www.cbql.com.br/biblioteca.php
8
Como citar este capítulo: CONTRERAS, A., MARTIN, A.G., AMORES, J., FÉ, C., CORRALES, J.C., S.A. Mamitis y células somáticas em cabras lecheras.
In: BARBOSA, S.B.P., BATISTA, A.M.V., MONARDES, H. III Congresso Brasileiro de Qualidade do Leite.
Recife: CCS Gráfica e Editora, 2008, v.1, p. 215-228.
Por último no hay que olvidar la necesidad de estandarizar la metodología de
conservación de la muestra y determinación del RCS en leche de cabra. Así, entre las
condiciones analíticas que contribuyen de forma significativa a la variación de los
valores del RCS, determinados en leche de cabra mediante contadores celulares basados
en citometría de flujo, se han identificado la temperatura de almacenamiento, el
conservante utilizado y la interacción de dichos factores en relación con el tiempo de
almacenamiento. En relación con los conservantes, las muestras adicionadas con
Bronopol presentan valores de RCS superiores a los obtenidos en las muestras sin
conservante y en aquellas tratadas con Azidiol. Para explicar dicho efecto, observado
previamente en leche de oveja, se ha propuesto que el BR permite una mayor
penetración del bromuro de etidio en el interior de las células determinando señales
fluorescentes de mayor intensidad en los contadores fluoro-opto electrónicos. En
condiciones prácticas, la elección del tipo de conservante dependerá de la estrategia de
conservación de las muestras. Así, cuando las muestras se procesan en 24-48 horas
cualquiera de los dos conservantes resultan igualmente válidos, si bien el azidiol
permite además la determinación de residuos de inhibidores. Sin embargo, si el periodo
de conservación necesita ser más prolongado las muestras con BR pueden ser
conservadas en refrigeración hasta 25 días, o congeladas durante periodos superiores.
AGRADECIMIENTOS
Al proyecto AGL2006-03105GAN, financiado por la
Dirección General de
Investigación (Ministerio de Educación y Ciencia, España) y al proyecto 05693/PI/07,
financiado por la Fundación SENECA (Agencia Regional de Ciencia y Tecnología de la
Región de Murcia, España)
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