IA-MBA-PE-012 Control Interno

LANASEVE
Control interno
Elaborado por: Coordinador Técnico de Sección
Rige a partir de:
04/10/11
Versión 11
Revisado por: Analista
Código:
IA-MBA-PE-012
Página - 1 - de 6
Aprobado por: Jefe de Sección
1. Objetivo
Establecer un control interno para evaluar el desempeño de los analistas y de los métodos de ensayo
utilizados en los análisis microbiológicos.
2. Alcance
Se aplica a la sección de Microbiología de Alimentos
3. Responsabilidad y autoridad
El Jefe de sección: Velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento.
El Coordinador Técnico de Sección: Supervisar el cumplimiento de las normas establecidas en este
procedimiento.
Analista: Ejecutar las actividades descritas en este procedimiento.
Coordinador de la Unidad de Gestión de Calidad: Velar por que se cumpla lo establecido en este
procedimiento.
4. Definiciones
No aplica
5. Abreviaturas y/o Siglas
No aplica
6. Referencias y/o Bibliografía
IA-MBA-PE-009-RE-010
Hoja de trabajo: Análisis de Salmonella spp.
IA-MBA-PE-009-RE-011
Hoja de trabajo: Análisis de Listeria monocytogenes
IA-MBA-PE-009-RE-012
Hoja de trabajo: Análisis de E.coli O157:H7
IA-MBA-PE-009-RE-020
Hoja de trabajo: Análisis de Salmonella spp (FDA)
IA-MBA-PE-009-RE-021
Hoja de trabajo: Análisis de S.aureus Método ISO 6888-1:1999
IA-MBA-PE-012-RE-001
Registro de Control interno
IA-MBA-PE-012-RE-002
Reporte de control interno
IA-MBA-PE-012-RE-003
Control interno: Análisis de Salmonella spp ( USDA)
IA-MBA-PE-012-RE-004
Control interno: Análisis de Salmonella spp (FDA)
IA-MBA-PE-012-RE-005
Control interno: Análisis de Listeria monocytogenes (USDA)
Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no
controlada
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IA-MBA-PE-012-RE-006
Control interno: Análisis de Listeria monocytogenes (FDA)
IA-MBA-PE-012-RE-009
Control interno Vibrio cholerae
IA-MBA-PE-012-RE-010
Control interno análisis de Ecoli O157:H7
IA-MBA-PE-012-RE-011
Control Interno para análisis de Enterococos fecales
IA-MBA-PE-012-RE-012
Control Interno para análisis de Clostridium perfringens
IA-MBA-PE-012-RE-013
Control Interno para análisis de E. coli
IA-MBA-PE-012-RE-014
Control Interno para análisis de Staphylococcus aureus
IA-MBA-PE-012-RE-015 Control Interno para análisis de E.coli por método de filtración
IA-MBA-PE-012-BT-001
Bitácora Control Interno (mensual)
IA-MBA-PE-014
Manejo y mantenimiento de cultivos de referencia
IA-MBA-PE-015
Control de calidad de reactivos
SEG-PE-005
Control de medios de cultivo
7. Descripción del procedimiento
7.1 Materiales, Equipo y cepas
7.1.1 Materiales
Tubos de 9 ml de solución salina 0,85 %
Escala 0,5 Mc Farland
Bolsas Stomacher
Pipetas 1 o 2 ml estériles
Micropipeta de 0,5 µl -10 µl
Placa recuento total Petrifilm
Sobres de anaerobiosis
7.1.2 Equipo
Stomacher
Balanza
Incubador 35 ºC± 2 ºC
Lector de colonias QUEBEC
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7.1.3 Cepas de referencia
Clostridium perfringens
Escherichia coli
Escherichia coli O157:H7
Enterococcus faecalis
Listeria innocua
Listeria monocytogenes
Salmonella Abaetetuba H2S+
Salmonella choleraesuis H2S –
Staphylococcus aureus
Staphylococcus epidermidis
Vibrio cholerae
Aeromonas hydrophila
7.2 Procedimiento
Para control interno por set de muestras:
7.2.1
Utilizar muestras previamente analizadas (con resultado negativo para el analito en prueba) y
pesar en bolsas de stomacher de la siguiente manera:
-Para el control de E.coli, L.monocytogenes, Salmonella spp. y Vibrio cholerae pesar muestras de
25 gramos c/u
-Para el control de S.aureus pesar muestras de 10 g c/u.
-Para el control de E.coli O157: H7 pesar muestras de 65 gramos c/u
-Para el control de E.faecalis, C. perfringens y Número más probable (NMP) medir 100 ml de agua
destilada estéril para cada muestra.
7.2.2
Utilizar la cepa de referencia inoculada en tubos de agar tripticasa de soya y mantenidas a
temperatura de 4 ºC - 8 ºC (ver IA-MBA-PE- 014 Manejo y mantenimiento de cultivos de
referencia).
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7.2.3
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Para los análisis cualitativos (ausencia/presencia en 25 g) preparar una suspensión de la bacteria
en los tubos de 9 ml de solución salina 0,85 % con turbidez equivalente a una escala 0,5 McFarland
o inocular caldo infusión e incubar a 35 °C ± 2 ºC por 24 horas.
7.2.4
Para los análisis cuantitativos preparar diluciones 10-1 hasta 10-8 en tubos de solución salina 0,85 %
a partir del caldo infusión de 24 hr (considerando que el caldo infusión tiene una concentración
teórica de 1 x 108 ufc/ml)
7.2.5
Sembrar 1 ml de la dilución 10-8 de E.coli, S.aureus ,y E.faecalis en placa de petrifilm E.coli, petrifilm
Staph Express y petrifilm recuento total aerobio respectivamente e incubar a 35 ºC ± 2 ºC por 24
horas (para el caso de E.coli y S.aureus ) ó 35 ºC± 2 ºC por 48 horas (para el recuento de
E.faecalis)
7.2.6
Realizar el recuento de la placa de petrifilm para calcular la concentración inicial del inóculo.
7.2.7
Para el análisis de C.perfringens previamente inocular (utilizar vial de cepa congelada a -70 ºC) un
tubo de caldo tripticasa de soya e incubar en jarra de anaerobiosis a 35 °C.
7.2.8
Preparar diluciones 10-1, 10-2, 10-3 y 10-4 en tubos de solución salina 0,85 %, agregar 1 ml de esta
última dilución a 100 ml de agua destilada estéril, filtrar y sembrar membrana en agar m-CP.
7.2.9
Registrar el resultado obtenido en los registros correspondientes (IA-MBA-PE-012-RE-003, IA-MBAPE-012-RE-004, MBA-PE-012-RE-005, IA-MBA-PE-012-RE-006, IA-MBA-PE-012-RE-009, IA-MBAPE-012-RE-010, MBA-PE-012-RE-011, MBA-PE-012-RE-012, IA-MBA-PE-012-RE-013 , IA-MBAPE-012-RE-014, IA-MBA-PE-012-RE-015).
7.2.10 Inocular las muestras de la siguiente manera:
Análisis
Salmonella spp
Listeria monocytogenes
E.coli O157:H7
Control positivo
Control negativo
1 l de la dilución 0,5 McFarland o de
1 l de la dilución 0,5 McFarland o
cultivo de 24 horas de Salmonella spp.
de cultivo de 24 horas de E.coli
1 l de la dilución 0,5 McFarland o de
1 l de la dilución 0,5 McFarland o
cultivo de 24 horas de L. monocytogenes de cultivo de 24 horas de L. innocua
1 l de la dilución 0,5 McFarland o de
1 l de la dilución 0,5 McFarland o
cultivo de 24 horas de Escherichia coli
de cultivo de 24 horas de E. coli
O157:H7
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1 l de la dilución 0,5 McFarland de o de
1 l de la dilución 0,5 McFarland o
cultivo de 24 horas de Vibrio cholereae
de cultivo de 24 horas de
Aeromonas hydrophila
Staphylococcus aureus
1 ml de la dilución 10-5 o 10-6 de
S.aureus
Muestra sin marcar
1 ml de la dilución 10-5 o 10-6 de E.coli
E. coli
(para alimentos) y 1 ml de la dilución10-8
Muestra sin marcar
(para aguas por método de filtración).
Enterococos fecales
1 ml de la dilución 10-8 de Enterococos
Muestra sin marcar
Clostridium perfringens
1 ml de la dilución 10-4 de C.perfringens
Muestras sin marcar
Para control interno mensual:
7.2.11 Rotular por duplicado las bolsas o botellas como muestra N° 1 y muestra N° 2, anotar en la
Bitácora IA-MBA-PE-012-BT-001 la identificación del control positivo y el control negativo; esta
asignación del número es al azar
7.2.12 Marcar la muestra como lo describe el apartado 7.2.9
7.2.13 Asignar los controles de cada microorganismo de prueba a dos analistas IA-MBA-PE-009-RE-010.
7.2.14 Entregar las muestras incógnitas con el formulario de control interno respectivo.
7.2.15 El analista debe seguir la metodología de acuerdo al análisis solicitado y utilizar el formulario
correspondiente (IA-MBA-PE-009-RE-010, IA-MBA-PE-009-RE-011, IA-MBA-PE-009-RE-012, IAMBA-PE-009-RE-020, IA-MBA-PE-009-RE-021, IA-MBA-PE-012-RE-001)
7.2.16 Comparar el resultado obtenido con el resultado esperado.
7.2.17 Si el resultado no fue satisfactorio realizar las acciones correctivas:

Verificar la viabilidad de la cepa de referencia utilizada

Verificar la esterilidad, selectividad y efectividad de los medios de cultivo utilizados en los
formularios SEG-PE-005-RE-001, SEG-PE-005-RE- 002 y SEG-PE-005-RE-003.

Verificar el control de reactivos críticos utilizados en la técnica en el formulario IA-MBAPE-015-RE-002.
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
Repetir la prueba utilizando la misma matriz y los mismos analistas.

En caso de que un analista obtenga dos resultados insatisfactorios consecutivos en el
mismo análisis se le excluye de la realización de dicho análisis.

Capacitar al analista en el método utilizado.

Evaluar de nuevo.
7.2.18 Reportar el resultado obtenido por los dos analistas en el formulario IA-MBA-PE-012-RE-002
Reporte de Control Interno.
8. Anexos
No aplica
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controlada