Baja frecuencia de Clostridium tetani en suelos de la Meseta

234
Rev Biomed 1997; 8:234-236.
Comunicación Breve
Baja frecuencia de Clostridium
tetani en suelos de la Meseta
Central de Costa Rica.
Evelyn Rodríguez C., María del M. Gamboa.
Laboratorio de Anaerobios, Facultad de Microbiología, Universidad de Costa Rica, Costa Rica, Centro
América.
RESUMEN.
Introducción. Clostridium tetani, el agente causal
del tétanos, es un bacilo Gram positivo, anaerobio
estricto, que se encuentra en intestino de animales
y en suelos. Su frecuencia en suelos varía desde un
11 a un 53%. Este patógeno se aisló en el 7% de
muestras de suelo costarricense analizadas
previamente; se desconoce si esa baja prevalencia
es real o si obedece a los procedimientos de selección
empleados.
Material y Métodos. En este estudio se reanalizaron
treinta muestras de suelo de la Meseta Central de
Costa Rica, empleando un ensayo biológico en
ratones con el fin de determinar las muestras
toxigénicas. Para el aislamiento de C. tetani de esas
muestras se utilizó una combinación de métodos
que incluyó sonicación y calentamiento a 60 °C por
10 minutos, así como también el crecimiento tipo
"swarming", característico de la especie.
Resultados. Se aisló C. tetani en una muestra
adicional no detectada previamente y se confirmó
su presencia en otra de las muestras toxigénicas. No
se intentó el aislamiento de la cepa no toxigénica
que se había detectado en el estudio anterior. Por
tanto, se obtuvieron un total de tres muestras
positivas (10 %) por de C. tetani.
Discusión. Estos resultados confirman la baja
prevalencia de la bacteria en los suelos analizados.
Esto podría explicarse por el bajo pH de las muestras
en estudio y se correlaciona, entre otros factores,
con los pocos casos de tétanos en Costa Rica.
Palabras clave: Clostridium tetani, tétanos, suelo.
SUMMARY.
Low prevalence for Clostridium tetani in soil
samples from the central plateau of Costa Rica.
Introduction. C. tetani, the causative agent of
tetanus, is a strict anaerobic Gram positive bacillus
found in animal intestine and soil. Its prevalence
varies from 11 to 53% in soil samples. This pathogen
was isolated in 7% of Costa Rican soil samples,
previously analized, but it is unknown whether this
Solicitud de sobretiros: MSc. Evelyn Rodríguez C., Fac. de Microbiología, Universidad de Costa Rica, Ciudad Universitaria "Rodrigo Facio", Costa
Rica. Tel.-Fax: 225-2374, Correo electrónico: [email protected]
Recibido el 12/Junio/1997. Aceptado para publicación el 31/Julio/1997.
Revista Biomédica
235
Clostridium tetani en suelos de Costa Rica.
low prevalence is real or due to the methodology
employed.
Material and methods. Thirty soil samples from
the Central Plateau of Costa Rica were re-analyzed,
employing the toxin mouse assay, a sensible and
specific methodology for C. tetani. Methods for
isolation including sonication, heat treatment and
swarming capacity were used.
Results. C. tetani was isolated from a toxigenic
sample and from an additional sample not detected
before. The isolation of the non toxigenic strain
found in the previous study was not intended.
Therefore, three (10%) positive samples for C.
tetani were obtained.
Discussion. These results confirm the low
prevalence of this pathogen. This may be due to the
low pH of the soil samples analyzed and it correlates
with the few reported tetanus cases in Costa Rica .
Key words: Clostridium tetani, tetanus, soil.
Clostridium tetani es un bacilo Gram positivo,
esporulado, anaerobio estricto, de crecimiento
fastidioso. Este agente puede pasar inadvertido en
una placa de cultivo, ya que no forma colonias
discretas, sino que por el contrario crece formando
una película muy tenue, fenómeno conocido como
"swarming" (1,2). Es ubicuo en el suelo (1) y se ha
encontrado en heces de animales, en ambientes
hospitalarios y en heridas (3). Su prevalencia en
suelos de diferentes regiones del planeta oscila
entre 11 y 53% (4-10). Sin embargo, en un estudio
previo (11, 12) se aisló sólo en el 7% de los suelos
analizados de la Meseta Central, Costa Rica. Esa
baja prevalencia pudo deberse a la metodología
empleada (calentamiento a 60°C por 10 minutos y
tratamiento con etanol al 50% por 30 minutos),
pues estaba orientada al aislamiento de las diferentes
especies de Clostridium. Esto podría haber afectado
el aislamiento de algunas especies más susceptibles
del género, entre ellas C. tetani (1, 4).
Se reanalizaron las mismas muestras de suelo
buscando la toxina tetánica mediante un ensayo
biológico, lo que representa una metodología más
sensible y específica para C. tetani (1). Las muestras
se inocularon en caldo de carne cocida (CC) con
glucosa, se incubaron a 35°C por 4 días y se
centrifugaron a 10 000 G. Se realizaron las pruebas
de toxigenicidad y neutralización en ratón de acuerdo
con la metodología de Dowell y Hawkins (13),
empleando antisueros antitetánicos y antibotulínicos
polivalentes. De las muestras con efecto toxigénico
se intentó aislar C. tetani mediante la combinación
de dos de los métodos más utilizados para tal fin (1,
5), como se describe a continuación. Se
homogeneizó un gramo de tierra en 5 mL de
solución salina estéril y se inoculó 1.5 mL de esa
mezcla en caldo CC prerreducido. Se sonicó el
resto de la suspensión durante 30 segundos
(PRANSOR MOD-450), se calentó a 60°C durante
10 minutos y se inoculó 1.5 mL en caldo CC
prerreducido; ambos tubos de caldo CC se incubaron
a 35°C por 24 h. Posteriormente se tomó una asada
de cada tubo y se inoculó por estría en la periferia
de un plato de agar sangre fresco que se incubó a
R
35°C en anaerobiosis (Gas Pak ) por 24 h. Se tomó
una asada del borde de la película de crecimiento
(tipo swarming) y se inoculó por rayado en un plato
de agar sangre (4% de agar) para favorecer la
formación de colonias discretas (1) y se incubó en
anaerobiosis a 35°C por 48 h. Las colonias aisladas
se identificaron de acuerdo con el procedimiento
descrito por Cato y col. (3). Paralelamente se
hicieron pruebas de patogenicidad y neutralización
en ratones (13).
Los sobrenadantes de cuatro muestras fueron
toxigénicos; dos se neutralizaron con antitoxina
tetánica y dos con suero polivalente antibotulínico
que correspondieron a toxina de C. botulinum A,
pues se neutralizaron con el suero específico contra
ésta. Se confirmó la presencia de C. tetani mediante
aislamiento de cepas toxigénicas a partir de las dos
primeras muestras. No se logró aislar C. botulinum
de las otras dos muestras.
Este reanálisis confirmó la presencia de C.
tetani toxigénico en una muestra, además, demostró
su presencia en una muestra adicional; pero
Vol. 8/No. 4/Octubre-Diciembre, 1997
236
E Rodríguez C., M del M Gamboa.
obviamente no detectó la cepa de C. tetani no
toxigénico informada previamente (11). De esta
forma, se identificaron tres muestras positivas (10%)
por esta bacteria, ya sea por aislamiento o por
demostración de la toxina, lo que representa una
frecuencia más baja que la descrita en otras latitudes.
Este hecho podría estar relacionado con el pH de
los suelos analizados, pues en promedio el pH fue
de 5.8. En este sentido Wilkins y col. (9) señalan
que C. tetani germina, se multiplica y esporula
mejor en suelos neutros o alcalinos.
Esta baja frecuencia de C. tetani junto con
una efectiva campaña de vacunación y buena
atención médica, se reflejan en la baja prevalencia
de cuadros clínicos de tétanos en humanos
informados en Costa Rica.
AGRADECIMIENTOS.
Agradecemos a Pablo Vargas-Dengo por su ayuda
técnica y a la Vicerrectoría de Investigación, Universidad de
Costa Rica, por el financiamiento otorgado (Proyecto N°
430-92-200).
REFERENCIAS.
1.- Smith LDS, Williams BL. The pathogenic anaerobic
bacteria, 3rd. ed. Illinois: Thomas Publisher, 1984: 137147.
2.- Hernández F, Rodríguez E. The swarming phenomenon
in Clostridium tetani. Rev Biol Trop 1993; 41:857-859.
3.- Cato EP, George W, Finegold SM. Genus Clostridium
Prazmowski 1980, . En: Sneath PHA, ed. Bergey’s Manual
of Systematic Bacteriology, vol 2. Baltimore: Williams and
Wilkins, 1986:1141-1120.
4.- Sanada I, Nishida S. Isolation of Clostridium tetani from
soil. J Bacteriol 1965; 89:626-629.
5.- Beland S, Rossier E. Isolement et identification de
Clostridium tetani dans le sol des cantons de L’Est de la
province de Quebec. Can J Microbiol 1973; 19:1513-1518.
6.- Tavares W. Contaminaçao do solo do estado do Río de
Janeiro polo Clostridium tetani. Bol Cien Vital Brasil 1975;
2:9-179.
Revista Biomédica
7.- Smith LDS. The occurrence of Clostridium botulinum
and Clostridium tetani in the soil of the United States.
Health Lab Sci 1978;15:74-80.
8.- Ebisawa I, Takayanagi M, Kurata M, Kigawa M. Density
and Distribution of Clostridium tetani in the Soil. Jpn J Exp
Med 1986; 56:69-74.
9.- Wilkins CA, Richter MB, Hobbs WB, Whitcomb M,
Bergh N, Carstens J. Occurrence of Clostridium tetani in
soil and horses. S Afr Med J 1988;73:718-720.
10.- Kobayashi T, Watanabe K, Ueno K. Distribution of
Clostridium botulinum and Clostridium tetani in Okinawa
Prefecture. Kansenshogaku. Zasshi 1992; 66:1639-1644.
11.- Rodríguez E, Gamboa MM, Fernández B. Clostridios
mesófilos en suelos de la Meseta Central de Costa Rica. Rev
Biol Trop 1993; 41:29-34.
12.- Rodríguez E, Gamboa MM, Fernández B. Primer
aislamiento de Clostridium tetani a partir de suelos de la
Meseta Central de Costa Rica. Rev Biol Trop 1991; 39:153154.
13.- Dowell VR, Hawkins TM. Laboratory methods in
anaerobic bacteriology. Laboratory Manual, Department of
Health and Human Services, PHS Center for Diseases
Control Atlanta. 1990:96.