ESFERULINA Y COCCIDIOIDINA: REACCIONES CRUZADAS CON

ESFERULINA Y COCCIDIOIDINA:
REACCIONES CRUZADAS CON
LA HISTOPLASMINA Y LA PARACOCCIDIOIDINA
EN PRUEBAS
DE SENSIBILIDAD CUTANEA ‘*’
Dres.
David
H. B. Levine,
A. Stevens ’
Angela
Restrepo
M.,4
David
R. Ten
Eyck ’ y
Este estudio presenta los resultados obtenidos-incluyendo
los
datos sobre pruebas cutáneas con coccidioidina
y paracoccidioidina-respecto
de la reactividad a la esferulina, en
poblaciones provenientes de zonas en las que la histoplasmosis,
si bien no la coccidioidomicosis, es endémica.
Introducción
La capacidad de la coccidioidina (1)
para detectar la sensibilidad dérmica retardada inducida por Histoplasma capsulatum
está claramente documentada. Smith et al.
(2) observaron que el 9% de 871 individuos sensibilizados por el H. capszdatum
reaccionaban a la coccidioidina (dilución
1: 100). Cuando se aumentaba diez veces
más la concentración de coccidioidina, la
tasa de reacción excedía el 50%. Furcolow
y Nelson-comunicación a Smith et al. (2)
y Smith (3)-informaron
una tasa de 50%
de individuos reactivos a la coccidioidina al
1: 10 en un grupo de niños de Ohio donde la
histoplasmosis, no así la coccidioidomicosis,
es endémica (4). Por último, la investigación de 1,000 personas realizadas por
Tucker (5) en Panamá, donde la histoplasmosis también es endémica pero no
existe la coccidioidomicosis, reveló una tasa
de sensibilidad a la coccidioidina al 1: 100
de 0.8%. Siete de los ocho individuos sensibles a la coccidioidina presentaron reacción
1 Apoyado por el Departamento
de Promoción y Coordinación de Investigaciones.
Organización
Panamericana
de
la Salud: la Ameritan Lung Association y el Bureau oj
Medicine and Surgery. Marina de los Estados Unidos de
América (Work Unit M4305.12-5017BFG6).
2 Publicado en Inglés en The Americnn Journal of Epidemiology101(6):512-516, 1975.
a Laboratorio
Naval de Investigaciones
Biomédicas, Escuela de Salud Pública, Universidad
de California,
Centro
de Suministros Navales, Oakland, California.
4 Departamento
de Microbiología
y Parasitología,
Facultad de Medicina,
Universidad
de Antioquia,
Medellín,
Colombia.
GCentro Naval de Investigaciones
en Salud, San Diego,
California.
OCentro Médico del Valle de Santa Clara, San José,
California.
positiva a la histoplasmina mientras que la
del octavo resultó ambigua.
Esta capacidad de los antígenos derivados
de Coccidioides para detectar la sensibilidad
cruzada a la histoplasmina, fue de interés
en las evaluaciones de la esferulina, nuevo
antígeno para pruebas cutáneas más sensible que la coccidioidina (6). Si bien los
estudios de dos poblaciones humanas (7, 8)
no sugirieron la existencia de problemas
referentes a la reacción cruzada, se advirtió
(8) que los datos obtenidos al respecto no
eran definitivos ya que no podía excluirse la
posibilidad de experiencias fúngicas dobles
en la población examinada. Por esa razón,
en Colombia se estudió la reactividad a la
esferulina en poblaciones provenientes de
zonas exentas de Coccidioides donde prevalece la histoplasmosis. Este estudio presenta
los resultados obtenidos, incluyendo los
datos sobre las pruebas cutáneas con coccidioidina y paracoccidioidina.
Materiales
y métodos
Antigenos.
Se utilizó el lote 64D2.5 de
coccidioidina depositado en la Oficina de
Productos Biológicos en la dilución normal
al 1:lOO (dosis de 41.6 pg/O.l ml) y a una
concentración diez veces mayor que la
ordinaria, solución 1: 10 (dosis de 416 pg/
0.1 ml) . La dilución de este lote de coccidioidina era 1.6 veces menor que la del lote
64D4 utilizado anteriormente (7, 8), pero
518
Levine et al.
-
ESFERULINA
519
Y COCCIDIOIDINA
procedía del mismo concentrado primario.
A las dosis empleadas en el presente estudio,
la coccidioidina produjo reacciones de intensidad comparable a las provocadas por
la esferulina, como se indica más adelante.
La esferulina (obtenida de Berkeley Biologicals, Berkeley, California) se empleó a
una concentración normal (dosis de 1.4 pg/
0.1 ml) y a una concentración doble (14
pg/O. 1 ml) . De aquí en adelante se utilizará
la expresión “segunda concentración” para
indicar la coccidioidina o la esferulina utilizadas a una concentración 10 veces mayor
que la normal. Con anterioridad al estudio,
se observó en seis voluntarios sensibles que
la esfernlina a la concentración ordinaria
y el lote 64D2.5 de coccidioidina eran
equipotentes; los ejes medios de induración
eran, respectivamente, de 27.3 y 27.0 mm.
Además, este lote de esferulina produjo
reacciones comparables a 2.8 pg de un
lote menos potente ya utilizado en investigaciones epidemiológicas (7, 8).
En un total de 254 voluntarios, se utilizó
la histoplasmina de Parke Davis and Co.
(Detroit, Michigan) a la dilución recomendada. Dado que la provisión de este reactivo
no fue suficiente, se empleó también histoplasmina preparada por el Centro para el
Control de Enfermedades, Atlanta, Georgia
(lote H-42). Otros ll 1 sujetos recibieron
este material. La proporción de individuos
reactivos provenientes de una sola región
geográfica del país fue casi idéntica con
ambos antígenos: 14/44 (31.8%) con
histoplasmina de Parke Davis y 34/1 ll
(30.6% ) con el reactivo del CDC. Para
10s fines de este estudio, se supuso que los
antígenos eran bioequivalentes.
La paracoccidioidina se utilizó en la dosis
normal de 40 pg/O.l ml. Este reactivo,
preparado con Paracoccidioides brasiliensis
en la fase micelial, fue parcialmente purificado por precipitación en etanol, como se
describió anteriormente (9).
Población estudiada. El grupo de estudio
estuvo integrado por 368 soldados coIombianos, de 18 a 25 años de edad, de dos
regimientos estacionados en Medellfn; uno
provenía del departamento de Caldas, y el
otro, del departamento de Tolima. La
histoplasmosis es endémica en ambos departamentos (10, II).
Su economía es
principalmente agrícola (café y arroz), y
los soldados procedían, casi en su totalidad,
de familias de agricultores. Fueron excluidos del estudio tres individuos que habían
visitado la zona de Guajira, al noroeste del
país, la única zona donde la coccidioidomicosis es endémica (12).
Plan. Todos los sujetos fueron inyectados
inicialmente con las concentraciones normales de los antígenos, aplicados en ambos
antebrazos de acuerdo con el plan siguiente:
coccidioidina, antebrazo superior izquierdo;
esferulina, antebrazo superior derecho;
histoplasmina, antebrazo inferior derecho;
paracoccidioidina, antebrazo inferior izquierdo. Se interpretaron las pruebas a las
24 y 48 horas, considerándose positiva la
induración superior a 5x5 mm en cualquier
lectura. A las 48 horas se administró la
segunda concentración de coccidioidina y
de esferulina a 99 individuos con reacción
positiva a la histoplasmina y a 107 con
reacción negativa. Ninguno de ellos había
reaccionado a los antígenos coccidioidínicos
empleados a la concentración normal. Como
en el caso anterior, se registraron las reacciones a las 24 y 48 horas. Se utilizó el
análisis de chi al cuadrado para determinar
diferencias significativas en las tasas de individuos reactivos (13).
Resultados
La figura 1 muestra que, como ya se ha
documentado (IO), los residentes de 10s
valles andinos colombianos presentan una
tasa elevada de sensibilidad a la histoplasmina, aproximadamente del 27%. Pero
las tasas globales obtenidas con esferulina
y coccidioidina a la primera concentración
resultaron bajas, oscilando entre 0.3 y
0.8%. Estos valores, traducidos a tasas de
2 y 3% entre sujetos que reaccionaban a la
520
BOLETIN
DE LA OFICINA
FIGURA
l-Reacciones
centraciones
normales.
Diferencias
cotivas
los grupos
B, C, B’ y C’.
entre
cutáneas
a la
SANITARIA
coccidioidina,
significativas
esferulina,
(p <
0.01)
histoplasmina, pueden compararse con las
tasas de 0.4 y 1.1% obtenidas en los sujetos
negativos a la histoplasmina. La proporción
de individuos reactivos a ambos antígenos
coccidioidínicos no fue significativamente
diferente.
Sin embargo, con los reactivos a la segunda concentración se observó una evidente reacción cruzada en algunos de los
individuos sensibles a la histoplasmina
(figura 2). De 99 de tales individuos, ocho
resultaron reactivos, cuatro respondieron a
ambos antígenos, tres a la esferulina y solo
uno a la coccidioidina. Las tasas de resFIGURA
Z-Reocc:iones
cutáneas
o la coccidioidina
a las ordinarias
en individuos
sensibles
y no sensibles
a <
0.02)
entre
los grupos
A y A’
y entre
B y B’.
*
PANAMERICANA
entre
histoplasmina
los
grupos
Diciembre
y poracoccidioidina
A y A’;
diferencias
en
no
1975
con-
signifi.
puesta provocadas por los dos reactivos, 7.1
y 5.1% , no variaron en modo significativo.
Sin embargo, lo fue el hecho que los individuos reactivos a ambos antígenos coccidioidínicos provinieran exclusivamente del
grupo con reacción positiva a la histoplasmina; y en cambio, entre los 107 sujetos
negativos a la histoplasmina estudiados no
se encontró ninguno (figura 2).
Correspondían al grupo con reacción
positiva a la histoplasmina 24 de 25 individuos reactivos a la paracoccidioidina
(figura 1)) en comparación con uno del
grupo con reacción negativa. Se sabe que la
y CI la esferulina
a la histoplasmino.
Diferencias
en concentraciones
Diferencias
no significativas
entre
10 veces
significativas
los grupos
superiores
(p < 0.06
A y B.
Levine et al.
.
ESFERULINA
Y COCCIDIOIDINA
521
paracoccidioidina suscita reacción cruzada terminar si con la esferulina reactiva más
en individuos sensibles a la histoplasmina sensible, se produciría una reacción cruzada
y a ello se hará referencia más adelante. Un similar en tales sujetos. La figura 1 muestra
análisis de los 25 positivos a la paracoc- que a la concentración normal ambos recidioidma demostró que 22 de ellos no activos detectaron reacción cruzada en muy
reaccionaban a la esferulina ni a la cocci- baja proporción, la que no podría atribuirse
dioidina, que dos reaccionaban a ambos exclusivamente a sensibilización por H.
antígenos y uno a la esferulina exclusiva- capsulatum, ya que algunas ocurrieron en
el grupo negativo a la histoplasmina. Sin
mente.
embargo, en una dosis 10 veces mayor que
la normal, fue evidente la detección de sensiDiscusión
bilidad cruzada a la histoplasmina; con
La esferulina se deriva (6) de las ambos antígenos se observó reacción cruesférulas del C. immitis cultivadas in vitro,
zada comparable, en una proporción de solo
mientras que la coccidíoidina es un producto 5 a 7% de los sujetos sensibles a la histomicelial (1) . Las lesiones por coccidioides
plasmina.
en el hombre y en los animales contienen
Se desconoce aún la naturaleza de las
esférulas características (I#), si bien en pocas reacciones no específicas obtenidas
alguna ocasión pueden observarse micelios; con las dosis normales de los antígenos
la estructura esferular parece ser la fase coccidioidínicos (figura 1) . Su incidencia
parasítica típica de este patógeno dimorfo, se aproxima mucho a las obtenidas por
y el micelio es su forma saprofítica.
Tucker en Panamá (5), y por Robledo et
Las esférulas y los micelios difieren in- al. (12) en Colombia. Posiblemente se
munológicamente (15) y sus lisados deriven de exposiciones subclínìcas a hongos
muestran también diferencias inmunológi- no afines o a sus productos. Goodman,
cas: la esferulina suscita reacciones de Larsh y Palmer (18) han demostrado
sensibilidad cutánea en dosis mucho me- perfiles complejos de reacción cruzada entre
nores que la coccidioidina y detecta alrede- una amplia gama de hongos; con Histodor de una tercera parte más de individuos plasma y 13 géneros heterólogos, incluso
reactivos en zonas donde el C. immitis es hongos comunes tales como Penicillium y
endémico (7, 8). Las pruebas cutáneas Aspergillus, se pudo inducir sensibilidad a
efectuadas en 47 casos de coccidioidomi- la coccidioidina en cobayos.
cosis demostrada por cultivos o serodiagTambién debe tenerse en cuenta la posinóstico, indicaron una proporción similar- bilidad de que las reacciones no especííicas
mente mayor de individuos reactivos a la a la coccidioidina y a la esferulina, en
esferulina (Stevens, D. A., Levine, H. B., concentraciones ordinarias, no estuvieran
Deresinski, S. C. y Blaine, L. J., inédito).
etiológicamente relacionadas con la sensiPor último, la esferulína es un estimulante bilidad a los hongos. La esferulina y la
mayor que la coccidioidina en la prueba de coccidioidina de segunda concentración no
transformación de linfocitos (16) y detecta suscitaron reacciones de esa naturaleza
anticuerpos de fijadores del complemento (figura 2) en los individuos no reactivos a
en ciertos pacientes cuyos sueros no de- las dosis más bajas, excepto cuando estos
muestran tales anticuerpos con la cocci- sujetos eran sensibles a la histoplasmína.
dioidina (17).
La baja proporción de reacciones cruzaComo la prueba cutánea a la coccidioi- das provocadas por la coccidioidina al 1: 10
dina con frecuencia resulta positiva en en sujetos positivos a la histoplasmina
(figura 2)) requiere un examen más detenido
sujetos sensibilizados por H. capsulatum,
se consideró de particular importancia de- porque se diferencia notablemente de la tasa
522
BOLETIN
DE LA OFICINA
SANITARIA
de reacción cruzada del 56% informada por
Smith et ai. (2). Es posible que la discrepancia refleje diferencias en los lotes de
coccidioidina. Smith et al. utilizaron el lote
9 que, a la dilución 1: 100, dio una tasa de
reacción cruzada del 9%. Tucker (5),
quien demostró una tasa de reacción cruzada
del 0.8%) utilizó el lote 29-3 1 de Smith.
En el presente estudio, se utilizó el lote
64D2.5 de Smith, que a la dilución 1: 100
(figura l), dio una tasa similar a la de
Tucker. Smith había diluido 2.5 veces el
lote 64 concentrado (comunicación personal) porque era muy potente. Por consiguiente, después de una nueva dilución a
1: 10 para producir la segunda concentración del reactivo, es posible que este contuviera un total de sólidos considerablemente menor que el lote 9, que a la
dilución 1: 10 presentaba una reacción cruzada tan notable.
No fue posible determinar si una experiencia previa con P. brasiliensis podía, por
sí sola, provocar reacciones cruzadas a la
esferulina o a la coccidioidina. En el
estudio, 22 de los 25 sujetos positivos a la
paracoccidioidina mostraron reacciones
negativas a los antígenos coccidioidínicos.
Pero el origen de tal sensibilidad a la paracoccidioidina no está claro ya que 24 de
ellos eran al mismo tiempo sensibles a la
histoplasmina, y al menos en algunos, la
respuesta a la paracoccidioidina fue probablemente el resultado de una experiencia
con H. capsulatum. Dos observaciones
apoyan esta probabilidad: entre 65 voluntarios de los Estados Unidos (donde la
paracoccidioidomicosis no es endémica)
hubo 13 individuos positivos a la paracoccidioidina, 12 de los cuales eran también
sensibles a la histoplasmina (9). En segundo
lugar, entre 3,988 sujetos estudiados en
Colombia (10) se observó evidente reactividad cruzada; las modalidades de sensibilidad
y endemicidad indicaron una sensibilización
del 6% aproximadamente para P. brasiliensis y de 20% para H. capsulatum.
PANAMERICANA
.
Diciembre
1975
Resumen
Hasta hace muy poco la coccidioidina era
la única preparación antigénica disponible
para detectar la sensibilidad cutánea retardada inducida por una experiencia previa
con Coccidioides immitis. Tal antígeno se
prepara a partir de autolisados del hongo
en la fase micelial (saprofítica). En 1969
se elaboró un reactivo más sensible, la
esferulina, con material de la fase esferular
(parasítica) del organismo. El uso de la
esferulina reveló que la coccidioidina dejaba sin detectar alrededor de un 30% de
individuos específicamente sensibles al C.
immitis. Sin embargo, se ignoraba si la
esferulina podía detectar sensibilidad cruzada inducida por el Histoplasma capsuZatum. Se consideró que esta información
era pertinente debido a la reconocida capacidad de la coccidioidina para revelar la
presencia de una experiencia histoplasmósica. En consecuencia, se compararon
simultáneamente ambos reactivos así como
la paracoccidioidina, en 365 soldados
colombianos de zonas en las que la histoplasmosis, pero no la coccidioidomicosis, es
endémica. En concentraciones normales,
ambas preparaciones mostraron reacciones
no específicas en una proporción de 0.8 a
3% en los subgrupos negativo y positivo a
la histoplasmina, respectivamente. En una
concentración 10 veces mayor que la ordinaria, ambas preparaciones detectaron
sensibilidad cruzada a la histoplasmina de
manera comparable; de los sujetos con
reacción positiva a la histoplasmina, de 5.1
a 7.1% reaccionaron a los antígenos coccidioidínicos. No se observó ningún modelo
de reactividad cruzada entre la sensibilidad a
la paracoccidioidina y la sensibilidad a los
antígenos coccidioidínicos. 0
Agradecimiento
Los autores agradecenla gentil cooperación
de los soldados y los oficiales del Batalión
Nariño y del Batallón Girardot del Ejército,de
Colombia.
Levine et al.
’
ESFERULINA
523
Y COCCIDIOIDINA
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.
Spherulin
and
coccidioidin:
histoplasmin
Cross-reactions
and paracocciodioidin
Until recently coccidioidin has been the only
antigenic preparation
available for detecting
delayed dermal sensitivity induced by an experience with Coccidioides
immitis.
It is prepared
from autolysates of the mycelial (saprophytic)
phase of the fungus. A more sensitive reagent,
spherulin, was developed in 1969 from the
spherule (parasitic) phase of the organism. Use
of spherulin showed that coccidioidin failed to
detect approximately
30 per cent of individuals
specifically sensitive to C. immitis.
However,
the potential
of spherulin to detect crosssensitivity induced by Histoplasma
capsulatum
was unknown. This information was considered
to be germane because of the capacity of coccidioidin to detect a histoplasmal experience.
in dermal
sensitivity
to
(Summary)
Accordingly,
both reagents as well as paracoccidioidin were compared simultaneously in
365 Colombian soldiers from areas endemic
for histoplasmosis
but not for coccidioidomycosis. At standard strength both preparations
detected nonspecific response in 0.8 per cent to
3 per cent of the histoplasmin-negative
and
-positive subgroups, respectively. At 10 times
standard strength both preparations
cross- .
detected histoplasmin sensitivity comparably:
5.1 to 7.1 per cent of histoplasmin-positive
subjects reacted with the coccidioidal antigens.
No pattern of cross-reactivity
was observed
between paracoccidioidin
sensitivity and sensitivity to the coccidioidal antigens.
524
BOLETIN
Esferulina
DE LA OFICINA
e coccidioidina:
paracoccidioidina
SANITARIA
Reacões
em provas
et coccidioidine:
paracoccidioídine
lors
cruzadas
Réactions
d’épreuves
11n’y a pas longtemps encare, la coccidioidine
était la seule préparation antigénique disponible
pour dépister la sensibilité cutanée tardive
causée par une expérience précédente avec
Coccidioides immitis. Cet antigène se prépare à
partir d’autolyses du champignon pendant la
phase saprophytique. En 1969, on élabora un
réactif plus sensible, la sphéruline, en recourant
à de la matière provenant de la phase parasitique de l’organisme. L’utilisation de la
sphéruline révéla que la coccidioidine ne
permettait pas de dépister quelque 30% des
individus spécifiquement vulnérables à C.
immitis.
Toutefois, on ne savait pas si la
sphéruline pouvait dépister la sensibilité croisée
que causait Histoplasma capsulatum. On estima
que ces données étaient pertinentes en raison
de la capacité connue qu’a la coccidioidine de
révéler la présence d’une expérience histoplas-
-
Diciembre
com a histoplasmina
de sensibilidade
Até recentemente, a coccidioidina era o
único preparado antigênico disponível para
detectar a sensibilidade cutânea retardada
induzida por urna experiência prévia com
Coccidioides immitis. Prepara-se esse antígeno
com base em autolisados do fungo na fase
micelial (saprofítica). Em 1969 elaborou-se
um reagente mais sensível, a esferulina, com
material da fase esferular (parasítica) do
organismo. 0 uso da esferulina revelou que a
coccidioidina deixava sem detectar cerca de
30% de indivíduos especificamente sensíveis a
C. immitis. Contudo, não se sabia se a esferulina podia detectar a sensibilidade cruzada
induzida pelo Histoplasma capsulatum. Considerou-se essa informacao pertinente dada a
reconhecida capacidade da coccidioidina para
revelar a presenta de urna experiência histoSphéruline
PANAMERICANA
cutônea
1975
e a
(Resumo)
plasmósica. Em conseqükrcia, compararam-se
simultaneamente ambos os reagentes, bem como
a paracoccidioidina, em 365 soldados colombianos de zonas em que a histoplasmose, mas
nao a coccidioidomicose, é endêmica. Em concentracóes normais, ambos os preparados mostram reacóes náo específicas na propor9áo de
0,8% a 3 % nos subgrupos negativo e positivo
à histoplasmina, respectivamente. Em concentracáo 10 vezes maior do que a ordinária,
ambos os preparados detectaram sensibilidade
cruzada å histoplasmina de maneir,a comparável;
dos pacientes com rea@0 positiva à histoplasmina, de 5,1% a 7,1% reagiram aos antígenos
coccidioidínicos. Náo se observou nenhum
modelo de reatividade cruzada entre a sensibilidade à paracoccidioidina e a sensibilidade aos
antígenos coccidioidínicos.
croisées
de
avec
sensibilité
I’histoplasmine
cutanée
et la
(Résumé)
mosique. En conséquence, on compara simultanément les deux réactifs ainsi que la paracoccidioidine chez 365 soldats colombiens
résidant dans des zones où l’histoplasmose et
non la coccidioidomycose est endémique. Dans
des concentrations normales, les deux préparations ont suscité des réactions non spécifiques
chez 0,8 à 3% des membres des sous-groupes
négatif et positif à l’histoplasmine respectivement. Dans une concentration 10 fois plus
grande que la concentration normale, les deux
préparations ont dépisté une sensibilité croisée
à l’histoplasmine dans une proportion comparable. Des sujets dont la réaction à l’histoplasmine s’était révélée positive, de 5,l à 7,1%
réagirent aux antigènes coccidioidiniques.
Aucun modele de réactivité croisée entre la
sensibilité à la paracoccidioidine et celle aux
antigènes coccidioidiniques n’a été constaté.