TOPICOS AVANZADOS EN BIOFARMACIA Y FARMACOCINETICA

CURSO INTERNACIONAL DE POSGRADO
Córdoba, Argentina. 11 – 14 de octubre de 2011
Prof. Dra. MARCELA LONGHI
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS
UNIVERSIDAD NACIONAL DE CORDOBA
ARGENTINA
DATOS ANALITICOS GENERADOS POR ANALISIS QUIMICOS
CONFIABILIDAD
VALIDEZ METODO
ANALITICO
CONFIABILIDAD DEL
INSTRUMENTAL
ADECUADO
ENTRENAMIENTO
DE ANALISTAS
MAYOR FUENTE DE ERROR EN ANALISIS
 INSTRUMENTOS NO CONFIABLES
 NO CALIFICADOS O CALIBRADOS ADECUADAMENTE CON
ESTÁNDARES TRAZEABLES
 REGISTROS DE CALIFICACION Y CALIBRACION
 DOCUMENTOS REQUERIDOS POR AUTORIDADES DE CONTROL
SISTEMA DE CALIDAD GLOBAL
 IDONEIDAD DEL PRODUCTO DETERMINADA POR DATOS
OBTENIDOS DESDE UN EQUIPO ANALITICO
 DEMOSTRAR QUE ESE EQUIPO ES ADECUADO PARA EL USO
PROPUESTO Y CALIBRADO Y MANTENIDO EN ESTADO APROPIADO
 LA VERIFICACION DEL RENDIMIENTO O CALIFICACION DEL
INSTRUMENTAL ANALITICO SE REALIZA DE DIFERENTES MANERAS
o TIPO DE EQUIPO, APLICACIÓN
 CALIFICACION
 ESPECTROFOTOMETRO UV
 EXACTITUD DE λ UTILIZANDO ESTANDARES TRAZEABLES
 pHmetro
SOLUCIONES REGULADORAS DE pH CERTIFICADAS
CALIFICACION
ACORDE A SUS FINES
 EQUIPO PARA CLAE (HPLC)
COINCIDENCIA DE TIEMPO DE
IDENTIFICACION DE PRODUCTO
RETENCION CON ESTANDAR
MENOR CALIFICACION
EQUIPO PARA MEDIR CANTIDAD EXACTA DE IMPUREZA TOXICA DE UN
IFA
CALIFICACION DEL EQUIPO
ESTABLECER CAPACIDAD Y CONFIABILIDAD PARA EL USO PROPUESTO EN
UN ENTORNO ADECUADO
PROTOCOLO DE CALIFICACION
 DETALLES DEL SISTEMA
 ALCANCES Y LIMITACIONES DE LA CALIFICACION
 ENSAYOS Y PROCEDIMIENTOS DE CALIFICACION
 CRITERIOS DE ACEPTACION
TRES ETAPAS
 CALIFICACION DE INSTALACION
 CALIFICACION OPERACIONAL
 CALIFICACION DE DESEMPEÑO
ESTABLECE QUE EL EQUIPO FUE
CALIFICACION DE
INSTALACION
RECIBIDO DE ACUERDO A LO
[INSTALLATION
QUALIFICATION (IQ)]
ESPECIFICADO E INSTALADO
APROPIADAMENTE DE ACUERDO A LOS
REQUISITOS DE DISEÑO Y EN UN
AMBIENTE ADECUADO PARA SU
FUNCIONAMIENTO.
INSTALACION ADECUADA → PRIMERA ETAPA PARA
ASEGURAR UN FUNCIONAMIENTO APROPIADO DEL
EQUIPO
ACTIVIDADES:
 INSPECCIONAR POR POSIBLES DAÑOS
 VERIFICAR EL MODELO, LA CONFIGURACION Y EL
NUMERO DE SERIE DE TODOS LOS COMPONENTES
 ASEGURAR LA CORRECTA PUESTA EN MARCHA Y EL
INICIO DE TODOS LOS COMPONENTES DEL SISTEMA
CALIFICACION
OPERACIONAL
PROCESO DE DEMOSTRAR QUE EL
EQUIPO FUNCIONA DE ACUERDO A LOS
[OPERATION
QUALIFICATION (OQ)]
REQUERIMIENTOS OPERACIONALES EN
UN AMBIENTE ADECUADO
EQUIPO DE CLAE:
BOMBA: EXACTITUD DE CAUDAL Y GRADIENTE
DETECTOR: LINEARIDAD DE RESPUESTA, RUIDO, EXACTITUD DE λ
INYECTOR: PRECISION, LINEARIDAD,
HORNO: EXACTITUD DE TEMPERATURA
ESPECTROFOTOMETRO UV-VISIBLE:
EXACTITUD Y REPRODUCIBILIDAD DE λ, PERDIDA DE LUZ,
RESOLUCION, RUIDO, ESTABILIDAD DE LINEA DE BASE
RESPUESTAS DEL SISTEMA
COMPARADAS CON LOS RESULTADOS
ESPECIFICADOS EN LOS INSTRUCTIVOS
CALIFICACION DE
FUNCIONAMIENTO
[PERFORMANCE
QUALIFICATION (PQ)]
PROCESO PARA DEMOSTRAR QUE UN
EQUIPO CUMPLE CON LAS
ESPECIFICACIONES ESTABLECIDAS POR
EL USUARIO PARA SU USO DE RUTINA
PQ SE PUEDE DEMOSTRAR REALIZANDO UNA APLICACIÓN
TIPICA DEL USUARIO QUE REQUIERA QUE LOS
COMPONENTES DEL EQUIPO FUNCIONEN JUNTOS DE
MANERA ADECUADA PARA BRINDAR LOS RESULTADOS
ESPERADOS
SE OBTIENE INFORMACION CON EL USO DE RUTINA DEL
EQUIPO.
PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR (SOP)
 EQUIPO CALIFICADO → GENERAR DATOS ANALITICOS
 REDACTAR UN SOP PARA EL NUEVO EQUIPO
 INSTRUCCIONES DE OPERACIÓN, MANTENIMIENTO Y
CALIBRACION
 ESCRIBIR INSTRUCCIONES SIMPLES
 INCLUIR: ENSAYOS REQUERIDOS PARA MANTENER , CRITERIOS DE
ACEPTACION Y FRECUENCIA PARA CADA TEST
 DEFINIR QUE REPARACIONES (MAYORES O MENORES) NECESITAN
RECALIFICACION TOTAL O PARCIAL

REEMPLAZO DE:
o LAMPARA UV DEL DETECTOR
o TARJETA DE CIRCUITOS
→ RECALIFICACION PARCIAL
→ RECALIFICACION TOTAL
CALIFICACION Y MANTENIMIENTO
 CALIFICACION O CALIBRACION A INTERVALOS ADECUADOS DE
ACUERDO CON EL PROGRAMA ESTABLECIDO
 NO DEBEN UTILIZARSE EQUIPOS QUE NO REUNAN LAS
ESPECIFICACIONES ESTABLECIDAS
 CADA INSTRUMENTO DEBE TENER UN STICKER DE CALIBRACION
CON LA INFORMACIÓN DEL ESTADO DEL SISTEMA:
 CUANDO SE REALIZO, QUIEN LA EFECTUO, FECHA DE LA PROXIMA
CALIBRACION
 SE REQUIERE UN PROGRAMA SISTEMATICO PARA MANTENER EL
EQUIPO EN ESTADO DE CALIFICACION
VALIDACION ANALITICA
 REQUISITO BASICO PARA ASEGURAR LA CALIDAD Y CONFIABILIDAD DE LOS
RESULTADOS DE UNA APLICACIÓN ANALITICA
 OBJETO
→
DEMOSTRAR QUE EL PROCEDIMIENTO ES ADECUADO PARA EL
USO PROPUESTO
 SE DETERMINA POR ESTUDIOS EXPERIMENTALES BIEN DOCUMENTADOS
 EXACTITUD Y CONFIABILIDAD DE RESULTADOS ANALITICOS ES CRUCIAL
PARA ASEGURAR LA CALIDAD, SEGURIDAD Y EFICACIA DE LOS
MEDICAMENTOS
 POR ESTA RAZON SE PUBLICARON NUMEROSOS REQUERIMIENTOS
REGULATORIOS
o REQUISITOS DE ICH DESDE 1990
o FARMACOPEA ARGENTINA 7ma EDICION
TIPOS DE CUANTIFICACION
POR ESTANDAR EXTERNO
 METODO MAS SENCILLO
 PREPARACION DE UNA SERIE DE SOLUCIONES ESTANDAR CON UNA
CONCENTRACION CERCANA A LA DEL ANALITO
 SE OBTIENEN LOS CROMATOGRAMAS DE LAS SOLUCIONES Y SE
GRAFICA
 AREA O ALTURA DEL PICO EN FUNCION DE LA CONCENTRACION DEL
ANALITO
 EL GRAFICO DE LOS DATOS DEBERA DAR UNA LINEA RECTA
 PARA EVITAR ERRORES ES CRUCIAL DISMINUIR LA VARIABILIDAD
ENTRE LAS INYECCIONES INDEPENDIENTES.
LOS AUTOMUESTREADORES DISMINUYEN ESTE ERROR A MENOS DEL
0,5 % RSD
POR ESTANDAR INTERNO
 PROVEE MAYOR PRECISION → SE ELIMINAN LOS ERRORES POR
INYECCION DE LA MUESTRA
 UNA CANTIDAD CONOCIDA DEL ESTANDAR INTERNO SE AGREGA A
LA SOLUCION DE LA MUESTRA Y SOLUCIONES ESTANDAR
 SE DETERMINA LA RELACION ALTURA O AREA DE PICO ESTANDAR –
ANALITO
 SE GRAFICA ESTA RELACION EN FUNCION DE LA CONCENTRACION
DE ANALITO
 BUENA RESOLUCION ENTRE ESTANDAR INTERNO Y ANALITO
SEPARACION DE LA LINEA DE BASE ≥ 1,5
ESTRATEGIAS Y PARAMETROS DE VALIDACION
SE DEBE REDACTAR UN PROTOCOLO PARA FACILITAR LA TAREA Y MINIMIZAR
EL NUMERO DE EXPERIMENTOS
LINEALIDAD DE UN PROCEDIMIENTO
ANALITICO
HABILIDAD PARA OBTENER
RESULTADOS (ABSORBANCIA O AREA)
EN LOS ENSAYOS DIRECTAMENTE
PROPORCIONALES (DENTRO DE UN
RANGO DETERMINADO) A LA
CONCENTRACION DE ANALITO EN LA
MUESTRA
LA CUANTIFIACION DEL ANALITO
DEPENDE DE LA OBEDIENCIA A LA LEY
DE BEER
LA LINEALIDAD SE DEMUESTRA POR DILUCION DE UNA SOLUCION ESTANDAR
STOCK
PREPARANDO NUMEROSAS SOLUCIONES POR PESADAS INDEPENDIENTES SE
INTRODUCE MUCHO ERROR
UTILIZAR UN MINIMO DE 5 SOLUCIONES
EVALUACION DE LINEALIDAD POR INSPECCION VISUALDEL GRAFICO
SE ALCANZA LINEALIDAD SI
r2 ≥ 0,997
PENDIENTE
SUMA RESIDUAL DE CUADRADOS
INTERCEPTO “y”
ACORDES A LO ESTABLECIDO POR ICH
RANGO DE UN PROCEDIMIENTO ANALITO
INTERVALO ENTRE LOS LIMITES SUPERIOR E INFERIOR DE
CONCENTRACION DE ANALITO EN LA MUESTRA PARA LAS CUALES SE
HA DEMOSTRADO QUE EL PROCEDIMINETO ANALITICO TIENE UN
NIVEL ADECUADO DE PRECISION, EXACTITUD Y LINEALIDAD.
LA CONCENTRACION DE ESTANDAR Y MUESTRA ANALITICA DEBEN ESTAR
COMPRENDIDOS EN EL RANGO LINEAR
LA PENDIENTE DEL GRAFICO
DA UNA IDEA DE LA SENSIBILIDAD
DEL METODO
EL INTERCEPTO “y”
BRINDA INFORMACION SOBRE LA
VARIABILIDAD DEL METODO
EXACTITUD
 CERCANIA ENTRE EL VALOR DE REFERENCIA O VERDADERO Y EL VALOR
HALLADO
 SE REPORTA COMO PORCENTAJE DE RECUPERACION DEL ENSAYO
 ICH RECOMIENDA REALIZAR UN MINIMO DE 9 DETEMINACIONES A 3
NIVELES DE CONCENTRACION CUBRIENDO EL RANGO (3
CONCENTRACIONES POR TRIPLICADO)
 PARA FARMACOS → APLICACIÓN DEL METODO ANALITICO AL IFA Y
CUANTIFICARLO CONTRA UN ESTADAR DE REFERENCIA DE
CONCENTRACION CONOCIDA
 PARA FORMULACION FARMACEUTICA → APLICACIÓN DEL PROCEDIMIENTO
ANALITICO A MEZCLAS SINTETICAS DE LOS COMPONENTES DE LA
FORMULA O FORMULA PLACEBO CON EL AGREGADO DE CANTIDADES
CONOCIDAS DEL FARMACO DE PUREZA ESTABLECIDA
 RANGO DE EXACTITUD ACEPTABLE → ENTRE 98 % Y 102 % DE
RECUPERACION ESPERADA
PRECISION
 PROCEDIMIENTO ANALITICO QUE EXPRESA EL GRADO DE COINCIDENCIA
(GRADO DE DISPERSION) ENTRE UNA SERIE DE MEDICIONES OBTENIDAS A
PARTIR DE MUESTRAS MULTIPLES DE LA MISMA MUESTRA HOMOGENEA
BAJO CONDICIONES PRE-ESTABLECIDAS
 LA PRECISION DEBE SER CONSIDERADA A TRES NIVELES:
 REPETIBILIDAD, PRECISION INTERMEDIA Y REPRODUCIBILIDAD
 LA PRECISION OBTENIDA USANDO MUESTRAS AUTENTICAS
 PARAMETROS A CALCULAR PARA CADA NIVEL DE PRECISION:
 DESVIACION ESTANDAR, DESVIACION ESTANDAR RELATIVA
(COEFICIENTE DE VARIACION), INTERVALO DE CONFIDENCIA
 REPETIBILIDAD → EXPRESA VARIABILIDAD ANALITICA BAJO LAS MISMAS
CONDICIONES OPERATIVAS SOBRE UN CORTO INTERVALO DE TIEMPO.
 REALIZAR
 MINIMO DE 9 DETERMINACIONES CUBRIENDO EL RANGO
ESPECIFICADO DE CONCENTRACIONES DEL ENSAYO (3
CONCENTRACIONES POR TRIPLICADO)
 MINIMO DE 6 DETERMINACIONES AL 100 % DE LA
CONCENTRACION ENSAYADA
 PRECISION INTERMEDIA → INFLUENCIA DE EFECTOS ADICIONALES AL
AZAR DENTRO DEL LABORATORIO, DE ACUERDO AL USO PROPUESTO
PARA EL PROCEDIMIENTO (DIFERENTES DIAS, ANALISTAS Y EQUIPOS).
 REPRODUCIBILIDAD → PRECISION ENTRE LABORATORIOS PARA
ESTUDIOS COLABORATIVOS
 PARA VALIDAR ESTE PARAMETRO SE DEBEN REALIZAR ESTUDIOS EN
OTROS LABORATORIOS UTILIZANDO LA MISMA MUESTRA
HOMOGENEA Y EL MISMO PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
ROBUSTEZ
MEDIDA DE LA CAPACIDAD DEL PROCEDIMIENTO ANALITICO PARA NO
VERSE AFECTADO POR PEQUEÑAS PERO DELIVERADAS VARIACIONES EN
LOS PARAMETROS DEL MISMO
ESPECIFICIDAD
 HABILIDAD PARA DETERMINAR INEQUIVOCAMENTE UN ANALITO EN
PRESENCIA DE COMPONENTES SE ESPERA ESTEN PRESENTES EN LA MUESTRA
 ESPECIFICIDAD ≃ SELECTIVIDAD
 SE DETERMINA POR COMPARACION DE RESULTADOS ANALITICOS DE
MUESTRAS CONTENIENDO IMPUREZAS, PRODUCTOS DE DEGRADACION O
INGREDIENTES PLACEBO CON MUESTRAS ANALIZADAS SIN ESTOS
 HPLC → RESOLUCION DE 2 PICOS QUE ELUYEN CERCANOS , UNO DE LOS
CUALES ES EL ANALITO
 EL ANALISTA DEBE DEFINIR QUE IMPUREZAS SON PARES CRITICOS
VALIDACION DE METODOS BIOANALITICOS
PROCEDIMIENTO EMPLEADO PARA DEMOSTRAR QUE UNA METODOLOGIA
ANALITICA, USADA PARA LA CUANTIFICACION DE ANALITOS EN UNA MATRIZ
BIOLOGICA, ES CONFIABLE Y REPRODUCIBLE PARA ALCANZAR SU OBJETIVO
CUANTIFICAR EL ANALITO CON UN GRADO DE EXACTITUD Y PRECISION ACORDES A LA TAREA
ENFOQUE ANALITICO UTILIZADO EN LOS METODOS BIOANALITICOS
USO DE UNA METODOLOGIA DE
CURVA ESTANDAR CON ESTANDAR INTERNO
FDA - 2001→ “GUIA PARA LA INDUSTRIA SOBRE EL
DESARROLLO DE METODOLOGIAS BIOANALITICAS”
BASADAS EN INFORMES FINALES DE LAS
CONFERENCIAS DE WASHINGTON 1990 Y 2000.
PARA ESTUDIOS DE BIODISPONIBILIDAD, BIOEQUIVALENCIA Y FARMACOCINETICA
METODOLOGIAS BIEN CARACTERIZADAS Y COMPLETAMENTE VALIDADAS
RESULTADOS CONFIABLES → INTERPRETADOS SATISFACTORIAMENTE
EL CONJUNTO BIOANALITICO INCLUYE LOS ESTANDARES DE CALIBRACION Y
MUESTRAS QUE NO CONTIENEN ANALITOS, DENOMINADAS BLANCOS, PARA
ASEGURAR QUE NO HAY INTERFERENCIAS DE LA MATRIZ.
EXACTITUD Y PRECISION
CALCULADAS UTILIZANDO MUESTRAS DE CONCENTRACION CONOCIDA
DENOMINADAS MUESTRAS DE CONTROL DE CALIDAD (QCs)
LOS ESTANDARES DE CALIBRACION Y LAS MUESTRAS CONTROL
DE CALIDAD DEBEN PREPARARSE EN LA MISMA MATRIZ QUE LAS
MUESTRAS REALES
ANALISIS DE FARMACOS Y SUS METABOLITOS EN MATRICES BIOLOGICAS
UTILIZANDO MUESTRAS ADICIONADAS CON ESTANDARES DE CALIBRACION Y
MUESTRAS CONTROL DE CALIDAD (QC).
LA PUREZA DE LOS ESTANDARES DE REFERENCIA USADOS PARA
PREPARAR LAS MUESTRAS PUEDE AFECTAR LOS DATOS DEL ESTUDIO.
SE DEBEN USAR ESTANDARES ANALITICOS DE REFERENCIA DE IDENTIDAD Y
PUREZA ESTABLECIDAS.
CLASES DE ESTANDARES:
1.- ESTANDARES DE REFERENCIA CERTIFICADOS.
2.- ESTANDARES OBTENIDOS DE UNA FUENTE COMERCIAL CONFIABLE.
3.- OTRO MATERIAL DE PUREZA DOCUMENTADA, SINTETIZADO POR UN
LABORATORIO ANALITICO O ESTABLECIMIENTO NO COMERCIAL.
FUENTE Y NUMERO DE LOTE, FECHA DE CADUCIDAD, CERTIFICADO DE
ANALISIS Y/O EVIDENCIA DE IDENTIDAD Y PUREZA.
SELECTIVIDAD
 HABILIDAD DE LA METODOLOGIA ANALITICA PARA DIFERENCIAR Y
CUANTIFICAR AL ANALITO EN PRESENCIA DE OTROS COMPONENTES DE LA
MUESTRA .
 ANALISIS DE MUESTRAS BLANCO DE LA MATRIZ BIOLOGICA APROPIADA
(PLASMA, ORINA, ETC.) OBTENIDAS DE AL MENOS 6 FUENTES.
 CADA MUESTRA BLANCO DEBE SER ANALIZADA PARA INTERFERENCIAS.
 SE DEBE ASEGURAR SELECTIVIDAD AL MENOR LIMITE DE CUANTIFICACION
(LLOQ).
 SUSTANCIAS INTERFERENTES POTENCIALES:
COMPONENTES ENDOGENOS DE LA MATRIZ, METABOLITOS, PRODUCTOS DE
DEGRADACION, OTRA MEDICACION ASOCIADA.
 METODOLOGIA PARA CUANTIFICAR MAS DE UN ANALITO, SE DEBE
ANALIZAR CADA UNO DE ELLOS PARA ASEGURAR NO INTERFERENCIA.
EXACTITUD
UTILIZAR UN MINIMO DE 5 DETERMINACIONES POR CONCENTRACION A 3
CONCENTRACIONES EN EL RANGO ESPERADO.
EL VALOR MEDIO DEBE ESTAR DENTRO DEL 15 % DEL VALOR ESPERADO,
PARA LLOQ NO MAS DEL 20 %.
LA DESVIACION DE LA MEDIA DEL VALOR VERDADERO SIRVE COMO MEDIDA
DE LA EXACTITUD.
PRECISION
DESCRIBE LA CERCANIA DE MEDICIONES INDIVIDUALES DE UN ANALITO
CUANDO EL PROCEDIMIENTO ES APLICADO REPETIDAMENTE A MULTIPLES
ALICUOTAS DE UN VOLUMEN HOMOGENEO SIMPLE DE MATRIZ BIOLOGICA.
SE MIDE UTILIZANDO UN MINIMO DE 5 DETERMINACIONES POR
CONCENTRACION A 3 CONCENTRACIONES DENTRO DEL RANGO ESPERADO.
LA PRECISION DETERMINADA A CADA NIVEL DE CONCENTRACION, EL CV NO
DEBE EXCEDER EL 15 %, EXCEPTO PARA LLOQ, EL CV NO DEBE SER MAYOR AL
20 %
RECUPERACION DE UN ANALITO
 EFICIENCIA DE EXTRACCION DE UNA METODOLOGIA ANALITICA DENTRO
DE LOS LIMITES DE VARIABILIDAD.
 NO DEBE SER DEL 100 %, PERO EL GRADO DE RECUPERACION DE UN
ANALITO Y DEL ESTANDAR INTERNO DEBE SER CONSISTENTE, PRECISO Y
REPRODUCIBLE.
 EXPERIMENTOS REALIZADOS POR COMPARACION DE LOS RESULTADOS
ANALITICOS PARA MUESTRAS EXTRAIDAS A 3 CONCENTRACIONES (BAJA,
MEDIA Y ALTA) CON ESTANDARES SIN EXTRAER QUE REPRESENTEN EL 100
% DE RECUPERACION.
CALIBRACION/CURVA ESTANDAR
GENERAR UNA CURVA PARA CADA ANALITO EN LA MUESTRA.
MUESTRAS
EN LA MISMA MATRIZ BIOLOGICA QUE LA DE LAS
MUESTRAS EN EL ESTUDIO PROPUESTO
AGREGADO DE CANTIDADES CONOCIDAS DE ANALITO A LA MATRIZ.
LIMITE DE CUANTIFICACION (LLOQ)
ESTANDAR DE MENOR CONCENTRACION EN LA CURVA DE CALIBRACION
SERÁ ACEPTADO COMO LIMITE DE CUANTIFICACION SI:
 LA RESPUESTA DEL ANALITO ES AL MENOS 5 VECES LA RESPUESTA DEL BLANCO
 EL PICO DEL ANALITO (RESPUESTA) ES IDENTIFICABLE, DISCRETO Y
REPRODUCIBLE CON UNA PRECISION DEL 20 % Y EXACTITUD DE 80 – 120 %
CURVA DE CALIBRACION/CURVA ESTANDAR/CONCENTRACION-RESPUESTA
 SE DEBE UTILIZAR EL MODELO MAS SIMPLE QUE DESCRIBA
ADECUADAMENTE LA RELACION CONCENTRACION-RESPUESTA
 SE DEBEN CUMPLIR LAS SIGUIENTES CONDICIONES:
DESVIACION DEL 20 % DE LA CONCENTRACION NOMINAL PARA LLOQ
DESVIACION DEL 15 % DE LA CONCENTRACION NOMINAL PARA
ESTANDARES DIFERENTES DEL LLOQ
DESVIACION MAYOR
SE ELIMINA EL ESTANDAR
SE ELIMINAN MAS DE 2 ESTANDARES
PERMANECEN MENOS DE 5 ESTANDARES
CALIBRACION NO ACEPTABLE
ESTABILIDAD
DEL FARMACO EN UN FLUIDO BIOLOGICO ES FUNCION DE:
LAS CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO, LAS PROPIEDADES QUIMICAS DEL FARMACO, LA
MATRIZ Y EL ENVASE.
LA ESTABILIDAD DE UN ANALITO EN UNA MATRIZ PARTICULAR Y EN UN ENVASE ES
RELEVANTE SOLO PARA ESE SISTEMA Y NO PUEDE EXTRAPOLARSE A OTRO
PROCEDIMIENTOS DE ESTABILIDAD DEBEN EVALUAR:
LA ESTABILIDAD DE LOS ANALITOS DURANTE LA TOMA DE MUESTRA Y MANIPULACION, LUEGO
DE ALMACENARSE LARGO TIEMPO A TEMPERATURAS DE FREEZER Y CORTO TIEMPO A
TEMPERATURA AMBIENTE Y LUEGO DE CICLOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO
LAS CONDICIONES DE LOS ESTUDIOS DE ESTABILIDAD DEBEN REFLEJAR SITUACIONES
SIMILARES A LAS ENCONTRADAS DURANTE EL MANEJO DE LA MUESTRA.
1.- ESTABILIDAD DURANTE LOS PROCESOS DE CONGELADO Y DESCONGELADO
 SE DEBE DETERMINAR LUEGO DE 3 CICLOS DE CONGELADO Y
DESCONGELADO. AL MENOS 3 ALICUOTAS A CADA UNA DE LAS
CONCENTRACIONES ALTA Y BAJA SE DEBEN ALMACENAR A LA TEMPERATURA
ESPECIFICADA POR 24 H Y DESCONGELARSE A TEMPERATURA AMBIENTE.
 LUEGO DEL DESCONGELADO, LAS MUESTRAS DEBEN SER CONGELADAS POR
12-24 H. REPETIR EL PROCESO 3 VECES Y LUEGO ANALIZAR
2.- ESTABILIDAD DE CORTO TIEMPO
 3 ALICUOTAS A CADA UNA DE LAS CONCENTRACIONES ALTA Y BAJA DEBEN
DESCONGELARSE A TEMPERATURA AMBIENTE POR 4 – 24 H (DEPENDIENDO
DEL TIEMPO ESTIMADO EN QUE LAS MUESTRAS ESTARAN A TEMPERATURA
AMBIENTE DURANTE EL ESTUDIO) Y ANALIZADAS.
3.- ESTABILIDAD DE LARGA DURACION
 EL TIEMPO DE ALMACENAMIENTO DEBE EXCEDER EL TIEMPO ENTRE LA
FECHA DE LA PRIMERA TOMA DE MUESTRA Y LA DE LA ULTIMA MUESTRA
ANALIZADA.
 SE DETERMINA POR ALMACENAMIENTO DE AL MENOS 3 ALICUOTAS, A CADA
UNA DE LAS CONCENTRACIONES ALTA Y BAJA, BAJO LAS MISMAS
CONDICIONES DE LAS MUESTRAS EN ESTUDIO.
 EL VOLUMEN DE LAS MUESTRAS DEBE SER SUFICIENTE COMO PARA
ANALIZALAS EN 3 OCASIONES DIFERENTES.
 LA CONCENTRACION DE TODAS LAS MUESTRAS DE ESTABILIDAD DEBE SER
COMPARADA CON LA MEDIA DE LOS VALORES CALCULADOS PARA LOS
ESTANDARES A CONCENTRACIONES APROPIADAS DESDE EL PRIMER DIA DEL
ESTUDIO DE ESTABILIDAD DE LARGA DURACION.
4.- ESTABILIDAD DE LA SOLUCION STOCK
 PARA EL FARMACO Y EL ESTANDAR INTERNO DEBE EVALUARSE A
TEMPERATURA AMBIENTE POR AL MENOS 6 HORAS.
 SI LAS SOLUCIONES STOCK SON REFRIGERADAS O CONGELADAS DURANTE
EL PERIODO RELACIONADO, LA ESTABILIDAD DEBE SER DOCUMENTADA.
 LUEGO DE CONCLUIDO EL TIEMPO DE ALMACENAMIENTO DESEADO, LA
ESTABILIDAD DEBE EVALUARSE POR COMPARACION DE LA RESPUESTA DEL
INSTRUMENTO CON LA DE SOLUCIONES FRESCAS.
5.- ESTABILIDAD POS-PREPARACION
 DEBE DETERMINARSE LA ESTABILIDAD DE LAS MUESTRAS PROCESADAS,
INCLUYENDO EL TIEMPO DE RESIDENCIA EN EL AUTO-MUESTREADOR.
 LA ESTABILIDAD DEL FARMACO Y EL ESTANDAR INTERNO DEBEN
EVALUARSE SOBRE EL TIEMPO DE EJECUCION PREVISTO PARA EL TAMAÑO
DEL LOTE POR DETERMINACION DE LAS CONCENTRACIONES SOBRE LA
BASE DE LA CALIBRACION ORIGINAL CON LOS ESTANDARES.
IDONEIDAD DEL SISTEMA
 VALIDACION DE LA METODOLOGIA ANALITICA
 UNA VEZ, AL FINALIZAR EL DESARROLLO
 ENSAYOS DE IDONEIDAD DEL SISTEMA
 PERIODICAMENTE ANTES DEL COMIENZO DEL ANALISIS DE MUESTRAS
 REPRODUCIBILIDAD DE TIEMPO DE RETENCION
 SENSIBILIDAD ADECUADA PARA CUANTIFICAR EL LLOQ
 SEPARACION CROMATOGRAFICA
INFORME DE LA METODOLOGIA ANALITICA
1. LISTA COMPLETA DE EQUIPOS, REACTIVOS Y PREPARACIONES
2. PROCEDIMIENTO PARA PREPARACION DE CURVA ESTANDAR, VALIDACION
Y MUESTRAS CONTROL
3. PROCEDIMIENTO PARA EXTRACCION O TRAMIENTO DE MUESTRAS PREVIO
A LOS ANALISIS. INCLUYE CRITERIOS PARA ACEPTACION/RECHAZO
4. METODOLOGIA PARA IDONEIDAD DEL SISTEMA
5. LIMITES DEL RANGO DE CUANTIFICACION
6. CRITERIOS DE ACEPTACION/RECHAZO PARA ESTANDARES DE LA CURVA Y
QCS
7. RESUMEN DE LOS DATOS DE VALIDACION
8. CROMATOGRAMAS REPRESENTATIVOS DEL PLASMA BLANCO, PLASMA +
ESTANDAR INTERNO, LLOQ
9. GRAFICO DE LA CURVA DE CALIBRACION ESTANDAR
10.INFORMACION SOPORTE PARA ESTABILIDAD