BASES CONCEPTUALES DEL MONITOREO BIOLOGICO La abundancia y los patrones de distribución de los organismos acuáticos pueden estar afectados por la contaminación del agua. Esto se evidencia en: •cambios de biomasa; se mantiene la estructura de la comunidad. •cambios en la estructura, la biomasa puede cambiar; especies se mantienen. •cambios en la estructura y en la composición; biomasa puede cambiar. El tipo de respuesta depende de: - la naturaleza y la intensidad de la contaminación - susceptibilidad relativa de las especies a tipos específicos de alteraciones ambientales. Justificación del monitoreo biológico -Limitación del monitoreo puramente físico y químico. -El análisis químico solamente revela la presencia de la sustancia para la cual el análisis ha sido específicamente diseñado. Contaminantes insospechados no son detectados por análisis de rutina. - Los relevamientos biológicos reflejan la integridad ecológica global y los cambios ambientales significativos llamando la atención a futuras investigaciones. -La concentración de contaminantes en las aguas receptoras fluctúa ampliamente y muy rápido. Los picos no son detectados, incluso con muestreos frecuentes. Los organismos responden a la totalidad de las condiciones ambientales experimentadas (fluctuantes e interactuantes) a lo largo de sus vidas. - Cuando la descarga del contaminante es anterior al monitoreo f-q, éste no es detectado. Se obtiene información de la calidad del agua. Asegurar el acatamiento de las medidas de control. Chequear la eficiencia de los tratamientos de desechos. Formular estrategias de manejo de aguas. Para establecer standards de calidad de agua así como para determinar cuál es el nivel aceptable de un contaminante se necesita la información generada en: relevamiento físico y químico monitoreo biológico * investigaciones ecofisiológicas * investigaciones toxicológicas * Niveles de estudio del aspecto biológico (*) Respuestas individuales: horas a semanas fisiológicas: nutrición, reproducción, fotosíntesis, respiración, etc. etológicas: huida, búsqueda de alimento, apareamiento, locomoción, etc. morfológica: deformaciones esqueletales, tumores, cambios histológicos. bioquímicas: tenor de hemoglobina, pigmentos fotosintéticos, inhibición de enzimas. Respuestas supraorganismo: semanas a años cambios en la estructura y dinámica de las comunidades alteraciones de biomasa y productividad alteraciones de las tramas tróficas reducción de la tasa de descomposición orgánica alteraciones de los ciclos biogeoquímicos Fluorescencia fitoplancton Control Contaminación con atracina (herbicida) C control G glifosato grado técnico R Roundup Max M mejillón Niveles de estudio del aspecto biológico (*) Respuestas individuales: horas a semanas fisiológicas: nutrición, reproducción, fotosíntesis, respiración, etc. etológicas: huida, búsqueda de alimento, apareamiento, locomoción, etc. morfológica: deformaciones esqueletales, tumores, cambios histológicos. bioquímicas: tenor de hemoglobina, pigmentos fotosintéticos, inhibición de enzimas. Respuestas supraorganismo: semanas a años cambios en la estructura y dinámica de las comunidades alteraciones de biomasa y productividad alteraciones de las tramas tróficas reducción de la tasa de descomposición orgánica alteraciones de los ciclos biogeoquímicos 2 dias Phacus tortus Phacus curvicaudus Phacus pyrum DBO5 Amonio oxígeno disuelto temperatura Arroyo Carabassa Padulles, 2014 branquias Hiperplasia de células Fusión de lamelas 26 semanas hígado piel 2 semanas núcleos de forma irregular hígado Tejido necrótico Núcleos picnoticos Proliferación de fibroblastos Trucha marrón riñón Desplazamientos de los núcleos a la periferia de las células tubulares Alteraciones en la morfología de individuos (ej. Chironomidae) Bioindicador de condiciones de stress (ej. Contaminantes) Contaminación grave incrementa la frecuencia de las deformidades en las larvas. Variaciones estacionales: mayor frecuencia en períodos fríos y menor en el verano bajas temperaturas extienden el período en que las larvas permanecen en contacto con el sedimento y los contaminantes Diapausa por días cortos 80-90% de la fauna bentónica 3% con deformidades Sitio 1-3: deformidades Parques Nacionales y Reservas: sin deformidades Niveles de estudio del aspecto biológico (*) Respuestas individuales: horas a semanas fisiológicas: nutrición, reproducción, fotosíntesis, respiración, etc. etológicas: huida, búsqueda de alimento, apareamiento, locomoción, etc. morfológica: deformaciones esqueletales, tumores, cambios histológicos. bioquímicas: tenor de hemoglobina, pigmentos fotosintéticos, inhibición de enzimas. Respuestas supraorganismo: semanas a años cambios en la estructura y dinámica de las comunidades alteraciones de biomasa y productividad alteraciones de las tramas tróficas reducción de la tasa de descomposición orgánica alteraciones de los ciclos biogeoquímicos Tipos de evaluaciones biológicas I. Ensayos de toxicidad Evaluar la calidad del agua y predecir y cuantificar el efecto de tóxicos. pesticidas y peces a distintas temperaturas (supervivencia) diversos contaminantes y bivalvos (mortalidad) detergentes y almejas (tasa de filtración) desechos industriales y diatomeas (densidad) desechos domésticos e industriales y Chlamydomonas gelatinosa (densidad) fenoles y larvas de Chironomus (consumo de oxígeno) metales pesados y crustáceos (DBO y tasas de respiración) Laboratorio Minimiza las diferencias fisiológicas entre organismos, condiciones ambientales standard, pérdida de realismo. Monoespecíficos: exposición de los organismos a diferentes concentraciones de un tóxico o diferentes diluciones de un efluente. Multiespecíficos: evaluación de los cambios estructurales y funcionales en un meso o microcosmos. En el campo Ensayo con muestra biológica (mono o multiespecífica) in situ. Se evalúan parámetros estructurales y funcionales. Más sensibles a la contaminación, variabilidad natural de los organismos y de las condiciones ambientales. Microcosmos Mesocosmos Controversia: uni o multiespecífico UNIESPECIFICOS VENTAJAS Metodología sencilla Corta duración (horas, días) No se requieren taxónomos Evaluaciones de crecimiento más rápidas (UV-visible) Mayor estandarización DESVENTAJAS Modelos sencillos simplifican la realidad del sistema No se incluyen mecanismos homeostáticos operantes en la comunidad. Aplicación ecológica limitada ya que las distintas especies de la comunidad tienen sensibilidades diferentes Controversia: uni o multiespecífico MULTIESPECIFICOS VENTAJAS Mayor realismo Se pueden estudiar los mecanismos homeostáticos de una comunidad Mayor aplicación ecológica Evaluación acotada pero certera de la realidad al realizarse bajo condiciones controladas DESVENTAJAS Metodología no es tan sencilla Mayor duración (semanas, meses) Determinación taxonómica de un gran número de especies Escaso conocimiento de la ecología de las especies. Amplio rango de respuestas fisiológicas que dificultan la reproducibilidad de la experiencia. De Tezanos Pinto & O’Farrell, 2015 Hydrbiologia Impacto conjunto glifosato y el mejillón invasivo sobre – Fitoplancton Bacterioplancton Perifiton Pizarro et al., Ecotoxicology S i m p l i c i d a d Tests enzimáticos órganos Tests fisiologicos Bioensayo ideal uniespecífica Comunidad natural multiespecífica Ecosistemas controlados Estudios de campo Realismo ecológico Pesticidas clorados Hidrocarburos alifáticos Metales Pesados Sensibilidad y precisión del bioensayo está afectada por: •Tasas de crecimiento •Concentraciones iniciales •Superficie de las células EC50: concentración de Cu requerida para reducir la fluorescencia en 50% con respecto al control Cu tiene efectos tóxicos en la actividad estearasa (determinada por la tinción FDA) Cu induce la sobreproducción de ROS por stress oxidativo, de forma más marcada en poblaciones uniespecíficas que en multiespecíficas de Microcystis aeruginosa. Un ejemplo: Efecto de los metales pesados sobre algas Estimación del impacto sobre las algas capacidad fotosintética (captación de CO2 radiactivo y evolución del O2) composición específica biomasa (recuentos celulares, volumen citoplasmático) indicadores fisiológicos (contenido de clorofila a, C, N, P, proteínas, hidratos de carbono, ácidos nucleicos, lípidos) La BIODISPONIBILIDAD depende estrechamente de la especiación química: la concentración del ión libre es más importante que la conc. total; la precipitación y formación de complejos puede transformar una gran fracción en indisponible para las algas. Los metales complejados (agentes complejantes: ácidos húmicos y fúlvicos) y adsorbidos (sólidos) suelen no estar disponibles para el fitoplancton reflejando falta de toxicidad en ríos y efluentes. Acción de los metales pesados sobre las algas inhibición por acción tóxica: cambios en la composición específica, disminuye la diversidad. Estimulación de la tasa de crecimiento (MICRONUTRIENTES) Tolerancia de determinados metales Mayor en el laboratorio que en la naturaleza (otros stress físicos y químicos) Concentraciones tóxicas de Zn varían entre 3 y 4 órdenes de magnitud La toxicidad varía según la especie y la clase algal Sensibilidad decreciente: diatomeas>cianofitas>clorofitas tot dis (mg/l) Control 0.55 0.43 Zn 1 3.3 2.73 Zn 2 11.7 9.56 Zn 3 26.11 24.46 Adaptaciones biológicas al stress Producción de material quelante extracelular: disminución de la biorreactividad de los MP. Ej.: envolturas extracelulares de Chlorella pyrenoidosa materia orgánica excretada por Nitzschia palea complejo Cu-polipéptido de Anabaena cylindrica Alteraciones de la permeabilidad de la membrana Desvío de los MP a sitios intracelulares metabólicamente inertes Mediación de cambios en el estado de oxidación de los MP Efecto del Zn sobre algas del Río Reconquista (Loez et al., 1995) Bioensayos multiespecíficos con asociaciones fitoplanctónicas nativas. Muestreos: frecuentes y no perturbadores (cada 2-3 días). Condiciones controladas: estabilidad del pH y del Zn total y disuelto. Cambios en la composición específica: parámetro consistente y sensible. Se hallaron especies indiferentes, sensibles y afines. Acción dual dependiente de la densidad del inóculo algal, estación climática y de la conc. de Zn. - estimulante del crecimiento algal > micronutriente; - inhibidor > tóxico A > Zn, comunidades más simples: <equitatividad, riqueza y diversidad. Dominancia de Bacillariophyceae y Chlorophyceae en el control Bacillariophyceae sensibles al Zn. - Se verificó una acción tóxica a mayores concentraciones: densidad decreciente - diatomeas reemplazadas por las Chlorophyceae estimuladas por el metal - explosión de Chlorella vulgaris (capaz de concentrar MP) Extrapolabilidad: las especies más tolerantes son dominantes en ríos muy contaminados de la región (Nitzschia palea, Gomphonema parvulum y Synedra acus). La combinación de varios metales tiende a incrementar el efecto tóxico Toxicidad aguda Efecto alguicida Alguiestatico El aumento del Cu afecta la membrana tilacoidal (inhibición de síntesis de clorofila y/o provoca la desorganización de la membrana tilacoidal por un aumento del nivel de peroxidación) observándose una disminución de la tasa de crecimiento. Existen diferencias entre especies en la sensibilidad al metal. Fuentes de C orgánico atenúan el efecto de los MP. Tolerancia, detoxificación es mayor en cepas provenientes de ambientes contaminados II. Comportamiento Desarrollo de medidas comportamentales para evaluar toxicidad subletal cambios en el movimiento general cambios en actoreflejos cambios en respuestas condicionadas cambios en actividad motora estimulación de la excitación general narcosis Un ejemplo: efectos tóxicos de la fauna ictícola Reconocen olores y sabores naturales, no reconocen productos químicos artificiales. Detección de sustancias y reacción de atracción o fuga: soluciones de sulfato de Zn en dosis subletales: reacción de fuga en salmónidos fenoles no inducen reacción, actúan sobre el SN privando a los organismos de toda posibilidad de lucha detergentes perturban organismos quimiorreceptores, comportamiento paradójico; idem cloruros aguas desoxigenadas producen stress: movimientos violentos y desordenados que alejan o mantienen los individuos en la zona de peligro Tiempo necesario para la aparición de los primeros síntomas de intoxicación → trastornos de comportamiento. Distintos tóxicos actúan distinto: amoníaco + lento, cianuro + rápido. • Tiempo de aparición del efecto tóxico • Tiempo de manifestación: pérdida de equilibrio • Tiempo necesario para alcanzar la irreversibilidad del proceso de intoxicación (importante para las contaminaciones intermitentes) Señal de alarma, • Tiempo de supervivencia (hasta la muerte) bloqueo de apertura Tiempo | Tiempo de manifestación ----- | Concentración umbral Concentración de tóxico Bioacumulacion, activ. ventilatoria y consumo de O2 III. Lista de especies simple lista de especies relacionadas con sitios con diferente grado de contaminación abundancia relativa de las especies Ventajas del uso del perifiton (algas) Tasas de reproducción rápidas y ciclos de vida muy cortos, indicador a corto plazo. Productores primarios: directamente afectadas por factores físico-químicos. Muestreo sencillo, poco costoso, poco personal, impacto mínimo en la biota . Métodos estandarizados para la evaluación de las características funcionales y estructurales no taxonómicas (biomasa, medidas de clorofilas).. Sensibles a la mayoría de los contaminantes que pueden no afectar a otras comunidades, o que afectan otros organismos a concentraciones más altas (herbicidas). Buenos indicadores de condiciones locales Ventajas del uso de los macroinvertebrados bentónicos Buenos indicadores de condiciones locales. Integran los efectos de variaciones ambientales a corto plazo. Ciclos complejos de un año o más con estadíos sensibles al stress; la comunidad responde más lentamente. Los macroinvertebrados se identifican rápidamente a nivel familia, muchos taxa intolerantes pueden ser identificados a niveles taxonómicos inferiores con facilidad. Amplio rango de niveles tróficos y tolerancias a la contaminación: información potente para la interpretación de efectos acumulativos. Muestreo relativamente fácil: poca gente, equipo poco costoso y efecto mínimo sobre la biota residente Son el alimento primario de los peces Son abundantes en la mayoría de los arroyos donde la fauna ictícola es escasa. Muchas agencias ambientales tienen datos background de macroinvertebrados. Ej. Quironómidos Indicadores de contaminación orgánica Aplicación a test de toxicidad Utilización en procesos de acidificación Indicadores de contaminación inorgánica con MP Alteraciones morfológicas en respuesta al impacto físico- temp. elevadas, fluct.NH Ventajas del uso de peces Efectos a largo plazo, habitat extensos: sus vidas largas y a la movilidad. Especies representativas de distintos niveles tróficos. Integran los efectos de niveles tróficos inferiores, la estructura de la asociación refleja la salud ambiental integrada. Cúspide de la red alimentaria y son consumidos por el hombre. Recolección e identificación a nivel de especie es relativamente fácil: liberación. Requerimientos ambientales bien conocidos (biología y distribución) Los estándares de calidad de agua se caracterizan por las pesquerías y su monitoreo provee evaluación directa de las posibilidades de pesca y propagación de los peces. Ej. peces Oxígeno es determinante en su distribución – muerte DO <1.5mg/l (agua calida), muerte afecta mas a peces grandes (< sup areal branquias/biomasa) MP: eliminación selectiva de estadios + sensibles de las spp mas vulnerables Alteraciones de la composición trófica y de spp, riqueza Distribucion de la frecuencia de largos reflejan la salud del habitat IV. Especies como indicadores ecológicos Bioindicadores Detectores de condiciones ambientales complejas que son el resultado de muchos factores difíciles de separar (Ghetti, 1980) Organismos que por su presencia y abundancia proveen alguna indicación, ya sea cualitativa o cuantitativa, o ambas, de las condiciones ambientales imperantes (Hellawell, 1978) Requisitos de un bioindicador estenoicos abundantes bajo condiciones favorables no cosmopolita buenas claves de identificación permitiendo una taxonomía correcta grupo diverso (alguna especie responderá a los cambios ambientales) Se debe conocer la tolerancia ecológica de la especie, los requerimientos (diurnos, estacionales) y las adaptaciones para resistir a contaminación aguda y crónica. Astyanax fasciatus AS BIOINDICATOR OF WATER POLLUTION OF RIO DOS SINOS, RS, BRAZIL SCHULZ & MARTINS-JUNIOR, 2001 The effects of an increasing downriver pollution gradient on the reproductive system of Astyanax fasciatus were investigated in the Rio dos Sinos, RS. The comparison of mean oocyte diameters, gonadal indices and gonado-somatic relationships of specimens captured in polluted areas with individuals from unpolluted reference sites revealed a significant decrease of these parameters with increasing water pollution. High loads of organic and industrial sewage are considered responsible for these effects. Condition factors showed an inverse relationship, and increased significantly in downriver polluted areas. The declining gonadal indices showed that energy was allocated to somatic growth. Astyanax fasciatus was chosen as an indicator species to monitor the influence of water quality on the reproductive potential of fish. A. fasciatus is a nonmigratory fish species (Vazzoler, 1992), abundant from Central America to the Río de la Plata delta in Argentina (Nomura, 1984). The species has a central role in riverine food webs (Agostinho et al., 1984). Araújo (1998) and Menni et al. (1996) classified A. fasciatus as relatively tolerant to environmental degradation. These characteristics are needed in an indicator species as recommended by Landres et al. (1988). Student-test comparison between the mean (X) of parameters of the reference site with polluted sites (diam = oocyte diameter, K = condition factor, GI = gonadal index, GSR = gonado-somatic relationship). Parameters Site comparison Diam (mm) K GI GSR Diam (mm) K GI GSR Monjolo x Parobé Monjolo x Parobé Monjolo x Parobé Monjolo x Parobé Monjolo x São Leopoldo Monjolo x São Leopoldo Monjolo x São Leopoldo Monjolo x São Leopoldo X reference site 0.8326 0.4891 0.6821 12.2240 0.8326 0.4891 0.6821 12.2240 X polluted site 0.8185 0.5618 0.6324 9.9381 0.7612 0.5545 0.5611 9.0307 p 0.1740** 0.0007* 0.5305** 0.0338* 0.0000* 0.0000* 0.0241* 0.0002 Controversia: Berg (1948): las especies deben ser dominantes o subdominantes, se excluyen las especies raras. Margalef (1969): todas las especies (dominantes, subdominantes y raras) con fluctuaciones numéricas y con su aparición o desaparición integran las ambientales y complementan la información físico-química sus características puntual. Interpretación: variaciones de la presencia o abundancia por los ciclos de vida y por la dinámica estacional. En general la definición de los bioindicadores responde a la ocurrencia y frecuencia de la distribución de las especies bajo determinadas características ambientales – por ej. el grado de saprobiosis -, pero es necesario comprobar las correlaciones obtenidas en la naturaleza con estudios de laboratorio. Ejemplos: bacterias, algas, protozoos, microinvertebrados, peces Clasificación según el grado de tolerancia TOLERANTES - crecen, se desarrollan en un amplio rango de condiciones ambientales - a menudo en aguas de baja calidad - insensibles a gran variedad de stress ambientales INTOLERANTES - sujetas a un rango estrecho de condiciones ambientales - poco frecuentes en aguas enriquecidas con m.o. - no pueden adaptarse a situaciones adversas - son reemplazadas por especies menos sensibles FACULTATIVAS - viven en un amplio rango de condiciones ambientales - pueden soportar un enriquecimiento moderado de m.o. - no toleran stress ambiental Organismos centinelas: organismos cuyos niveles de contaminantes en los tejidos son medibles de manera de poder inferir el tenor del contaminante químico en el ambiente. V. Asociación de organismos 1. Zonas de ambientes lóticos Métodos basados en asociaciones de grupos taxonómicos--->sistema de saprobios (Kolwitz y Marsson, 1908-1909): “Un río que ha recibido un ingreso importante de desechos presenta, aguas abajo, zonas de contaminación decreciente”. Polisaprobia---------> masosaprobia ---------> mesosaprobia--------> oligosaprobia ------------------------------------a u t o d e p u r a c i ó n -----------------------------------> Se basa en la presencia de especies indicadoras a las cuales se les ha asignado valores (0-8) de acuerdo a su tolerancia a la contaminación. Fjeridngstad (1963): 9 zonas de distinto grado de saprobiedad donde viven 4 grupos de organismos. saprobiontes sólo en aguas polutas saprofílicas en general no viven en aguas polutas saproxenas saprófobas en aguas polutas pero pueden vivir en otras condiciones ambientales no toleran nunca aguas polutas 2. Métodos gráficos Abundancia relativa de grupos taxonómicos--------------------> Patrick (1949) Utilización de diatomeas bénticas--------------------------------> Patrick (1954) En un ambiente limpio: muchas spp. con pocos individuos, pocas spp. con muchos individuos En un ambiente contaminado: se eliminan especies sensibles disminuye la competencia interespecífica aumentan las especies tolerantes Análisis mutivariados: datos cuali y cuantitativos 3. Expresiones matemáticas: Indices sensibles al efecto estresante de aplicabilidad general que detecten rápidamente cambios en los ciclos naturales fáciles de calcular y medir independientes del tamaño de la muestra que tengan significado ecológico A. Estructura de la comunidad En ambientes contaminados: consumidores y descomponedores (D) muy abundantes. Productores (P) abundan aguas abajo de un vertido. 2P I = -------------D+C Gabriel (1946) Para expresar las reducción del número de spp. aguas abajo de un vertido. A arriba - A abajo I = ------------------------- x 100 A arriba Kothe (1962) 100 % supresión total de la comunidad Indices de diversidad: contemplan el número de especies y su distribución H = pi ln pi pi=ni/N Shannon- Weaver (1949) H>3 agua limpia; 2-3 cont. moderada; 1-2 cont. media; <1 cont. fuerte. 4 H´ 3 2 1 0 S1 S2 S3 S6 S7 S9 Río Luján Tradicion americana: ind. de biodiversidad Indices bióticos: contemplan la estructura de la comunidad y la tolerancia de las Tradicion europea: indices bioticos especies. I = 2 Int + Fac Beck (1955) Int= número de spp. intolerantes Fac= número de especies facultativas 0 = cont. fuerte; 1-6= cont. moderada; 4-9 = agua limpia con corriente lenta; 10-40 = agua limpia. Aj x vj x sj GDI = General Diatom Index = -------------------- Aj x vj Coste y Ayphassorho (1991) Sj = sensibilidad a la contaminación (1:resistentes--->5: más sensibles) Aj = abundancia relativa del taxón vj = amplitud ecológica del taxón (1:fuerte; 2:media; 3:débil) 1< GDI < 5 > 4,5 contaminación nula 4,5-4 contam. o eutrof. débil 4-3,5 eutrof. moderada 3,5-3 contam. media o eutrof. moderada 3-2 contam. fuerte 2-1 contam. muy fuerte Wu (1986) # diatomeas arrafidales # diatomeas céntricas valor disminuye con un contaminación orgánica creciente <cont 5 4 3 2 1 0 S1 >cont S2 S3 No v 98 M a y 99 Río Lujàn S6 S7 J a n 99 Aug 99 S9 * Trofismo (s x h) S = índice de saprobiosis = --------------Σh S: valor saprobiótico de cada especie Sladececk (1973) h: frecuencia de aparición (1, raro; 3, frecuente; 5, abundante) Aguas limpias = 1< S < 4 = aguas con carga orgánica alta Nygaard (1949) Clorofíceas Diatomeas # especies de Chlorococcales < 1 oligotrófico # especies de Desmidiaceae > 1 eutrófico # especies de diatomeas céntricas < 1 oligotrófico # especies de diatomeas pennadas > 1 eutrófico Compuesto # Cyanophyceae + # Chlorococcales + # Céntricas + # Euglenophyceae # Desmidiaceae < 1oligotrófico; 0-0.3 distrofia >1 eutrófico; 5-20 alta eutroficación y contaminación B. Biomasa, pigmentos y metabolismo Peso seco libre de cenizas perifiton (g.m-2) Autotrófico=----------------------------------------------------Weber y Mc Farland (1969) Clorofila a (g.m-2) Aguas no contaminadas: poblaciones algales dominantes ? I bajo Aguas contaminadas: bacterias, organismos heterótrofos y descomponedores ? I alto (I>100 polución orgánica) Lakatos (1989) Contenido de clorofila a (%) Perifiton tipo autotrófico > 0.6 Perifiton tipo auto-heterotrófico .25-0.6 Perifiton tipo hetero-autotrófico 0.1-0.25 Perifiton tipo heterotrófico <0.1 D.O. 430 nm I = -------------------------- Margalef (1958) D.O. 665 nm Poblaciones algales jóvenes, en crecimiento ? I bajo Poblaciones algales maduras, estables ? I alto Odum (1956) P/R <<<<< 1 en ambientes sépticos P/R > 1 en ambientes recientemente recuperados P/R = 1 en ambientes limpios Felfoldy (1987) Estado trófico evaluado a través de la clorofila a y la densidad fitoplanctánica Estado trófico chla (µgl-1) # cel 106l-1 Atrófico 0 0 Ultraoligotrófico <1 <0.01 Oligotrófico 1-3 0.01-0.05 Oligo-mesotrófico 3-10 0.05-0.1 Mesotrófico 10-20 0.1-0.5 Meso-eutrófico 20-50 0.5-1 Eutrófico 50-100 1-10 Hipereutrófico >800 >500 Prygiel y Coste (1995) chla (µgl-1) < 10 normal 10-60 contaminación moderada 60-120 contaminación elevada 120-300 contaminación severa > 300 catástrofe Carlson (1977) Trophic Status Index (clorofila) = 10 (6- ln (DS)) ln 2 (Secchi) = 10 (6-2.04-0.68 ln (clorofila)) ln 2 (P total) = 10 (6-ln (48/PT)) ln 2 < 40 oligotrófico, 40-50 mesotrófico, > 50 eutrófico (hasta 100). Cursos lóticos y clasificaciones regionales. Es continuo y objetivo. No se deben promediar los resultados, sino que se debe usar el más sensible. En verano el de la clorofila es el más sensible c. Indicadores poblacionales Indice histopatológico Bernet et al, 2004 Lesiones clasificadas según 5 patrones de reacción de alteraciones histológicas en peces: • circulatorio • Regresivo • progresivo factor de importancia de 1 a 3 que caracterizan la relevancia patológica de c/alteración • Inflamatorio • neoplástico El grado y la extensión de la alteración se evalúa en un rango de valor de 0 a 6. Para cada órgano se calcula un índice como la suma del producto de los factores de importancia y de los valores de todas las alteraciones halladas en el órgano. La suma de todos los índices de los 4 órganos del pez resulta en el índice total de cada pez- cuanto mayor es el índice (Tot-I), más afectado está el organismo.