Índice general Índice general Página Índice general Índice figuras Índice tablas Resumen Resum Abstract Abreviaturas ………………………………………………………... ……………………………………………………….. .……………………………………………………….. ………………………………………………………... ……………………………………………………...... ……………………………………………………….. ……………………………………………………….. i Capítulo 1 Introducción………………………………………… El Pepino mosaic virus: aspectos epidemiológicos, moleculares y estrategias de control……………… La aparición de un nuevo virus………………………. Epidemiología ………………….……………………. Distribución geográfica………………...………... Sintomatología……………………...…………..... Rango de hospedantes………...………………… Propiedades biológicas del virus………………… Formas de transmisión y dispersión del patógeno.. Transmisión mecánica……………………… Transmisión por insectos vectores……..…..... Transmisión por semilla…………………...... Propagación vegetativa…...……………........ Transmisión por hongos vectores y soluciones nutritivas…...……………………………..… Reservorios de la enfermedad…………………… Un caso particular: El Marchitamiento del tomate…… 1 vii ix xi xv xviii xxi 3 5 5 7 13 20 21 21 22 23 25 26 26 30 i Índice general Página Características de la partícula viral…….…………….. Encuadramiento taxonómico………….…………. Estructura y organización del genoma………....... Variabilidad molecular o diversidad genética..…... Estructura y composición de las poblaciones del virus…………………………………………….. Diagnóstico de la enfermedad…………………......... Detección serológica…..……………………….... Técnicas moleculares…………………………..... RT-PCR y análisis por RFLPs…...………..… Multiplex-one step RT-PCR……………….… Real time RT-PCR………………………........ Medidas de control del PepMV..…….……………..... Medidas preventivas…..………………………..... Control de la dispersión.………………………..... Control biológico de la enfermedad…………. Impacto económico de la enfermedad a nivel mundial. Capítulo 2 Capítulo 3 ii Justificación y Objetivos………………................... Dispersión…………………….................................... 3a Seed transmission of Pepino mosaic virus and efficacy of tomato seed disinfection treatments……………… Abstract…………………………………………. Introduction…………..…………………………. Material and methods….……..…………………. PepMV detection in whole tomato seeds……. PepMV seedlings infection test….………..... Seed disinfection treatments….………….… Statistical analysis….……………………..... Results………………………….……………….. PepMV infection of tomato seeds…………….. Seed transmission of PepMV………………... Efficacy of seed disinfection treatments.……. 34 34 38 41 44 47 47 48 48 49 50 51 51 53 56 58 61 67 69 69 70 72 72 73 73 74 75 75 75 77 Índice general Página Effects of seed treatments on tomato seed 79 germination……………………………………… 80 Discussion..………………………….………….. 84 References.……………….………….………….. 3b New natural hosts of Pepino mosaic virus in Spain…. Abstract………………………………………….. References..…………..…………………………. Capítulo 4 Capítulo 5 87 87 88 Estructura de las poblaciones virales españolas....... Genetic structure of the population of Pepino mosaic virus infecting tomato crops in Spain..….…………… Abstract….………………………………………. Introduction…………..…………………………. Material and methods..…..………………………. Virus isolates, bioassays, and preparations.... Nucleotide sequence determination…………… Results……………...……..……………………. Diversity of the Spanish PepMV population…. Mixed infections and recombination among the strains occur in the PepMV population of Murcia……………………………………… Discussion.……...….....…………………………. References…………..……………………………. 89 Marchitamiento súbito...………………………...... Pepino mosaic virus and Olpidium virulentus: agents associated with the occurrence of tomato Collapse.… Abstract…………………………………………. Introduction…………..…………………………. Material and methods….…………………………. Surveys and sample collections……................ Surveys directed to collect symptomatic plants……………………………………… 115 91 92 94 94 95 97 97 104 106 109 117 118 121 121 121 iii Índice general Página Capítulo 6 iv Ramdom surveys…………………………. Electron microscopy………………………. Determination of viral presence in simples obtained in 2000…………………………. Determination of viral presence in simples obtained since 2001……………………… Monitoring Olpidium infection….……….. Pathogenicity studies......................................... PepMV isolates………………………….... Olpidum virulentus isolates…………...….. Plant material…………………………..… Inoculative procedures…….……………… Disease evaluation………………………... Statistical analyses………..………....……. Molecular variability of selected isolates........... Results……………...….……..………………….. Surveys, symptoms and field diagnostic….....… 122 Random surveys………………………….. Directed surveys………………………….. Pathogenicity studies…..……..……………..... Summer trial…….…………………….….. Winter trial………….………..………….. Molecular variability…..……..……………… Discussion.………...….…………………………. References………...….………………………….. 131 133 Necrosis………………….…………………………... Characterisation of distinct Spanish isolates of Pepino mosaic virus causing necrosis in tomato………….…. Abstract………………………….………………. Introduction………………...……………………. Material and methods….……..……….………… Field surveys and sample collection…….…… Virus detection by ELISA………………..…. 123 123 123 125 125 125 126 127 128 129 129 130 131 131 135 135 137 140 145 149 153 155 156 158 158 158 Índice general Página Virus detection by molecular assays............ Electron microscopy......................................... Experimental host range………..……………. Genetic characterisation of necrotic isolates... Phylogenetic analysis…….……………….…. Results……………...….……..…………………... Origin of the samples and disease symptoms... Virus detected during the surveys……..……... Electron microscopy…………….….………... Host range and symptoms………….………... Genetic diversity and phylogenetic analysis… Discussion.………...…..…..……..………………. References………...…..…..……………..……….. 159 161 161 162 163 164 164 164 168 169 170 177 179 Capítulo 7 Discusión general………………………………….... 183 Capítulo 8 Conclusiones……………...………………………..... 197 Capítulo 9 Bibliografía general………………..……………….. 203 v