BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin

INSTRUCCIONES DE USO –
MEDIOS EN PLACA LISTOS
PARA USAR
PA-254480.02
Rev.: Junio de 2003
BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin
USO PREVISTO
BD Bacteroides Bile Esculin Agar (=BBE) with Amikacin es un medio selectivo para el
aislamiento e identificación presuntiva del grupo Bacteroides fragilis.
PRINCIPIOS Y EXPLICACION DEL PROCEDIMIENTO
Método microbiológico.
Entre los anaerobios detectados con mayor frecuencia en infecciones clínicas humanas se
encuentran los miembros del grupo Bacteroides fragilis. Es importante obtener una detección e
identificación rápidas de estos organismos, dado que se han determinado como más
resistentes al tratamiento antimicrobiano en comparación con otros anaerobios1,2. B. fragilis y
B. thetaiotaomicron son las especies de mayor importancia clínica1-3. Otras especies incluidas
en el grupo: B. caccae, B. distasonis, B. eggerthii, B. merdae, B. ovatus, B. stercoris, B.
uniformis y B. vulgatus.
Se han recomendado como apropiados para aislamiento primario los medios selectivos tales
como CDC Anaerobe 5% Sheep Blood Agar with Kanamycin and Vancomycin3-6. Sin embargo,
se proporcionó una evidencia limitada para la identificación presuntiva del grupo B. fragilis. En
1978, Livingston et al describieron un medio en placa primario (BBE) que se determinó que
proporcionaba recuperación selectiva del grupo B. fragilis y también evidencia de identificación
presuntiva4. Mientras las versiones anteriores de los medios contenían gentamicina5, se ha
demostrado que la amicacina proporciona una mejor inhibición de determinados organismos
anaerobios facultativos.
BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin se basa en el agar de soja Trypticase II,
que proporciona nutrientes. Mediante la amicacina y la bilis de buey, se obtiene una inhibición
selectiva de anaerobios facultativos y de la mayoría de los organismos anaerobios gram
positivos. La diferenciación del grupo B. fragilis se basa en la hidrólisis de la esculina, durante
la que se producen esculetina y glucosa. La esculetina reacciona con la sal férrica (citrato
férrico amónico) para producir un complejo de marrón oscuro a negro que aparece en el medio
alrededor de las colonias de los miembros del grupo B. fragilis.
REACTIVOS
BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin
Fórmula* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína
14,5 g
Digerido papaico de harina de soja
5,0
Cloruro sódico
5,0
Esculina
1,0
Citrato férrico de amonio
0,5
Bilis de buey
15,0
Hemina
0,01
Amicacina
0,075
Vitamina K1
0,01
Agar
14,0
Factores de crecimiento
1,8
pH 7,0 ± 0,2
*Ajustada y/o suplementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
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PRECAUCIONES
. Solamente para uso profesional.
No utilizar las placas si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación, grietas o cualquier otro signo de deterioro.
Consultar los procedimientos de manipulación aséptica, riesgos biológicos y desecho del
producto usado en el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO.
ALMACENAMIENTO Y VIDA UTIL
Al recibir las placas, almacenarlas en un lugar oscuro a una temperatura de 2 – 8 °C, en su
envase original hasta momentos antes de su utilización. Evitar la congelación y el
sobrecalentamiento. Las placas pueden inocularse hasta la fecha de caducidad (véase la
etiqueta del paquete) e incubarse durante los períodos de incubación recomendados.
Las placas de pilas abiertas de 10 unidades pueden utilizarse durante una semana cuando se
almacenan en un área limpia a una temperatura de 2 – 8 °C.
CONTROL DE CALIDAD DEL USUARIO
Inocular muestras representativas con las cepas indicadas a continuación (para obtener los
detalles, véase el documento INSTRUCCIONES GENERALES DE USO). Incubar durante 48 h
en una atmósfera anaerobia (por ejemplo, sistema anaerobio BD GasPak) a 35 – 37 °C.
Cepas
Bacteroides fragilis ATCC 25285
Bacteroides thetaiotaomicron
ATCC 29741
Clostridium perfringens ATCC 13124
Escherichia coli ATCC 25922
Proteus mirabilis ATCC 12453
Peptostreptococcus anaerobius
ATCC 27337
Staphylococcus aureus ATCC 25923
Sin inocular
Resultados del crecimiento
Crecimiento de bueno a excelente; colonias
grises rodeadas por zonas de marrón a negro
Crecimiento de bueno a excelente; colonias
grises rodeadas por zonas de marrón a negro
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición de parcial a completa
Inhibición completa
Inhibición completa
Beige oscuro
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados
BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin (placas Stacker de 90 mm). Controladas
microbiológicamente.
Material no suministrado
Medios de cultivo auxiliar, reactivos y el equipo de laboratorio que se requiera.
Tipos de muestras
Es un medio selectivo para el aislamiento e identificación presuntivas del grupo Bacteroides
fragilis. Puede utilizarse con todos los tipos de muestras clínicas (véase también
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO).
Emplear las técnicas aprobadas para la recogida y el transporte de muestras anaerobias 1,3,6-8.
Durante la recogida, evitar la contaminación de las muestras con flora fecal, dado que
albergan organismos del grupo B. fragilis.
PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
Extender las muestras tan pronto como sea posible después de recibirlas en el laboratorio.
Dado que algunas cepas del grupo B. fragilis tal vez no crezcan bien debido a las propiedades
selectivas del medio, y con el fin de detectar otros patógenos anaerobios en la muestra,
también debe incluirse un medio de agar sangre no selectivo tal como BD Schaedler Agar
with Vitamin K1 and 5% Sheep Blood. Asimismo, debe inocularse una placa de BD
Columbia Agar with 5% Sheep Blood incubada en atmósfera aerobia para garantizar la
detección de patógenos aerobios y facultativos presentes en la muestra.
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Incubar BD Bacteroides Bile Esculin Agar With Amikacin y BD Schaedler Agar with
Vitamin K1 and 5% Sheep Blood sin demora en condiciones anaerobias (por ejemplo,
mediante el uso de un sistema anaerobio BD GasPak), a 35 ± 2 °C durante al menos 48 h.
Independientemente del sistema anaerobio utilizado, es importante incluir un indicador de
anaerobiosis tal como el indicador anaerobio desechable BD GasPak.
Resultados
Después de 48 h de incubación, las colonias del grupo B. fragilis deben medir más de 1 mm
de diámetro y tener un aspecto grisáceo, circular, entero y elevado. Se debe realizar una
tinción de Gram para facilitar la identificación. La hidrólisis de esculina se indica mediante el
oscurecimiento del medio alrededor de las colonias. Se inhibe la mayoría de los anaerobios
diferentes del grupo B. fragilis.
CARACTERISTICAS DEL RENDIMIENTO Y LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Este medio se utiliza para el aislamiento selectivo e identificación presuntiva del grupo
Bacteroides fragilis, tal como B. fragilis, B. thetaiotaomicron, B. caccae, B. distasonis, B.
eggerthii, B. merdae, B. ovatus, B. stercoris, B. uniformis y B. vulgatus. No permite la
diferenciación de las especies dentro de este grupo. Para identificar las especies, se requieren
pruebas bioquímicas adicionales3.
Se ha reseñado que algunas cepas de Bacteroides vulgatus tal vez no produzcan hidrólisis de
la esculina1-3.
En este medio no se inhiben los anaerobios facultativos con una alta resistencia a los
aminoglucósidos.
Las especies de Enterococcus pueden crecer en el medio y pueden ser similares en
apariencia al grupo B. fragilis. Por tanto, es obligatorio incluir una placa de agar sangre
incubada en atmósfera aerobia para mostrar la relación de los aislados con respecto al
oxígeno. Los enterococos también crecen en atmósfera aerobia. Una tinción de Gram también
permite la diferenciación entre Enterococcus y el grupo B. fragilis.
Bilophila wadsworthia, que fue aislada en agar bilis esculina para Bacteroides9, por lo general es
inhibida por la amicacina contenida en BD Bacteroides Bile Esculin Agar with Amikacin.
REFERENCIAS
1. Hammann, R., and Werner, H. 1992. Bacteroidaceae, p. 195-204. In: F. Burkhardt (ed.),
Mikrobiologische Diagnostik. Georg Thieme Verlag, Stuttgart, New York.
2. Reischelderfer, C., and J.I. Mangels. 1992. Culture media for anaerobes, p.2.3.1-p.2.3.8 In
for Microbiology, Washington, D.C.H.D. Isenberg (ed.), Clinical microbiology procedures
handbook, vol. 1. American Society
3. Jousimies-Somer, H.R., et al. 2003. Bacteroides, Porphyromonas, Prevotella,
Fusobacterium, and other anaerobic gram-negative bacteria. In: Murray, P. R., E. J. Baron,
J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken (ed.). Manual of clinical microbiology, 8thed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
4. Livingston, S.J., S.D. Kominos, and R.B. Yee. 1978. New medium for selection and
presumptive identification of the Bacteroides fragilis group. J. Clin. Microbiol. 7:448-453.
5. Dowell, V.R., Jr., G.L. Lombard, F.S. Thompson, and A.Y. Armfield. 1977. Media for
isolation, characterization, and identification of obligately anaerobic bacteria. CDC
laboratory manual. Center for Disease Control, Atlanta.
6. Dowell, V.R., Jr., and T.M. Hawkins. 1987. Laboratory methods in anaerobic bacteriology.
CDC laboratory manual. HHS Publication No. (CDC) 87-8272. Centers for Disease Control,
Atlanta.
7. Murray, P.R., and D.M. Citron. 1991. General processing of specimens for anaerobic
bacteria, p. 488-504. In A. Balows, W.J. Hausler, Jr., K.L. Herrmann, H.D. Isenberg, and
H.J. Shadomy (ed.), Manual of clinical microbiology, 5th ed. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
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8. Murray, P.R., Baron, E.J., Pfaller, M.A., Tenover, F.C., and R.H. Yolken (ed.). 1995.
Manual of clinical microbiology, 6th ed., American Society for Microbiology, Washington,
D.C.
9. Baron EJ, Summanen P, Downes J, Roberts MC, Wexler H, Finegold SM. 1989. Bilophila
wadsworthia, gen. nov. and sp. nov., a unique gram-negative anaerobic rod recovered from
appendicitis specimens and human faeces. J. Gen. Microbiol. 135: 3405-3411
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Medios en placa listos para usar, 20 placas
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