guía microscopio

Guía: Microscopio
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ESCUELA SALUD
GUÍA
MICROSCOPIO
Microscopio de Hooke (izquierda) y Microscopio de Leeuwenhoek (derecha), creadores de
los primeros microscopios.
DIRIGIDO A ALUMNOS DE:
Técnico de Laboratorio Clínico y Banco de Sangre
Técnico Superior de Enfermería
Técnico de Radiodiagnóstico y Radioterapia
Informático Biomédico
PRE-REQUISITO:
No tiene
.INTRODUCCIÓN
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
DuocUC
CODIGO: CEBMS110001
Guía: Microscopio
La microscopía óptica es una de las herramientas más utilizadas en el Laboratorio,
tanto Clínico, como de otra índole. Está ampliamente distribuido en las áreas de la
microbiología y la hematología.
También es posible encontrar microscopía más compleja en los Laboratorios, en
las áreas de la inmunología, de la histología o de la biología celular. Este tipo de
microscopía se diferencian de la microscopía óptica no sólo en lo que respecta al
instrumento en sí, mucho más complejo y costoso, sino que también en sus
fundamentos teóricos.
OBJETIVOS
Al finalizar el taller el alumno será capaz de:
 Reconocer las distintas partes principales de un microscopio óptico, sus
nombres y funciones.
 Realizar correctamente la simulación de observación.
 Realizar la correcta limpieza de las superficies de un microscopio óptico.
 Realizar la correcta limpieza de los objetivos y oculares de un microscopio
óptico.
 Manipular material delicado propio de un laboratorio.
REALIZADO POR:
Tecnólogo Médico, Bioquímico, Químico Farmacéutico, Médico Laboratorista,
Biólogo.
DURACION:
90 minutos.
NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE:
20 alumnos
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
DuocUC
CODIGO: CEBMS110001
Guía: Microscopio
MARCO TEORICO:
Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaños, formas y
composiciones distintas, la mayoría de ellas pueden verse, algunas a simple vista,
y otras mediante instrumentos.
El microscopio óptico es un instrumento de precisión que permite ampliar la
imagen de los objetos que no son visibles para el ojo humano. En el microscopio,
la luz atraviesa de abajo a arriba el objeto a estudiar. Para ver con el microscopio
un objeto, éste debe ser lo más fino posible. Si no lo atraviesa la luz se verá sólo
un grumo deforme y opaco.
Tiene un límite resolución de cerca de 200 nm (0.2 µm), es decir la distancia
mínima a la que se pueden ver dos objetos separados. Este microscopio utiliza
luz visible. Las células observadas bajo el microscopio óptico pueden estar vivas o
fijadas y teñidas. Las muestras son depositadas en una lámina de vidrio
denominada PORTAOBJETO, de unos 5 cm de largo por 2 cm de ancho. En el
lugar del portaobjetos donde se puso la muestra puede, además, ponerse una
laminilla muy fina de vidrio llamada CUBREOBJETO.
Los oculares proporcionan diez aumentos de la imagen, y viene expresado x10 en
la carcasa del ocular. También los hay x20.
Los objetivos (generalmente cuatro), suelen tener aumentos de x4, x10, x40 y
x100. La ampliación de la imagen resultante al multiplicar los aumentos que
proporciona el ocular y el objetivo serán de 40, 100, 400 y 1000 aumentos.
Ejemplo: Ampliación de 40 aumentos:
Objetivo x4: aumenta 4 veces la imagen
Ocular x10: aumenta 10 veces la imagen ya aumentada 4 veces por el
objetivo
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Resultado: 4 aumentos x10 aumentos = 40 aumentos
Lo objetivos x4, x10 y x40, se denominan objetivos secos, porque entre la lente y
la preparación a observar, la luz atraviesa el aire proporcionando una imagen
nítida. El objetivo x100, se denomina objetivo de inmersión, porque para proveer
imágenes nítidas, la lente debe estar inmersa en un líquido (aceite de cedro o
similar), con un índice de refracción igual al vidrio, lo que permite evitar la
dispersión de los rayos luminosos. Siempre que utilicemos el objetivo x100
debemos colocar una gota de aceite de inmersión sobre la preparación a
observar.
Partes de un Microscopio óptico:
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
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CODIGO: CEBMS110001
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a) Sistema óptico
 Ocular: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen del
objetivo.
 Objetivo: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de ésta.
Sus aumentos de menor a mayor son 4x, 10x, 40x, 100x. Si se utiliza el
aumento 100x es necesario agregar a la preparación aceite de inmersión.
cuya función es evitar la dispersión de los rayos luminosos.
 Condensador: Lente que concentra los rayos luminosos sobre la
preparación.
 Diafragma: Regula la cantidad de luz que entra en el condensador.
 Foco: Dirige los rayos luminosos hacia el condensador.
Oculares y objetivos
b) Sistema mecánico
 Soporte: Mantiene la parte óptica. Tiene dos partes: el pie o base y el
brazo.
 Platina: Lugar donde se deposita la preparación.
 Cabezal: Contiene los sistemas de lentes oculares. Puede ser monocular,
binocular.
 Revólver: Contiene los sistemas de lentes objetivos. Permite, al girar,
cambiar los objetivos.
 Tornillos de enfoque: El Tornillo Macrométrico que aproxima el enfoque y el
Tornillo Micrométrico que consigue el enfoque correcto.
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
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Microscopio conectado a TV
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INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS
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Sala de simulación de Laboratorio clínico.
Microscopios ópticos binocular, 1 por cada 2 alumnos ( minimo)
Portaobjetos: 1 por alumno
Cubreobjetos: 1 caja por taller
Paño o toalla de papel suave para limpiar: 1 por alumno
Aceite de inmersión
Solventes para limpieza de lentes: alcohol: acetona (7:3) o xilol
(precaución: muy tóxico)
 Frontis sanguíneo teñido ( preparados listos)
 Caja de bioseguridad para eliminación de material cortopunzante
 Recipiente con solución detergente para portaobjetos sucios.
DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO:
NOTA: Recuerde usar su delantal, pelo tomado, sin joyas en las manos, y
realizar lavado de manos al ingresar al laboratorio
Manejo y uso del microscopio óptico:
1. Colocar el objetivo de menor aumento (4x) en posición de empleo y bajar la
platina completamente. Si el microscopio se recogió correctamente en
el uso anterior, ya debería estar en esas condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas
metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o
colocar el de 10 aumentos (10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque seguir los siguientes pasos:
 Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el
tornillo macrométrico. Esto debe hacerse mirando directamente y no a
través del ocular, ya que se corre el riesgo de incrustar el objetivo en la
preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
 Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el
objetivo de la preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo
nítida la muestra, girar el micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5. Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y
suele ser suficiente con mover un poco el micrométrico para lograr el
enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por completo la imagen, es
preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación
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desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la
preparación y por ello es fácil que ocurran dos tipos de percances:
incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones anteriores y
mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se
enfocó con el objetivo de inmersión.
6. Empleo del objetivo de inmersión:
 Bajar totalmente la platina.
 Subir totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que
nos indica la zona que se va a visualizar y donde habrá que echar el aceite.
 Girar el revólver hacia el objetivo de inmersión dejándolo a medio camino
entre éste y el de x40.
 Colocar una gota mínima de aceite de inmersión sobre el círculo de luz.
 Terminar de girar suavemente el revólver hasta la posición del objetivo de
inmersión.
 Mirando directamente al objetivo, subir la platina lentamente hasta que la
lente toca la gota de aceite. En ese momento se nota como si la gota
ascendiera y se adosara a la lente.
 Enfocar cuidadosamente con el micrométrico. La distancia de trabajo entre
el objetivo de inmersión y la preparación es mínima, aun menor que con el
de 40x por lo que el riesgo de accidente es muy grande.
 Una vez se haya puesto aceite de inmersión sobre la preparación, ya no se
puede volver a usar el objetivo 40x sobre esa zona, pues se mancharía de
aceite. Por tanto, si desea enfocar otro campo, hay que bajar la platina y
repetir la operación desde el paso 3.
 Una vez finalizada la observación de la preparación se baja la platina y se
coloca el objetivo de menor aumento girando el revólver. En este momento
ya se puede retirar la preparación de la platina. Nunca se debe retirar con el
objetivo de inmersión en posición de observación.
 Limpiar el objetivo de inmersión con cuidado empleando un papel especial
para óptica. Comprobar también que el objetivo 40x está perfectamente
limpio.
Mantenimiento y precauciones:
1. Al finalizar el trabajo, hay que dejar puesto el objetivo de menor aumento en
posición de observación, asegurarse de que la parte mecánica de la platina
no sobresale del borde de la misma y dejarlo cubierto con su funda.
2. Cuando no se está utilizando el microscopio, hay que mantenerlo cubierto
con su funda para evitar que se ensucien y dañen las lentes. Si no se va a
usar de forma prolongada, se debe guardar en su caja dentro de un armario
para protegerlo del polvo.
3. Nunca hay que tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, limpiarlas
muy suavemente con un papel de filtro o, mejor, con un papel de óptica.
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
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4. No dejar el portaobjetos puesto sobre la platina si no se está utilizando el
microscopio.
5. Después de utilizar el objetivo de inmersión, hay que limpiar el aceite que
queda en el objetivo con pañuelos especiales para óptica o papel muy
suave, que no deje pelusas. En cualquier caso se pasará el papel por la
lente en un solo sentido y con suavidad. Si el aceite ha llegado a secarse y
pegarse en el objetivo, hay que limpiarlo con una mezcla de alcoholacetona (7:3) o xilol. No hay que abusar de este tipo de limpieza, porque si
se aplican estos disolventes en exceso se pueden dañar las lentes y su
sujeción.
6. No forzar nunca los tornillos giratorios del microscopio (macrométrico
7. Una vez finalizada la observación, el cubreobjeto debe ser depositado en
una caja para material cortopunzante (safe box) y el portaobjeto se deja en
un bandeja con solución de limpieza, dispuesta en el laboratorio.
ACTIVIDADES
Actividad 1:
El docente realiza el procedimiento de mantención de las superficies y
lentes del microscopio.
Actividad 2:
El docente realiza el procedimiento de simulación de observación,
describiendo en detalle la forma correcta de poner la preparación y
enfocarla.
Actividad 3:
Cada alumno realiza, las veces que sea necesario las actividades 1 y 2. El
docente observa y corrige las actividades de los alumnos.
Autor: BQ Cecilia López Reyes
EU. Eliana Escudero
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BIBLIOGRAFIA
http://www.angelfire.com/bc2/biologia/microscopia.htm (VISITA 28/12/2004)
http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm (VISITA 28/12/2004 )
http://www.shimadzu.com.br/analitica/port/Produtos/Microscopio/images/ss550.jpg (visita 2/1/2005)
http://www3.unileon.es/ins/insaiem/images/microscopio%20electronico.jpg
(visita 2/1/2005)
METODOLOGIA DE EVALUACION
El taller se evalúa a través de una pauta de competencias logradas de
acuerdo a los objetivos planteados:
Autor: BQ Cecilia López Reyes
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Nombre del alumno:..............................................
Fecha:............................................Nota.......................
Microscopio
1. Su presentación personal es correcta para el
taller
2. Identifica al menos 3 partes del microscopio
3. Sabe colocar el aceite en el lugar correcto del
microscopio
4 Usa el microscopio en el orden secuencial
indicado
5. Coloca el porta objeto en el lugar correcto del
microscopio, porque sabe su función.
4. Cumple con el orden y limpieza indicado por el
docente al finalizar el taller
5. Realiza la técnica de mantención del
microscopio
C: competente
MC: medianamente competente
NC: no competente
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C
MC
NC