Caracteristicas morfologicas y aislamientos de Cercospora

CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS
Y AISLAMIENTOS DE Cercospora sojina
Dra. Alicia Luque
CEREMIC
(Centro de Referencia de Micología)
Fac. Cs. Bioq. y Farm. UNR
E-mail: [email protected]
Taxonomía de Cercospora sojina Hara
Dentro del género Cercospora se han nombrado más de 3000
especies (Pollack, 1987). Recientemente ese número fue
reducido a 659 especies (Crous & Braun 2003), con 281
especies consideradas morfológicamente indistinguibles de
Cercospora apii
El género Cercospora es reconocido como uno de los
géneros más grandes dentro de los Hyphomycetes
Taxonomía de Cercospora sojina Hara
Cercospora género de hongos anamórficos (asexuados) vinculado
con ascomicetes teleomorfos (sexuados) relacionados a
Mycosphaerella
CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA:
Phylum : Ascomycota.
Clase: Dothideomycetes.
Orden: Capnodiales.
Familia: Mycosphaerellaceae.
Género: Cercospora .
Especie: sojina.
El estado sexuado de este hongo hasta el momento es desconocido.
Taxonomía de Cercospora sojina Hara
Cercospora sojina presenta gran número de razas que difieren en
su capacidad de causar enfermedad en un amplio rango de
genotipos de soja
Es un hongo genéticamente muy variable
Esto nos indica la posible existencia de reproducción sexuada
en C. sojina
Los estudios genéticos realizados en Cercospora beticola
sugieren que algunas poblaciones se reproducen sexualmente
(Groenewald et al., 2007)
Caracteres morfológicos de Cercospora sojina
Macromorfología
APG
AZ
Temperatura: 25°C± 1°C
Luz
Caracteres morfológicos de Cercospora sojina
Micromorfología
Conidióforos: 52-120 x 4-6 µm
Conidios: 0-10 septos,
24-108 x 3-9 µm
Rango más frecuente:
40-60 x 6-8 µm
Tamaño y forma de los conidios y
conidióforos puede variar
dependiendo del sustrato
Chupp, 1953
Caracteres morfológicos de Cercospora sojina
Micromorfología: Conidios
Cercospora sojina
Conidios: 0-10 septos,
24-108 x 3-9 µm
Cercospora kikuchii
Conidios: 0-22 septos, 50-375 x 2.5-5 µm
Caracteres morfológicos de Cercospora sojina
Lesiones foliares- Micromorfología: Conidióforos
Conidióforos: 110 a 203 µm.
Caracteres morfológicos de Cercospora sojina
Lesiones foliares- Micromorfología: Conidios
Conidios: 1-9 septos, 26-111
(47,3 ± 14,7)×5,2-7,4 µm (6,1 ± 0,7)
Métodos de aislamiento de Cercospora sojina
Aislamiento a partir de lesiones foliares, de tallos y vainas
Transferencia directa de conidios, a medios de cultivo agarizados:
1. Se seleccionan las lesiones más esporuladas de C. sojina y con el menor grado
de microorganismos contaminantes, observados bajo microscopio esterescópico.
2. Posteriormente se toman conidios con la aguja histológica con un trocito de
medio de cultivo, dentro de una cámara de flujo laminar.
3. Se distribuye el trocito agarizado en forma de estrías en una placa de APGS. Se
incuban a 25ºC ± 2ºC, con 12 hs de luz fluorescente y 12 hs de oscuridad.
Este método ha demostrado ser el más exitoso
Carmona, Formento, Scandiani 2010 en prensa
Métodos de aislamiento de Cercospora sojina
Aislamiento a partir de lesiones foliares, de tallos y vainas
Trocitos de tejidos previamente desinfestados superficialmente :
I.
Aislar en medios de cultivo: APG 2% acidificado, Agar Extracto de
Tomate (AET) y Agar Caldo de Verduras (ACV).
Incubar a 26°C ± 3°C durante 48 hs en oscuridad y luego en
condiciones de mesada de laboratorio durante 10 días.
II.
Los trocitos de tejido vegetal se pueden colocar en cámara húmeda
para lograr fructificaciones del hongo a las 48 horas y transferir las
estructuras a medio de cultivo.
Carmona, Formento, Scandiani 2010 en prensa
Métodos de aislamiento de Cercospora sojina
Aislamiento a partir de lesiones foliares, de tallos y vainas
Debido a que Cercospora sojina crece más lentamente que otros
microorganismos contaminantes
Observar los cultivos cada 2 días, durante 10 días para detectar
colonias sospechosas de Cercospora sojina, las cuales deben ser
repicadas en forma inmediata
Método de dilución en placa
Cultivos puros
Carmona, Formento, Scandiani 2010 en prensa
Métodos de conservación de Cercospora sojina
Subcultivos periódicos
Crecimiento en medios de cultivo apropiados y transferencia periódica
a medio de cultivo fresco
En agar
En agua
Agar V8 a 25°C en oscuridad transferido cada 30 día s,
para mantener la esporulación
bloques de agar sumergidos
en agua estéril
a temperatura ambiente
En agar bajo capa de aceite
columna de agar con
capa de aceite mineral
Luque, Tartabini, Lo Piccolo
Aislamientos argentinos de Cercospora sojina
depositados en la Colección de Cultivos del CEREMIC
147 aislamientos
Aislados de semillas: 9
Aislados de hojas: 138
4 2
28
63 19
31
Tucumán
Sgo. Del Estero
E. Ríos
Sta. Fe
Córdoba
Bs. As.
Luque, Tartabini, Lo Piccolo
Aislamientos argentinos de Cercospora sojina
Caracteres morfológicos
Condiciones de incubación:
Medios de cultivo: Agar papa glucosa, Agar harina de avena, Agar zanahoria,
Agar hojas de zanahoria, Agar V8, Agar plantas senescentes de soja.
Temperatura: 25°C± 1°C
Iluminación: Luz continua, Luz oscuridad alternados, Oscuridad continua.
Obtener cultivos esporulados
Mejorar la conservación de los aislamientos
Realizar ensayos de patogenicidad
Estudiar el comportamiento de los genotipos de soja
Realizar pruebas de fungitoxicidad para controlar al patógeno
La transferencia de conidios en lugar de micelio produce
cultivos más esporulados
Luque, Tartabini
Aislamientos argentinos de Cercospora sojina
Caracteres macromorfológicos
AZ
AV8
APG
Luz
Mayor velocidad
de crecimiento
Oscuridad
Aislamientos seleccionados de las distintas provincias
presentaron caracteres macromorfológicos similares
Luque, Tartabini
Caracteres morfológicos de Cercospora sojina
Cultivos- Micromorfología: Conidios
Conidios: 1-9 septos,
20-125 x 3-8 µm
AZ AV8
Luque, Tartabini
Aislamientos argentinos de Cercospora sojina
Caracteres morfológicos: micromorfología
Temperatura: 25°C± 1°C
Medios de cultivo
Cantidad de conidios
(Esporulación)
Iluminación
AZ
AV8
APG
Luz continua
Oscuridad continua
Longitud media: 48,8-62,7µm
Conidios
Ancho medio: 5,0-6,4µm
Aislamientos seleccionados de las distintas provincias
presentaron caracteres micromorfológicos similares
Luque, Tartabini
Aislamientos argentinos de Cercospora sojina
Caracteres morfológicos
SNA
Temperatura: 25°C± 1°C
Luz
Luque, Tartabini
CARACTERÍSTICAS
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS
MORFOLÓGICAS Y
Y AISLAMIENTOS
AISLAMIENTOS DE
DE
Cercospora
Cercospora sojina
sojina
Observación:
Lupa estereoscópica
Microscopio
Reconocimiento de
caracteres morfológicos de
Cercospora sojina
Aislamiento:
Obtención de cultivos
puros y esporulados
Medios de cultivo
T. de incubación
Iluminación
Conservación
adecuada
CARACTERÍSTICAS
CARACTERÍSTICAS MORFOLÓGICAS
MORFOLÓGICAS Y
Y AISLAMIENTOS
AISLAMIENTOS DE
DE
Cercospora
Cercospora sojina
sojina
Aislamientos de Cercospora sojina
Estudios taxonómicos
Taxonomía clásica
Taxonomía molecular
Ensayos de patogenicidad
Estudios del comportamiento de los genotipos de soja
Pruebas de fungitoxicidad
Realización de investigaciones con aislamientos locales
para dar soluciones concretas a nuestros problemas