Microscopia

Microscopia Conceptos importantes:
Resolución: capacidad de distinguir 2 objetos
adyacentes como unidades distintas
y separadas
Magnificación: capacidad de aumentar el tamaño
de una imagen en relación al
tamaño real del objeto
Contraste: diferencia en color entre el espécimen
y el campo de visión
I. Microscopia de luz
Microscopio compuesto de luz
resolución: 0.2 µm
Algunos tipos de Microscopio
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Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
Microscopio
de Campo Claro
de Campo Obscuro
de Contraste de Fase
de Fluorescencia
Electrónico de Transmisión (TEM)
Electrónico de Rastreo (SEM)
Microscopio de Luz
•  Secciones ultrafinas de la muestra
•  Magnificación máxima- 1,000X
•  Resolución- menor distancia discernible entre dos
puntos 0.2 µm
•  Fuente de iluminación–lámpara
•  Tinción diferencial
•  Micrografías a colores
Microscopio de Campo
Claro (compuesto de Luz)
Microscopio de contraste de fase (microscopio de luz modificado)
microscopio compuesto de luz
microscopio de contraste de fase
Se amplifica el efecto de desplazamiento de fase de aquellos
rayos de luz que se refractan al pasar sobre partes densas del espécimen.
De esta forma sepermite mayor contrate entre el objeto de interés y su
alrededor en el campo óptico.
Microscopia de contraste de fase
contraste de fase
luz
células de levadura
Contraste de Fase:
Microscopio de campo obscuro (microscopio de luz modificado)
Método por el cuál la muestra es observada sobre un fondo obscuro,
al dirigir la luz por los lados de la muestra
Microscopio de Campo Obscuro
Microscopio de campo obscuro
luz
células de levadura
campo oscuro
Microscopio de fluorescencia
Resolución similar a la del microscopio de luz,
es otra técnica para lograr contraste usando tintes
fluorescentes
Microscopio de fluorescencia (se utiliza un pigmento que genera luz
al absorber luz de un largo de onda específico)
Ejemplo: autofluorescencia,
clorofila de cianobacterias
absorve luz verde (λ 546nm) emite luz roja (λ 700nm)
cianobacterias
ventaja: permite visualizar
células en un medio complejo,
suelo, agua, muestras
ambientales
Fluorescencia:
Microscopía Electrónica
•  Fuente de iluminación- haz de
electrones (por filamento de tungsteno)
•  Magnificación máxima 200,000X
•  Colores artificiales con computador
Microscopía en tres dimensiones de alta resolución
Microscopia electrónica de rastreo (MER)
Se utiliza para obtener imágenes de alta resolución de partes externas
de la célula o superficies de objetos
v Para observar la muestra se cubre con una capa fina de metal,
y se rastrea con un rayo de electrones en presencia de un vació.
v  El patrón de movimiento de los electrones sobre la muestra
produce la imagen
M.E. de Rastreo o Scanning (SEM):
Microscopio electrónico de transmisión (MET)
v  Este tipo de microscopia se usa para
visualizar estructuras internas de una
célula.
v  Para trabajar la muestra se requiere el
corte de las muestras en secciones
delgadas
M.E. de Transmisión (TEM):
microscopio de luz
Microscopio de luz
Versus
Microcopio Electrónico
luz → electrónico rastreo
→
electrónico transmisión
poder de resolución aumenta
region nucleoide
microscopio electrónico
de rastreo
microscopio electrónico
de transmisión (resolución
máxima 0.2nm)