DIAGNOSTICO DE HIV
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NOCIONES DE EPIDEMIOLOGÍA Y DIAGNOSTICO DE HIV Dra G Carballal Laboratorio de Virología Clínica CEMIC, 2009 La Pandemia de SIDA • Personas que viven con el HIV/SIDA • Total Adultos Niños 40 millones 38 “ 2 “ • Nuevas Infecciones en el 2005 En ese año • Muertes en ese año 5 millones 3 millones ONUSIDA/OMS Diciembre 2005 SIDA en Argentina: Casos notificados al 2005 • • • • • • Total de casos 32.500 Hombres 22.400 Mujeres 7.300 Niños 2.300 Relación hombre/mujer: 3:1 Gente viviendo con HIV: estimado 130.000 HIV Transmisión • • • • • • Principal vía: Sexual ( 50%) Heterosexual: 31% Homosexual: 22% Drogas EV 33% Madre a hijo Otras Diagnóstico de Infección por HIV Es fundamentalmente serológico !! 4G 3G 1y 2 G Diagnóstico de infección por HIV Detección de Anticuerpos: Ensayos de tamizaje (screening) Enzimoinmunoensayos (ELISAs) Los Antígenos se obtienen de: Lisado de partículas virales completas Proteínas recombinantes Péptidos (sintetizados químicamente) Que Inmunoglobulinas detectan ? IgG ( 1ª y 2ª generación) IgG, IgM, IgA ( 3ª generación) IgG, IgM, IgA y Antígeno p24 ( 4ª generación) Otros ensayos Aglutinación de partículas de gelatina o látex Hemoaglutinación pasiva Inmunoensayos de fase sólida Ensayos rápidos Virología Médica 4 Ed. Ed. CORPUS, Cap 22 B Bouzas Diagnóstico de la infección por HIV Ensayos Complementarios o Suplementarios ( antes Confirmatorios) Para anticuerpos Western blot Inmunofluorescencia Para antígenos o virus viable ELISA para antígeno p 24 Aislamiento en cultivo Identificación por peso molecular de los principales productos de genes estructurales de HIV-1 en el Western blot. Gen • Env • • Producto gp160 gp120 gp41 Descripción precursor envoltura externa transmembrana • gag • • • polp66 • • • p55 p40 p24 p17 precursor precursor core matriz transcriptasa reversa transcriptasa reversa endonucleasa p51 p32 Criterio de positividad para la interpretación de Western Blot. ORGANIZACIÓN ASTPHLD/CDC * Cruz Roja Americana Consorcio para la Estandarización de Serología de retrovirus FDA OMS CRITERIO Al menos dos de: - p24 -gp41 -gp160/120 Al menos tres bandas Una correspondiente a cada uno de los genes: gag + pol + env Al menos dos bandas: p24 ó p32 + gp41 ó gp160/120 24, p31, y gp41 ó gp120/gp160 Al menos dos bandas de envoltura OMS: Organización Mundial de la Salud; FDA: Food and Drug Administration; CDC: Center for Disease Control, Atlanta. Interpretación del Western blot • POSITIVO: reactividad a 2 de cualquiera de los productos de • Gag: p 24 ó • env: gp 120/ 160, gp 41 • INDETERMINADO: Cualquier patron de 1 o mas bandas reactivas que no alcanza el criterio de + • NEGATIVO: ausencia de cualquier banda Diagnóstico de la infección por HIV Detección de Ácidos Nucleicos (RNA ó DNA) Para Diagnóstico DNA proviral de HIV en células polimorfonucleares (neonatos) RNA en plasma (cualitativa) Para monitoreo de la terapia antiretroviral Carga viral plasmática de HIV Diagnóstico de la infección por HIV Detección de antígenos virales o del virión ELISA (captura de antígeno p24): para pediatricos y primoinfección Co- Cultivo: a partir de PMN del paciente en PMN de dador normal estimulados con fitohemaglutinina. Se mantienen con IL-2 durante 30 días Diagnóstico Virologico: es diferente en adultos y niños: qué usar ? Anticuerpos antígeno genoma aislamiento p24 _________________________________________ Tamizaje ELISA Aglut partic ELISA PCR RT-PCR Inmunodot Confirmación: WB , IFI. LIA Co-cultivo en lineas linfoblastoide Deteccion de Ag p 24 o TR ALGORITMO PARA EL DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE HIV-1 Suero EIE (3G ó 4G) NEGATIVO REACTIVO RETESTEAR CON OTRA TECNICA INFORMAR AL MÉDICO Y SOLICITAR NUEVA MUESTRA INFORMAR RETESTEAR POSITIVO ELISA. HACER WB NEGATIVO (en ambos duplicados) WB NEGATIVO Agp24 , RNA HIV Nueva Muestra en 7 – 10 DIAS INDETERMINADO Agp24, RNA HIV Nueva Muestra en 7-10 DIAS POSITIVO DIAGNÓSTICO PEDIATRICO Diagnóstico en menores de 18 meses nacidos de madres infectadas La madre infectada transmite la infección entre el 20 al 50% de los casos Los anticuerpos Ig G atraviezan la placenta lo que dificulta el diagnóstico La presencia de anticuerpos en el niño no indica infección como en los adultos l Los anticuerpos maternos son indetectables a los 10 – 18 meses de vida Métodos usados anteriormente en pediatría Desaparición de bandas con el tiempo en WB seriados : tarda 18 meses Baja sensibilidad Detección de Anticuerpos IgM e IgA Producción in vitro de anticuerpos (IVAP o ELISPOT). Antígeno p24 en suero, previa disociación ácida de inmunocomplejos Diagnostico Actual de HIV en el neonato: • Aislamiento viral: por co-cultivo • PCR para DNA proviral en PMN de sangre periférica • Antigenemia p 24, previa disociación ácida • RNA plasmático cualitativo ( carga viral) SEGUIMIENTO DE LA INFECCIÓN POR HIV EN ADULTOS Y NIÑOS Seguimiento de Infección por HIV • Recuento de CD 4 • Carga viral para HIV ( cantidad de ARN viral en plasma ) Carga viral para HIV • Predice la evolución ( Mellors): • Si baja carga inicial se demora la progresión a SIDA • Monitorea la respuesta al tratamiento • Permite establecer el nivel de base • Es mejor marcador de evolución que CD4 Diagnóstico de HIV en período de ventana • • • • Antígeno p 24 Si +, confirmar Si -, no descarta infección Problema: complejos ag-ac. Hay que disociar los complejos con acido. Carga viral para HIV: Métodos • RT-PCR ( Amplicor) • ( NASBA) • bDNA ( Chiron) • Las variaciones > 0.5 logs son significativas Virología Médica, 4 Ed. Ed CORPUS, Cap 22, Diagnóstico de HIV B Bouzas Ante dudas: Que muestra ? Cuando obtenerla ? Cómo enviarla ? Que significa este resultado ? Consultar al Virólogo ! Siempre hay esperanzas FUTURO: Investigación: vacunas, nuevos antivirales Médicos, docentes : Educar en la prevención !
