INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICO DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE FEBRERO, 2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 1 De: 129 ÍNDICE HOJA I. INTRODUCCIÓN 2 II. OBJETIVO DEL MANUAL 3 III. MARCO JURÍDICO 4 IV. PROCEDIMIENTOS 12 1. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BANCO DE SANGRE. 13 2. LAVADO DE MATERIAL 16 3. METODOS PARA OBTENER MUESTRAS DE SANGRE. 21 4. FLEBOTOMIAS DE 500 ML. EN BOLSAS COLECTORAS. 24 5. CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS. 26 6. DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS ABO. 34 7. DETERMINACION DE GRUPOS SANGUINEOS RH. (D) 39 8. PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD. 43 9. IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES. 48 10. TÉCNICA DEL DESPEGADO DE ANTICUERPOS 62 11. ESTUDIOS OBLIGADOS DE HEMODERIVADOS. 67 12. BRUCELLA. 70 13. DETERMINACION DEL TREPONEMA PALLIDUM 75 14. DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-VIH. 81 15. HEPATITIS VIRAL B 92 16. HEPATITIS C 102 17. IDENTIFICACIÓN DE CHAGAS 112 18. FRACCIONAMIENTO DE SANGRE 120 V. GLOSARIO DE TÉRMINOS 128 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código: NCDPT 06 Rev. 1 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Hoja: 2 De: 129 I. INTRODUCCIÓN El manual de procedimientos técnicos del Servicio de Banco de Sangre integra las políticas y normas que el personal adscrito a este servicio deberá tomar en cuenta para el buen desempeño de las actividades. La integración de este documento ha sido logrado con la participación del titular del mismo y sancionado por el Departamento de Planeación antes de ser presentado para su aprobación a la Subdirección de Servicios Auxiliares de Diagnóstico y Paramédicos y posteriormente por la Dirección Médica. Este manual deberá ser revisado y actualizado periódicamente según las necesidades del servicio y/o por cambio en los lineamientos dictados por autoridades superiores. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 3 De: 129 II. OBJETIVO DEL MANUAL • Conducir de forma ordenada el desarrollo de las actividades de servicio de Banco de Sangre. • Uniformar criterios en los procedimientos que permitan el correcto desempeño de las actividades. • Establecer los mecanismos básicos para contribuir al objetivo institucional del INER. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 4 De: 129 III. MARCO JURÍDICO Constitución Política de los Estados Unidos Mexicanos. D.O.F. 07-IV-06 LEYES Ley Orgánica de la Administración Pública Federal D.O.F. 02-VI-2006 Ley Federal del Trabajo D.O.F. 17-I-06 Ley Federal de las Entidades Paraestatales D.O.F. 21-VIII-06 Ley de los Institutos Nacionales de Salud D.O.F. 26-V-06 Ref. 22-VI-06 Ley Federal de Responsabilidades Administrativas de los Servidores Públicos D.O.F. 21-VIII-06 Ley Federal de Presupuesto y Responsabilidad Hacendaría D.O.F. 03-05-06 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 5 De: 129 Ley Federal de Transparencia y Acceso a la Información Pública Gubernamental D.O.F. 06-06-2006 Ley General de Salud D.O.F. 19-IX-2006 Ley Federal de los Trabajadores al Servicio del Estado Reglamentaria del apartado B del Artículo 123 Constitucional D.O.F. 03-V-06 Ley de Información, Estadística y Geografía D.O.F. 27-12-2006 Ley de Amparo, Reglamentaria de los artículos 103 y 107 de la Constitución Política de los Estados Unidos Mexicanos D.O.F. 24-IV-06 Ley Federal para la Administración y Enajenación de Bienes del Sector Público D.O.F. 23-II-05 Ley de Planeación D.O.F. 13-VI-06 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 6 De: 129 REGLAMENTOS Reglamento de la Secretaria de Salud D.O.F. 12-I-04 Reglamento de la Ley Federal de Presupuesto y Responsabilidad Hacendaría D.O.F. 28-VI-06. Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Prestación de Servicios de Atención Médica. D.O.F. 14-V-1986 Reglamento de la Ley General de Salud en Materia de Investigación para la Salud. D.O.F. 16-I-1987. Reglamento General de Seguridad Radiológica. D.O.F. 22-XI-1988, Aclaración: D.O.F. 14-XII-1988 Reglamento de la Ley de Información, Estadística y Geografía D.O.F. 24-03-2004 Reglamento de la Ley Federal de Entidades Paraestatales D.O.F. 26-I-1990, Ref. D.O.F. 7-IV-1995 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código: NCDPT 06 Rev. 1 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Hoja: 7 De: 129 Reglamento para la Protección de los No Fumadores en el Distrito Federal D.O.F. 6-VIII-1990. Reglamento Interior de la Secretaría de Salud D.O.F. 6-VIII-1997, Ref. D.O.F. 4-VIII-1999 Reglamento de Insumos para la Salud D.O.F. 4-II-1998 Reglamento de Procedimientos para la Atención de Quejas de la Comisión Nacional de Arbitraje Médico D.O.F. 29-IV-1999 Reglamento de Control Sanitario de Productos y Servicios D.O.F. 9-VIII-1999 Reglamento sobre consumo de tabaco D.O.F. 27-VII-01 CONVENIOS Convenio relativo a las Estadísticas de las causas de defunción D.O.F. 23-II-1938 Decreto de Promulgación y Protocolo de firma. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 8 De: 129 DECRETOS Decreto por el que se da a conocer la forma oficial de los certificados de defunción y muerte fetal D.O.F. 21-XI-1986 Decreto del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias D.O.F. 4-VIII-1988 Decreto por el que se da a conocer en forma oficial el nombre del Instituto Nacional de Enfermedades Respiratorias Ismael Cosío Villegas D.O.F. 22-VI-2006 Decreto por el que se establece la Cartilla Nacional de Salud de la Mujer D.O.F. 6-III-1998 PROGRAMAS Plan Nacional de Desarrollo 2007-2012 ACUERDOS DEL EJECUTIVO FEDERAL Acuerdo por el que se dispone que el Archivo General de la Nación será la entidad central y de consulta del Ejecutivo Federal en el manejo de los archivos administrativos e históricos de la Administración Pública Federal D.O.F. 14-VIII-1978 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 9 De: 129 Acuerdo número 71 por el que se crea el Sistema de Capacitación y Desarrollo del Sector Salud D.O.F. 20-IV-1987 Acuerdo número 79 relativo a la aplicación, instrumentación y actualización del manual para la referencia y contrarreferencia de pacientes y envío de muestras y especimenes CODIGOS Código civil para el Distrito Federal en materia común y para toda la República en materia federal D.O.F. 26-V-1928 y sus reformas. Código Federal de Procedimientos Civiles D.O.F. 24-II-1943 NORMAS OFICIALES Norma Oficial Mexicana NOM-168-SSA1-1998 del expediente clínico D.O.F. 14-IX-1999 Norma Oficinal Mexicana para la Práctica de la Anestesiología NOM-170-SSA1-1998 D.O.F. 1-VII-1994 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código: NCDPT 06 Rev. 1 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Hoja: 10 De: 129 Norma Oficial Mexicana NOM-019-SCFI-1993. Seguridad de equipo de procesamiento de datos D.O.F. 20-X-1993 Resolución por la que se modifica la Norma Oficial Mexicana NOM-168-SSA1-1998 del expediente clínico D.O.F 22-08-2003 Norma Oficial Mexicana NOM-017-STPS-1993, Relativa al equipo de protección personal para los trabajadores en los centros de trabajo D.O.F. 24-V-1994 y sus reformas Norma Oficial Mexicana NOM-002-STPS-1994 relativa a las condiciones de seguridad para la prevención y protección contra incendio en los centros de trabajo D.O.F. 20-VII-1994 y su aclaración Norma Oficial Mexicana NOM-019-SCFI-1994 Seguridad de equipo de procesamiento de datos D.O.F.27-III y su aclaración. Norma Oficial Mexicana NOM-010-SSAS2-1993, para la prevención y control de la infección por virus de la inmunodeficiencia humana D.O.17-I-1997 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 11 De: 129 Proyecto de Norma Oficial Mexicana PROY-NOM-040-SSA2-2003 en materia de información en salud D.O.F. 04-03-2004 OTRAS DISPOSICIONES ADMINISTRATIVAS Oficio circular que fija las normas a que se sujetará la administración de los bienes muebles y el manejo de almacenes D.O.F. 21-VI-1988 LINEAMIENTOS Lineamientos Generales para la organización y conservación de archivos de las dependencias y entidades de la Administración Pública Federal D.O.F. 20-02-2004 Lineamientos Generales para la clasificación y desclasificación de la información de las dependencias y entidades de la Administración Pública Federal D.O.F. 18-08-2003 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 12 De: 129 IV. PROCEDIMIENTOS CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 1. Medidas de Seguridad en el Laboratorio de Banco de Sangre Rev. Hoja: 13 NCDPT 06 1 De: 129 1. MEDIDAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE BANCO DE SANGRE CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 1. Medidas de Seguridad en el Laboratorio de Banco de Sangre Rev. Hoja: 14 NCDPT 06 1 De: 129 MEDIDAS GENERALES 1. Usar bata. 2. Utilizar guantes cuando se maneja sangre y otros líquidos corporales. 3. Lavarse las manos con los guantes puestos y otra vez al quitárselos, e inmediatamente después del contacto de la piel sana con productos contaminados. 4. Se deben identificar con una etiqueta especial todos los productos que pudieran estar contaminados. 5. Evitar punciones con agujas u objetos punzocortantes. 6. No reinstalar el protector en la aguja después de haberla autorizado, depositarla en un recipiente rígido. 7. No pipetear con la boca, utilizar perilla o pipeta manual. 8. No maquillarse en el área de laboratorio. 9. No correr, comer, fumar o llevarse objetos a la boca en el laboratorio. 10. El material contaminado (jeringas, agujas, cajas de Petri, toallas de papel, etc.) previamente identificado con la etiqueta específica, se deberá depositar en un contenedor para ser desechado. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 1. Medidas de Seguridad en el Laboratorio de Banco de Sangre Rev. Hoja: 15 NCDPT 06 1 De: 129 MEDIDAS PARA LIMPIAR LIQUIDOS CORPORALES Los líquidos corporales que se hayan derramado en superficies inertes (mesa, lavabo, etc.) deben ser limpiados como sigue: 1. La secreción o líquido corporal que se haya derramado deberá diluirse con desinfectante (de preferencia hipoclorito de sodio concentrado). 2. Se debe retirar la secreción diluida con desinfectante. 3. Limpiar escrupulosamente con un trapo humedecido, de preferencia en hipoclorito diluido del 0.5% al 1% en caso de utilizar alcohol deberá limpiarse varias veces, dado que éste se evapora rápidamente. 4. Utilizar guantes gruesos durante todo el procedimiento. MANEJO DEL MATERIAL CONTAMINADO 1. Sumergir el material contaminado en desinfectante químico (por ejemplo en hipoclorito de sodio diluido del 0.5% al 1%, por lo menos durante media hora). 2. Lavar cuidadosamente el material con agua y jabón utilizando guantes gruesos para retirar todas las partículas orgánicas. 3. Someter el material al método de esterilización o desinfección seleccionado. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 16 2. Lavado de material NCDPT 06 1 De: 129 2. LAVADO DE MATERIAL CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 17 2. Lavado de material NCDPT 06 1 De: 129 LAVADO DE MATERIAL La limpieza escrupulosa e impecable del material que se utiliza en el banco de sangre es fundamental, ya que la presencia de restos de jabón o proteína en el material puede dar resultados falsos negativos, tanto en pruebas de escrutinios a donadores como en pruebas de escrutinio a donadores como en pruebas de inmunohematología y control de calidad, con la consecuencia fatal par la vida de los pacientes. Por esto tenemos que valorar que el trabajo de servicios básicos es vital para obtener resultados confiables aunque este personal no se encuentre aparentemente tan cerca del paciente. A Continuación se presenta en forma de gráficas de flujo los pasos fundamentales del lavado de material y su control de calidad. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 18 2. Lavado de material NCDPT 06 1 De: 129 MATERIAL GENERAL INICIO Reposo 12 horas . Remojo en agua más cloro comercial para obtener una dilución final del 2% 15 enjuagues a chorro de agua corriente . Cepillado con escobillón adecuado al tamaño de material al chorro del agua aproximadamente 6 veces . Hervir con agua bidestilada 15 a 20 minutos . Verificación visual de la limpieza. Clasificación en canastillas . Clasificación por tamaños y clase de material en cubetas de acero inoxidable . Secado en horno a 200ºC durante 2 horas . Control de calidad . Remojar en detergente de Ph neutro al 2% calentar sin llegar a ebullición. Material listo para su uso. Reposo 12 horas . FIN CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 19 2. Lavado de material NCDPT 06 1 De: 129 MATERIAL LIBRE DE HIERRO INICIO Remojo en HCL 1N, durante 4 horas . Enjuague con agua bidestilada desmineralizada de Fe . Deposito en cubetas plásticas y secado a temperatura ambiente y cubierto con gasa . FIN CONTROL DE CALIDAD a. Observar la presencia de residuos o manchas dentro y fuera del material. b. Comprobar la eliminación de detergente y agentes limpiadores, agregando una gota de solución indicadora y gah. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Hoja: 20 2. Lavado de material Agua bidestilada Prueba de consumo de GAH Prueba de fenolftaleina Ph y conductividad mensual previo enjuague y último enjuague . Diario material Listo para su uso . Diario material Listo para su uso . Jabón líquido neutro . Ph por lote o por cambio de marca. PRODUCTO LOTE Y Rev. CADUCA PH GAH NCDPT 06 1 De: 129 FENOLFTALEINA MARCA CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 3. Métodos para obtener muestras de sangre Rev. Hoja: 21 NCDPT 06 1 De: 129 3. MÉTODOS PARA OBTENER MUESTRAS DE SANGRE CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 3. Métodos para obtener muestras de sangre Rev. Hoja: 22 NCDPT 06 1 De: 129 Extracción Capilar: Se utiliza fundamentalmente en recién nacidos e infantes, para obtener volúmenes pequeños de sangre. El sitio de elección en el recién nacido suele ser el talón, mientras que en niños más grandes y en adultos, se recomienda el pulpejo del dedo o en lóbulo de la oreja. Técnica: Se desinfecta la superficie elegida para la punción con una torunda de algodón empapada en una solución de alcohol yodado, alcohol etílico o éter (de ser necesario calentar ligeramente la zona para evitar la vasoconstricción y favorecer la vasodilatación). Mediante un movimiento rápido y seguro, dar un pinchazo con una lanceta estéril, enjuagando la primera gota de sangre, para después colectar las siguientes en una pipeta o tubo capilar heparinizado, sin realizar presión. Extracciones venenosas: Proporcionan de forma sencilla volúmenes suficientes de sangre. Los lugares habituales de extracción son de las venas del pliegue del codo. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 3. Métodos para obtener muestras de sangre Rev. Hoja: 23 NCDPT 06 1 De: 129 Técnica: Después de colocar un torniquete, se procede a desinfectar la superficie cutánea, realizándose la punción con una aguja hipodérmica montada en una jeringa de plástico se va tirando lentamente del émbolo, hasta obtener la cantidad necesaria de sangre, posteriormente se retira primero el torniquete y después la aguja. Actualmente se emplea también el sistema Vacutainer, cuya modificación consiste en que la aguja tiene doble punta, una en cada extremo, se introduce una de ellas a la vena y la otra está montada en un soporte de plástico, en el cual se introduce un tubo de ensaye al vacío con tapón de plástico, de manera que al empujarlo sea perforado por el otro extremo de la aguja y mediante el vacío, la sangre penetre libremente al tubo. La ventaja de esta técnica consiste en que es posible la toma sucesiva de varios volúmenes de sangre en diferentes tubos, a partir de un mismo paciente, en una sola punción. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 4. Flebotomías de 500 ml en bolsas colectoras Rev. Hoja: 24 NCDPT 06 1 De: 129 4. FLEBOTOMÍAS DE 500ML. EN BOLSAS COLECTORAS CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 4. Flebotomías de 500 ml en bolsas colectoras Rev. Hoja: 25 NCDPT 06 1 De: 129 1. No usar ninguna bolsa si la solución anticoagulante no está transparente. 2. Identificar la unidad con el paciente. 3. Colocar un torniquete unos tres centímetros por arriba del pliegue del brazo; palpar bien la vena. 4. Se procede a desinfectar la superficie cutánea con torundas con jabón quirúrgico, isodine o alcohol. 5. Tomar la bolsa colectora y pinzar el tubo piloto para evitar la entrada de aire contaminado, una vez hecho esto, se quita el protector de la aguja en forma vertical y se realiza la punción en el área desinfectada, dar posición y fijar la aguja con una tela adhesiva, despinzar el tubo piloto para que fluya la sangre hacia la bolsa colectora. 6. Homogenizar el conservador de la bolsa colectora con la sangre. 7. Pesar la bolsa y una vez que tenga el volumen adecuado (para el caso de Baxter, triple ACD, 630 grs.), pinzar la bolsa por el tubo colector y quitar el torniquete al paciente, retirar la aguja y colocar una torunda con alcohol en el sitio donde se puncionó, indicar al paciente que doble el brazo y lo mantenga así por 15 minutos. 8. Dirigir la sangre dentro del tubo colector hacia la bolsa, con la pinza rodillo. mezclar y permitir que el tubo se llene nuevamente. Sellar las marcas “X“ sobre el tubo colector colector con un sellador dieléctrico para preparar alicuotas numeradas de sangre anticoagulada para tipificación o pruebas cruzadas. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 26 5. Control de calidad de reactivos NCDPT 06 1 De: 129 5. CONTROL DE CALIDAD DE REACTIVOS CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 27 5. Control de calidad de reactivos NCDPT 06 1 De: 129 Los reactivos que se utilizan en el Banco de Sangre deben controlarse cotidianamente con células y sueros testigos antes de efectuar cualquier prueba como son: grupos sanguíneos o pruebas cruzadas, etc. Para dicho control es ideal usar células y sueros testigos enviados por el Banco Central de Sangre. Este control consiste en enfrentar los antisueros con células control conocidas, y los parámetros a evaluar son especificidad, avidez y potencia. Material: • Tubos 10x75, pipetas pasteur, gradillas. • Sueros anti-A, anti-AB, anti-B, leticinas anti-A, anti-H, anti-D (Rho), Suero de coombs, albúmina bovina. • Células conocidas A1, A2, B, O. al 3%. • Células sensibilizadas con anti-D al 3%. • Células no sensibilizadas al 3%. • Células R1r y rr al 3%. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 28 5. Control de calidad de reactivos NCDPT 06 1 De: 129 Método: A) Para control de sueros ABO, leticinas anti-A, anti-H. 1. Colocar tres series de cuatro tubos de 10x75 en una gradilla. 2. A la primera serie adicionar 2 gotas de suero anti- A, a la segunda serie 2 gotas de anti-AB, a la tercera serie 2 gotas de suero anti-B. 3. - Adicionar una gota de células, A1, A2, B, O, a los tubos de cada serie (Ver fig. 1). 4. Homogenizar y centrifugar 30 seg. A 3000 rpm 5. Leer y reportar en “hoja de control de calidad de reactivos” (INER-BS-06). B) Control de Lectinas Anti A1 y Anti H 1. Colocar dos series de dos tubos de 10x75 en una gradilla. 2. Adicionar una gota de anti-A a cada tubo de la primera serie. 3. Adicionar una gota de anti-H a cada tubo de la segunda serie. 4. Adicionar una gota de células A1 al primer tubo de las dos series. 5. Adicionar una gota de células A2 al segundo tubo de las dos series. 6. Homogenizar y centrifugar a 3000 rpm. (Ver figura 2). 7. Leer y reportar en formato INER-BS-06. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Hoja: 29 5. Control de calidad de reactivos FIGURA 1 Rev. NCDPT 06 1 De: 129 CONTROL DE CALIDAD DE SUELOS ABO A1 A2 B O FIGURA 2 A1 FIGURA3 CONTROL DE CALIDAD DE LECTINAS A2 CONTROL DE CALIDAD DE ANTI-D Y ALBUMINA Rir rr CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 30 5. Control de calidad de reactivos De: 129 A) Para control de Anti-D y albúmina. 1. Colocar dos series de dos tubos de 10x75 mm. en una gradilla. 2. A la primera serie, adicionar una gota de reactivo Anti-D (Rho). 3. Ala segunda serie adicionar dos gotas de albúmina al 33% (auto T). 4. Al primer tubo de cada serie, adicionar una gota de células R1 al 5%. 5. Al segundo tubo de cada serie, adicionar una gota de células rr al 5%. 6. Homogenizar, centrifugar a 3000 rpm durante 90 segundos, leer y reportar en la forma BS06 (Figura 3). 7. Para control de sueros de Coombs. (antiglobulina humana) 8. Preparar diluciones del suero de Coombs al doble de la siguiente manera: 9. Numerar tres series de tubos de 10x75 mm. o de 12x75 mm. de la siguiente manera. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 31 5. Control de calidad de reactivos NCDPT 06 1 De: 129 Fig. 4 FILA 1 2 3 4 5 6 7 8 9 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 32 5. Control de calidad de reactivos NCDPT 06 1 De: 129 Fila S. A. H.: (Suero Antiglobulina Humana) 1. Coloque en los tubos No. 1 y 2, 6 gotas de suero de Coombs. (Fig. 4), los reactivos serán utilizados de acuerdo al fabricante. 2. Coloque en el tubo No. 9, 6 gotas de solución salina. 3. A partir del tubo No. 2, de la primera serie hasta el No. 8, colocar 6 gotas de solución salina 4. Mezcle el contenido del tubo No. 2 y pase 6 gotas al tubo No. 3 y así sucesivamente hasta el número 8 de donde se descartan 6 gotas. 5. Del tubo No. 8, pasar con una pipeta limpia 2 gotas de los tubos 8 C. S. y 8 N. S. 6. Saque la pipeta 7. Pase del tubo No. 7, 2 gotas a los tubos 7 CS y 7NS, y del No. 6, a los tubos 6 CS, 6 NS y así sucesivamente hasta los tubos No. 2 CS Y 2 NS. 8. Con otra pipeta, pase del tubo, No. 1, 2 gotas de suero de Coombs a los tubos (de la serie 1) 1CS y 1CNS. 9. Cambie de pipeta y coloque del tubo NO. 9, 2 gotas de solución salina a los tubos de la serie 9. 10. Agregue a la fila CS, una gota de eritrocitos sensibilizados al 3% a todos los tubos. 11. Una gota de eritrocitos no sensibilizados a la fila CNS. 12. Mezcle cuidadosamente. 13. Centrifugar a 3000 rpm. Durante 30 segundos. 14. Leer y reportar en formato BS-06. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 33 5. Control de calidad de reactivos NCDPT 06 1 De: 129 Reportar Titulo Donde 4+ 3+ 2+ 1+ G Computo = = = = = 10 puntos 8 puntos 5 puntos 3 puntos 1 puntos CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 6. Determinación de grupos sanguíneos ABO Rev. Hoja: 34 NCDPT 06 1 De: 129 6. DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS ABO CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 6. Determinación de grupos sanguíneos ABO Rev. Hoja: 35 NCDPT 06 1 De: 129 1. Fundamento: Los grupos sanguíneos son sustancias antigénicas que se encuentran en membrana eritrocitaria. En la actualidad se han descrito más de 400 antígenos de diferentes sistemas de grupos sanguíneos en la membrana eritrocitaria. Es de primordial importancia la determinación de la presencia o ausencia de los antígenos del sistema A B O, ya que en este sistema se encuentran de manera natural anticuerpos antitéticos a los antígenos eritrocitarios. Por lo anterior debemos entender que una determinación correcta de grupos sanguíneos debe constar de: Grupo Directo: Determinación de los antígenos eritrocitarios con antisueros conocidos, Anti-A, Anti-AB, Anti-B. Grupo Inverso: Determinación de anticuerpos antitéticos, con células de fenotipo conocido, A1, A2, B, O. TECNICA EN TUBO Material: • Sueros hemoclasificadores Anti-A, Anti-AB. • Eritrocitos de fenotipo conocido, A1, A2, B, O, suspendidos al 5%. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 6. Determinación de grupos sanguíneos ABO • Rev. Hoja: 36 NCDPT 06 1 De: 129 Tubos de vidrio de 10x75 mm, Pipetas Pasteur, Centrífugas serológicas, Centrífugas clínicas. • Gradillas, soluciones fisiológicas. (Salina al 0.9%) Material Biológico: (-7) ml. De sangre venosa del paciente sin anticoagulante. Método: 1. Extraer la sangre por punción venenosa y colectarla en un tubo de 13x10 sin anticoagulante, dejar que se coagule. 2. Retraer cuidadosamente el coágulo y centrifugar la muestra a 3000 rpm. Durante 5 minutos para separara el suero de los eritrocitos. 3. Colocar en una gradilla 8 tubos en sentido horizontal y colocar 2 gotas de antisueros Anti-A, Anti-AB, y Anti-B en los primeros tres tubos (grupo directo), el cuarto tubo autotestigo AT. 4. Adicionar una gota de eritrocitos al 5% conocidos A1, A2, B, O, en los siguientes cuatro tubos, (grupo inverso) 5. Con la misma pipeta tomar de la muestra del suero sobrenadante de la muestra problema y colocar dos gotas en los tubos A1, A2, B, O, (grupo inverso) y en el tubo número 4 autotestigo (AT) fig. 5 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 37 6. Determinación de grupos sanguíneos ABO De: 129 6. Con la misma pipeta preparar una suspensión al 5% de eritrocitos problema con su propio suero o con solución salina fisiológica. 7. Adicionar una gota de esta suspensión en los primeros cuatro tubos Anti-A, Anti-AB, Anti-B, y Auto T. 8. Homogenizar suavemente los tubos y centrifugar a 3000 rpm durante 30 segundos. 9. Leer aglutinación y/o hemólisis. 4+ - Botón compacto. 3+ - Botón con Gránulos satélites. 2+ - Gránulos separados. 1+ - Gránulos separados más pequeños. (+) - Gránulos más pequeños. G - Gránulos muy pequeños. Prueba Directa Anti A Prueba Indirecta (inversa) Anti AB Anti B AT A1 A2 B O Gpo Sanguíneo + + - - - - + - A - + + - + + - - B - - - - + + + - O + + + - - - - - AB CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 38 6. Determinación de grupos sanguíneos ABO NCDPT 06 1 De: 129 DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO ABO ESTUDIO EN ERITROCITO ESTUDIO EN SUERO RESULTADO (PRUEBA DIRECTA) (PRUEBA INVERSA) (GRUPO) ANTI ANTI ANTI AUTO A AB B CEL T A1 CEL CEL CEL A2 B O “A” “B” “O” “AB” CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 7. Determinación de grupos sanguíneos RH (D) Rev. Hoja: 39 NCDPT 06 1 De: 129 7. DETERMINACIÓN DE GRUPOS SANGUÍNEOS RH (D) CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 7. Determinación de grupos sanguíneos RH (D) Rev. Hoja: 40 NCDPT 06 1 De: 129 El siguiente sistema sanguíneo en importancia por su frecuencia en la población mundial es el sistema Rh-Hr, el cual consta de más de 40 antígenos eritrocitarios de los cuales el mosaico CcDEe, reviste mayor importancia. Dentro de estos, el antígeno D (Rho) tiene relevancia porque éste nos permite clasificar a los individuos en Rh positivos cuando esta presente, y Rh negativos cuando está ausente. Una mala tipificación de este antígeno nos podría provocar una sensibilización en un individuo Rh negativo y la probabilidad de que esté antígeno provoque una respuesta de anticuerpo es muy alta, esté antígeno también ha sido asociado con mayor frecuencia en la enfermedad hemolítica del recién nacido. Material y Equipo: • Tubos de 10 x 75 mm. • Gradillas • Pipetas Pasteur • Aplicadores de madera • Solución fisiológica • Centrifuga sexológica • Centrifuga clínica • Suero Anti D (Rho) • Control albuminoso Material Biológico: • 7 ml. De sangre venosa sin anticoagulante. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 41 7. Determinación de grupos sanguíneos RH (D) NCDPT 06 1 De: 129 Método: 1. Centrifugar la muestra problema a 3000 rpm. 2. hacer suspensión al 3% de eritrocitos problema con el mismo suero del paciente. 3. Colocar dos tubos de 10 x 75 mm en una gradilla. 4. Al primer tubo debidamente rotulado (D), adicionar una gota de reactivo anti D (Rho) ver fig. 6. 5. Al segundo tubo agregar 2 gotas de control albuminoso (AT). 6. Adicionar a ambos tubos una gota de la suspensión preparada en el punto 2. 7. Homogenizar ambos tubos (D) y /AT) y centrifugar a 3000 rpm, durante 90 segundos. 8. Agitar el tubo suavemente para resuspender el botón formado, observar si existe aglutinación. 9. Anote sus resultados. 10. Si obtiene una prueba negativa, realizar la prueba “D” para descartar esta variable. Variante D débil Antes llamado Du. A todas las muestras que den negativos o un positivo muy dudoso, se le debe realizar la prueba de la antiglobulina humana. 1. Agregue una gota de AntiD en un tubo debidamente marcado. 2. Agregar una gota de suspensión al 3% de eritrocitos problema. 3. Mezclar, e incubar el tubo a una temperatura de 37º por 15 minutos, centrifugar a 3000 rpm por 90 seg. Leer. 4. Si el resultado anterior es negativo, lavar 3 veces con solución salina. 5. Agregar suero de Coombs, homogeneizar, centrifugar a 3000 rpm. Leer. 6. Agregar una gota de eritrocitos sensibilizados al 3% para observar el consumo. 7. Reportar en la forma de grupo sanguíneo. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 42 7. Determinación de grupos sanguíneos RH (D) De: 129 DETERMINACION DE Rho (D) Figura 6 Muestra sin Anticoagulante Auto testigo Albuminoso Anti- D Rh Positivo (+) Rh Negativo (-) (-) Rh Negativo (-) (-) (-) Rh Positivo (+) (+) CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 8. Pruebas cruzadas de compatibilidad Rev. Hoja: 43 NCDPT 06 1 De: 129 8. PRUEBAS CRUZADAS DE COMPATIBILIDAD CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 44 8. Pruebas cruzadas de compatibilidad De: 129 Fundamento: El objeto de las pruebas cruzadas de compatibilidad, es investigar anticuerpos específicos activos a 37° C en el suero del paciente contra los eritrocitos del donador y viceversa. La Prueba Cruzada se divide en tres partes: 1. Prueba mayor.- Que contiene el suero del paciente y eritrocitos del donador (D). 2. Prueba menor.- Que contiene el suero del donador y los eritrocitos del paciente. (R). 3. El autotestigo.- Que contiene el suero y eritrocitos del paciente (AT). Material: • Tubos de 13x100 mm • Tubos de 10x75 mm • Solución salina isotónica (0.9%). • Suero antiglobulina humana (AGH, “suero de Coombs”). • Albúmina bovina al 22%. • Baño maría para incubación a 37°C Material Biológico: • Sangre del donador. • -Todas las bolsas de sangre para transfusión, llevan segmentos de tubos de plástico (pilotos) de la sangre que esté en la bolsa, (sangre anticoagulada con ACD ó CPDA). CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 8. Pruebas cruzadas de compatibilidad Rev. Hoja: 45 NCDPT 06 1 De: 129 Sangre del Receptor: De 5 a 10 ml de sangre fresca sin anticoagulante en un tubo rotulado con nombre completo del enfermo, expediente, fecha, edad, pabellón, cama y hora de extracción. TÉCNICA Preparación: • Centrifugar el tubo del receptor 5 minutos a 3500 rpm., para separar completamente el suero de los eritrocitos del coagulo. • Deben de anotarse los datos completos del paciente en la hoja de reporte y anotar sus resultados como se indicará mas adelante y separar el suero en un tubo rotulado con los datos del paciente como se indicó anteriormente. • Cortar un segmento del tubo “piloto” de la bolsa de sangre, pasar todo el contenido de 12x75 mm. y centrifugarlo a 3500 rpm durante tres minutos, este tubo contiene plasma y eritrocitos del donador. • Colocar las 2 o 3 gotas de sangre remanente del tubo piloto en otro tubo de 12x75 mm. y adicionar la solución salina. • Realizar tres lavados por un tiempo de tres minutos a 3000 rpm. Decantando y volviendo a centrifugar. • Después de los lavados, hacer una solución de eritrocitos al 5% con solución salina. (Este tubo contiene eritrocitos “lavados” de la sangre del donador) • Colocar en una gradilla 3 tubos de 10x75 mm previamente rotulados como se indica en la figura No. 7. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 46 8. Pruebas cruzadas de compatibilidad NCDPT 06 1 De: 129 Figura 7. Receptor Donador Solución de eritrocitos al 5%. Prueba Menor (R) Prueba Mayor (D) • Autotestigo (T) Con una pipeta Pasteur colocar 2 gotas de suero del paciente. En el tubo de prueba mayor (D), una gota de eritrocitos del donador previamente lavados. • Con otra pipeta Pasteur, colocar 2 gotas de suero o plasma del donador y una gota de células o eritrocitos del paciente en el tubo de la prueba menor (R). • Colocar con una pipeta en el tubo del autotestigo (T), dos gotas de suero del paciente y una gota de eritrocitos del mismo (paciente). • Mezclar perfectamente el contenido de los tubos. Centrifugar durante 30 segundos a 3400 rpm. • Leer y reportar en la hoja de anotaciones (SR) salina rápida. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 8. Pruebas cruzadas de compatibilidad • NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 47 De: 129 Si en algunos de los tubos (D. R. A. T.) se observa hemólisis o aglutinación, debe rectificarse de inmediato el grupo sanguíneo, tanto del donador como del receptor. • Si las lecturas son negativas, continuar con el procedimiento e incubar los tubos (D. R. A.T.) en el baño maría a 37°C durante una hora (checar la temperatura cada 5 o 10 minutos). • Una vez terminada la incubación, centrifugue rápidamente todos los tubos durante 30 segundos a 3400 RPM. • Leer y reportar los resultados en la hoja de reporte BS-7, BS-5, (Pruebas Cruzadas). • Si se observa aglutinación o hemólisis, la prueba es incompatible, si el resultado es negativo: • Lavar los tubos tres veces con solución salina: decantando y secando después de cada centrifugación (tiempo de centrifugación, 3 minutos a 3400 RPM). • Resuspender suavemente el botón (agitando el tubo). • Agregar a cada tubo, 1 gota de suero de Coombs (AGH), mezclar y centrifugar durante 30 segundos a 3400 RPM. • Leer los resultados y anotarlo en la hoja de reporte (S/C). • Si se observa aglutinación la prueba es incompatible, si es negativa: • Adicionar 1 gota de células sensibilizadas, centrifugar durante 30 segundos a 3400 RPM. • Leer y reportar en la hoja de reporte (CONS) CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 48 NCDPT 06 1 De: 129 9. IDENTIFICACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 49 NCDPT 06 1 De: 129 La detección de un anticuerpo y su identificación constituyen una de las prácticas más importantes en el campo de la inmunohematologia. Se le llama anticuerpo irregular porque en contraste con los anticuerpos del sistema ABO, el cual se encuentra regularmente en todos los individuos sanos, estos anticuerpos solo se encuentran en algunos. La incidencia de estos anticuerpos irregulares se ha calculado entre un 0.3 a2%, dependiendo del grupo de individuos examinados y de las técnicas utilizadas para la investigación. La investigación de anticuerpos irregulares nos sirve para: 1. Aclarar discrepancias séricas en el sistema ABO. 2. En mujeres embarazadas, para detectar anticuerpos que puedan causar enfermedad hemolítica del recién nacido o discrepancias en la prueba cruzada para el momento del parto, en caso de que la paciente requiera ser trasfundida. 3. En el estudio de reacciones hemolíticas transfusionales. 4. En el estudio de anemias hemolíticas auto inmunes. Por lo tanto los anticuerpos irregulares sen encuentran como hemolizantes, aglutinantes y sensibilizantes. Aquellos anticuerpos llamados irregulares como Lea , Anti P, Anti M, no están relacionados ni con transfusiones, ni con embarazos, en cambio los llamados irregulares inmunes como el anti D, anti C, anti F, sí lo están. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 50 NCDPT 06 1 De: 129 La presencia de anticuerpos irregulares se evidencian a diferentes temperaturas in Vitro y pueden requerir para su observación, substancias que favorezcan su demostración como: medios de alta concentración proteica, medios enzimáticos, de baja fuerza iónica, con la prueba de la antiglobulina indirecta o suero de Coombs. La albúmina ha sido usada para potenciar la aglutinación de los glóbulos rojos por anticuerpos de la clase IgG. Las soluciones de fuerza iónica baja (LISS) acortan el tiempo de incubación e incrementan la captación de anticuerpos. La utilización de substancias que contengan enzimas, son útiles para potenciar la reactividad de algunos anticuerpos como los pertenecientes a los sistemas Rh, Lewis, Kidd; pero las enzimas también modifican o destruyen otros antígenos como: MNS, Duffy Pr, Xga , Yta, Csa y Cha, propiedad que facilita la identificación de los correspondientes anticuerpos. La observación de la reacción antígeno anticuerpos se lleva a cabo sólo en condiciones óptimas según la naturaleza del anticuerpo, ( cantidad del reactivo, técnica apropiada, etc. ) debiendo considerar que cuando se demuestra la presencia de un anticuerpo irregular en el suero de una persona, podemos afirmar que existe un problema, en cambio en caso negativo no se puede asegurar, aún en condiciones óptimas, que el paciente pudo haber sido estimulado y producir un anticuerpo en el momento de la investigación. Por esta razón se debe tener comunicación entre el servicio clínico y el laboratorio. Para saber si el paciente ha tenido embarazos o ha sido sometido a hemoterapias. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 51 NCDPT 06 1 De: 129 En la búsqueda de los anticuerpos irregulares fuera del sistema ABO, se emplean varias células de grupo sanguíneo “o” a las que se les ha tipificado los siguientes sistemas de grupo sanguíneo: • Rh-Hr • MN • SS • P • Duffy • Kell-cellano • Kidd • Diego • Lewis • Lutheran a) Prueba de Pantalla (Semipanel) Las muestras de sangre con los siguientes fenotipos como: PANEL I R1R1, MN, SS, P, Fy (a+b- ), Di (a b), Le ( a-+, b- ) Lub. PANEL II R2R2, MN, SS, P-Fy ( a-b+ ) KK, JK (a-b+ ) Di ( a- b+ ) Lub. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 52 NCDPT 06 1 De: 129 PANEL III rr, MN, SS, P, Fy (a+ b+) KK JK (a+ b+) Di (a- b+) Lub. b) En el caso de que en la prueba de pantalla se obtuvieran resultados positivos se estudiará la especificidad del anticuerpo contra 10 muestras separadas (panel) con las mismas técnicas que se emplearon en la prueba de pantalla. Material y Reactivos: 1. 8 ml. de muestra fresca de sangre del problema, de menos de 2 horas de extraída, sin anticoagulante. 2. Células de los paneles 1,2,3, al 2% en solución salina isotónica. 3. Células de los paneles 1,2,3, suspendidas al 5% en Buffer de baja fuerza iónica ( Liss ). 4. Células del panel (10 células) suspendidas al 2% en solución salina. 5. Células del panel (10 células) suspendidas al 5% en Buffer (Liss). 6. Suero antiglobulina humano (suero de Coombs). 7. Albúmina bovina al 22% y/o al 30%. 8. Medio enzimático (ejemplo, Bromelina). 9. Pipeta Pasteur. 10. Tubos de ensaye de 10x75mm. 11. Baño maría 20°C. 12. Baño maría o estufa a 37°C. 13. Solución amortiguadora de baja fuerza iónica (Liss). CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 53 De: 129 Método: 1. Colocar y marcar los tubos de 10x75mm. como se indica en el cuadro No. 1. 2. Poner en cada uno de los tubos de las series I, II, III, 2 gotas de suero problema, más 1 gota de los eritrocitos correspondientes, suspendidos al 2% en solución salina. 3. En las serie IV, poner 1 gota de suero, más 1 gota de eritrocitos, correspondientes, suspendidos al 5% en Buffer de Liss y llevar a cabo la siguiente técnica: SERIE I 1. Mezclar y centrifugar 30” a 3400 rpm. Leer aglutinación y/o hemólisis. Anotar = sr 2. Colocar todos los tubos a 37°C durante 60’, centrifugar 30” a 3400 rpm. Leer aglutinación y/o hemólisis y anotar = S 37°C. 3. Al contenido negativo de los tubos, lavarlo 3 veces (tubo lleno) con solución salina estéril, “secando” los eritrocitos después de la tercera lavada. 4. Agregar de 1 a 2 gotas (según instructivo) de suero de coombs. 5. Mezclar, centrifugar 30” a 3400 rpm, leer y anotar = s/coombs. 6. A los tubos negativos, obligatoriamente agregarle 1 gota de “eritrocitos testigo coombs positivo”. 7. Mezclar, centrifugar 30” a 3400 rpm y leer. 8. Este resultado debe ser positivo = consumo de la antiglobulina humana, (coombs). CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 54 9. Identificación de cuerpos irregulares NCDPT 06 1 De: 129 SERIE II 1. Agregar a todos los tubos 1 gota de Bromelina. 2. Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente 15’. 3. Centrifugar 30” a 3400 rpm, leer aglutinación y/o hemólisis, anotar = Br. 4. Colocar todos los tubos a 37°C por 15’. 5. Centrifugar todos los tubos a 30” a 3400 rpm y leer, anotar = Br 15’ = 37°C. SERIE III 1. Agregar a todos los tubos de 2 a 3 gotas de albúmina (según instructivo del proveedor). 2. Mezclar perfectamente. 3. Centrifugar 90” a 3400 rpm. ( según instructivo del proveedor ) 4. Leer aglutinación y/o hemólisis, anotar = Ar. 5. Colocar todos los tubos a 37°C durante 60’, centrifugar y reportar =A 37°C 6. Lavar todos los tubos negativos 3 veces con solución salina y continuar como en la técnica s/coombs= A Coombs SERIE IV 1. Colocar todos los tubos 10’ a 37°C. 2. Centrifugar 30” a 3400 rpm, leer y anotar = Liss 10’ 37°C. 3. Lavar todos los tubos negativos 3 veces con solución salina y continuar como en la técnica s/coombs = Liss/coombs. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 55 9. Identificación de cuerpos irregulares NCDPT 06 1 De: 129 Cuadro No. 8 SERIE I ERITROCITOS ERITROCITOS ERITROCITOS ERITROCITOS PROBLEMA PANEL No. 1 PANEL No.2 PANEL No. 3 ATS IS 25 35 = Salina rápida II ATB IB 2B 3B = Bromelina III ATA 1A 2A 3A = Albúmina IV ATL 1L 2L 3L = Liss ATS = Autotestigo en Salina. ATB = Autotestigo en Bromelina. ATA = Autotestigo en Albúmina. ATL = Autotestigo en Liss. Cuando un suero contiene dos o más anticuerpos, su identificación puede complicarse. El patrón de aglutinación del panel se caracteriza por: 1. No define la presencia de un determinado anticuerpo. 2. Todas las células del panel o la mayoría son aglutinadas. 3. Puede haber variaciones en el grado de aglutinación, en los diferentes medios. 4. Bajo estas circunstancias se debe considerar que existan: o Anticuerpos múltiples o bien. o Presencia de anticuerpos contra antígenos de alta frecuencia. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 56 NCDPT 06 1 De: 129 Unas de las técnicas utilizadas en estos casos son: Absorción y elución selectiva. Absorción: La técnica de absorción se usa: 1. Para remover anticuerpos y facilitar la identificación de otro. 2. Confirmar la especificidad (de un anticuerpo). Las técnicas de elución son usadas para confirmar la especificidad de los anticuerpos removidos por absorción. En este procedimiento las moléculas de anticuerpos son liberadas de la membrana del glóbulo rojo, ya sea mediante la destrucción del antígeno o cambiando las condiciones que favorecen la disociación del complejo antígeno anticuerpo. Existen varias técnicas de elución: Por calor, con eter, digitonina acida, congelamiento, xileno y cloroformo. Interpretación de resultados: La interpretación del panel se hace por exclusión o descarte de posibles anticuerpos, basándose en la no reactividad del anticuerpo con aquellas células del panel que poseen determinados antígenos, es decir, si el suero no reacciona con una determinada célula del panel en todas las fases de la prueba. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 57 9. Identificación de cuerpos irregulares NCDPT 06 1 De: 129 Significa que el anticuerpo presente en el suero no está dirigido contra los antígenos presentes en célula. En cambio el anticuerpo tendrá especificidad contra el o los antígenos presentes en las células que resultan aglutinadas. Sin embargo es posible llegar a conclusiones erróneas, en la identificación de anticuerpos. Por lo cual para poder determinar la especificidad de un anticuerpo al realizar el panel, lo cual consta de 8 a 10 células, por lo menos 3 de ellas que contienen el antígeno correspondiente, deben dar reacción positiva otras 3 en las cuales el antígeno está ausente, no deben reaccionar. Si esta regla se cumple, el nivel de probabilidad de certeza es mayor del 95%. Prueba de la Antiglobunina Humana Directa o Coombs Directo y del Despegado de Anticuerpos La destrucción precoz de los eritrocitos como en la Enfermedad Hemolítica del Recién Nacido (EHRN), en las reacciones transfusionales hemolíticas o en la Enfermedad Hemolítica autoinmune, es debida a anticuerpos (Acs) específicamente dirigidos a Antígenos (Ags), contra los eritrocitos del bebé, quien posee Ags heredados del padre y de los que la madre carece. En el segundo caso, los pacientes sometidos frecuentemente a transfusiones de eritrocitos, pueden desarrollar también Aloanticuerpos. Por el contrario en el último de los casos, el paciente afectado por una regulación defectuosa de su respuesta inmune, es capaz de desarrollar Acs (Autoanticuerpos) contra sus propios eritrocitos. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 9. Identificación de cuerpos irregulares Rev. Hoja: 58 NCDPT 06 1 De: 129 Una prueba de laboratorio muy útil para demostrar anticuerpos ligados al eritrocito, es la prueba de la antiglobulina humana directa o prueba de coombs directa. Esta cuando es positiva nos indicaría solamente la presencia de Acs ligados al eritrocito. Posteriormente, debe obtenerse al Ac en solución por medio de las técnicas del despegado (elusión) para poder estudiar su especialidad. Estas técnicas se basan en procedimientos físicos y/o químicos aplicados al eritrocitos recubierto de Ac y que rompen su unión. PRUEBA DE LA ANTIGLOBULINA HUMANA DIRECTA (AGHD) O DE COOMBS DIRECTO Material: 1. Sangre problema anticoagulada con EDTA (EP) 2. Eritrocitos sensibilizados con IgG (testigo positivo de coombs TPC). 3. Eritrocitos no sensibilizados (testigo negativo de coombs TNC) 4. Suero Antiglobulina Humana o Suero de Coombs (SAH) Preparación de los eritrocitos: 1. Tome 3 tubos de 13 x 100, en uno coloque 1 gota de EP, en otro 1 gota de TPC y en el tercero 1 gota de TNC. 2. Lávelos con solución salina isotónica, (SSI), tubo lleno, por 3 veces. 3. Resuspéndalos al 2.55 con SSI. 4. Colóquelos a 20°C mientras prepara el siguiente material. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 59 9. Identificación de cuerpos irregulares NCDPT 06 1 De: 129 Preparar diluciones del suero de Coombs al doble de la siguiente manera: 1. Numerar tres series de nueve tubos de 10 x 75 mm., como se indica en la figura 8. Donde: SAH= Suero Antihumano EP= Eritrocitos problema TPC= testigo positivo de Coombs TNC= Testigo negativo de Coombs. FILA S.A.H.: 1) Coloque en los tubos No. 1 y 2, 8 gotas de suero de coombs. 2) Coloque en el tubo No. 9, 8 gotas de solución salina. 3) A partir del tubo No. 2 hasta el No. 8, coloque 8 gotas de solución salina. 4) Mezcle el contenido del tubo No.2 y pase 8 gotas al tubo No.3 y así sucesivamente hasta el No.8 en donde se descartan 8 gotas. 5) Del tubo No.8, pasar con una pipeta limpia 2 gotas a los tubos 8 EP, 8 TPC y 8 TNC. 6) Saque la pipeta. 7) Pase del tubo No.7, 2 gotas a los tubos 7 EP, 7 TPC, 7 TNC y del No. 6, a los tubos, 6 EP, 6 TPC y 6 TNC, y así sucesivamente hasta los tubos No. 2 EP, 2 TPC y 2 TNC. 8) Con otra pipeta, pase del tubo No.2, 2 gotas de suero de coombs a los tubos de la serie 1. 9) Cambie de pipeta y coloque de tubo No.9, 2 gotas de solución salina a los tubos de la serie 9. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 60 9. Identificación de cuerpos irregulares 10) Agrege a la serie EP 2 gotas de eritrocitos EP al 2.5% a todos los tubos. 11) 1 gota de eritrocitos TPC a la serie TPC y 1 gota de eritrocitos TNC a la serie TNC. 12) Mezcle cuidadosamente. 13) Centrifugue todos los tubos. 14) Lea. NCDPT 06 1 De: 129 Ejemplo de resultados: Diluciones del Suero de Coombs 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1/1 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/128 1/256 E.P. 4+ 4+ 3+ 2+ 1+ (+) g - - T.P.C. 2+ 2+ 1+ (+) g - - - - T.N.C. - - - - - - - - - CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 61 9. Identificación de cuerpos irregulares NCDPT 06 1 De: 129 Preparación de Sueros de Coombs Numere tres series de tubos de 10 x 75 mm o de 12 x 74 mm de la siguiente manera. FILA 1 2 3 4 5 6 7 8 9 S. A. H. E. P. T. P. C. T. N. C. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 10. Técnica del despegado de los anticuerpos Rev. Hoja: 62 NCDPT 06 1 De: 129 10. TÉCNICA DEL DESPEGADO DE LOS ANTICUERPOS CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 10. Técnica del despegado de los anticuerpos Rev. Hoja: 63 NCDPT 06 1 De: 129 TECNICA DEL DESPEGADO DE LOS ANTICUERPOS CON CLOROFORMO (ELUIDO) Material: 1) El habitual en el laboratorio. 2) Sangre total del problema, anticoagulada con EDTA Despegamiento con cloroformo Reactivos: 1) Cloroformo 2) Albúmina bovina al 22% ó 33% 3) Solución salina isotónica (NaCL 0.9%) (SSI) Método: Coloque el volumen necesario de eritrocitos en un tubo de 13 x 100 de acuerdo con la intensidad de la reacción del coombs directo, (cómputo). CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 64 10. Técnica del despegado de los anticuerpos EJEMPLOS: S/P 1/2 1/4 1/8 1/16 1/32 1/64 1/28 1/256 No.1 2+ 2+ + + (+) (+) g - - COMPUTO 8 8 5 5 3 3 1 0 0 No.2 4+ 4+ 3+ 2+ + (+) g - - COMPUTO 12 12 10 8 5 3 1 0 0 NCDPT 06 1 De: 129 = 33 puntos = 51 puntos La intensidad de la reacción nos indica, aunque de manera gruesa, la cantidad de anticuerpos pegados al eritrocito. Se necesitará una mayor cantidad de eritrocitos del ejemplo No. 1 que del No. 2 para obtener una cantidad apropiada de anticuerpo despegado, ejemplo: Del No. 1, 0.2 ml. de paquete de eritrocitos y del No. 2, 0.1. Técnica: 1) Lavar 3 veces los eritrocitos problema con SI a 4°C. 2) Preparar una solución de albúmina al 6% con solución salina. 3) En un tubo 13 x 100, poner volumen a volumen la solución anterior y el paquete de eritrocitos lavados. Agregar un volumen equivalente de cloroformo. 4) Tapar con tapón de caucho, mezclar vigorosamente por 15 seg., mezclar por inversión durante un minuto. 5) Destapar con mucho cuidado para que no se proyecte el contenido. Poner el tubo a 56°C durante 5 minutos exactos, mezclando constantemente con un aplicador (pipeta pasteure). Centrifugar 5 minutos, pasar el sobrante a un tubo de 12x 75, centrifugar 2 minutos, decantar el sobrante. 6) Coloque el total del eluido, distribuido equitativamente en los tubos donde se va a probar su especialidad. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 65 10. Técnica del despegado de los anticuerpos NCDPT 06 1 De: 129 7) Agrege las células de fenotipo conocido al 2.5% en SSI. 8) Incube a 37°C de 30 a 60¨. 9) Lave 3 veces con SSI (tubo lleno). 10) “Seque” los eritrocitos. 11) Suspéndalos suavemente. 12) Agregue el suero antiglobulina humana. 13) Centrifugue y lea aglutinación. 14) Si los resultados son negativos, agregar una gota de eritrocitos control positivo de Coombs. (Consumo) Técnica del Despegado de los Anticuerpos A 45°C (Baño Maria) 1) Los eritrocitos problema se lavan como en el caso de la técnica del cloroformo. 2) Agregue la mitad del volumen de eritrocitos de SSI o albúmina bovina a 6% en SSI. 3) Mezcle perfectamente bien. 4) Coloque el tubo en un baño maría de 45°C durante 20’. 5) Agite la mezcla vigorosamente de 4 a 5 veces durante este tiempo de incubación. 6) Centrifugue la mezcla durante 5’ a 4000 R.P.M. 7) Separe cuidadosamente el sobrenadante (Ac eluido o despegado). 8) Recentrifugue el sobrenadante durante 3’ a 4000 R.P.M. 9) Decántelo sobre un tubo limpio. 10) Reparta de inmediato y equitativamente todo el eluido en tubos de 10 x 75 ó 12 x 75 mm. 11) Agregue los eritrocitos de fentipo conocido necesario y, 12) Lleve la prueba hasta coombs. 13) Realizar consumo de coombs. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 10. Técnica del despegado de los anticuerpos Rev. Hoja: 66 NCDPT 06 1 De: 129 DESPEGADO POR TRICLOROETILENO-CLOROFORMO 1) Lavar 3 veces los eritrocitos problema con SI a 4°C. 2) En un tubo de 13 x 100 poner volumen a volumen con solución salina eritrocitos lavados, agregar igual volumen del reactivo, tapar el tubo, incubar a 37°C durante 5 a 10 minutos rotando constantemente con una inclinación de 45°C hasta que se observe la hemólisis total. 3) Centrifugar 5 minutos, con pipeta pasteure recuperar el sobrenadante procurando no tocar la interfase ni el reactivo porque entonces todo se hemiolizará. 4) Centrifugar nuevamente por 2 minutos, decantar y realizar el estudio de anticuerpos ( como en el paso No. 5 de la técnica de cloroformo). 5) Reportar resultados en INER-BS 18 98. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 11. Estudios obligados de hemoderivados Rev. Hoja: 67 NCDPT 06 1 De: 129 11. ESTUDIOS OBLIGADOS DE HEMODERIVADOS CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 68 11. Estudios obligados de hemoderivados NCDPT 06 1 De: 129 A todas las unidades de sangre y hemoderivados se les tienen que practicar obligatoriamente las pruebas siguientes: A. -Prueba serológica para identificación de reaginas contra sífilis ( RPR ) B. -Determinación de Brucella mediante la técnica de Rosa de Bengala. C. -Prueba serológica para el antígeno de superficie de la hepatitis “B” (HbsAg). D. -Prueba serológica para la determinación de anticuerpos anti-HIV. E. -Prueba serológica para la determinación de anticuerpos anti-HCV. A continuación se describirá cada una de las técnicas detalladamente; son en general pruebas de floculación, aglutinación e inmunoensayo enzimáticos y antes de empezar la ejecución de cada técnica es necesario hacer las siguientes consideraciones. Recomendaciones Generales Todas las técnicas son sumamente sensibles y para tener la fiabilidad de los resultados depende en gran parte del correcto cumplimiento de las normas de laboratorio establecidas. • No utilizar reactivos caducados. • No mezclar reactivos de diferentes lotes en una serie de pruebas determinadas. • Antes de comenzar las pruebas, esperar 30 minutos para estabilizar los reactivos a temperatura ambiente. • Reconstruir los reactivos cuidadosamente. • Verificar las pipetas y el equipo para una operación correcta y precisa. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 11. Estudios obligados de hemoderivados Rev. Hoja: 69 NCDPT 06 1 De: 129 Acerca de las Muestras: 1. Obtener las muestras de acuerdo con las prácticas habituales. 2. Se deben separar lo antes posible las muestras para evitar hemólisis. 3. No usar muestras lipémicas, hemolizadas y que visiblemete presenten contaminación (bacteriana), si no se puede obtener una muestra fresca, las muestras existentes deben ser clasificadas mediante filtración.(0.45um). 4. No se deben utilizar muestras que se hayan congelado y descongelado en múltiples ocasiones. 5. Toda las muestras y controles de origen humano deben manejarse como potencialmente infectantes. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 70 12. Brucella NCDPT 06 1 De: 129 12. BRUCELLA CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 71 12. Brucella NCDPT 06 1 De: 129 Las brucelas son cobacilos gram negativos. El género comprende 3 especies importantes patógenos para el hombre, que se diferencian originalmente sobre la base de sus principales reservorios animales: Cabras y ovejas para B. mellitensis, ganado vacuno para B. abortus y los cerdos para B. suis. Esta división ha sido apoyada por diferencias metabólicas y antigénicas. El hombre se infecta a través de la ingestión de leche no pasteurizada o de queso, o bién del contacto con los tejidos de animales infectados. La respuesta inicial de los anticuerpos es la aparición de IgM, seguida después de IgG. Las pruebas de aglutinación se realiza con suspensiones fenoladas de bacilos lisos, muertos por el calor, Se utiliza para esto una cepa normalizada de B. abortus (n° 456), que es avirulenta para el hombre; detecta igualmente bien los anticuerpos frente a las tres especies principales. Interpretación: Los títulos superiores de 1:80 se considera una indicación de la existencia de una infección o de una infección anterior. Material y Equipo: • 1 placa de vidrio • Aplicadores • Antígeno de Brucella Abortus • Suero control positivo para Brucella Abortus • Suero control negativo para Brucella Abortus • 1 agitador rotatorio CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 72 12. Brucella NCDPT 06 1 De: 129 Procedimiento: 1. Colocar 1 gota de suero problema en cada división de la placa de vidrio, colocar también 1 gota de suero control positivo y de control negativo respectivamente. 2. Depositar en el lado opuesto donde está la gota de suero , 1 gota de antígeno de B. Abortus. 3. Con un aplicador, unir las dos gotas de cada división y homogenizar la mezcla. 4. Agitar durante 6 minutos a velociada media. 5. Interpretar resultados. Se utiliza antígeno Brucella Abortus 99 inactivado por calor y fenol en buffer de lactato de sodio y teñido con Rosa de Bengala. Material: • Gradilla • Placa-soporte desechable • Pipeta-agitador desechable • Rotor • Cronómetro Material Biológico: • Muestra (s) de sangre venosa sin anticoagulante centrifugada y separada en suero y paquete globular. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 73 12. Brucella NCDPT 06 1 De: 129 Reactivos: • Antígeno rosa de bengala • Control positivo (suero) • Suero control negativo Procedimiento: 1. Llevar reactivos a temperatura ambiente. 2. Con ayuda de las pipetas, tomar una gota de suero problema y colocarla en la placa desechable. Hacer lo mismo con cada uno de los controles. 3. Homogenizar perfectamente el antígeno de rosa de bengala y adicionar una gota en la placa desechable que contiene la muestra problema y proceder del mismo modo con cada uno de los controles. 4. Mezclar ambas gotas con la punta de una pipeta desechable. 5. Colocar en el rotor y accionarlo durante 4 minutos 6. Observar, leer y reportar. 7. Interpretación de resultados. Aglutinación: Prueba positiva. No Aglutinación : Prueba negativa CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 74 12. Brucella NCDPT 06 1 De: 129 Interpretación de resultados para rosa de bengala. 1. Control positivo mas antigeno rosa de bengala. (4+) 2. Control negativo mas antigeno rosa de bengala. ( - ) 3. -6 suero problema mas antigeno rosa de bengala. ( - ) CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 13. Determinación de treponema pallidum Rev. Hoja: 75 NCDPT 06 1 De: 129 13. DETERMINACIÓN DE TREPONEMA PALLIDUM CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 13. Determinación de treponema pallidum NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 76 De: 129 Determinación de Treponema Pallidum Sifilis por el Método de Reagina Rapida (RPR). La sífilis, principal enfermedad venérea del hombre, encausada por la espiroqueta (treponema pallidum) y suele transmitirse por contacto sexual, aunque la entrada estragenital está bién demostrada. La respuesta inmune a esta invasión se divide en : 1) Anticuerpos reagínicos biológicamente no específicos. 2) Anticuerpos específicos a treponema pallidum que producen aglutinación, adherencia inmune, fijación de complemento. Para la determinación de estos anticuerpos existen dos tipos de pruebas: Las no treponémicas (VDRL y RPR) que utilizan como antígenos cardiolipinas sensiblizadas por colesterol para detectar anticuerpos reagínicos y las treponémicas que sí utilizan antígeno o extractos de treponema pallidum para detectar anticuerpos especificos (las más frecuentes son: la prueba de inmovilización de treponema pallidum TPI la prueba de fijación de proteinas complemetarias de Reiter (RPCF). Sin embargo hablaremos aquí específicamente de la prueba reagínica de RPR . Esta prueba se basa en la floculación visible (macroscópica) del antígeno artificial combinación de cardiolipina, colesterol, lecitina y colorante en solución alcohólica estabilizado con ácido benzóico ante la presencia del anticuerpo en el suero del paciente. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 13. Determinación de treponema pallidum Rev. Hoja: 77 NCDPT 06 1 De: 129 Material: • Gradilla • Placa de reacción con anillos grabados • Pipetas desechables • Aguja sin bisel • Agitadores • Rotor Material Biológico: • Muestra (s) de sangre venosa sin anticoagulante, centrifugada y con suero separado. Reactivos: • Antígeno en suspensión. • Control positivo. • Suero control negativo. • Agitador Rotatorio CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 13. Determinación de treponema pallidum Rev. Hoja: 78 NCDPT 06 1 De: 129 Método cualitativo: 1. Depositar con ayuda de la pipeta desechable una gota (0.05ml) de suero problema, en un anillo de la placa de reacción . Se procederá del mismo modo con cada una de las muestras y controles. Extender perfectamente la gota sobre la superficie del anillo. 2. Añadir con la ayuda de la aguja sin bisel una gota de la suspensión del antígeno una vez homogenizado a cada una de las muestras. 3. Colocar la placa en el rotor y agitar por un espacio de 8 minutos a 180 rpm. 4. Leer resultado. Interpretación de resultados: • Presencia de flóculos (grumos)- Positivo. • No presencia de flóculos (grumos)- Negativo. DIAGRAMA CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 13. Determinación de treponema pallidum Rev. Hoja: 79 NCDPT 06 1 De: 129 Método Cuantitativo: 1. Seleccionar los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. 2. Colocar en una gradilla 4 tubos de 12X75mm y numerarlos. 3. Agregar a cada uno de ellos 0.5ml de solución salina. 4. Depositar 0.5ml. de suero problema en el tubo No. 1 y mezclar. 5. Pasar 0.5ml. del tubo No.1 al tubo No. 2 y mezclar. 6. Continuar esta operación hasta el tubo No.4. 7. Depositar 0.05ml de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la placa de reacción . Extender la muestra sobre la superficie del anillo. 8. Añadir una gota de la suspensión de antígeno , previamente resuspendido utilizando el frasco gotero al que se le ha insertado la aguja sin bisel. 9. Colocar la placa de reacción sobre el rotador mecánico a 180 RPM durante 8 minutos. 10. Leer resultados microscópicamente. Interpretación: El título de suero problema será la última dilución que presente grumos, ejemplo: Tubo # Dil. Suero Resultado 1 1:2 positivo 2 1:4 positivo 3 1:8 positivo 4 1:16 negativo CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 13. Determinación de treponema pallidum Rev. Hoja: 80 NCDPT 06 1 De: 129 El título del suero problema será 1:8 NOTA: Las limitaciones del procedimiento serán con : • Sueros extremadamente turbios o hemolizados son insatisfactorios para realizar la prueba. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Rev. Hoja: 81 NCDPT 06 1 De: 129 14. DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS ANTI-VIH CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Rev. Hoja: 82 NCDPT 06 1 De: 129 Pruebas para detectar la presencia de anticuerpos anti-VIH, por el método de Hemaglutinación pasiva y el ensayo inmunoenzimático (ELISA) Hemoaglutinación Pasiva Dicha prueba es un procedimiento sencillo que no requiere de instrumentos especiales para su realización; esta prueba utiliza antígeno de VIH obtenido por cultivo del virus en células linfoides (VIH I). El virus es inactivado y desintegrado y con el se cubren partículas que actúan como soporte (eritrocitos humanos estabilizados, partículas de gelatina). El principio de esta prueba se basa en que estas partículas sensibilizadas son aglutinadas por la presencia de anticuerpos de HIV en muestras de suero o plasma. Material: • Tubos de 13X100. • Pipetas graduadas de 1ml. • Micropipeta de 25ml. • Puntas para micropipeta. • Agitador rotatorio. • Placas con fondo en “U”. • Reactivo del Kit en uso. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 83 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH NCDPT 06 1 De: 129 Procedimiento: 1. El kit serodia cuenta con dos viales; uno de partículas control y otro con patículas sensibilizadas, ambos viales vienen liofilizados. Reconstituir ambos frascos con Buffer (reconstituyente). Dejar hidratar durante 30 minutos. (Adicionar el volumen necesario de Buffer de acuerdo a la presentación del Kit). 2. Se manejan 3 pozos por cada muestra; se agregan 75 Microllitros de diluyente de muestras en el primer pozo y 25 Microlitros en el segundo y tercer pozo 3. Agregar 25 Microlitros de muestra al primer pozo. 4. Homogenizar la muestra en el primer pozo y transferir 25 Microlitros al segundo pozo, homogenizar con una micropipeta y transferir al pozo 3, homogenizar y descartar los últimos 25 Microlitros. 5. Proporcionar en el pozo 2, 25 Microlitos. de partículas no sensibilizadas. 6. Colocar en el pozo 3,25 Microlitos de partículas sensibilizadas. 7. Homogenizar en un agitador rotatorio durante 5 minutos (a 180 rpm), cubrir e incubar 2 horas a temperatura ambiente (15-25°C) en una superficie libre de vibraciones. 8. Correr un control positivo en cada ensayo. 9. Leer resultados. 10. Registrar número de lote del reactivo y fecha de caducidad. Interpretación de resultados: - Resultado negativo: Formación de un botón compacto. - Resultado positivo: Formación de un Halo (anillo) aglutinado. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Rev. Hoja: 84 NCDPT 06 1 De: 129 El VIH como cualquier otro agente infeccioso estimula la respuesta inmune provocando la formación de anticuerpos específicos. Entre los métodos comunes de detencción de estos anticuerpos se encuentra el ensayo ELISA . Dicha prueba se basa en la reacción inmunológico que se presenta entre un antígeno y su anticuerpo específico ; el antígeno de VIH se encuentra fijo en una superficie (fase sólida), el cual reacciona con el anticuerpo específico al adicionar alguna muestra seropositiva. Posteriormente se lleva a cabo una segunda reacción en la cual se adiciona un anticuerpo marcado con una enzima (conjugado), dicho anticuerpo va dirigido al primer anticuerpo; enseguida se adiciona un sustrato el cual desarrolla color para visualizar la reacción positiva. Principio de la prueba HIV Anti-HIV (Ig anti-humano)-HRP+ sustrato Antígeno en fase Muestra Anticuerpo marcado con sólida Positiva enzima Material: • Reactivos del Kit en uso. • Incubador. • Lavador de microtiras. • Lector. • Micropipetas. (50-200 Microlitos). • Puntas para micropipeta. • Tubos de 13X100 para muestra. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 85 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH NCDPT 06 1 De: 129 PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA Seguir estríctamente el procedimiento propuesto. Utilizar los controles negativos, positivos y el valor umbral en cada serie de pruebas, para validar los resultados. Seguir estrictamente las normas de laboratorio establecidas: 1. Cuidadosamente establecer la distribución de las muestras y el plan de identificación. 2. Preparar la solución de lavado. (concentrada 10X) 3. Sacar la placa soporte con los módulos de la bolsa de protección. 4. Distribuir directamente sin lavados previos de la microplaca y en serie: 4.1- 80 µl. de diluyente en cada pocillo. 4.2- 20 µl. de suero control negativo en los pocillos –a A - 20 µl. de suero valor umbral en los pocillos B1, C1 y D1 - 20 µl. de suero contro positivo en el pocillo E1. - 20 µl. de la muestra No.1 en el pocillo F1. - 20 µl. de la muestra No.2 en el pocillo G1, etc. 4.3 – Adicionar dos muestras control interno negativo y positivo Aspirar y expµlsar al menos tres veces para homogenizar la mezcla. También es posible, distribuir 100 µl. de la muestra previamente diluida 1:5. 5. Cubrir la microplaca con plástico adhesivo. Apretar firmemente sobre toda la microplaca para asegurar una firme adhesión. 6. Incubar la microplaca en un baño maría a 40°C ≠ 1° durante 30 minutos ≠ 5. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH NCDPT 06 1 Rev. Hoja: 86 De: 129 7. Quitar el plástico adhesivo. Aspirar el contenido de los pocillos a un recipiente de residuos desechables ( contenido hipoclorito sódico ), añadir 0.3 µl. de la solución de lavado en cada pocillo. Aspirar otra vez. Repetir este procedimiento dos veces ( ej. un total de 3 lavados ), a continuación secar la microplaca volteando hacia abajo sobre papel absorvente. Si se utiliza un lavador automático, seguir el mismo procedimiento. 8. Distribuir 100 µl. de la solución de conjugado en todos los pocillos. Agitar el frasco del conjugado antes de utilizarlo. Cubrir con un plástico adhesivo nuevo e incubar durante 30 minutos a 40°C ≠ 1°. 9. Quitar el plástico adhesivo, vaciar todos los pocillos por aspiración y lavar cuatro veces como se indica en el párrafo No. 7. A continuación secar la microplaca volteando hacia abajo sobre un papel absorbente. 10.Preparar la solución de substrato justo en el momento de usarlo. (Una tableta de OPD en 10ml de Buffer). Esta solución no deberá exponerse a la luz directa, y no usarla después de 10 minutos. 11.Evitando la luz directa distribuir rápidamente 100 µl. de la solución de revelado (preparada en el punto 10), en todos los pocillos. Dejar que se desarrolle la reacción en un lugar oscuro durante 30 ≠ 5’ minutos a temperatura ambiente. (18°-25°C) No utilizar el plástico adhesivo durante esta incubación. 12.Añadir 50 µl. de la solución de parada (H2SO44N) utilizando la misma secuencia de distribución a la empleada para la solución de revelado. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Rev. Hoja: 87 NCDPT 06 1 De: 129 13.Secar cuidadosamente la base de la microplaca. Realizar la lectura de las densidades ópticas a 492/620 nm, utilizando un lector de microplacas dentro de los 30 minutos después de la parada de la reacción (los módulos se deberán mantener fuera del alcance de la luz intensa antes de la lectura). 14.Verificar todos los resultados y la correspondencia entre la lectura y la distribución de la muestra y el plan de identificación. 15.Guardar registro de lecturas. OBSERVACIONES Precauciones: EVITAR LA CONTAMINACION DURANTE EL ENSAYO EN CASO DE CONTAMINACION (derrames, generales...) • Los derrames no ácidos, se deberán limpiar a fondo con solución de hipoclorito sódico a 5%. • Los derrames ácidos, se deberán limpiar en seco. El área derramada se deberá limpiar con una solución de hipoclorito sódico al 5%. El material utilizado para limpiar, se deberá desechar en un contenedor para material contaminado y desechar de acuerdo con las normas de seguridad establecidas. • NUNCA USAR EL MISMO CONTENEDOR PARA DISTRIBUIR EL CONJUGADO Y LA SOLUCION DE REVELADO. • RESPETAR EL NUMERO DE CICLOS DE LAVADO PRESCRITOS. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 88 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH NCDPT 06 1 De: 129 • VERIFICAR LA SOLUCION DE REVELADO ENZIMATICA. (tampón sustrato y cromógeno) ANTES DE DISTRIBUIR deberá estar incolora ó, a lo máximo amarillo pálido. La aparición de un color amarillo-naranja a los pocos minutos después de la reconstitución, indica que el reactivo no puede utilizarse y se deberá reemplazar. El tampón sustrato, el cromógeno, la solución de revelado y la solución de parada, pueden contaminarse por iones metálicos. Por esta razón, es preferible utilizar contenedores y equipos de distribución de plástico o vidrio, previamente lavados con ácido clorhídrico 1N y enjuagados cuidadosamente con agua destilada y secados. CALCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS La presencia o ausencia de anticuerpos frente a VIH-1 y/o VIH-2, se determina comparando la lectura de absorbancias para cada muestra contra el Valor Umbral calculado. 1) Calcular la media de absorbancias del Suero Control del Valor Umbral: DOR4 = DO (B1)+DO (C1)+DO (D1) 3 2) Calcular el Valor Umbral El Valor Umbral viene dado por CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Valor umbral = DO Rev. Hoja: 89 NCDPT 06 1 De: 129 = V.U. 10 3) Validación de la prueba El suero control Negativo, deberá ser inferior al 70% del Valor Umbral: D.O. (Control Negativo)< 0,7 V.U La medida del Suero Control Valor Umbral, deberá ser superior a 0.6: DO > 0,6 El Valor D.O. Control pos fuerte / D.O. DO de V.U deberá ser igual o superior a 1.3: DO > 1,3 DO CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Rev. Hoja: 90 NCDPT 06 1 De: 129 4) Interpretación de los resultados Las muestras con un valor de absorbancias inferiores al Valor Umbral, deben considerar negativas por la prueba de GENELAVIA MIXT. Los resultados con un valor justo inferior al Valor Umbral: D.O. VU - 10% < D.O. UV, deberán ser interpretados con mucha precaución y a las muestras correspondientes, se les repetirá la prueba en duplicado. Las muestras con valor de absorbancias igual o superior al Valor Umbral, inicialmente se consideran positivas por la prueba GENELAVIA MIXT. Se deberá repetir la prueba por duplicado antes de emitir el resultado final. Si después de repetir una muestra, los valores de absorbancias de la prueba por duplicado son inferiores al Valor Umbral, el resultado inicial no es considerado reproducible y la muestra se declara como negativa. Reacciones no reproducibles son a menudo causadas por: • Lavado insuficiente • Contaminación de las muestras negativas por sueros con un título alto de anticuerpos. • Contaminación de la solución de revelado por agentes oxidantes (lejía, iones metálicos, etc..) • Contaminación de la solución de parada. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE 14. Determinación de anticuerpos Anti-VIH Rev. Hoja: 91 NCDPT 06 1 De: 129 Si después de repetir, las absorbancias de uno de los duplicado es igual o superior al Valor Umbral, el valor inicial es reproducible, y la muestra se declara positiva. Un resultado negativo indica que la muestra ensayada no contiene anticuerpos VIH. REALIZACION La sensibilidad de HIV-1 es 100% para 300 pacientes diagnosticados de SIDA y con complejos de SIDA (ARC). La sensibilidad para HIV-2 es 100% para 67 muestras confirmadas por Western Blot. La sensibilidad de HIV-1 subtipo 0 es 100% para 9 muestras. La especificidad es 99.82% (5545/5555) en una población de donantes. No ha sido observada en muestras hemolizadas o pacientes con otras enfermedades virales o autoinmunes. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 92 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 15. HEPATITIS VIRAL B CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 93 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 Técnicas de Elisa para Hepatitis “B” y Hepatitis “C” Hepatitis Viral Introducción y Fundamento: La Hepatitis Viral es una de las enfermedades en las que se desarrolla un cuadro clínico común , pero los agentes causantes son etimológicamente y epidemiológicamente distintos. Los diferentes tipos de Hepatitis tienen importancia significativa en la salud pública, no solo en términos de morbilidad y mortalidad, también en términos de consecuencias económicas (CDC de ATLANTA). La Hepatitis B ha sido reconocida y estudiada desde los 40´S y en el laboratorio es diagnosticada por pruebas serológicas específicas. El agente causal es un virus con ADN de filamento doble y miembro de la familia Hepadnaviridae, mide 40nm. El VHB posee una parte central que es el corazón , rodeado de una cubierta viral que contiene la proteína de superficie ó el Ag HBS. El ADN viral y una Polimerasa participantes en su replicación se encuentran dentro del Núcleo. La transmisión ocurre, en especial por vía parenteral o sexual. La Hepatitis B puede presentarse como aguda o crónica. Se calcula que 50 a 60% de los individuos infectados se mantienen asintomáticos, mientras que el resto presenta signos clínicos de hepatitis aguda. Los pacientes con síntomas más importantes en la fase aguda pueden presentar una respuesta inmunitaria más exitosa que provoca la eliminación del virus. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 94 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 La mayoría de los pacientes que desarrollan hepatitis B crónica presentan una enfermedad inicialmente asintomática o relativamente leve. Es por eso la importancia de conocer e interpretar los marcadores del VHB en el laboratorio desde el punto de vista clínico. (Para llegar a un diagnóstico). HBsAG es la proteína predominante de la cubierta viral, presente en suero indica infección viral aguda ó crónica. Puede ser detectado en suero 30 a 60 días después de la exposición al virus es el primer marcador serológico, precede a los síntomas. Alcanza una concentración máxima durante los estadíos agudos de la infección por hepatitis B después declina, de manera gradual a niveles no perceptibles en un lapso de cuatro a seis meses en infecciones de curación espontánea. El HBeAg se libera durante periodos de replicación viral activa y se relaciona con aumento de infectividad. Aparece simultáneamente con el HBsAg y disminuye justo antes de que se reduzcan los títulos de HBsAg. Cuando el resultado de la prueba de HBeAg es positivo , el riesgo de transmisión perinatal es de 75 a 90%, sin embargo existe un riesgo de 5% cuando el resultado es negativo. El antígeno (HbcAg), es un componente proteínico de la (nucleocápside) y se encuentra cubierto por el HBsAg, no penetra en suero y no se cuenta con alguna prueba comercial para determinarlo. El huésped , al reconocer al HBcAg como extraño producirá anticuerpos específicos IgM contra esta proteína (ANTI-HBc). CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Hoja: 95 15. Hepatitis Viral B El ANTI-HBc Rev. NCDPT 06 1 De: 129 IgM es el primer parámetro serológico visible de la respuesta inmunitaria del huésped contra el VHB y suele presentarse entre la 6 y 10 semana después de la infección inicial. Por lo que se le considera un indicador de Hepatitis Aguda y desaparece después de la recuperación. El ANTI Hbc IgG, aparece después y es visible indefinidamente. El ANTI Hbc IgG es el mejor indicador de una exposición previa con el VHB y sobre todo es de suma importancia durante el período de VENTANA ya que se ausenta el HBsAg de circulación y por lo tanto se le considera como un indicador de previo contacto. El ANTI Hbs los anticuerpos específicos contra el HBs Ag se forman unos seis meses después de la infección inicial. En un porcentaje reducido de pacientes (5 a 15%) no se presenta anti HB. Estos anticuerpos también se forman como respuesta a la vacuna de Hepatitis B y podría persistir después de una inmunización con gamaglobulina inmune. Podemos resumir, la presencia de HBsAg y ANTI HBc-IgM son indicadores de una infección aguda causada por el VHB. La pérdida de HBsAg y HBeAg y la presencia de anti Hbs son indicadores de inmunidad. Los individuos no inmunizados contra el virus y expuestos al VHB, incluida la exposición a piquete de aguja, maternoneonatal y sexual deben recibir una combinación de inmunoterapia pasiva y activa. La inmunoglobulina de hepatitis B (HBIG) debe administrarse lo antes posible durante los siete días después de la exposición y de nuevo a los (14 a 30 días, junto con la administración de la vacuna de hepatitis B. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 96 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 Principio y Procedimiento Microplaca sensibilizada con un anticuerpo monoclonal Lavar la placa. Dispensar 100 ul. de muestras y controles. Dispensar 50 ul. de conjugado. Incubar por 90 minutos a 40ªC Lavar 5 veces. Dispensar 100ul de solución reveladora. - Incubar 30 minutos en la oscuridad. - Dispensar 50 microlitos de H2SO4 4N Leer a 492/620 nm. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 97 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 MÉTODO Tres métodos para la detección de Ags HB son disponibles. Para cada método 1,2 ó 3 el procedimiento es el siguiente: 1. Preparar la solución de lavado 2. Tomar de la bolsa el número de tiras necesarias, las restantes dejarlas dentro de la bolsa y sellar. 3. Llenar los pozos con 370ml. de solución de lavado. 3.1 Aspire el contenido de los pozos dentro de un recipiente. 3.2 Repita el procedimiento una vez más y seque la placa sobre papel absorbente. 3.3 Si se emplea sistema de lavado automático, realizar los mismos ciclos de lavado. 4. Distribuir los pozos en el siguiente orden: Pozos A1, B1 C1 y D1: 100 microlitros de control negativo. Pozos E1 y F1: 100 microlitros de control positivo Pozos G1, H1, etc.: 100 microlitros de muestras no conocidas. 5. Distribuidas 50 microlitros de solución de conjugado en los pozos, cubrir con un tira adhesiva. 6. Método 1.- Incubar por 90 minutos a 40°C en baño maría. Método 2.- Incubar por 90 minutos a 40°C en un incubador seco con agitación. Método 3.- Incubar por 45 minutos a 40°C en un incubador seco con agitación. 7. Remover la tira adhesiva y vaciar los pozos lavar 5 veces como indica en el punto 3. 8. Preparar la solución de desarrollo enzimático unos minutos antes. 9. Dispense 200 microlitros de la solución de desarrollo en cada pozo, incubar 30 minutos en la oscuridad a temperatura ambiente. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 98 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 10. Adicionar 50 microlitros de solución de paro 4N en cada pozo. 11. Leer la placa a una densidad óptica de 492/620 nm. dentro de los 30 minutos siguientes de la interrupción de la reacción. 12. Guardar registro de resultados. Según Técnica del Fabricante Material y Equipo: 1. Reactivos del Kit en uso. 2. Lavador de Microplacas. 3. Micropipeta para toma variable. 4. Punta para Micropipetas. 5. Incubadora para 40ºC. 6. Lector de tiras Microelisa. 7. Impresora CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. Hoja: 99 15. Hepatitis Viral B NCDPT 06 1 De: 129 CALCULO E INTERPRETACION DE RESULTADOS 1. Calcular el promedio de la densidad óptica de los controles negativos: DO EJEMPLO: Control negativo D.O. 1 0.010 2 0.011 3 0.012 4 0.015 D.O TOTAL 0.048 = 4 2. = 0.012 = D.O. 4 Calcular el promedio de la densidad óptica de los controles positivos D.O. EJEMPLO: Control positivo D.O. 1 0.980 2 0.964 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Hoja: 100 De: 129 15. Hepatitis Viral B D.O TOTAL 1.944 = 2 3. Rev. NCDPT 06 1 = 0.972 =D.O 2 Calcular el valor de corte. Para cada método el valor de corte es igual a : D.O + 0.025 EJEMPLO: D.O = 0.012 VALOR DE CORTE = 0.012 + 0.025 = 0.037 4. Condiciones de validación de la prueba. Todos los valores de los controles negativos deben ser menores que 0.100 unidades de densidad óptica. Si el valor promedio de los controles negativos (D.O) es mayor que 0.010, es posible eliminar cuando más un valor aberrante cuando el valor se desvía más de un 40% con respecto al valor promedio. Si el valor promedio de los controles negativos (D.O) es menor ó igual a 0.010, todos los valores individuales de control negativo deben estar dentro del intervalo de -0.005 a +0.005 del promedio. Es posible eliminar cuando más un valor aberrante. Cuando el valor aberrante se ha eliminado, calcular nuevamente el valor promedio de los controles negativos (D.O) con lo otros tres valores. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 101 De: 129 15. Hepatitis Viral B El valor promedio de los controles positivos (D.O) deben ser mayor 0.400 para los métodos 1 y 3 y mayor que 0.800 para el método 2. 5. Interpretación de resultados. - Muestras con una densidad óptica menor que el valor de corte son negativos. - Muestras con una densidad óptica mayor ó igual que el valor de corte son positivas. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 102 De: 129 16. Hepatitis C 16. HEPATITIS C CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 103 De: 129 16. Hepatitis C La primera vez que se identificó el virus de hepatitis C (VHC), cuya clasificación formal es no A, no B, fue en 1988. Existen dos clases, siendo la más común la encontrada en sangre que se relaciona en forma estrecha, con transfusiones. También se describió una variedad existente en agua y se le relaciona con epidemias en India, Asia y América Central. Desde el punto de vista epidemiológico, el VHC semeja el VHA y en ocasiones se le denomina hepatitis entérica o VHE. Los anticuerpos aparecen entre el primero y tercer mes del surgimiento del antígeno HCaG. La infectividad es reducida por contacto personal, razón por la que se le relaciona, en especial , con transfusión sanguínea. El periodo de incubación varía entre dos semanas y seis meses. las pruebas que en forma directa identifican el virus están en desarrollo pero encuentran el obstáculo de resultados falsopositivos y falsonegativos desproporcionados. Antigeno Codificado del Virus de la Hepatitis “C” (Recombinantes c22-3, c200y NS5), ORTHO En el sistema de prueba ELISA ORTHO HCV 3.0, se utilizan tres antígenos recombinantes codificados del virus de la hepatitis C. Los tres antígenos recombinantes, desarrollados por Chiron Corporation , son los c22, c200 y NS5. Procedimiento de la Prueba - Incubación ESTANDAR: 1. Treinta minutos antes del comienzo del procedimiento, aproximadamente, deje que los componentes del equipo adquieran la temperatura de la habitación ( de 15 a 30°C ). Voltee suavemente los reactivos varias veces, pero evite que se forme espuma. Compruebe la temperatura del incubador: manténgala a 37°C + 1°C. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 104 De: 129 16. Hepatitis C 2. Determine el número total de micropocillos necesarios para el ensayo. Además de las muestras, en cada placa o en cada placa parcial, se deberá incluir un sustrato blanco, tres controles negativos y dos controles positivos. Si no se necesita la tira entera, puede separarse el número adecuado de pocillos que se vayan a utilizar. Los pocillos que no se utilicen deberán almacenarse entre 2 y 8°C en la bolsa de aluminio que se suministra, con desecante, firmemente sellada y habrán de usarse dentro de los cuarenta y dos días siguientes a la apertura de la bolsa de aluminio. Anote en el espacio destinado para ello en la bolsa de aluminio la fecha en la que se abre la misma y la fecha de caducidad de los pocillos que no se usen. La realización de la prueba en una placa más pequeña que la placa entera se permite siempre y cuando se cumplan las siguientes condiciones: Las tiras de micropocillos de diferentes placas pueden mezclarse para formar placas completas o parciales siempre y cuando pertenezcan a un mismo lote, no hayan caducado y provengan de placas que han demostrado con anterioridad una respuesta adecuada a los controles del equipo. Al ensamblar una placa que contengan tiras de una placa recién abierta y que no se ha ensayado con anterioridad, deberá colocarse una de estas tiras al comienzo de la placa y realizar todos los controles del equipo ADVERTENCIA: Manipule las tiras de los micropocillos con cuidado. No toque la superficie exterior del fondo de los pocillos. NOTA: Una vez comenzado el ensayo , todos los pasos han de completarse en orden. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 105 De: 129 16. Hepatitis C 3. Monte las tiras de micropocillos en el soporte para tiras Las tiras han de estar niveladas en dicho soporte. Añada tiras de micropocillo negras o sin recubrir para formar una microplaca completa. 4. Prepare una ficha en la que se identifique la disposición de los controles y de las muestras en los micropocillos. Disponga los pocillos de control de ensayo de forma que el pocillo 1A sea el sustrato blanco. Partiendo del pocillo 1A, disponga todos los controles en una configuración horizontal o vertical, tal y como se indica a continuación . Esta configuración dependerá del “soffware”. Pozo 1A Sustrato Blanco Control Negativo Control Negativo Control Negativo Control Positivo Control Positivo 5. Añada los controles y las muestras a los micropocillos. Compruebe que el equipo dispensador es capaz de pipetear los volúmenes especificados y las diluciones apropiadas tal y como se indican en el procedimiento. Verificar visualmente los pocillos después de la dispensación de muestras y sueros de control. Un cambio de color marrón grisáceo hacia verde es indicativo de que la muestra o el control ha sido correctamente dispensado en el pocillo. Si no se observa ningún cambio de color el resultado correspondiente a esa muestra o control ( será invalidado y se le realizará un nuevo ensayo. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 106 De: 129 16. Hepatitis C Para la Adición de una Muestra Directa: A) Al utilizar instrumentos automáticos para dispensar los controles y las muestras al micropocillo, siga las instrucciones del fabricante para lograr los volúmenes y las diluciones precisas. Cuando se dispensen los controles y las muestras manualmente, deberán llevarse a cabo los siguientes pasos: I) Añada 200 µl de Diluyente de la Muestra a todos los pocillos, excepto al 1A. II) Añada 10 µl de los controles a los pocillos correspondientes. III) Añada 10 µl de cada muestra de suero o plasma que se vaya a ensayar a los pocillos correspondientes. IV) Coloque el soporte para tiras de micropocillos en un agitador de placas para que se mezcle durante 5 ó 10 segundos a menos que utilice el Aparato Automático Dilutor/Pipeteador ORTHO o material equivalente. El agitador deberá utilizarse a una velocidad lenta o moderada , teniendo cuidado de no producir salpicaduras con el contenido de los pocillos de prueba. Para la adición de Muestras Prediluidas: A. Añada 300 µl de Diluyente de Muestras a un tubo o recipiente. B. Añada 15µl de control de la muestra al tubo. Mézclelo a fondo. C. Transfiera a 210 ml de cada muestra o control , diluidos previamente, al pocillo correspondiente. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 107 De: 129 16. Hepatitis C 6. Tape la microplaca con adhesivos de placas e incube a 37°C + 1°C durante 60 minutos + 5 minutos. 7. Nivele las tiras en el soporte. Utilizando un dispositivo aspirador/lavador, aspire y lave todos los pocillos cinco veces consecutivas con Tampón de Lavado (1X). ADVERTENCIA: El seguimiento escrito del procedimiento de lavado descrito es crucial para asegurar la realización óptima de la prueba. Siga los pasos que se citan con objeto de asegurar un lavado a fondo. a) Aspire las soluciones de muestra de los micropocillos y proceda a llenarlos con Tampón de lavado (1X). No deje que los pocillos rebosen. Deje transcurrir 20 segundos , aproximadamente, desde el momento en que añada el Tampón de Lavado hasta la aspiración siguiente. b) Realice la secuencia completa de aspirado y llenando otras cuatro veces. c) Aspire los pocillos de manera completa. Déle la vuelta a la placa y golpee firmemente sobre una toallita de papel limpia para eliminar el exceso de Tampón de Lavado. 8. Añada 200µl de Conjugado a todos los pocillos, incluir al 1A 9. Tape el soporte de tiras de micropocillo con adhesivo de placas nuevo e incube a 37°C + 1°C durante 60 minutos + 5 minutos. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Hoja: 108 De: 129 16. Hepatitis C 10. Rev. NCDPT 06 1 Prepare suficiente Solución de Sustrato aproximadamente 10 minutos antes de que termine la segunda incubación . Déjese transcurrir el tiempo suficiente para que las pastillas de OPD se disuelvan adecuadamente. No es correcto utilizar más de una preparación de Solución de Sustrato en una misma placa. 11. Tras la segunda incubación , lave los pocillos tal y como se describe en el paso 7. 12. Añada 200µl de solución de Sustrato a todos los pocillos, incluso el 1A. 13. Incube a la temperatura ambiente y en la oscuridad durante 30 minutos + 1minuto. 14. Añada 50µl de ácido sulfúrico (H2SO4) 4N a todos los pocillos, incluido el 1A. El ácido ha de añadirse mediante un chorro enérgico y constante poniendo especial cuidado para no producir salpicaduras entre pocillos. 15. Si existiera humedad, limpie cuidadosamente el fondo de las tiras con un papel absorbente y suave para eliminarla antes de la lectura. Asegúrese de que las tiras están niveladas en su soporte. Lea la placa con una longitud de onda de 490 ó 492nm. En el caso de lectores de longitud de onda duales, ajuste la longitud de onda de referencia 620 ó 630 nm. Ajuste el blanco de lectura en el pocillo 1A de acuerdo con las instrucciones del fabricante del aparato. 16. Registrar el número de lote de los reactivos utilizados y la caducidad de los mismos en la bitácora. NOTA: Las microplacas han de leerse dentro de los 60 minutos que siguen a la dispensación del ácido sulfúrico 4N. Las placas han de conservarse en la oscuridad hasta que sean leídas. Importante: Al final de cada jornada, limpie el aparato aspirador/lavador con agua destilada o desionizada (aproximadamente 500ml) siguiendo las instrucciones recomendadas por el fabricante del aparato. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 109 De: 129 16. Hepatitis C Procedimientos de Control de Calidad -Incubación ESTANDAR 20,21. 1. Criterios de Aceptación del Sustrato Blanco. Se considera que una placa es válida con respecto al sustrato blanco si el valor de absorbancia del pocillo con el Sustrato blanco (pocillo 1A) es mayor o igual a -0,020 y menor o igual a 0,050. 2. Criterios de Aceptación del Control Negativo. a) Los valores individuales del control negativo deben ser menores o iguales a 0,120 y mayores o iguales a -0,005 son válidas y deberán ser redondeadas a 0,000 para los cálcµlos. Si uno de los tres valores control se encuentran fuera de alguno de estos límites, recalcµle el volor medio del control negativo basándose en los dos valores control aceptables. La placa no será válida y habrá de repetirse la prueba si dos o más de los tres valores control se encuentran fuera de alguno de los límites. b) Halle la media de los valores del control negativo. Ejemplo: Control Negativo Absorbancia 1 0,010 2 0,030 3 0,020 Absorbancia Total = 0,060 NCX = Absorbancia Total = 0,020 3 CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 110 De: 129 16. Hepatitis C 3. Cálculo del valor de la línea de Corte (“Cutoff”) Valor de la línea de Corte = NCx + 0,600 Ejemplo: Control Negativo Absorbancia 1 0,010 2 0,030 3 0,020 Absorbancia Total = 0,060 NCX = Absorbancia Total = 0,020 3 Valor de la línea de Corte = 0.020 + 0.600 = 0.620 4. Criterios de Aceptación del Control Positivo. El control positivo se utiliza para verificar que los compontentes del Kit son capaces de detectar una muestra reactiva, siempre que se haya seguido estríctamente el procedimiento del ensayo. Una placa se considera válida con respecto al control positivo si el valor de ambos controles positivos es mayor o igual a 0.800 y no dfieren entre sí más de 0,600. Cualquier otro resultado para el control positivo es considerado inválido. NOTA: Los resultados por encima del límite superior del lector pueden aparecer como “OVER”, “***” O “ “. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 111 De: 129 16. Hepatitis C 1. Las muestras con valores de absorbancia menores de -0,025 deberán ser sometidas de nuevo a la prueba en un único pocillo. La prueba deberá considerarse no reactiva si el valor de absorbancia en la repetición de la prueba es inferior a 0,025. 2. Las muestras con valores de absorbancia inferiores al valor de la línea de corte se considera negativos (no reactivos). No es necesario hacer más pruebas. 3. Las muestras con valor de observancia superiores o iguales al valor de la línea de corte se consideran inicialmente reactivas y deberán ser sometidas a una nueva prueba por duplicado antes de hacer una interpretación definitiva. 4. Al someter de nuevo a ensayo una muestra inicialmente reactiva, dicha muestra se considerará repetidamente reactiva para el anticuerpo frente al HCV si alguno o los dos valores de la prueba duplicada es (o son) reactivo (s), es decir mayor(es) o igual(es) al valor de la línea de corte. 5. Tras la repetición de la prueba para una muestra inicialemte reactiva, dicha muestra se considerará no reactiva para el anticuerpo frente al HCV si ambos valores de la prueba por duplicado son negativos, es decir, inferiores a la línea de corte. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 112 De: 129 17. Identificación de Chagas 17. IDENTIFICACIÓN DE CHAGAS CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 113 De: 129 17. Identificación de Chagas PRUEBA DE ESCRUTINIO PARA Tripanosoma cruzi OBJETIVO: Identificar los anticuerpos (Acs) anti-T cruzi para disminuir, la posible transmisión de la enfermedad de chagas a través de los componentes sanguíneos, determinando los Acs producidos por el individuo (disponente) contra el Tripanosoma cruzi y para dar cumplimiento a la Normatividad vigente. FUNDAMENTO: La enfermedad de Chagas es una infección parasitaria producida por el Tripanosoma cruz. El diagnostico de laboratorio depende del estadio en el cual se encuentre la enfermedad. Durante la fase aguda, se efectúa directamente mediante la comprobación de los parásitos en sangre o por métodos inmunológicos como: reacción de fijación de complemento, aglutinacón de látex, floculación, hemaglutinación, aglutinación directa, imnunofluorescencia o ELISA. En ésta técnica cualitativa para la detección de anticuerpos anti-T.cruzi, la muestra se diluye en el soporte en el que se encuentran inmovilizados antígenos recombinantes, obteniéndole un método de 3ª. Generación. Estos antígenos se obtienen por técnica de ADN recombinante a partir de proteínas específicas de los estadios epimastigote y tripomastigote del T.cruzi, correspondientes a zonas altamente conservadas entre distintas cepas. La tecnología empleada permite asegurar una mezcla antigénica de composición conocida y constante lote a lote, brindando resultados reproducibles, específicos y con una elevada sensibilidad. Si la muestra contiene los anticuerpos específicos, éstos formarán un complejo con los antígenos y permanecerán unidos al soporte. La fracción no unida se elimina por lavado tras lo que se agregan anticuerpos anti-inmunogloobina CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 114 De: 129 17. Identificación de Chagas humana conjugados con peroxidasa. Si se produjo la reacción en la primera etapa del proceso, se unirá el conjugado con peroxidasa. Si se produjo la reacción en la primera etapa del proceso, se unirá el conjugado. Luego de un nuevo lavado se agrega el sustrato enzimático. En los casos en que se haya unido el conjugado habrá aparición de color celeste. La reacción se detiene con ácido sulfúrico, con lo que el color celeste vira al amarillo. MUESTRA: Suero o plasma • Recolección: Obtener de la manera usual. No usar muestras inactivadas por el calor. Sustancias interferentes conocidas: La hemólisis, hiperlipemia y otras causas de turbiedad pueden provocar resultados erróneos. MATERIAL Y EQUIPO: • Micropipetas capaces de medir los volúmenes indicados. • Reloj, alarma o cronómetro. • Estufa a 37° C • Espectrofotómetro para lectura de policubetas. ETI-STAR. MARCA DIASORIN REACTIVOS PROVISTOS: Policubetas sensibilizadas: policubeta de tiras removiles con pocillos que contienen antígenos recombinantes de T.cruzi inmovilizados. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 115 De: 129 17. Identificación de Chagas Conjugado: anti-inmunoglobulinas humanas (cabra) conjugadas con peroxidasa. Revelador A: peróxido de hidrógeno de hidrógeno 60mmol/l en buffer citrato 50 mmol/l pH 3.2. Revelador A: tetrametilbencidina (TMB) 0.01 mol/l en ácido clorhídrico 0.1N. Stopper: ácido sulfúrico 2N. Buffer de lavado concentrado: cloruro de sodio 1.4 mol/l en buffer fosfatos 100 mmol/l y tensioactivo no iónico 0.1 g/l Diluyente de muestras: albúmina bovina en solución fisiológica tamponada con buffer fosfatos pH 7.2. Control Positivo: dilución de suero inactivado conteniendo anticuerpos contra Tripanosoma cruzi. Control negativo: dilución de suero no reactivo, inactivado. Los reactivos provistos son estables en refrigerador (2 - 10 °C) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No congelar. PROCEDIMIENTO: Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras antes de iniciar la prueba. Una vez iniciado el procedimiento debe completarse sin interrupción. Procesar simultáneamente 2 Controles Positivos (CP) 3 Negativos (CN) y los desconocidos (D). Al depositar la muestra y/o Controles sobre el Diluyente de Muestras, debe asegurarse de colocar los mismos en el seno del líquido y no sobre las paredes o el fondo del pocillo. Enjuagar la pipeta con el Diluyente dispensado en el pocillo para asegurar la correcta homogeneización. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 116 De: 129 17. Identificación de Chagas En los pocillos a utilizar de la policubeta colocar: D CP CN Diluyente de muestras 200 ul 200 ul 200 ul Control Positivos - 10 ul - Control Negativo - - 10 ul Muestra 10 ul - - Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 segundos una vez cargadas las muestras en cada tira. Para evitar la evaporización, cubrir la placa e incubar en la estufa 30 minutos a 37 °C. Luego espirar cuidadosamente el líquido de cada pocillo recibiéndolo en un recipiente para desechos biológicos que contenga 5% de hipoclorito sódico. A continuación, lavar 5 veces con Buffer de lavado empleando aproximadamente 300 ul/vez/pocillo. Después de cada lavado, el líquido se descartará también en el recipiente con hipoclorito. Opcionalmente, emplear lavador automático. Al finalizar el último lavado, eliminar por completo el líquido residual, invirtiendo la policubeta y golpeándola varias veces sobre papel absorbente, ejerciendo una leve presión con la mano sobre los laterales mayores del soporte, para evitar la caída de las tiras de pocillos. Luego agregar en cada pocillo. Conjugado 1 gota 1 gota 1 gota En caso de utilizar micropipeta automática, dispensar 50 ul. Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 seg. Para evitar la evaporización, cubrir la placa e incubar 30 minutos en estufa a 37°C. luego aspirar el líquido de los pocillos, recibiéndolo en el recipiente con hipoclorito y lavar según se indicó más arriba. Al finalizar el último lavado, eliminar por completo el líquido residual, inviertiendo la policubeta y golpeándola varias veces sobre papel CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 117 De: 129 17. Identificación de Chagas absorbente, ejerciendo una leve presión con la mano sobre las laterales mayores del soporte, para evitar la caída de las tiras de pocillos. Luego agregar en cada pocillo. Re velador A 1 gota 1 gota 1 gota Revelador B 1 gota 1 gota 1 gota En caso de utilizar micropipeta automática, dispensar 50 ul. Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 segundos. Incubar 30 minutos a temperatura ambiente y luego agregar: Stopper 1 gota 1 gota 1 gota En caso de utilizar micropipeta automática, dispensar 50 ul. Mezclar aplicando suaves golpes en los laterales de la policubeta durante 10 segundos. Leer en espectrofotómetro a 450 nm o dicromática a 450/620-650 nm o evaluar el resultado a simple vista por comparación con los Controles Positivos y Negativos. ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINAL El color de la reacción es estable durante 30 min., por lo que los resultados deben observarse durante ese lapso. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 118 De: 129 17. Identificación de Chagas CRITERIOS DE VALIDACION DE LA CORRIDA La corrida se considera válida si se cumplen simultáneamente las siguientes condiciones: a) Las lecturas de al menos 2 de los 3 Controles Negativos corregidas contra el Blanco de Reactivos deben ser menores o iguales a 0.150 D.O. b) La lectura media de los Controles Positivos corregida debe ser mayor o igual a 0.600 D.O. Si una o ambas condiciones no se cumple, repetir la corrida, para ambos casos recordar que las lecturas obtenidas dependerán de la sensibilidad del aparato empleado. INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS: a) Con instrumental óptico: La presencia o ausencia de anticuerpos anti-T.cruzi se determina relacionado la absorbacia de la muestra respecto al valor Cut-off. Cut-off=CN + 0.300 D.O. Donde CN: promedio de las lecturas del Control Negativo. Zona de indeterminación: Cut-off + 10% Muestras No Reactivas: Se consideran aquellas con absorbancia menores al límite inferior de la zona de indeterminación. Muestras Reactivas: se consideran aquellas con absorbacias mayores al límite superior de la zona de indeterminación. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 119 De: 129 17. Identificación de Chagas Muestras indeterminadas: se consideran aquellas con absorbacias que caen dentro de la zona de indeterminación. Estas muestras deben ser ensayadas nuevamente. b) Interpretación visual Si se opta por este tipo de interpretación debe considerarse No reactiva toda muestra que no presente una coloración mayor que la de los Controles Negativos. Por el contrario, una muestra netamente amarilla se considera Reactiva. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 120 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre 18. FRACCIONAMIENTO DE SANGRE CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 121 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre FUNDAMENTO: La elección cuidadosa del elemento a fraccionar favorece el aprovechamiento óptimo de la sangre, es decir la donación de una persona puede beneficiar a cuatro pacientes al separarse en: Concentrados eritrocitarios, plasma fresco congelado, plasma desprovisto de F-VIII, concentrado plaquetario y concentrado de factor VIII ó crioprecipitado. La sangre y sus componentes se indican para sustituir el elemento específico en déficit, los glóbulos rojos para transporte de O2, plasma para restituir volumen, proteínas pro-coagulantes y poder onicótico , plaquetas para trombocitopenia y factor VIII en hemofilia. MATERIAL Y EQUIPO: • Tijeras • Centrífuga Refrigerada. • Balanza. • Prensa. • Hematron. • Bolsas de colección de sangre. • Pinzas Rodillo. • Pinzas de Kelly PROCEDIMIENTO: A) Preparación de glóbulos rojos (Bolsa doble) y plasma fresco congelado (P.F.C.). Para este procedimento se debe de usar una unidad de recolección que tenga una bolsa de transferencia. La separación del plasma de los glóbulos rojos puede ser o hacerse de la siguiente forma: CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 122 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre Por centrifugación entre (3000) RPM Durante 15 minutos la temperatura de la centrífuga debe ser de 4°C. TÉCNICA DE SEPARACIÓN: Una vez centrifugadas las bolsas de sangre como se indicó anteriormente seguir los siguientes pasos: 1. Colocar la bolsa de sangre centrifugada en el extractor de plasma. 2. Libere el mecanismo de presión suavemente. 3. Cierre con una pinza hemostática el tubo que comunica a una de las bolsas satélite. 4. Romper el sello de la bolsa madre y dejar fluir el plasma en la otra bolsa satélite. Se debe usar una bolsa para medir la cantidad de plasma obtenido. 5. Cerrar con otra pinza hemostática el tubo de comunicación , por el cual esta fluyendo el plasma , cuando haya pasado la cantidad estipulada, sellar el tubo piloto con un sellador electrónico (hematrón). 6. Identificar la unidad de plasma con el mismo sistema que se usó para la bolsa madre, cortar el piloto después de haber sellado. 7. Pilotear con una separación de 5 ó 10 cm. de separación todo el tubo piloto que quedó en la bolsa del concentrado eritrocitario y colocarlo a un costado de la bolsa para pruebas futuras. 8. Del mismo modo para el paquete de plasma como se indicó anteriormente , pilotear el tubo y adicionarlo al extremo de la bolsa. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Hoja: 123 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre 9. El concentrado eritrocitario debe ser Rev. NCDPT 06 1 guardado en un refrigerador especial a una temperatura entre 4 y 6°C para su conservación. 10. El plasma se guarda o se debe mantener a una temperatura de -20°C para su conservación. Bolsa Triple B) Preparación de Concentrados Plaquetarios: En la recolección de sangre para preparar plaquetas, se debe observar la siguiente recomendación: - Dejar la sangre a temperatura ambiente que es entre 20-24°C , hasta que inicie el proceso de separación. - Es necesario practicar dos centrifugaciones, la primera a baja velocidad produce el plasma rico en plaquetas (PRP) y la segunda a alta velocidad , produce un concentrado de plaquetas más una unidad de plasma pobre en plaquetas (PRP). - Se señalan tres factores importantes en este procedimiento: 1. El tiempo y la fuerza gravitacional de centrifugación . 2. La técnica de resuspensión de plaquetas después de la centrifugación. 3. El pH del plasma. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 124 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre Técnica de Preparación. 1. La centrífuga refrigerante debe tener una temperatura de 20°C. 2. Centrifugar a 1800 RPM, durante 10 minutos. 3. Colocar la bolsa de sangre en el extractor y separar el plasma rico en plaquetas en una bolsa satélite, pinzar el tubo piloto por donde fluye el plasma o sellar una vez terminado el paso de separación de PRP y cortar. 4. Anotar datos del donador como son nombre, grupo sanguíneo y Rh. sin poner la etiqueta que quedará al final. (Esto es para tener un mejor control en la identificación de los productos a obtener. 5. Centrifugar el plasma rico en plaquetas P.R.P. a una velocidad de 3000 R.P.M. x 10 minutos , a una temperatura de 20°C. 6. Colocar la bolsa en el extractor y transferir el plasma sobrenadante a la segunda bolsa satélite, dejar un volumen de plasma , no menor de 50ml., así las plaquetas serán conservadas a 20°C. 7. Identificar los productos , tanto el PRP, como el C.P. con las etiquetas elevadas señalando la fecha, hora de preparación y vencimiento. 8. Colocar los concentrados plaquetarios en un agitador para plaquetas a +20°C, (es aproximadamente de 1 a 2 horas.) de 3 a 5 días de la bolsa colectora. 9. El plasma pobre en plaquetas se guarda y conserva a una temperatura de -20°C para su almacenamiento por un año. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 125 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre OBSERVACIÓN: Los C.P. deben cumplir con tres parámetros: 1. Volumen de plasma 50ml. 2. Número d plaquetas, no menor de 5.5 x 1010. 3. PH = a 6 por lo menos en el 75% de las unidades preparadas al final del periodo de expiración. C) Crioprecipitado de Factor VIII. El crioprecipitado de factor VIII o factor antihemofílico (FAH) (es la porción del plasma que precipita en frio, después de que el P.F.C. ha sido descongelado bajo condiciones congeladas.) Contiene la mayor parte del factor VIII y cierta cantidad de fibrinógeno, de los existentes en la unidad original de plasma. Es la proteína que precipita a temperatura de -120°C y posteriormente de descongelar el plasma. Técnica de Preparación: 1. Colocar la sangre total del donador en bolsas triples y una vez obtenida y centrifugar a 3000 RPM durante 15 minutos. 2. Pasar con un extractor el plasma a una bolsa satélite , pesando en una balanza para precisar el volumen, sellar el tubo piloto y separar el P.G. refrigerándolo de 2 a 6°C. 3. Poner los datos correspondientes a la bolsa del plasma (no etiqueta). CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 126 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre 4. Congelar el plasma rápidamente con hielo seco y acetona para que de un proceso de congelación (completa o dejar congelar a una temperatura de 20°C durante toda una noche 14 a 18 Horas) de -120°C. 5. Una vez congelado el plasma, descongelarlo a una temperatura de 1 a 6°C. 6. Ya que estén descongelados, centrifugar el plasma a 4000 RPM durante 15 minutos, a una temperatura de 4°C. 7. Terminada la centrifugación, colocar la bolsa en un extractor de bolsas y separar el plasma en la segunda bolsa satélite. 8. Separado ya el plasma, etiquetar debidamente los productos ya fraccionados con todos los datos. 9. Los plasmas y crioprecipitados se guardarán a una temperatura de -20°C para su conservación. CUADRO DE CONSERVACIÓN DE PRODUCTOS: PRODUCTO ANTICUAGULAN DIAS DE CONSERVACIO Concentrado Eritrocitario ADSOL 41 días Concentrado Eritrocitario C.P.D. ó A.C.D. 21 días Concentrado Eritrocitario C.P.D.A. 35 días Plasma Fresco Congelado 1 año Plasma sin Factor VIII 1 año Plasma Pobre en Plaquetas 1 año Concentrado Plaquetario 3 días a 5 días Factor VIII o crioprecipitado 1 año CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código : MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE Rev. NCDPT 06 1 Hoja: 127 De: 129 18. Fraccionamiento de Sangre Datos que debe contener la etiqueta: Datos del Hospital ó Instituto 1. Nombre del donador. 2. Grupo y Rh. 3. Fecha de extracción. 4. Fecha de caducidad. 5. Hematocrito. 6. Volumen. 7. Producto. (C.E., P.F.C., C.P. Y (C.P.D.O.) (CPDO) 8. Número de registro. 9. Hora y tiempo de extracción. C.E.: Concentrado Eritrocitario. P.F..C.: Plasma Fresco Congelado. P.P.P.: Plasma Pobre en Plaquetas. C.P.: Concentrado Plaquetario. C.P.D.O.: Crioprecipitado. (Factor VIII). Las unidades fraccionadas deben mantenerse en una área perfectamente identificada con la leyenda “No usar Falta Liberar”, en tanto este tiempo se estarán realizando las pruebas que nos permiten liberar las unidades como son: HBsAg, HCV, HIV, RPR, BRUCELLA, una vez obtenidos estos resultados, siendo negativos y rectificando el grupo sanguíneo se procede a etiquetar las unidades con las siguientes etiquetas, y se colocan en su charola de grupo correspondiente. NOTA: Si alguna prueba serológica sale positivo, se le dará destino final. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 Código: NCDPT 06 Rev. 1 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Hoja: 128 De: 129 IV. GLOSARIO DE TÉRMINOS 1. ANTICUERPO IRREGULAR DE IMPORTANCIA CLINICA: Inmunoglobulina inusualmente presente en el plasma (o suero) que puede causar enfermedad a través de diferentes mecanismos 2. CONCENTRADOS DE PLAQUETAS: Trombocitos recolectados por aféresis o preparados mediante fraccionamiento de unidades de sangre fresca. 3. CONCENTRADOS ERITROCITARIOS: Fracción que contiene principalmente glóbulos rojos, como resultante de la remoción casi completa de plasma. 4. CONTROL DE CALIDAD: método que se lleva a cabo para garantizar la efectividad y funcionalidad de equipos, reactivos y técnicas, así como, la viabilidad y seguridad de la sangre y de los componentes sanguíneos. 5. DISPONENTE ALTRUISTA: sujeto que proporciona su sangre o componente de esta, para quien la requiere. 6. DISPONENTE FAMILIAR: persona que proporciona su sangre o componentes de esta, a favor de un paciente vinculado con ella. 7. PACIENTE POLIGLOBULICO: Persona que por un proceso patológico primario o secundario, tiene un incremento absoluto del volumen eritrocítico circulante. 8. PLASMA FRESCO: el que se encuentra en el lapso de las primeras 6 horas después de la recolección. 9. PLASMA FRECO CONGELADO: el que se congela en el lapso de las primera seis horas, después de la recolección y así se conserva. 10. PRUEBAS DE COMPATIBILIDAD: estudio practicado in-vitro empleando muestras de sangre del disponente y del receptor para comprobar la existencia de afinidad reciproca entre las células de uno y el suero del otro, para efectos transfusionales. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 MANUAL DE PROCEDIMIENTOS TÉCNICOS DEL SERVICIO DE BANCO DE SANGRE INSTITUTO NACIONAL DE ENFERMEDADES RESPIRATORIAS “ISMAEL COSÍO VILLEGAS” Código: NCDPT 06 Rev. 1 Hoja: 129 De: 129 11. SANGRE FRESCA: tejido hemático no fraccionado, de menos de 6 horas después de su recolección 12. SANGRE TOTAL: Tejido hemático no fraccionado, de más de 6 horas después de su recolección 13. TRANSFUSIÓN AUTOLOGA: aplicación a un individuo, de la sangre o componentes sanguíneos recolectados de el mismo. 14. TRANSFUSION AUTOLOGA MEDIANTE DEPOSITO PREVIO: disposición de sangre y componentes sanguíneos que en forma anticipada se acopian para uso terapéutico del propio disponente. 15. UNIDAD: Volumen de sangre o componente sanguíneo recolectado de un solo disponente. CONTROL DE EMISIÓN Elaboró: Nombre DR. LUIS MALDONADO NORIEGA Revisó: C. LILIANA MORALES SUAREZ E. Autorizó: LIC. DR. JOSÉ R. DR. ENRIQUE MARGARITA S. VELÁZQUEZ BALTAZARES DEL VALLE SERRATOS LIPP CASTILLO Firma Fecha 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008 29/FEBRERO/2008