2. introducción

ENEMÉRITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA
DE PUEBLA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
DEPARTAMENTO DE FARMACIA
LABORATORIO DE NEUROFARMACOLOGÍA
TESIS PROFESIONAL
“Efecto del fragmento C-terminal de la toxina tetánica sobre
la asimetría motora de ratas con 6-OHDA y la supervivencia
celular e inmunorreactividad de la tirosina hidroxilasa en el
estriado y la sustancia nigra pars compacta.”
QUE PARA OBTENER EL TÍTULO DE:
Químico Framacobiólogo
PRESENTA:
Aleidy Patricio Martínez
DIRECTOR DE TESIS
Dr. I. Daniel Limón Pérez de León
FCQ-BUAP
9 DE MARZO DE 2009
INDICE
I. ABREVIATURAS ....................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
2. INTRODUCCIÓN .......................................................................................................... 5
2.1 ESTRUCTURA Y SÍNTESIS DE LA TOXINA TETÁNICA. ............................................................... 5
2.1.1 El fragmento Hc-TeTx ....................................................................... Error! Bookmark not defined.
2.1.2 Transporte retroaxonal de la TeTx y del Hc-TeTx ........................... Error! Bookmark not defined.
2.1.3 Vías de sobrevivencia activadas por el Hc-TeTx. ............................... Error! Bookmark not defined.
2.2 ENFERMEDAD DE PARKINSON ...................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
2.2.1 Ganglios basales ................................................................................. Error! Bookmark not defined.
2.3 DOPAMINA: SÍNTESIS Y REGULACIÓN. ......................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
2.4 ESTRUCTURA Y FUNCIÓN DE LA TIROSINA HIDROXILASA. .......... ERROR! BOOKMARK NOT
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2.5 LA 6-OHDA COMO MODELO EXPERIMENTAL DE EP. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
2.5.1 Estrés oxidativo inducido por la 6-OHDA ........................................ Error! Bookmark not defined.
2.5.2 Apoptosis por la 6-OHDA ................................................................ Error! Bookmark not defined.
2.6 LA 6-OHDA INDUCE DÉFICIT MOTOR ......................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
2.6.1 Modelos de asimetría motora ............................................................. Error! Bookmark not defined.
2.6.1.1Asimetría motora en la prueba del cilindro y ajuste de pasos .. Error! Bookmark not defined.
III. JUSTIFICACIÓN ..................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
IV. HIPÓTESIS ............................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
V. OBJETIVO GENERAL ............................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
5.1 OBJETIVOS PARTICULARES+ .......................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
VI. DIAGRAMA DE TRABAJO .................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
VII. METODOLOGIA PARA LA REALIZACIÓN DE LOS EXPERIMENTOS
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7.1 SUJETOS DE EXPERIMENTACIÓN ................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
7.2 CIRUGÍA ESTEREOTÁXICA ............................................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
7.3 ASIMETRÍA MOTORA ..................................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
a) Conducta de giro..................................................................................... Error! Bookmark not defined.
b) Asimetría motora en el modelo de ajuste de pasos .................................. Error! Bookmark not defined.
c) Asimetría motora en el modelo del cilindro ............................................ Error! Bookmark not defined.
7.4 METODOLOGÍA PARA LA DETERMINACIÓN DE LA VIABILIDAD CELULAR ................. ERROR!
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Sacrificio y disección ................................................................................... Error! Bookmark not defined.
Viabilidad Celular....................................................................................... Error! Bookmark not defined.
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7.5 METODOLOGÍA PARA LA DETERMINACIÓN DE LA INMUNOREACTIVIDAD DE LA TIROSINA
HIDROXILASA....................................................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
Sacrificio y disección ................................................................................... Error! Bookmark not defined.
Obtención de extractos citoplásmicos ......................................................... Error! Bookmark not defined.
Determinación de proteínas totales............................................................. Error! Bookmark not defined.
Inmunoreactividad a la tirosina hidroxilasa ............................................... Error! Bookmark not defined.
VIII. RESULTADOS ...................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
8.1 LOCALIZACIÓN DEL SITIO DE INYECCIÓN .................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
8.2 EVALUACIÓN DE LA LESIÓN DOPAMINÉRGICA MEDIANTE LA PRUEBA CONDUCTA DE GIRO
.............................................................................................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
8.3 EFECTO DEL FRAGMENTO HC-TETX SOBRE LA ASIMETRÍA MOTORA EN EL MODELO DE
AJUSTE DE PASOS ................................................................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
8.4 EFECTO DEL FRAGMENTO HC-TETX SOBRE LA ASIMETRÍA MOTORA EN EL MODELO DEL
CILINDRO ............................................................................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
8.5 EFECTO DEL FRAGMENTO HC-TETX SOBRE LA VIABILIDAD CELULAR EN EL ESTRIADO
.............................................................................................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
8.6 EFECTO DEL FRAGMENTO HC-TETX SOBRE LA INMUNOREACTIVIDAD DE LA TH EN EL
ESTRIADO Y LA SUSTANCIA NIGRA PARS COMPACTA ........ ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
IX. DISCUSIÓN .............................................. ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
X. CONCLUSIONES ...................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
XI. PERSPECTIVAS ....................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
XII. BIBLIOGRAFIA ...................................... ERROR! BOOKMARK NOT DEFINED.
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2. INTRODUCCIÓN
2.1 Estructura y síntesis de la toxina tetánica.
Las neurotoxinas clostridiales (NTC) son consideradas haloproteínas
sintetizadas por diferentes especies de bacterias del género Clostridium (C.). El
género Clostridium esta formado por bacilos gram-positivos, anaerobios estrictos y
formadores de esporas, y están ampliamente distribuidos en la naturaleza. Las
toxinas más conocidas son la botulínica (TBo) y la tetánica (TeTx). La TeTx es una
estructura serológica única producida por C. tetani, esta toxina induce tétanos,
enfermedad caracterizada por contracturas musculares y espasmos recurrentes,
ocasionando la muerte por colapso respiratorio y asfixia. La estructura
tridimensional de las NTC entre las que se encuentra la TeTx muestra tres
dominios funcionales de aproximadamente 50 kDa cada uno: los dominios de
unión, translocación y de catálisis (figura 1) (Montecucco y Schiavo, 1995), estos
dominios participan en el proceso de toxicidad a tres niveles (Simpson, 1980).
a)
Dominio de translocación
Dominio de unión
TeTx
Dominio de
b) unión de la TeTx
Dominio catalítico
Dominio de
unión de la TBo
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Figura 1. a) Estructura tridimensional de las NTC, b) Dominio de unión de la toxina tetánica y de la
botulínica /A. Existe una homología en la estructura de ambas toxinas, solo se diferencian en el
dominio de unión. Tomado de Turton y cols., 2002.
En el primer nivel el dominio de unión media la interacción entre la
neurotoxina y la membrana presináptica de la terminal nerviosa (Dolly y cols.,
1984), interacción que parece tener lugar a través de gangliósidos de membrana;
después de la unión la neurotoxina es internalizada por endocitosis. El segundo
nivel esta favorecido por la actividad de la bomba de protones ATPasa-tipoV que
acidifica los endosomas. El pH ácido del lumen vesicular parece causar un cambio
estructural en el dominio de translocación, permitiendo que se forme un poro en la
membrana vesicular. Este poro permite la translocación del dominio catalítico a
través de la membrana, accediendo la neurotoxina al compartimiento citosólico.
Finalmente el tercer nivel implica la hidrólisis específica de uno o varios enlaces
peptídicos de una o varias proteínas encargadas de la fusión sináptica de la
membrana vesicular con la membrana de la terminal nerviosa, impidiendo los
procesos de secreción vesicular.
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