8. ANEXOS 8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE

Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
8. ANEXOS
8.1 COMPOSICION DE MEDIOS DE CULTIVO
CALDO ACETATO MINERAL
Fosfato ácido di sódico dodecahidratado.
2.25 g
Fosfato diácido monopotásico
0.345 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado
0.05 g
Cloruro de Amonio
0.25 g
Acetato de Sodio
0.000125 g
Bicloruro de Calcio dihidratado
0.00025 g
Solución de elementos traza
0.75 mL
Carbonato de Sodio al 0.05%
0.11 mL
Agua destilada
250 mL
pH final
7.0
Esterilización a 121 ºC por 15 min.
MEDIO AUXILIAR ( AUX MEDIUM)
Sulfato amoníaco
2g
Base
82.8 mg
Aminoácidos.
250 mg
Vitaminas y sustancias nutritivas
35.9 g
Tampón fosfato
0.04 M pH= 7.1 1000 mL
Agar
1.5 g
pH final
7.0-7.2
Esterilización a 121 ºC por 15 min.
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
CETRIMIDE AGAR
Peptona de gelatina
20 g
Cloruro de Magnesio
1.4 g
Sulfato potásico
10 g
N-cetil-N,N,N,-trimetilamoniobromuro(Cetrimide)
0.3 g
Agar-agar
13 g
Glicerina
10 mL
Petróleo al 1 %
Esterilización a 121 ºC por 15 min.
AGAR KING-B
Peptona de carne
4g
Glicerol
2g
Fosfato diácido de Potasio
0.3 g
Sulfato de Magnesio
0.3 g
Agar
3g
Agua destilada
200 mL
pH final
7.0
Esterilización a 121 ºC por 15 min.
MEDIO MINERAL
Cloruro de Sodio
24 g
Cloruro de Potasio
0,7 g
Fosfato diácido de Potasio
2,0 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado
1,0 g
Fosfato ácido di sódico
3,0 g
Nitrato de Amonio
1,0 g
Agua destilada
1000
Petróleo crudo
mL
pH final
10 mL
7.0
Esterilización a 121ºC por 15 minutos.
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
MEDIO MÍNIMO DE GOLDMAN
Fosfato ácido di potásico
18 g
Fosfato diácido de Potasio
6g
Sulfato de Magnesio
0.02 g
Sulfato diamónico
4g
Etanol
20 mL
Agua destilada.
1000 mL
pH final
7.0
Esterilización a 121ºC por 15 minutos.
Extracto de levaduras al 3%.
MEDIO PALLERONI
Fosfato ácido di sódico
9.37 g
Fosfato diácido de Potasio
8.976 g
Cloruro de Sodio
1.7 g
Cloruro de Amonio.
0.2 g
Sulfato de Magnesio heptahidratado
0.1 g
Citrato amónico férrico
0.01 g
Cloruro de Calcio
0.001 g
Agua destilada
200 mL
pH final
6.8
Esterilización a 121 ºC por 15 min., excepto el Citrato amónico férrico y Cloruro de Calcio el cual se
esteriliza por filtración y se adiciona en condiciones estériles a partir de una solución concentrada.
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
8.2 CARACTERÍSTICAS DEL DESTILADO DE CRUDO DE PETRÓLEO A 200 ºC
CUADRO Nº 01
Nº
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
Tiempo
de
retención
(TR)
1.33
1.55
2.07
2.69
3.17
3.87
4.28
4.43
5.09
7.74
8.28
10.76
15.83
16.86
17.79
19.64
22.34
24.88
24.88
25.90
27.30
29.60
31.80
33.91
35.94
37.87
39.73
41.51
43.23
44.89
46.47
48.08
49.97
52.22
Componentes
Peso
Fórmula
molecular
(PM)
%
n-pentano
n-hexano
n-heptano
2 metil pentano
3 metil hexano
1,1,2trimetil
ciclohexano
1-hexeno
2 metil hexano
2 etil hexano
2 metil decano
4 metil decano
n-nonano
2 metil undecano
3,5 dimetil octano
2 metil undecano
dodecano
n-tridecano
n-tetradecano
tetradecano
2 metil tridecano
n-pentadecano
pentadecano
n-hexadecano
n-heptadecano
n-octadecano
octadecano
n-eicosano
n-heneicosano
n-dodocosano
n-pentacosano
n-octacosano
n-nonacosano
n-triacontano
n-dotriacontano
76
86
100
72
100
126
84
86
114
114
156
128
170
142
170
170
184
198
198
198
212
212
226
240
254
254
282
296
310
352
394
408
422
450
0.49
0.77
0.57
0.64
1.82
2.18
2.14
2.05
7.58
9.52
0.38
13.17
5.95
9.39
2.55
8.56
7.86
5.09
3.48
3.90
3.93
1.37
1.22
0.96
0.85
0.77
0.71
0.55
0.43
0.37
0.20
0.20
0.20
0.10
C5H12
C6H14
C7H16
C6H14
C7H14
C9H28
C6H12
C7H16
C8H18
C11H24
C12H26
C9H20
C12H26
C10H22
C12H26
C12H26
C13H28
C14H30
C14H30
C14H30
C15H32
C15H32
C16H34
C17H36
C18H38
C18H38
C20H42
C21H44
C22H46
C25H52
C28H58
C29H60
C30H62
C32H66
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
INTERPRETACIÓN:
Saturados aciclicos
95.77% (37.38% parafínico)
Saturados cíclico
2.18
Insaturados-olefínico
2.05
Aromáticos
0.00
100.00
PROPIEDADES FISICOQUÍMICAS
GRAVEDAD API A 60º F
19.0
DESTILACIÓN
%DESTILADO
Hasta 200 ºC
15
Residuo
pesado 85
CONDICIONES CROMATÓGRAFO DE GASES: GC/MS
Columna:
Medianamente polar SUPELCO 608
T. Horno:
80 ºC (8,5’); 45 ºC/min hasta 150 ºC (1’) 8 ºC/min hasta 280 ºC (12’)
Injector:.
80 ºC (0,2’); 50 ºC/min hasta 100 ºC (5’); 50 ºC/min hasta 300 ºC hasta el final de
Vol.inj:
corrida.
Split:
1,5 µl
Gas arrastre:
[50:1]
Helio 20.8psi (1,73 mL/min)
NOTAS:
TR: Tiempo de retención, secuencia en que se separan los componentes en el cromatograma.
PM: Peso molecular
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
Gráfico Nº 01:Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del
destilado de crudo.
Gráfico Nº 01: Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del
destilado de crudo.
g
Grafico N° 01:
Tiempo de retención en la columna y porcentaje de cada componente del destilado de crudo.
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8.3 CARACTERISTICAS DEL SUELO DE CULTIVO.
CUADRO Nº 02
Conductivida Análisis Mecánico
d (C.E)
Ds/m
P.S*
Arena Limo
%
%
Arcill
a%
1.03
69.45
8.28
22.3
pH
Carbonat
o de
Calcio
CaCO3
Textura P.S %
Materia
Fósforo Óxido
Orgánica P
dipotásic
(M.O)
o K2O
Cationes Cambiables
%
Cationes
Ca++
intercambiabl
es (CIC)
Cmol (+)/kg
Franco 6.4
Arenoso
2.6
0.00
ppm
kg/ha
49.45
585.60
(0.005% (0.49%)
)
P.S*: Pasta Saturada
13.72
Mg++
K+
Na
9.60
3.20
0.46
0.17
(0.038% (0.0077%) (0.0017%) (0.0004%)
)
Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
INTERPRETACIÓN:
CONDUCTIVIDAD :
Muy ligeramente salino:
Ligeramente salino:
Moderadamente salino:
Fuertemente salino:
Extremadamente salino:
MATERIA ORGANICA (M.O)
Bajo:
Medio:
Alto:
CALCAREO TOTAL CaCO3%
C.E. (sales). Según respuesta de los cultivos (dS/m)
<2
2-4
4-8
8-16
>16
Bajo:
Medio:
Alto:
FÓSFORO P (ppm)
Bajo:
Medio:
Alto:
POTASIO K2O (kg/ha)
Bajo:
Medio:
Alto:
REACCION DEL SUELO (pH)
Fuertemente ácido:
Moderadamente ácido:
Ligeramente ácido:
Neutro:
Ligeramente alcalino:
Moderadamente alcalino:
EQUIVALENCIAS
1 mmhos/cm =
1 cmol (+) kg =
< 1%
1-5%
> 5%
< 2%
2-4%
>4%
< 7%
7-14%
>14 %
< 300
300-600
> 600
5.1-5.5
5.6-6.0
6.1-6.5
6.6-7.3
7.4-7.8
7.9-8.4
1 dS/m
1 me/100g
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
8.4 BIODEGRADACIÓN DE CRUDO EN TERRARIOS
FOTO Nº 01
CONSORCIO BACTERIANO EXÓGENO
NATIVO
CONSORCIO BACTERIANO
CONTROL ABIÓTICO
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
8.5 DETERMINACIÓN DE LA REGRESIÓN MÚLTIPLE POR PASOS CON EL
PROGRAMA SPSS 9.0 WINDOWS.
Gráfico Nº 02. Ingreso de datos al SPSS.
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
Gráfico Nº 03. Selección de método de regresión lineal múltiple
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
Gráfico Nº 04.Selección de variables y del método de regresión lineal múltiple: Stepwise.
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Biodegradación de crudo
Guzmán, Rocío Miluska.
8.6
de
petróleo
en
terrarios.
Escalante
ESCALA TURBIDIMÉTRICA MC. FARLAND
Tubo
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Cloruro de Ácido
Millones de
Bario (1%) sulfúrico(1%) m.o/mL
0.1
9.9
300
0.2
9.8
600
0.3
9.7
900
0.4
9.6
1200
0.5
9.5
1500
0.6
9.4
1800
0.7
9.3
2100
0.8
9.2
2400
0.9
9.1
2700
1.0
9.0
3000
Fuente: Microbiología de laboratorio (Bradshaw, 1976)
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