Page 1 8816691 1 Español BBL Selenite Cystine Broth 8816691

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BBL Selenite Cystine Broth
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8816691 • Rev. 01 • Enero de 2013
PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD
I
INTRODUCCION
Selenite Cystine Broth (caldo de selenita y cistina) se utiliza como medio de enriquecimiento selectivo para el aislamiento de
Salmonella a partir de muestras fecales, alimentos, artículos farmacéuticos, agua y otros materiales de importancia sanitaria.
II
REALIZACION DEL PROCEDIMIENTO DE ANALISIS
1. Inocular muestras representativas con 1,0 mL de suspensiones de los microorganismos S. typhimurium ATCC 14028 y
S. sonnei ATCC 9290 diluidas a una concentración de 103 UFC/mL. Para cada tubo inoculado previamente añadir 0,1 mL
de E. coli ATCC 11775 diluido para obtener 102 UFC/0,1 mL.
2. Realizar un subcultivo de los tubos en BBL MacConkey II Agar en la hora de inicio y después de 24 h de incubación a
35 ± 2 °C en atmósfera aerobia. Las placas se incuban a 35 ± 2 °C durante un día en atmósfera aerobia.
3. Resultados previstos
Recuperación
Crecimiento en MacConkey II Agar después de subcultivo en
Selenite Cystine Broth a:
Organismos
ATCC
*Salmonella enterica subesp.
enterica serotipo Typhimurium
14028
Trazas de crecimiento a crecimiento
moderado de colonias incoloras
Crecimiento de regular a denso de
colonias incoloras
*Shigella sonnei
9290
Trazas de crecimiento a crecimiento
moderado de colonias incoloras
Crecimiento de regular a denso de
colonias incoloras
*Escherichia coli
11775
Crecimiento de regular a denso de
colonias de color rojo rosado
Inhibición de parcial a completa
Hora de inicio
24 h
*Cepa de organismo recomendada para control de calidad del usuario.
III
CONTROL DE CALIDAD ADICIONAL
1. Examinar si los tubos presentan signos de deterioro (como se describe en “Deterioro del producto”).
2. Examinar visualmente los tubos representativos para asegurarse de que los defectos físicos existentes no interfieran con el
uso.
3. Determinar el pH potenciométricamente a temperatura ambiente para verificar el cumplimiento de la especificación de
7,0 ± 0,2.
4. Incubar muestras representativas sin inocular a una temperatura de 20 – 25 °C y 30 – 35 °C y examinar si presentan
contaminación microbiana después de 7 días.
IV
USO PREVISTO
Selenite Cystine Broth (caldo de selenita y cistina) se utiliza como medio de enriquecimiento selectivo para el aislamiento de
Salmonella a partir de muestras fecales, alimentos, artículos farmacéuticos, agua y otros materiales de importancia sanitaria.
Este medio cumple con las especificaciones de la farmacopea de Estados Unidos (The United States Pharmacopeia USP).
V
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
Selenite Cystine Broth es la fórmula de Leifson1 con adición de cistina. Leifson determinó que el caldo selenita favorecía el
crecimiento de Salmonella a la vez que reducía el crecimiento de los organismos coliformes y enterococos fecales1. El
crecimiento y recuperación de Salmonella en muestras de alimentos puede ser obstaculizada por bacterias diferentes a la
Salmonella, sustancias originadas en la muestra de alimento y, en el caso de alimentos procesados y deshidratados, la
Salmonella puede estar presente en poca cantidad y en estado lesionado2. Mediante protocolos que incluyen el
enriquecimiento previo, el enriquecimiento selectivo y la colocación en placas con medio selectivo se aumenta la probabilidad
de recuperación de Salmonella. En la mayoría de los procedimientos estándar, Selenite Cystine Broth se recomienda en el
paso de enriquecimiento selectivo2-6. Como medio de enriquecimiento selectivo, Selenite Cystine Broth se ha formulado de
manera de permitir la proliferación de Salmonella, a la vez que inhibe el crecimiento de bacterias competidoras diferentes de
Salmonella2.
Selenite Cystine Broth y medios de enriquecimiento similar también son útiles para la detección de Salmonella en las etapas no
agudas de la enfermedad, cuando los organismos se presentan en las heces en pequeñas cantidades y para los estudios
epidemiológicos, con el fin de favorecer la detección de pequeñas cantidades de organismos de pacientes asintomáticos o
convalecientes7.
VI
PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
Selenite Cystine Broth contiene triptona como fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa es el
carbohidrato. La selenita ácida sódica inhibe las bacterias gram positivas y la mayoría de las bacterias gram negativas
entéricas, con excepción de Salmonella. L-cistina es un agente reductor.
INFORMACION SOBRE EL PRODUCTO
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VII
REACTIVOS
Selenite Cystine Broth
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína ..........................................5,0 g
Lactosa .................................................................................4,0 g
Fosfato sódico ....................................................................10,0 g
Selenito ácido sódico ............................................. 4,0 g
L-cistina .................................................................. 0,01 g
*Ajustada y/o complementada para satisfacer los criterios de rendimiento.
Advertencias y precauciones: Para uso diagnóstico in vitro.
Los tubos con tapas ajustadas deben abrirse con cuidado para evitar lesiones por la rotura del vidrio.
En las muestras clínicas puede haber microorganismos patógenos, como los virus de la hepatitis y el virus de la
inmunodeficiencia humana. Para la manipulación de todos los elementos contaminados con sangre u otros líquidos corporales
deben seguirse las “Precauciones estándar”8-11 y las directrices del centro. Esterilizar en autoclave los tubos preparados, los
recipientes para muestras y cualquier otro material contaminado antes de desecharlos.
Instrucciones de almacenamiento: Al recibir los tubos, almacenarlos en un lugar oscuro a 2 – 8 °C. No congelar ni
sobrecalentar. No abrir hasta que se vayan a utilizar. Reducir al mínimo la exposición a la luz. Los medios en tubos
almacenados como se indica en sus etiquetas hasta momentos antes de su utilización pueden ser inoculados hasta la fecha de
caducidad e incubados durante los períodos recomendados de incubación. Dejar que el medio se caliente a temperatura
ambiente antes de la inoculación.
Deterioro del producto: No utilizar los tubos si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación o cualquier otro signo de deterioro.
VIII RECOGIDA Y PREPARACION DE LAS MUESTRAS
Consultar las referencias correspondientes para conocer los detalles relativos a los procedimientos de recogida y preparación
de las muestras12,13. Las muestras deben obtenerse antes de administrar los agentes antimicrobianos. Se deben adoptar las
medidas necesarias para un transporte inmediato al laboratorio.
IX
PROCEDIMIENTO
Materiales suministrados: Selenite Cystine Broth
Materiales necesarios pero no suministrados: Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para control de calidad y el
equipo de laboratorio que se requiera.
Procedimiento de análisis: Cumplir las técnicas asépticas.
Para las muestras fecales, alimentos u otros materiales sólidos, suspender 1 – 2 g de la muestra en el caldo (aproximadamente
10 – 15% por volumen) y emulsionar con una aguja de inoculación en caso necesario. Consultar las referencias para obtener
información acerca del procesamiento e inoculación de otras muestras2,4-6,14.
Incubar los tubos a 35 °C y subcultivar en medios selectivos y de diferenciación (por ejemplo, MacConkey Agar, XLD Agar,
XLT4 Agar, CHROMagar Salmonella) después de 6 – 8 h de incubación y nuevamente después de 12 – 24 h de incubación.
Control de calidad del usuario: Véase “Procedimientos de control de calidad”.
El control de calidad debe llevarse a cabo conforme a la normativa local y/o nacional, a los requisitos de los organismos de
acreditación y a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio. Se recomienda consultar las instrucciones
pertinentes del CLSI y la normativa de la CLIA para obtener información acerca de las prácticas adecuadas de control de
calidad.
X
RESULTADOS
Los resultados deben ser acordes con los de las cepas de control de calidad.
Después de la incubación, debe haber un incremento del número de colonias de patógenos para los cuales fue diseñado el
medio. Se preparan subcultivos en medios selectivos y de diferenciación apropiados para aislar los patógenos para su
identificación.
XI
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Dado que varían los requisitos de nutrición de los organismos, algunas cepas tal vez no crezcan o crezcan poco en este medio.
Los caldos de enriquecimiento no deben utilizarse como único medio de aislamiento. Deben utilizarse en conjunto con medios
en placa selectivos y no selectivos para aumentar la probabilidad de aislar patógenos, en especial si pueden estar presentes en
pequeñas cantidades. Consultar las referencias para obtener información detallada y procedimientos recomendados2,4,6.
XII
CARACTERÍSTICAS DE RENDIMIENTO
Antes de su lanzamiento al mercado, todos los lotes de Selenite Cystine Broth se analizan para determinar sus características
específicas. Se analizan muestras con suspensiones de células de S. typhimurium ATCC 14028 (1 mL de una dilución de
103 UFC/mL), E. coli ATCC 11775 (0,1 mL de una dilución de 102 UFC/0,1 mL) y S. sonnei ATCC 9290 (1 mL de una dilución de
103 UFC/mL). Los tubos inoculados se subcultivan en BBL MacConkey II Agar en la hora de inicio y después de 24 h de
incubación a 35 ± 2 °C en atmósfera aerobia. Las placas se incuban a 35 ± 2 °C durante un día en atmósfera aerobia. Se
observa crecimiento de regular a denso con S. typhimurium y S. sonnei a las 24 h. E. coli presenta inhibición de parcial a completa
a las 24 h.
XIII DISPONIBILIDAD
Nº de cat.
Descripción
292525
BBL Selenite Cystine Broth, 10 mL, caja de 100 tubos de tamaño A
297711
BBL Selenite Cystine Broth, 20 mL, caja de 100 tubos de tamaño A
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XIV REFERENCIAS
1. Leifson, E. 1936. New selenite selective enrichment medium for the isolation of typhoid and paratyphoid (Salmonella) bacilli.
Am. J. Hyg. 24:423-432.
2. Downes and Ito (ed.). 2001. Compendium of methods for the microbiological examiniation of foods, 4th ed. American Public
Health Association, Washington, D.C.
3. Flowers, R.S., W.H. Andrews, E.W. Donnely, and E. Koenig. 1992. Pathogens in milk and milk products, p. 103-124. In R.T.
Marshall (ed.) Standard methods of the microbiological examination of dairy products, 16th ed. American Public Health
Association, Washington, D.C.
4. Andrews, W.H., G.A. June, P.S. Sherrod, T.S. Hammack, and R.M. Amaguana. 1995. Salmonella, p. 5.01-5.20. In
Bacteriological analytical manual, 8th ed. AOAC International, Gaithersburg, Md.
5. Horwitz (ed.). 2000. Official methods of analysis of AOAC International, 17th ed., vol. 1. AOAC International, Gaithersburg,
Md.
6. United States Pharmacopeial Convention, Inc. 2001. The United States pharmacopeia 25/ The national formulary 20-2002.
United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville, Md.
7. Kelly, Brenner and Farmer. 1985. In Lennette, Balows, Hausler and Shadomy (ed.)., Manual of clinical microbiology, 4th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Clinical and Laboratory Standards Institute. 2005. Approved Guideline M29-A3. Protection of laboratory workers from
occupationally acquired infections, 3rd ed. CLSI, Wayne, PA.
9. Garner, J.S. 1996. Hospital Infection Control Practices Advisory Committee, U.S. Department of Health and Human
Services, Centers for Disease Control and Prevention. Guideline for isolation precautions in hospitals. Infect. Control
Hospital Epidemol. 17:53-80.
10. U.S. Department of Health and Human Services. 2007. Biosafety in microbiological and biomedical laboratories, HHS
Publication (CDC), 5th ed. U.S. Government Printing Office, Washington, D.C.
11. Directive 2000/54/EC of the European Parliament and of the Council of 18 September 2000 on the protection of workers
from risks related to exposure to biological agents at work (seventh individual directive within the meaning of Article 16(1) of
Directive 89/391/EEC). Official Journal L262, 17/10/2000, p. 0021-0045.
12. Murray, et al. (ed.). 1999. Manual of clinical microbiology, 7th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
13. Isenberg, et al. 1979. Cumitech 9, Collection and processing of bacteriological specimens. American Society for
Microbiology, Washington, D.C.
14. Clesceri, Greenberg and Eaton (ed.). 1998. Standard methods for the examination of water and wastewater, 20th ed.
American Public Health Association, Washington, D.C.

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