HEMOGLOBINA GLICOSILADA

HEMOGLOBINA
GLICOSILADA
Método Inmunoturbidimétrico
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - España
IVD
PARA USO DIAGNÓSTICO IN VITRO
CONSERVAR A 2 - 8º C.
LEER LAS INSTRUCCIONES ANTES DEL USO
REF
Cont.
Referencia:
Presentación:
G N 86900:
1 x 30 mL Reactiv o 1
1 x 10 mL Reactiv o 2
1 x 125 mL Reactiv o 3 hemolizante
Advertencias y medidas de precaución
(S25) Evitar el contacto del reactivo con los ojos.
En casos excepcionales, las muestras de pacientes con gammapatías pueden dar
resultados incorrectos.
Observar todas las medidas de precaución necesarias para la manipulación de
reactivos de laboratorio.
Deben seguirse las disposiciones locales para la gestión de residuos.
MUESTRAS
Sangre entera EDTA.
Desechar las muestras contaminadas.
USO PREVISTO
El reactivo de Hemoglobina glicosilada de Gernon es un test inmunoturbidimétrico
para la determinación de HbA1c en muestras de sangre entera.
RESUMEN
La hemoglobina A1c (HbA1c) es una hemoglobina glicosilada que se origina a
partir de una reacción no enzimática de glucosa con hemoglobina nativa. Este
proceso se produce constantemente mientras el eritrocito se encuentra en la
circulación sanguínea (vida media de los eritrocitos : 100-120 días). El grado de
glicosilación es directamente proporcional a la concentración de glucosa en
sangre. La proporción de HbA1c en la hemoglobina total representa el nivel medio
de glucosa en sangre de las últimas 6-8 semanas de modo que la HbA1c sirve
como parámetro de glucemia para el seguimiento retrospectivo en casos de
diabetes mellitus. Los estudios clínicos han demostrado que un ajuste adecuado
del valor HbA1c puede evitar o retrasar las consecuencias de la diabetes a largo
plazo.
Debido a que la cantidad de HbA1c también depende de la cantidad total de
hemoglobina, se indica el porcentaje de HbA1c en la hemoglobina total.
En enfermedades relacionadas con una vida media reducida de los eritrocitos y en
pérdidas de sangre considerables durante las semanas anteriores (proporción
mayor de eritrocitos jóvenes), se pueden presentar valores bajos falsos. Se han
observado falsos valores elevados en anemias por déficit de hierro (mayor
proporción de eritrocitos viejos).
PRINCIPIO
La hemoglobina total y la HbA1c se unen con la misma afinidad a las partículas de
látex del reactivo 1 en sangre hemolizada. El anticuerpo monoclonal HbA1c antihumano (ratón) se une a la HbA1c ligada a las partículas de látex. El anticuerpo
policlonal IgG anti-ratón (cabra) reacciona con el anticuerpo monoclonal HbA1c
anti-humano, produciéndose una aglutinación. La absorción medida es
proporcional a la HbA1c unida a las partículas que, a su vez, es proporcional al
porcentaje de HbA1c en la muestra.
ESTANDARIZACIÓN
La prueba ha sido estandarizada a partir del método de referencia aprobado por la
IFCC. También es posible calibrar según DCCT/NGSP. Los valores correspondientes
de calibración se indican en la técnica del kit de calibración.
Los valores DCCT/NGSP muestran una relación linear a los del IFCC. Por lo tanto
se pueden calcular mediante la siguiente fórmula:
IFCCb = (NGSPa – 2.15) / 0.915
NGSPa = 0.915 x IFCC b + 2.15
a: Valores NGSP (%)
b: Valores IFCC (mmol/mol)
Conversión de valores IFCC (%) en mmol/mol: [mmol/mol IFCC] = 10 * [% IFCC]
IFCC: International Federation of Clinical Chemistry
DCCT: Diabetes Control and Complications Tria l
NGSP: National Glycohemoglobin Standardization Program
Preparación de muestras
1000 µL de solución hemolizante y 20 µL de muestra (o calibrador o control).
Mezclar y dejar reposar 5 minutos o hasta que se haya completado la hemólisis.
Las muestras de sangre entera son estables 1 semana a 2 – 8 °C.
Las muestras de hemolizado son estables 10 horas a 15 – 25 °C ó 10 días a 2 – 8
°C
ESQUEMA DE LA PRUEBA
Hay disponibles, a petición, aplicaciones para sistemas automáticos.
Longitud de onda:
660 nm
Paso óptico:
1 cm
Temperatura:
37 °C
Medida:
Respecto aire
Muestra / Std
8 uL
300 uL
Mezclar e incubar 5 minutos
Reactivo 2
100 uL
Mezclar y leer la absorbancia exactamente a los 5
Muestra / Std
Reactivo 1
Blanco
--300 uL
100 uL
minutos
CALIBRADORES Y CONTROLES
Para la calibración se recomienda utilizar el kit de calibración (GN 86930) con 4
concentraciones diferentes además de una solución de NaCl (9 g/L) para
determinar el punto cero.
Para el control de calidad interno se recomienda utilizar el control Hemoglobin A1c
(GN86910) con cada serie de muestras.
CARACTERÍSTICAS
Rango de medida
El test tiene un rango de medida de 3 – 16 % según DCCT/NGSP (15 – 150
mmol/mol de HbA1c según IFCC).
El test está indicado para una concentración total de hemoglobina de 6 – 26 g/dL.
Especificidad/Interferencias
Debido a los anticuerpos que contiene, Hemoglobin A1c es un inmunoensayo
específico para HbA1c humana. No se presentan interferencias con ácido ascórbico
hasta 50 mg/dL, con bilirrubina conjugada y no conjugada hasta 50 mg/dL, con
lipemia hasta 2000 mg/dL de triglicéridos, con FR hasta 250 lU/mL, con
hemoglobina carbamilada hasta 7.5 mmol/L, y con hemoglobina acetilada hasta
5.0 mmol/L.
No se presentan interferencias por uremia, intermedios lábiles (base de Schiff) y
las variantes de hemoglobina HbS, HbC y HbA2. Elevados valores de HbF pueden
producir falsos resultados negativos de HbA1c.
El alcoholismo y la ingestión de elevadas dosis de Aspirina pueden influir en los
valores de HbA1c.
Sensibilidad del test/Límite de prueba
El límite inferior de prueba es de 1% (10 mmol/mol) de HbA1c.
HbA1c Y CONCENTRACIONES MEDIAS DE GLUCOSA
Existe una correlación lineal entre la HbA1c y las concentraciones medias de
glucosa, de modo que se pueden convertir en valores estimados de
concentraciones medias de glucosa por medio de las siguientes ecuaciones:
Normalización según IFCC:
[Glucosa media en mg/dL] = 2.63* (HbA1c en mmol/mol IFCC) +15.01
[Glucosa media en mmol/L] = 0.146 * (HbA1c en mmol/mol IFCC) +0.829
Normalización según NGSP:
[Glucosa media en mg/dL] = 28.7 * (HbA1c en % NGSP) – 46.7
[Glucosa media en mmol/L] = 1.59 * (HbA1c en % NGSP) – 2.59
No se observaron diferencias significativas en la ecuación de regresión para ambos
sexos, presencia o ausencia de diabetes, tipo de diabetes, franja de edad o
procedencia.
Aunque esta ecuación puede emplearse en la mayoría de individuos, cada
laboratorio debe verificar su validez para cada grupo de pacientes.
T el: (+3 4 ) 9 3 4 8 0 8 0 4 7
REACTIVOS
Componentes y concentraciones
R1: tampón 20 mmol/L látex 0.14 %
R2: tampón 10 mmol/L, anticuerpo monoclonal HbA1c antihumano de ratón (5.5
mg/dL), anticuerpo policlonal IgG anti-ratón de cabra (67 mg/dL), estabilizantes
R3: hemolizante
A una temperatura de 2 - 8 °C, los reactivos después de abiertos se conservan al
menos durante un mes siempre que se evite la contaminación y la evaporación.
Los reactivos están listos para su uso.
Fax: (+3 4 ) 9 3 3 7 3 0 0 9 2
Imprecisión (Hitachi 917, sistema de 3 componentes):
Valores según IFCC
En la serie
n = 20
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Valor
medio[%]
5.97
8.49
12.21
Día a día
n = 20
Muestra 1
Muestra 2
Muestra 3
Valor
medio[%]
5.95
8.33
12.15
e - mail: ral@ ral- s a.c om
DS [%]
(CV)[%]
0.138
0.072
0.152
2.31
0.85
1.24
DS [%]
(CV)[%]
0.190
0.093
0.179
3.2
1.12
1.47
web: www.ral- s a.c om
HEMOGLOBINA
GLICOSILADA
Método Inmunoturbidimétrico
Comparación de métodos
En la comparación de Hemoglobin A1c (y) con otro test inmunoturbidimétrico (x)
se obtuvieron los siguientes resultados para 40 muestras:
y = 0.98 x + 0.14 %; r = 0.987.
VALORES DE REFERENCIA
Cada laboratorio debe comprobar y determinar los rangos de referencia con
pacientes no diabéticos.
Valores de referencia recomendados para HbA1c:
Pacientes no diabéticos
Objetivo de terapia
Modificación de terapia
% NGSP
mmol/mol IFCC
4–6
<7
>8
20-42
< 53
> 64
BIBLIOGRAFÍA
Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt:
TH-Books Verlagsgesellschaft; 1998. p. 142-48.
Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of
Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia W.B. Saunders Company; 1999. p. 790-6.
Jeppsson JO, Kobold U, Barr J, Finke A et al. Approved IFCC reference method for
the measurement of HbA1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002; 40:78-89.
Hoelzel W, Weykamp C et al. IFCC Reference System for Measurement of
Hemoglobin A1c in Human Blood and the National Standardization Schemes in the
United States, Japan, and Sweden: A Method-Comparison Study. Clin Chem 2004;
50:1:166-74.
The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The effect of
intensive treatment of diabetes in the development and progression of long-term
complications in insulin-dependent diabetes mellitus. N Engl J Med.1993; 329:97786.
Little RR, Rohlfing CL, Wiedmeyer HM, Myers GL et al. The National
Glycohemoglobin Standardization Program: A Five- Years Progress Report. Clin
Chem 2001; 47:1985-92.
Miedema K. Standardization of HbA1c and Optimal Range o Monitoring. Scand J
Clin Lab Invest 2005;65 (Suppl 240):61-72.
Pantheghini M, John WG on behalf of the IFCC Scientific Division. Implementation
of HbA1c results traceable to the IFCC reference system: the way forward. Clin
Chem Lab med 2007; 45 (8): 942-4
Nordin G, Dybkaer R. Recommendation for term and measurement unit for HbA1c.
Clin Chem Lab med 2007; 45 (8): 1081-2.
Sacks DB. Translating Hemoglobin A1c into Average Blood Glucose: Implications
for Clinical Chemistry. Clinical Chemistry 2008; 54: 1756-80
IU/GN86900/R4/1214
T el: (+3 4 ) 9 3 4 8 0 8 0 4 7
Fax: (+3 4 ) 9 3 3 7 3 0 0 9 2
e - mail: ral@ ral- s a.c om
web: www.ral- s a.c om
GLYCATED HEMOGLOBIN
Immunoturbidimetric Method
Fabricante: RAL TECNICA PARA EL LABORATORIO, S.A.
Av. Mare de Déu de Montserrat 51
08970 Sant Joan Despí (Barcelona) - Spain
IVD
REF
FOR IN VITRO DIAGNOSTIC
REAGENTS
Components and concentrations
R1: buffer 20 mmol/l, Latex 0.14 %
R2: buffer 10 mmol/l, Mouse anti-human HbA1c monoclonal antibody (5.5 mg/ml),
goat anti-mouse IgG polyclonal antibody (67 mg/dl), stabilizers
R3: Hemolysing solution
STORE AT 2 - 8º C.
After opening, the reagents are stable at least for one month when at 2-8ºC and
contamination and evaporation are avoided.
The reagents are ready to use.
READ INSTRUCTIONS
Warnings and precautions
(S25) Avoid contact with eyes.
In very rare cases, samples of patients with gammapathy might give false results.
Take the necessary precautions for the use of laboratory reagents.
Please refer to local legal requirements for the waste management .
Cont.
Reference:
Package:
G N 86900:
1 x 30 mL Reagent 1
1 x 10 mL Reagent 2
1 x 125 ml Ly sing Reagent 3
SAMPLE
Whole blood collected with EDTA.
Discard contaminated specimens.
INTENDED USE
Gernon Glycated hemoglobin reagent is an immunoturbidimetry assay to quantify the
percentage of HbA1c in samples of whole blood.
SUMMARY
Hemoglobin A1c (HbA1) is a glycated hemoglobin which is formed by the nonenzymatic reaction of glucose with native hemoglobin. This process runs continuously
throughout the circulation life of the red cell (average life time 100-120 days). The
rate of glycation is directly proportional to the concentration of glucose in the blood.
The blood level of HbA1c represents the average blood glucose level over the
preceding 6 to 8 weeks (due to the kinetics of erythrocyte turnover this period is
more affected by the blood glucose level than the preceding weeks). Therefore,
HbA1c is suitable for retrospective long-term monitoring of blood glucose
concentration in individuals with diabetes mellitus. Clinical studies have shown that
lowering of HbA1c level can help to prevent or delay the incidence of late diabetic
complications.
As the amount of HbA1c also depends on the total quantity of haemoglobin the
reported HbA1c value is indicated as a percentage of the total haemoglobin
concentration.
Falsely low values (low HbA1c despite high blood glucose) may occur in people with
conditions with shortened red blood cell survival (haemolytic diseases) or significant
recent blood loss (higher fraction of young erythrocytes). Falsely high values (high
HbA1c despite normal blood glucose) have been reported in iron deficiency anaemia
(high proportion of old erythrocytes). These circumstances have to be considered in
clinical interpretation of HbA1c values.
PRINCIPLE
Total Hb and HbA1c in hemolyzed blood bind with the same affinity to particles in R1.
The amount of binding is proportional to the relative concentration of both
substances in the blood.
Mouse anti-human HbA1c monoclonal antibody binds to particle bound HbA1c. Goat
anti-mouse IgG polyclonal antibody interacts with the monoclonal mouse anti-human
HbA1c antibody and agglutination takes place. The measured absorbance is
proportional to the HbA1c bound to particles, which in turn is proportional to the
percentage of HbA1c in the sample.
STANDARDIZATION
The assay is standardized according to the approved IFCC reference method.
Calibration according to DCCT/NGSP is also possible. Corresponding calibrator values
are listed in the package insert of the calibrator set.
DCCT/NGSP and IFCC values show a linear relationship and can therefore be
calculated from each other using the following equation:
IFCCb = (NGSPa – 2.15) / 0.915
NGSPa = 0.915 x IFCC b + 2.15
a: Valores NGSP (%)
b: Valores IFCC (mmol/mol)
Conversión de valores IFCC (%) en mmol/mol: [mmol/mol IFCC] = 10 * [% IFCC]
IFCC: International Federation of Clinical Chemistry
DCCT: Diabetes Control and Complications Trial
NGSP: National Glycohemoglobin Standardization Program
HbA1c AND AVERAGE GLUCOSE CONCENTRATIONS
Due to a linear correlation between hemoglobin A1c and average glucose
concentrations HbA1c values can be converted in estimated average glucose values
by means of the following equations:
Standardization according to IFCC:
[Average Glucose in mg/dL] = 2.63* (HbA1c in mmol/mol IFCC) +15.01
[Average Glucose in mmol/L] = 0.146 * (HbA1c in mmol/mol IFCC) +0.829
Standardization according to NGSP:
[Average Glucose in mg/dL] = 28.7 * (HbA1c in % NGSP) – 46.7
[Average Glucose in mmol/L] = 1.59 * (HbA1c in % NGSP) – 2.59
No significant differences in the regression equation were observed for variations in
individuals tested, including sex, presence or absence of diabetes, type of diabetes,
age, race, and ethnicity. Although this equation can be used for the majority of
individuals each laboratory has to reassure itself if the regression equations
mentioned are applicable for the patient group to be examined.
T el: (+3 4 ) 9 3 4 8 0 8 0 4 7
Fax: (+3 4 ) 9 3 3 7 3 0 0 9 2
Sample preparation
Hemolyzing solution 1000 µl
Sample / calibrator / control 20 µl
Mix and allow to stand for 5 minutes or until complete lysis is apparent.
Whole blood simples are stable for 1 week at 2 – 8 °C.
Hemolisate samples are stable for 10 hours at 15 – 25 °C or 10 days at 2 – 8 °C
PROCEDURE
Application sheets for automated systems are available on request.
Wavelength:
660 nm
Optical path:
1 cm
Temperature:
37 °C
Measurement:
Read absorbance against air
Sample / Std
Reagent 1
Reagent 2
Sample / Std
Blank
8 ul
--300 ul
300 ul
Mix, incubate for 5 minutes, then add
100 ul
100 ul
Mix, read absorbance after exactly 5 minutes
CALIBRATORS AND CONTROLS
For calibration use it is recommended to use the calibration kit (GN86930) with 4
different concentrations.
For internal quality control use the Hemoglobin A1c control (GN86910) which should
be assayed with each batch of samples.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Measuring Range
The test has been developed to determine concentrations of HbA1c within a
measuring range from 3 – 16 % according to DCCT/NGSP (1.5 – 15 mmol/mol
according to IFCC).
The assay is applicable for haemoglobin concentrations in blood from 6 – 26 g/dl.
Specificity / Interferences
Due to its antibodies, HbA1c kit is a specific immunoassay for human HbA1c. No
interference was observed by ascorbic acid up to 60 mg/dl, conjugated and
unconjugated bilirubin up to 60 mg/dl, lipemia up to 2000 mg/dl triglycerides, RF up
to 250 IU/ml, carbamylated Hb up to 7.5 mmol/l, and acetylated Hb up to 5.0
mmol/l.
No interference is observed by uremia, labile intermediates (Schiff bases), and
Hemoglobin variants HbS and HbA2. Elevated levels of HbF may lead to falsely low
HbA1c values. Alcoholism and ingestion of large doses of aspirin may lead to
inconsistent results.
Sensitivity / Limit of detection
The limit of detection is 1 % HbA1c.
Imprecision (Hitachi 917, 3-components system)
Values according to IFCC
Within-run
precision
n = 20
Sample 1
Sample 2
Sample 3
Between day
precision
n = 20
Sample 1
Sample 2
Sample 3
Valor
medio[%]
DS [%]
(CV)[%]
5.97
8.49
12.21
0.138
0.072
0.152
2.31
0.85
1.24
Valor
medio[%]
DS [%]
(CV)[%]
5.95
8.33
12.15
0.190
0.093
0.179
3.2
1.12
1.47
Method comparison
A comparison between Gernon HbA1c (y) and another immunoturbidimetric assay (x)
using 40 samples gave following results: y = 0.98 x + 0.14; r = 0.987.
e - mail: ral@ ral- s a.c om
web: www.ral- s a.c om
GLYCATED HEMOGLOBIN
Immunoturbidimetric Method
REFERENCE RANGE
Reference intervals should be established or verified by the laboratory based on an
appropriate non-diabetic patient population.
Suggested target values for HbA1c:
% NGSP
Non-diabetics
4–6
Target of therapy
<7
Change of therapy
>8
mmol/mol IFCC
20 - 42
< 53
> 64
LITERATURE
Thomas L. Clinical Laboratory Diagnostics. 1st ed. Frankfurt: TH-Books
Verlagsgesellschaft; 1998. p. 142-48.
Sacks DB. Carbohydrates. In: Burtis CA, Ashwood ER, editors. Tietz Textbook of
Clinical Chemistry. 3rd ed. Philadelphia W.B. Saunders Company; 1999. p. 790-6.
Jeppsson JO, Kobold U, Barr J, Finke A et al. Approved IFCC reference method for
the measurement of HbA1c in human blood. Clin Chem Lab Med 2002; 40:78-89.
Hoelzel W, Weykamp C et al. IFCC Reference System for Measurement of
Hemoglobin A1c in Human Blood and the National Standardization Schemes in the
United States, Japan, and Sweden: A Method-Comparison Study. Clin Chem 2004;
50:1:166-74.
The Diabetes Control and Complications Trial Research Group. The effect of intensive
treatment of diabetes in the development and progression of long-term complications
in insulin-dependent diabetes mellitus. N Engl J Med.1993; 329:977-86.
Little RR, Rohlfing CL, Wiedmeyer HM, Myers GL et al. The National Glycohemoglobin
Standardization Program: A Five- Years Progress Report. Clin Chem 2001; 47:198592.
Miedema K. Standardization of HbA1c and Optimal Range o Monitoring. Scand J Clin
Lab Invest 2005;65 (Suppl 240):61-72.
Pantheghini M, John WG on behalf of the IFCC Scientific Division. Implementation of
HbA1c results traceable to the IFCC reference system: the way forward. Clin Chem
Lab med 2007; 45 (8): 942-4
Nordin G, Dybkaer R. Recommendation for term and measurement unit for HbA1c.
Clin Chem Lab med 2007; 45 (8): 1081-2.
Sacks DB. Translating Hemoglobin A1c into Average Blood Glucose: Implications for
Clinical Chemistry. Clinical Chemistry 2008; 54: 1756-8
IU/GN86900/R4/1214/EA
T el: (+3 4 ) 9 3 4 8 0 8 0 4 7
Fax: (+3 4 ) 9 3 3 7 3 0 0 9 2
e - mail: ral@ ral- s a.c om
web: www.ral- s a.c om