Ensayos "in vitro"
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Grupo de investigación: ACTIVIDAD INVESTIGADORA Estudio previo de la citotoxicidad de los compuestos polifenólicos a ensayar / - determinación de Flavonoides ( e : : eriocitrina y extracto de pomelo; y catequinas) - y extracto de ) (epitelio túbulo renal mono verde africano) Método:Test colorimétrico formación sales de formazano o MTT Citotoxicidad / inhibición del crecimiento del cultivo celular Concentraciones ( )/ Lectura absorbancia a dos longitudes de onda: 570 nm y 690 nm. Resultados TRATAMIENTO 72 HORAS TRATAMIENTO 48 HORAS 200 150 150 150 1µM 100 100 5µM 50 50 0 0 10µM A 50µM IT R IN BC G AO C IO ER ER ER IO IO C C G IT R AC SP A 25µM IN BC G C C IT G SP R IN A BC G C AC SP AO 0 AC 50 AO 100 G % viabilidad respecto control TRATAMIENTO 24 HORAS GSP CACAO IC 50 IC 90 IC 50 IC 90 24h 48h 72h 24h 48h 72h 24h 48h 72h 24h 48h 72h 25 µM 24,5 µM 23,5 µM 43,5 µM 44 µM 42,9 µM 29 µM 31 µM 27 µM 55 µM 50 µM 55 µM GBC ERIOCITRINA IC 50 IC 90 IC 50 IC 90 24h 48h 72h 24h 48h 72h 24h 48h 72h 24h 48h 72h - - 37,8 µM - - 73,6 µM - - 127 µM - - 211 µM EFECTO DE POLIFENOLES SOBRE CÁNCER Línea celular Tipo ensayo •B16F10 •SK-MEL-1 Citotoxicidad •Melan-a Compuestos / tratamientos •Eriodictiol /7,3’ dimetilhesperetina / Tangeretina • Quercetina / Procianidinas / Ácido isofelúrico / Ácido trimetoxibenzoico / Hesperetina / Luteolina / Baicaleína/ Miricetina / Ácido gálico / Ácido sinapínico Citotoxicidad •Apigenina / AC / Ácido rosmarínico •TRAMP-C1 Migración •Apigenina / AC Apoptosis •Apigenina MÉTODO DE CULTIVO (Carmichael, 1987; Rodríguez, 1997) EFECTOS DE POLIFENOLES ” IN VITRO”: Control: células apoptóticas Porcentaje de células apoptóticas EFECTO DE POLIFENOLES” IN VITRO”: 25.00 20.00 15.00 10.00 5.00 2 4 h 0.00 4 8 h 7 2 h Tiempo Apigenina 200 μM 72 horas: Control AK 25 microM AK 100 microM AK 200 microM AK 50 microM Tratamiento con ácido carnósico Porcentaje respecto al control 140 120 100 80 60 40 20 0 0 0.39 0.78 0.56 3.13 6.25 12.5 25 50 Concentración (μM) 24 horas 48 horas 72 horas Tratamiento con apigenina potásica Porcentaje respecto al control 140 120 100 80 60 40 20 0 0 0.78 1.56 3.13 6.25 12.5 25 Concentración (μM) 24 horas 48 horas 72 horas 50 100 200 Distancia de migración 400 450 350 400 Distancia de migración (μm) Distancia de migración (μm) Distancia de migración 300 250 200 150 100 50 350 300 250 200 150 100 50 0 0 0 3 6 9 12 15 18 21 24 27 30 33 0 3 6 9 Control AK 25 μM AK 50 μM 12 15 18 21 24 27 Tiempo (horas) Tiempo (horas) AK 100 μM Control Car 1.56 μM Car 3.13 μM Car 6.25 μM 30 33 EFECTO DE POLIFENOLES ”IN VITRO”: migración Esquema de la oxidación secuencial de flavonoides Hesperetin a 7,3’dimetilhesperetina Eriodictio l Luteolin a Quercetin a (vía metabólica) Miricetina Baicaleína OH OH OH Tangeretina Ácido gálico COOH Esquema de la oxidación secuencial de flavonoides
