Comparación de seis métodos diferentes para calcular la densidad

Comparación de seis métodos diferentes para calcular la densidad
celular en cultivo de microsporas
C. Camacho-Fernández1, *, D. Hervás2, A. Rivas-Sendra1, A.M. Romero2, M.P. Marín2
y J.M. Seguí-Simarro1
1
Instituto Universitario para la Conservación y Mejora de la Agrodiversidad Valenciana
(COMAV), Universitat Politècnica de València, Camí de Vera s/n, 46022 (Valencia)
2
Instituto de Investigación Sanitaria La Fe, Av. Fernando Abril Martorell 106, 46026
(Valencia)
*[email protected]
Para el cultivo in vitro de células vegetales, uno de los primeros pasos es ajustar la
densidad inicial de células. Para los cultivos de microsporas aisladas, se han de
determinar densidades o rangos de densidades óptimas que permitan la inducción de
androgénesis, y fuera de los cuales no hay inducción o la hay con una frecuencia muy
baja.
Para el ajuste de densidades celulares se suelen utilizar cámaras de recuento, como la
cámara de Neubauer, pero no hay muchos estudios que definan la precisión y exactitud
de este método. En el presente estudio se evaluó la precisión y exactitud de seis
métodos para calcular la densidad celular: (i) Un contador automático que realiza un
análisis de imagen para determinar la densidad celular, (ii) un conteo manual por
campos, a partir de imágenes tomadas al microscopio, (iii) una cámara de recuento
(hemacitómetro) y (iv) un citómetro de flujo, en el que se tomaron datos de
autofluorescencia de las células sin teñir, de fluorescencia de las células teñidas con
yoduro de propidio y de dispersión lateral de la luz (SSC). Nuestros resultados señalan
que, a pesar de su facilidad, bajo coste y amplio uso, el hemacitómetro no es un método
fiable y preciso. Su uso, por lo tanto, es poco recomendable. Los contadores
automáticos representan un buen compromiso entre precisión, exactitud y coste. Sin
embargo, el método más fiable, reproducible y preciso es con diferencia la detección y
conteo de células por citometría, aunque también es el más caro. Dentro de los métodos
basados en la citometría, la medida de SSC fue la elegida por presentar las
características antes mencionadas, y evitar además la necesidad de teñir la muestra. Por
ello, fue el método utilizado para ensayar diferentes densidades celulares en cultivos de
microsporas de berenjena para mejorar la eficiencia del protocolo.
1