nmx-f-286-1992. alimentos. preparación y dilución de muestras de

RECOPILADO POR:
EL PROGRAMA UNIVERSITARIO DE ALIMENTOS
NMX-F-286-1992. ALIMENTOS. PREPARACIÓN Y DILUCIÓN DE MUESTRAS DE
ALIMENTOS PARA ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS. FOODS. PREPARATION AND
DILUTION OF FOOD SAMPLES FOR MICROBIOLOGICAL ANALYSIS. NORMAS
MEXICANAS. DIRECCIÓN GENERAL DE NORMAS.
PREFACIO
En la elaboración de esta Norma participaron las siguientes Dependencias, Instituciones y
Organismos:
Secretaría de Salud
Laboratorio Nacional de Salud Pública.
Secretaría de Comercio y Fomento Industrial
Laboratorios Nacionales de Fomento Industrial
Secretaría de Hacienda y Crédito Público
Laboratorio Central de la Dirección General de Aduanas
Instituto Politécnico Nacional
Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Universidad Nacional Autónoma de México
Facultad de Química
Leche Industrializada CONASUPO, S.A.
Instituto Nacional del Consumidor
Cámara Nacional de la Industria de Transformación
Cámara de Productos Alimenticios Elaborados con Leche
Sigma Alimentos, S.A. de C.V.
1. INTRODUCCIÓN
Independientemente del grupo de microorganismos que se pretenda enumerar, el
procesamiento de la muestra y la preparación de las diluciones debe realizarse con estrecho
apego a las directrices que se describen a continuación.
El incumplimiento de estas condiciones dará lugar a variaciones importantes en los
resultados hasta el punto de resultar inutilizables. Así, no es posible comparar los resultados
entre 2 laboratorios que trabajan en la misma muestra con un manejo diferente de la técnica
de análisis, ni es posible interpretar los resultados sucesivos de un laboratorio, si no se
observan en cada ocasión las normas precisamente en los términos descritos.
2. OBJETIVO Y CAMPO DE APLICACIÓN
Esta Norma especifica el procedimiento mediante el cual debe hacerse la preparación y la
dilución de muestras de alimentos para análisis microbiológico.
3. REFERENCIAS
Esta Norma se complementa en la siguiente Norma Mexicana:
NMX-F-285
Muestreo y transporte de meustras de alimentos para su análisis
microbiológico.
4. REACTIVOS Y MATERIALES
4.1
Reactivos
Los reactivos que a continuación se mencionan, deben ser grado analítico. Cuando se
indique agua debe entenderse agua destilada.
Solución de Hidróxido de sodio 1 N.
Agua peptonada
a) Solución reguladora de fosfatos
b) Agua peptonada
4.1.1 Preparación de reactivos
4.1.1.1 Solución de Hidróxido de sodio 1N.
Fórmula:
Hidróxido de sodio 4g
Agua 100ml
•
Disolver el Hidróxido de sodio y aforar a 100cm³ con agua.
4.1.1.2 Soluciones diluyentes
4.1.1.2.1 Solución reguladora de fosfatos
Fórmula:
KH2PO4 34 g
Agua
500 ml
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Disolver el fosfato en el agua y ajustar el pH a 7.2 con hidróxido de sodio 1 N.
Llevar a un litro con agua
Esterilizar durante 20 minutos a 121ºC. Conservar en refrigeración.
Tomar 1.25ml de solución concentrada y llevar a un litro con agua. Esta es la solución
de trabajo.
Distribuir en porciones de 99, 90 y 9ml según se requiera
Esterilizar a 12°C durante 20 minutos.
4.1.1.3 Agua peptonada
Fórmula:
Peptonada
NaCl
Agua
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•
•
4.2
1.0 g
8.5 g
1.0 L
Disolver los componentes en un litro de agua.
Ajustar el pH a 7.0 con hidróxido de sodio 1 N.
Distribuir en porciones de 99, 90 y 9 ml según se requiera.
Esterilizar al 121°c durante 15 minutos.
Materiales
Todo el material que tenga contacto con las muestras de microorganismos debe estar estéril.
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Pipetas bacteriológicas de 10ml y 1ml (graduadas en 0.1 y 0.01ml respectivamente).
Frascos de vidrio de 250ml.
Tubos de 16 X 150mm con tapón rosca.
Utensilios esterilizables para la presentación de las muestras: cuchillos, pinzas, tijeras,
cucharas, espátulas.
5. APARATOS E INSTRUMENTOS
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Horno para esterilizar con regulador de temperatura.
Autoclave con termómetro o manómetro probado con termómetro de máximas.
Baño de agua con termostato y termómetro.
Licuadora de 1 ó 2 velocidades controladas por un reostato y/o stomacher.
Vasos esterilizables para licuadora.
Balanza granataria con sensibilidad de 0.1g.
6. PROCEDIMIENTO
6.1
Si se trata de una muestra congelada de un alimento originalmente líquido o
licuable, fundirla por completo (405-45°C máximo) y homogeneizarla por agitación
vigorosa del recipiente, según se indique en la técnica correspondiente para cada
alimento.
6.2
En caso de un alimento sólido congelado, se debe congelar a refrigeración de 4 a
8°C durante 18 horas y no más de 24 horas antes de proceder a su análisis.
6.3
Si la muestra es líquida o semilíquida, agitarla firmemente. Cuando el producto por
analizar llena totalmente el recipiente, es recomendable vaciarlo en otro (estéril)
para homogeneizarlo; se debe tener cuidado de evitar contaminaciones al escurrir el
líquido por el labio de ambos recipientes.
6.4
Si se trata de alimentos sólidos, pesar 10 o 11g de la muestra, obtenidos de
diferentes zonas, auxiliándose de cuchara, cucharilla, abatelenguas, espátula o
cuchillo estériles, transferirlos a un vaso estéril de licuadora y agregar 90 o 99ml de
solución diluyente (según se haya pesado 10 o 11g respectivamente) lentada o no,
según se indique en la técnica correspondiente para cada alimento.
6.5
Licuar durante 1-2 minutos hasta obtener una suspensión completa y homogénea
según se indique en la técnica correspondiente a cada alimento.
6.6
Puede sustituirse el tratamiento con licuadora haciendo uso de stomacher y
procediendo de tal manera que se logre una suspensión completa y homogénea de la
muestra.
6.7
La anterior constituye la primera dilución de la muestra.
6.8
Continuar las diluciones de la muestra con el mismo diluyente, siguiendo los pasos
que ilustran los esquemas 1 y 2, según convenga para cada caso.
La selección de las diluciones que se vayan a preparar y de aquellas que se van inocular,
dependen del número esperado de microorganismos en la muestra con base a los resultados
de análisis previos y de la información que se obtenga del personal de inspección que la
haya colectado, en ausencia total de información, trabajar con todas las diluciones de la 1 a la 6-.
6.9
Utilizar pipetas diferentes para cada dilución inoculando simultáneamente las cajas
que se hayan seleccionado. El volumen que se transfiera nunca debe ser menor del
10% de la capacidad total de la pipeta. Para transferir 1.0ml no usar pipetas mayores
de 10ml.
6.10
Si la pipeta es terminal y se transfiere un volumen de líquido equivalente a su
capacidad total, escurrirla aplicando la punta de las pipetas al fondo en una zona sin
líquido una sola vez y retirarla.
6.11
Mientras se afora el líquido en la pipeta, la punta de ésta debe aplicarse en el interior
del cuello del frasco y mantenerse en posición vertical, para lo cuál este último debe
inclinarse lo necesario. Para aspirar el líquido de las muestras con la pipeta,
sumergir ésta lo menos posible al realizar la operación.
6.12
Cada botella con diluyente que se inocule debe agitarse siempre de la misma
manera: 25 movimientos de abajo a arriba en un arco de 30cm efectuados en 7
segundos.
6.13
Transferir la muestra y/o cada una de las diluciones a las cajas petri (recuento en
placa) o tubos en medio (recuento en tubo) que se requiera para cada caso,
siguiendo las indicaciones señaladas en 4.9
7. BIBLIOGRAFÍA
Técnicas para el muestreo y análisis microbiológico de alimentos.
Dirección General de Investigación en Salud Pública, S.S.A. 1978
NMX-Z-013 Guía para la redacción, estructuración y presentación de las Normas
Mexicanas.
Comité Internacional sobre las Especificaciones Microbiológicas para los Alimentos.
8. CONCORDANCIA CON NORMAS INTERNACIONALES
Al momento de la elaboración de la presente Norma no se encontró concordancia con
ninguna Norma Internacional.
Fecha de aprobación y publicación: Junio 5, 1992. Esta Norma cancela a la: NMX-Y-2861977.