DESARROLLO DE UN INSTRUMENTO PARA ADQUISICION Y PROCESADO DE EEG (Electro-encefalograma) y ECG (Electro-cardiograma) Alumno: Santiago Cañas Casco Tutor: Juan Antonio Barios Heredero TRIBUNAL Presidente: Serrano Olmedo, José Javier Vocal: Ramos Gómez, Milagros Secretario: González Nieto, Daniel Suplente: Maestu Unturbe, Ceferino Grado en Ingeniería de Tecnologías y Servicios de Telecomunicación UNIVERSIDAD POLITECNICA DE MADRID TRABAJO DE FIN DE GRADO EN SISTEMAS DE TELECOMUNICACIONES Fecha: Calificación: 1 DESARROLLO DE UN INSTRUMENTO PARA ADQUISICION Y PROCESADO DE EEG (Electro-encefalograma) y ECG (Electro-cardiograma) Alumno: Santiago Cañas Casco Tutor: Juan Antonio Barios Heredero TRIBUNAL Presidente: Serrano Olmedo, José Javier Vocal: Ramos Gómez, Milagros Secretario: González Nieto, Daniel Suplente: Maestu Unturbe, Ceferino Grado en Ingeniería de Tecnologías y Servicios de Telecomunicación UNIVERSIDAD POLITECNICA DE MADRID TRABAJO DE FIN DE GRADO EN SISTEMAS DE TELECOMUNICACIONES 2 RESUMEN Diseño y construcción de un aparato de bajo costo para adquisición y procesamiento de señales bioeléctricas, compuesto por un hardware capaz de amplificar y filtrar las señales, y por un instrumento virtual basado en labVIEW encargado de la adquisición de los distintas bioseñales y de su procesamiento en tiempo real. Este sistema permitirá dar soporte diagnóstico en modelos animales con desórdenes neurológicos sometidos a diferentes tipos de intervención terapéutica. Palabras clave: EEG, ECG, Amplificador, procesamiento, tiempo real. ABSTRACT Design and construction of a low-cost tool for acquiring and processing of bioelectric signals. This tool is composed of hardware as well as software. The hardware is able to amplify and filter the different signals. Whereas the software consists of a virtual tool, which is based on labVIEW. This virtual tool is in charge of the acquisition and their real time processing. The system will provide diagnostic support in animal models with neurological disorders that have been subjected to different types of therapeutic intervention. Key words: EEG, ECG, Amplifier, processing, real time. 3 Contenido 1 INTRODUCCION .......................................................................................................................... 8 1.1 Origen de las Señales Bioeléctricas ....................................................................................... 8 1.1.1 Modelo de Hodgkin-Huxley ............................................................................................ 8 1.1.2 Señales Bioeléctricas ..................................................................................................... 9 1.2 Electrograma (EEG) ............................................................................................................... 9 1.3 Electrocardiograma (ECG) ................................................................................................... 10 1.3.1 El corazón ..................................................................................................................... 10 1.4 Técnicas de Registro ............................................................................................................ 12 1.4.1 Amplificador de instrumentación................................................................................. 12 1.4.2 Elección de Amplificador de instrumentación ............................................................. 12 1.4.3 Problemas de captación de señales bioeléctricas ........................................................ 13 1.4.4 Técnicas de registro de EEG en humanos .................................................................... 13 1.4.5 Técnicas de registro de ECG ......................................................................................... 14 ................................................................................................................................................ 15 1.4.6 Aplicaciones en ingeniería biomédica del estudio de señales EEG y ECG..................... 15 1.5 Software .............................................................................................................................. 16 1.5.1 Digitalización ................................................................................................................ 16 1.5.2 Introducción a LabVIEW ............................................................................................... 16 1.5.3 LINX – LVH .................................................................................................................... 17 2 MATERIAL Y METODOS ..............................................................................................................17 2.1 Diseño Protoboard .............................................................................................................. 17 2.1.1 Diagrama de Bloques del Sistema de Adquisición ....................................................... 17 2.1.2 Esquema del Sistema de Adquisición ........................................................................... 18 2.1.3 Filtro Paso Alto (HPF).................................................................................................... 18 2.1.4 Amplificador de Instrumentación (INA110) ................................................................. 20 2.1.5 Filtro Rechaza Banda (NOTCH) ..................................................................................... 21 2.1.6 Atenuador Variable ...................................................................................................... 22 2.1.7 CD4016B ....................................................................................................................... 22 2.1.8 Filtro Paso Bajo (LPF) con Amplificación ...................................................................... 23 2.1.9 Tensión de Offset ......................................................................................................... 25 2.2 Diseño PCB .......................................................................................................................... 26 2.2.1 Board ............................................................................................................................ 26 2.2.2 Schematic ..................................................................................................................... 27 2.3 Software de Adquisición...................................................................................................... 28 2.3.1 Block Diagram............................................................................................................... 28 2.3.2 MATLAB ........................................................................................................................ 31 4 2.4 Experimento ECG................................................................................................................. 34 2.5 Experimento EEG ................................................................................................................. 35 3 RESULTADOS..............................................................................................................................37 3.1 Protoboard .......................................................................................................................... 37 3.2 Resultado PCB ..................................................................................................................... 38 3.3 Resultado Filtro Paso Bajo ................................................................................................... 39 3.4 Resultado Filtro Notch......................................................................................................... 40 3.5 Resultado Aparato ............................................................................................................... 41 3.6 Resultado Software ............................................................................................................. 42 3.6.1 Resultado labVIEW ....................................................................................................... 42 3.6.2 Resultado Software Matlab .......................................................................................... 43 3.7 Resultado Bode ................................................................................................................... 44 3.8 Resultado Experimento ECG................................................................................................ 46 3.9 Resultado Experimento EEG ................................................................................................ 47 4 DISCUSION .................................................................................................................................49 4.1 Discusión ECG ...................................................................................................................... 49 4.2 Discusión EEG ...................................................................................................................... 49 4.3 Discusión Resultado MATLAB .............................................................................................. 50 4.4 Discusión diseño PCB........................................................................................................... 52 4.5 Consumo.............................................................................................................................. 53 4.6 Debilidades y Fortalezas ...................................................................................................... 53 4.6.1 Debilidades Multiplexador Analógico .......................................................................... 53 4.6.2 Debilidades Eficiencia ................................................................................................... 54 4.6.3 Debilidades Número de Canales .................................................................................. 54 4.6.4 Fortalezas ..................................................................................................................... 55 5 CONCLUSIONES ..........................................................................................................................55 5.1 Líneas de Mejora ................................................................................................................. 56 6 BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................................56 5 ÍNDICE DE FIGURAS Figura 1.1: Ilustración de bandas EEG….……………………………………………………………………………………9 Figura 1.2: El corazón y sus partes……………………………………………………………………………………………10 Figura 1.3: Ejemplo de señal ECG…………….……………………………………………………………………………….11 Figura 1.4: Ilustración de las distintas colocaciones de los electrodos..…………………………………….13 Figura 1.5: Derivaciones bipolares en registro de ECG..……………………………………………………..…….14 Figura 1.6: Derivaciones unipolares en registro de ECG..……………..…………………………………………..15 Figura 2.1: Esquema de adquisición………………………………………………………………………………………….17 Figura 2.2: Diagrama de bloques del sistema de adquisición…………………………………………………….17 Figura 2.3: Esquemático del sistema de adquisición.…………………………………….………………………….18 Figura 2.4: Esquemático del filtro paso alto……………………………………….…………………………………….19 Figura 2.5: Diagrama de Bode del Filtro paso alto………………….…………………..………………………......19 Figura 2.6: Especificaciones de Ajuste del offset………………………………………………………………………20 Figura 2.7: Esquemático del amplificador de instrumentación…………………………………………….……20 Figura 2.8: Esquemático del filtro Notch…………………………………………………………………………………..21 Figura 2.9: Diagrama de Bode del filtro tipo Notch…………………………………………………………………..21 Figura 2.10: Esquemático del atenuador variable…………………………………………………………………….22 Figura 2.11: Esquemático del conmutador bidireccional analógico……………………..…………………..22 Figura 2.12: Esquemático de la segunda etapa de amplificación………………………………………………23 Figura 2.13: Esquemático del filtro paso bajo de segundo orden………………………………………….….23 Figura 2.14: Diagrama de Bode del filtro paso bajo……………………………………………………………….…24 Figura 2.15: Esquemático del circuito equivalente de tensión de offset….……………………………….25 Figura 2.16: Esquema del diseño PCB. Bottom.gbx………………………………………………………..…….....26 Figura 2.17: Esquema del diseño PCB. Top.gbx.……………………………………………………………………….26 Figura 2.18: Ilustración del Block Diagram del software de adquisición……………………………………28 Figura 2.19: Captura de filtrado de la señal bañada en ruido a 160Hz.Dominio del tiempo……..31 Figura 2.20: Captura de filtrado de la señal bañada en ruido a 160Hz.Dominio frecuencia…..….32 Figura 2.21: Esquema de detección de señales R.………………………………………………………….…………32 Figura 2.22: Esquema de detección de señales R y cálculo de pulsaciones por minuto………….…33 Figura 2.23: Esquema del experimento ECG………..……………………………………………….………………….34 Figura 2.24: Puesta en marcha del experimento ECG..………………………………………………………….….35 Figura 3.1: Implementación del Protoboard (1).……………..……………………..………..……………………...37 Figura 3.2: Implementación del Protoboard (2)..……………...……………………….……….……….……….….37 Figura 3.3: Implementación de la PCB (1) .……………..……………………….……………………………………….38 Figura 3.4: Implementación de la PCB (2) .………….……………………….……………………………………….….38 Figura 3.5: Resultado filtro paso bajo a 20 Hz………………..…………………………………………………………39 Figura 3.6: Resultado filtro paso bajo a 160 Hz………………..……………………….………………………………39 Figura 3.7: Resultado filtro paso bajo a 300 Hz………………..……………………….………………………………39 Figura 3.8: Resultado filtro Notch a 45 Hz………………..…………………………………………….…………………40 Figura 3.9: Resultado filtro Notch a 50 Hz………………..……………………………………….………………………40 Figura 3.10: Resultado filtro Notch a 55 Hz………………..……………………………………….………….…………40 6 Figura 3.11: Salida del aparato atenuando por un factor 1…………………………..………………….….……44 Figura 3.12: Salida del aparato atenuando por un factor 10……………………………….…………….………44 Figura 3.13: Salida del aparato atenuando por un factor 100…………………………………..……………….45 Figura 3.14: Capturas de pantalla del experimento ECG (1)……………………………………………………...46 Figura 3.15: Capturas de pantalla del experimento ECG (2)……………………………………………………...46 Figura 3.16: Capturas de pantalla del experimento EEG…………………………………………………………...47 Figura 4.1: Discusión del experimento ECG…………………...…………………………….…...........................49 Figura 4.2: Discusión temporal del experimento EEG……………….………………….…...........................50 Figura 4.3: Discusión espectral del experimento EEG…………………...…………………………….…............51 Figura 4.4: Discusión del diseño de la PCB…..……………………….…………..…………….…………………........52 Agradecimientos Quiero aprovechar estas líneas para agradecer a todas las personas que me han ayudado y me han apoyado a lo largo de los años de dura andadura por la Escuela Técnica Superior de Ingenieros de Telecomunicación. En primer lugar quería agradecer el apoyo recibido por mis padres, que siempre me han estado apoyando y a mi lado, desde mis comienzos en esta dura pero bonita carrera, y que siempre me han sabido inyectar moral en mis peores momentos y no han dudado ni un momento de mí. Quiero mostrar mi más sincero agradecimiento a mis compañeros de clase y amigos, que han hecho que este duro trance como es la carrera se llevara de forma más amena, sobre todo nombrar a ese grupo de Sistemáticos que ya son parte de mi familia. Quería hacer una mención especial a mi compañero Jaime Maroto Villar, compañero que me ha ayudado mucho en la consecución y elaboración de incontables proyectos. Sin él muchas cosas me habrían resultado mucho más difíciles. También agradecer a mis compañeros Carlos González Bris, Julián Sanchez y Roberto Onrubia así como a mis compañeras del laboratorio Ludmila, Soledad y a José Manuel Ibarz por compartir sus conocimientos de electrónica. No quería pasar por alto la oportunidad de agradecer a todos los profesores que he tenido durante mi vida académica, no sólo en esta escuela sino también desde pequeño, porque entre todos han formado la base para que hoy pueda ser lo que soy. Entre los profesores, cabe una mención especial para Victoria Samaniego, Adolfo Gasteudurritia y Mateo Burgos. 7 1 INTRODUCCION 1.1 Origen de las Señales Bioeléctricas Las células excitables están cubiertas por una membrana semipermeable, que permite la entrada de ciertas sustancias y otras no. Cuando la célula se encuentra en reposo (polarizada) solo permite la entrada de K+ y Cl- y no permiten la entrada de Na+. Cuando se excita la célula por un flujo de corriente iónica o una energía exterior aplicada se produce una entrada rápida de Na+, produciéndose una despolarización. Una vez las corrientes iónicas disminuyen la membrana impide de nuevo la entrada de Na+ y se permite la salida de K+. A este último proceso se le conoce con el nombre de repolarización. 1.1.1 Modelo de Hodgkin-Huxley Hodgkin and Huxley (1952) fueron los primeros en modelar un potencial de acción, un modelo matemático basado en conductancias g (1⁄𝑅 ) que explica los mecanismos iónicos que subyacían en la iniciación y propagación de los potenciales de acción en las neuronas. Este modelo es una interpretación biofísica de una célula excitable por la que circula una corriente a través de la membrana. De modo que la corriente total que atraviesa la membrana es la suma de la corriente que atraviesa el condensador y la corriente iónica. Im(t) = IC+Iiónica IC = CmdV(t)/dt Los canales iónicos son selectivos al sodio (Na+) y al potasio (K+). Dando lugar a las corrientes INA e IK respectivamente. Estas corrientes están asociada a una conductancia y un generador de tensión que modela la diferencia de concentración de iones entre los espacios intracelular y extracelular. Hodgkin y Huxley definen una corriente IL que representa el resto de propiedades pasivas de la célula. Definiendo la corriente iónica como: Iiónica = INa+IK+IL Iiónica = gNa(V)[V(t)−VNa]+gK(V)[V(t)−VK]+gL[V(t)−VL] Im(t) = CmdV(t)/dt + gNa(V)[V(t)−VNa]+gK(V)[V(t)−VK]+gL[V(t)−VL] 8 1.1.2 Señales Bioeléctricas La adquisición de señales bioeléctricas se basa en la medida del efecto combinado de un gran número de potenciales de acción, que aparecen en la superficie del cuerpo o en zonas cercanas a la actividad del sistema fisiológico que se desea monitorizar. La bioelectrónica se centra en la interpretación teórica de la generación, propagación y captación de dichas señales, utilizando conceptos de la electrónica clásica. Algunas señales bioeléctricas usuales son el electrocardiograma (ECG), el electrograma (LFP) y electromiograma (EMG). En este proyecto nos centraremos en el estudio del electrograma (LFP) y del electrocardiograma (ECG). 1.2 Electrograma (EEG) En realidad no estamos registrando señales electroencefalográficas (EEG) sino actividad de campo eléctrico cerebral, o también conocido como LFP (Large Field Potential). El LFP mide la diferencia de potencial eléctrico medido en el espacio extracelular entre neuronas, usando típicamente micro-electrodos. El LFP, a diferencia del electroencefalograma no se mide con macro-electrodos en el cuero cabelludo sino perforando en el tejido cortical con electrodos intracraneales. De aquí en adelante nos referiremos al LFP como EEG, pero entendiendo la diferencia comentada anteriormente. Esta actividad eléctrica es típicamente caracterizada por la potencia de campo eléctrico en las diferentes bandas de frecuencia. Para más información consulte página 8 de la referencia [5]. Banda Frecuencia Delta (δ) de 0,5 Hz a 4 Hz Theta (θ) de 4 Hz a 8 Hz Alfa (α) de 8 Hz a 13 Hz Beta (β) de 13 Hz a 22 Hz Gamma (γ) de 22 HZ a 30 Hz Figura 1.1: Ilustración de bandas EEG. Soto León, V. (2011). Determinación de la percepción de un estímulo doloroso a partir de la actividad EEG pre-estímulo. Recuperado el 24/06/2015 . El ritmo alfa es el ritmo más conocido del EEG. En vigilia, con los ojos cerrados, la mayoría de los Contenido sujetos presentan un ritmo α muy prominente en las regiones occipitales que se bloquean al 1abrir INTRODUCCION ........................................................................................................................... 8 los ojos. El ritmo alfa, normalmente mezclado con pequeñas amplitudes de los ritmos delta, theta y beta es predominante en estados donde el sujeto esta relajado pero despierto. 1.1 Origen de las Señales Bioeléctricas ................................................................................................. 8 1.1.1de Modelo Hodgkin-Huxley...................................................................................................... 8 El rango ritmosdebeta se subdivide en dos regiones: Beta I y Beta II (mayor frecuencia). Beta1.1.2 II aparece activación intensa del sistema nervioso central, disminuyendo Señalesdurante Bioeléctricas ............................................................................................................... 9 entonces beta I. 1.2 Electrograma (EEG) ......................................................................................................................... 9 1.3 Electrocardiograma (ECG) ............................................................................................................. 10 9 10 1.3.1 El corazón ............................................................................................................................... 1.4 Técnicas de Registro...................................................................................................................... 12 1.4.1 Amplificador de instrumentación .......................................................................................... 12 1.3 Electrocardiograma (ECG) La señal Electrocardiográfica (ECG) es un registro de la actividad eléctrica cardiaca. Esta señal bioeléctrica se obtiene con un electrocadiógrafo en forma continua y es útil para saber la duración del ciclo cardiaco. 1.3.1 El corazón El corazón está constituido por un tejido de fibras musculares llamado miocardio que son las responsables de la contracción. Está formado por una bomba derecha, que encamina la sangre hacia los pulmones y una izquierda, que bombea sangre hacia los órganos periféricos, por lo que su función primaria es mecánica, dado que se encarga de bombear la sangre a través del sistema circulatorio. El corazón se divide en cuatro cavidades y cuatro válvulas: Dos ventrículos: situados debajo de las aurículas, encargados de bombear la sangre fuera del corazón. Dos aurículas: son las cámaras situadas en la parte superior del corazón. Válvulas atrioventriculares: están la tricúspide (derecha) y la mitral (izquierda). Evitan que la sangre recién bombeada al ventrículo entre a la aurícula. Válvulas semilunares: están la pulmonar (permite el paso de la sangre del ventrículo derecho hacia los pulmones) y la aórtica (permite el paso de la sangre desde el ventrículo izquierdo hacia la aorta). Evitan que la sangre bombeada hacia la arteria pulmonar y la aorta entre al ventrículo. Figura 1.2: El corazón y sus partes. Donald W. Jones. Anatomy and Physiology of the Cardiovascular System. Chapter 5. Page 39. Recuperado el 14 /02/2015 de: http://samples.jbpub.com/9781449652609/99069_ch05_6101.pdf 10 El ECG está formado por una onda P, un complejo QRS y una onda T. Onda P: Producida por los potenciales eléctricos generados cuando las aurículas se despolarizan antes de cada contracción. Su duración es menor de 100ms y su voltaje no excede los 2.5mV. Complejo QRS: Producido por los potenciales que se generan cuando los ventrículos se despolarizan antes de contraerse. Onda T: Se debe a los potenciales que se producen cuando los ventrículos se recuperan de su estado de despolarización (1), esto ocurre por lo general, en el músculo ventricular de 0.25 a 0.35 seg después de la despolarización. A esta onda se la conoce como la onda de repolarización (2). Su duración es de 80 a 100ms. Figura 1.3: Ejemplo de señal ECG. Escola Tècnica Superior d’Enginyeria (2013) Recuperado el 14 /05/2015 de: http://ocw.uv.es/ingenieria-y-arquitectura/1-5/ib_material/IB_T2_OCW.pdf [ (1) Despolarización: Se refiere cuando la membrana se vuelve completamente permeable a los iones de sodio Na+, permitiendo el flujo hacia el axón de iones de sodio cargados positivamente. (2) Repolarización: Una vez pasados 10 ms desde que la membrana se ha hecho muy permeable a los iones de sodio Na+, estos canales comienzan a cerrarse, pero los canales de potasio K+ se abren más de lo habitual, lo que provoca que haya una rápida difusión de iones en el interior de la membrana, restableciendo el potencial de reposo negativo normal de la membrana. Para más información consulten el Tratado de fisiología médica Guyton & Hall 12ed. Unidad 3, Capitulo 9, El corazón. 11 1.4 Técnicas de Registro 1.4.1 Amplificador de instrumentación Un amplificador de instrumentación es un amplificador diferencial tensión-tensión cuya ganancia puede fijarse de forma muy precisa. Los amplificadores de instrumentación cumplen los siguientes requisitos: 1) Su ganancia en modo común debe ser muy baja respecto de la ganancia diferencial, esto es, debe ofrecer un alto rechazo al modo común (CMRR) en todo el rango de frecuencia en que opera. 2) Debe tener una alta impedancia de entrada para que su ganancia no se vea afectada por la impedancia de la fuente de entrada. 3) Debe tener una baja impedancia de salida para que su ganancia no se vea afectada por la carga que se conecta a su salida. 1.4.2 Elección de Amplificador de instrumentación Nuestra primera opción fue el amplificador de instrumentación AD620 que se utiliza en aplicaciones con señales muy pequeñas y entornos ruidosos. En el datasheet del AD620 encontramos interesantes algunas de sus aplicaciones. Nos decidimos por el dispositivo amplificador de instrumentación INA110KP puesto que cumple la condición de rechazo al modo común (CMRR) y también cuenta con una impedancia de entrada muy elevada, como podrán observar en el datasheet (Apéndice 4), se trata de un FET que tiene una impedancia de entrada del orden de 1012 Ω. Además, encontramos este integrado en dispositivos de preamplificación de Axon Instruments. 12 1.4.3 Problemas de captación de señales bioeléctricas El problema principal en la captación de señales bioeléctricas proviene de los pequeños valores de amplitud, que en algunas ocasiones es difícil diferenciar la señal del ruido que normalmente las acompaña en el proceso de adquisición. Los potenciales bioeléctricos son raramente determinísticos, por eso, para poder determinar el esquema de amplificación, nos basamos en caracterizaciones previas tanto para señales EEG como ECG. Señal ECG (Electrocardiograma) EEG (Electrograma) Magnitud Ancho de banda (Hz) 0,5 - 4 mV 5 - 500 μV 0,01 - 150 Hz DC - 150 Hz 1.4.4 Técnicas de registro de EEG en humanos El registro de EEG en humanos se basa en electrodos de superficie en puntos normalizados sobre el cuero cabelludo. Describimos a continuación los distintos sistemas de localización de los electrodos en el cuero cabelludo. El system 10/20 es un método reconocido internacionalmente que describe la localización de los electrodos en el cuero cabelludo. El sistema está basado en la relación entre la localización de un electrodo y la zona que subyace en la corteza cerebral. Los números ‘10’ y ‘20’ se refieren a las distancia entre electrodos, que puede ser o bien 10% o el 20% de la nuca o la longitud de izquierda a derecha del cráneo [6]. Luego la diferencia de los sistemas radica en la densidad de electrodos que podemos colocar en el cuero cabelludo, el orden de mayor a menor densidad de electrodos en los sistemas sería el siguiente: System 10/5, System 10/10 y System 10/20. Para más información pueden consultar la referencia [7]. Electrode Lobe F T C P O Frontal Temporal Central Parietal Occipital Figura 1.4: Ilustración de las distintas colocaciones de los electrodos 13 1.4.5 Técnicas de registro de ECG Las técnicas de registro de ECG se basan en derivaciones unipolares y bipolares. Vamos a detenernos ahora en las derivaciones bipolares de los miembros y para ello es imprescindible mencionar el Triángulo de Einthoven. Consiste en colocar un electrodo en el brazo izquierdo, uno en el derecho y uno en el tobillo izquierdo, dibujando un triángulo imaginario que indica el sentido de la actividad eléctrica del corazón Figura 1.5: Derivaciones bipolares en registro de ECG. Triángulo de Einthoven (2013) Recuperado el 30/05/2015 de: http://electrocardiogramaymedicinageneral.blogspot.com.es/2013/02/triangulo- de-einthoven.html Cada derivación de las extremidades bipolares se registra usando dos electrodos, luego tenemos tres derivaciones de la extremidades (DI, DII y DIII). Cada derivación tiene un electrodo positivo y otro negativo. Así, para DI el electrodo negativo corresponde al brazo derecho y el positivo al brazo izquierdo. Para DII el electrodo negativo corresponde al brazo derecho y el positivo a la pierna izquierda y para DIII el negativo corresponde al brazo izquierdo y el positivo a la pierna izquierda. Además de las derivaciones bipolares de las extremidades tenemos como vimos anteriormente las derivaciones unipolares que son aVF, aVR y aVL y que se obtienen usando los mismos electrodos. Por ejemplo, para obtener aVF se usa el electrodo del pie izquierdo como positivo y ambos electrodos de los brazos como punto en común (negativo). De igual manera se obtienen aVR (en este caso el electrodo del brazo derecho es positivo y los otros dos negativos) y aVL (el electrodo del brazo izquierdo se hace positivo y los otros dos negativos). Estas derivaciones unipolares serán las utilizadas en los experimentos. 14 Figura 1.6: Derivaciones unipolares en registro de ECG. Triángulo de Einthoven (2013) Recuperado el 30/05/2015 de: http://electrocardiogramaymedicinageneral.blogspot.com.es/2013/02/triangulo-de-einthoven.htm 1.4.6 Aplicaciones en ingeniería biomédica del estudio de señales EEG y ECG El campo de aplicación del EEG está enfocado al estudio de la epilepsia, alteraciones del nivel de la conciencia, deterioro de funciones superiores y en la evaluación de la maduración cerebral en recién nacidos y prematuros. Es posible obtener una gran cantidad de información clínicamente relevante del EEG en el coma, la muerte cerebral y las migrañas, entre otros. El campo de aplicación del ECG es principalmente el diagnóstico cardíaco. Diagnóstico de diferentes enfermedades del corazón, como el infarto de miocardio y la enfermedad cardíaca coronaria, así como enfermedades pulmonares. Para más información consulte páginas 17 a 19 de la referencia [5]. Así como las páginas 16 a 17 de la referencia [9]. 15 1.5 Software 1.5.1 Digitalización El muestreo de señal es un proceso que transforma una señal en tiempo continuo en una señal en tiempo discreto, tomando muestras periódicas de esa señal cada T segundos. Se define la frecuencia de muestreo como la inversa del periodo de muestreo Fs = 1/T. El teorema de muestreo Nyquist - Shannon demuestra que se puede recuperar una señal periódica continua en banda base a partir de sus muestras mediante la función de interpolación 𝑔(𝑡) = sin(2πBt) 2𝜋𝐵𝑡 a condición de que la señal esté limitada en banda y la frecuencia de muestreo sea superior al doble de su ancho de banda. Dicho de otro modo, la frecuencia de muestreo tiene que ser por lo menos el doble que la frecuencia más alta de la señal que queremos muestrear para poder reconstruir la señal original evitando ambigüedades como el solapamiento espectral (aliasing). FS ≥ 2FMAX = 2B 1.5.2 Introducción a LabVIEW LabVIEW (Laboratory Virtual Instrument Engineering Workbench) es un entorno gráfico de programación, el lenguaje utilizado para programar, es el llamado “Lenguaje G”, donde la “G” simboliza que es un lenguaje de tipo gráfico. Utiliza símbolos gráficos en lugar de lenguaje textual para describir acciones de programación. Los programas desarrollados en LabVIEW se llaman VI’s (Virtual Instruments), de este modo se pueden diseñar sistemas de automatización y medida de bajo costo. La programación gráfica con LabVIEW permite programar fácilmente un método para implementar aplicaciones complejas de test, medida y automatización. Cada programa en LabVIEW o VI se divide en dos partes, el “Panel Frontal” y el “Diagrama de Bloques”. Panel Frontal: es la interfaz con el usuario, la utilizamos para interactuar con el usuario cuando el programa se está ejecutando. En esta interfaz se definen los controles (entradas, botones, marcadores etc…) y también indicadores (salidas, gráficas, display etc…). Diagrama de Bloques: es el programa en sí mismo, donde se define su funcionalidad, aquí se colocan los distintos iconos que realizan una determinada función y se interconectan entre ellos. Suele haber una tercera parte icono/conector que son las herramientas utilizadas para conectar un VI con otros VI’s. 16 1.5.3 LINX – LVH Es una interfaz para plataformas embebidas, con este toolkit y software para NI LabVIEW, podemos controlar y adquirir datos desde plataformas embebidas comunes como Arduino. LINX ofrece firmware para plataformas embebidas comunes que actúan como dispositivos de Entrada/Salida y se conecta con VI's de LabVIEW a través de conexión serial, USB, inalámbrica o Ethernet. Esto ayuda a enviar información rápidamente desde un dispositivo embebido como Arduino a LabVIEW sin ajustar la comunicación, la sincronización o incluso una sola línea de código C. Al usar la convención común Open, Read/Write, Close en LabVIEW, tenemos acceso a las señales digitales, analógicas, PWM, I2C y SPI de varias plataformas embebidas comunes o usar VI’s de más alto nivel para controlar sensores y actuadores directamente. Barajando otros toolkit como NI LabVIEW interface for Arduino, NI LabVIEW Biomedical, NI LabVIEW System Identification, LabVIEW Control Design and Simulation. Finalmente nos decantamos por LINX-LVH porque simplifica el registro, ofrece una frecuencia de muestreo a 500 Hz y cumple con el resto de requisitos del proyecto. 2 MATERIAL Y METODOS 2.1 Diseño Protoboard En este apartado se describirá el hardware utilizado para la implementación del módulo de adquisición de señales bioeléctricas. Este será el esquema de adquisición que seguimos. Figura 2.1: Esquema de adquisición 2.1.1 Diagrama de Bloques del Sistema de Adquisición Figura 2.2: Diagrama de bloques del sistema de adquisición 17 2.1.2 Esquema del Sistema de Adquisición Figura 2.3: Esquemático del sistema de adquisición. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. Registramos bioseñales con un ancho de banda DC – 150 Hz. Para señales EEG estimamos que registramos señales del orden de 5 – 500 µV, así como para ECG registramos señales del orden de 0.5 – 4 mV. El Arduino Uno trabaja con valores de 0 a 5 V, luego tendremos que amplificar en un factor 5000 en distintas etapas. Podrán observar un esquema del sistema de amplificación más detallado en (Apéndice 1). 2.1.3 Filtro Paso Alto (HPF) Para acondicionar la entrada de los electrodos, aplicamos un filtrado paso alto para eliminar la componente continua y quedarnos con las altas frecuencias, utilizamos un filtro pasivo RC que ajustamos a una frecuencia de corte de fc = 1.5915 Hz. Al tratarse de la entrada a un amplificador de instrumentación, cuidamos mucho de no introducir ruido, especialmente ruido térmico (Johnson-Nyquist), que estudia el movimiento aleatorio de e-, originado por su energía térmica como una Gaussiana de media nula. Este movimiento da lugar a una corriente aleatoria y debido a ella aparece una tensión de ruido vn en bornes de una resistencia. El valor medio de la tensión de ruido es siempre nulo, pero no su valor eficaz. Vneff = √ 4ℎ𝑓𝐵𝑅 ℎ𝑓 (rms) 𝑒 𝐾𝑇 −1 Considerando hf << KT, Vneff = √ h = 6.628*10-34 (Js) - Constante de Planck. K = 1.381*10-23 (JK-1) - Constante de Boltzmann. f = frecuencia central del ancho de banda B. T = temperatura (K). 4ℎ𝑓𝐵𝑅 (rms) ⟶ Vneff = √4𝐾𝑇𝑅𝐵 (independiente frecuencia) ℎ𝑓⁄𝐾𝑇 18 Dado que el valor eficaz depende del valor de la resistencia, lo más lógico sería tomar una resistencia de valor pequeño. Primeramente se propuso 10KΩ, pero con objetivo de conseguir una compatibilidad con un mayor rango de electrodos (distinta impedancia de entrada de los electrodos) optamos por una resistencia de mayor valor, para independizarnos de la impedancia de entrada del electrodo. Finalmente optamos por una resistencia de 10MΩ como puede apreciarse en la figura. Figura 2.4 Esquemático del filtro paso alto. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. 𝐻(𝑠) = 𝑠∗𝑅1∗𝐶1 1+𝑠∗𝑅1∗𝐶1 ⟶ polos en s =± 1 = 𝑅1𝐶1 10 𝑟𝑎𝑑 𝑠𝑒𝑐 1 ⟶ ceros en s = 0 𝑟𝑎𝑑 y en s = 𝑅1𝐶1 = 10 𝑟𝑎𝑑 𝑠𝑒𝑐 𝑠𝑒𝑐 ⟶ Frecuencia de corte: f c = 1 2𝜋𝑅1𝐶1 =1.5915 Hz Figura 2.5: Diagrama de Bode del Filtro paso alto. La figura anterior corresponde a la salida del filtro paso alto para una entrada de 3 Vpp. Observamos que para la frecuencia de corte fc = 1.59 Hz tenemos una tensión de 2,26 Vpp = 3 𝑉𝑝𝑝 √2 19 2.1.4 Amplificador de Instrumentación (INA110) De la variedad de factores de amplificación que ofrece nuestro amplificador de instrumentación INA110KP como pueden consultar en el (Apéndice 4) fijamos el factor de amplificación en 500. Debido a que tratamos con una etapa de amplificación elevada, tendremos meticuloso cuidado de no introducir algún tipo de offset a la entrada del amplificador, por esta razón ajustamos tanto el offset de salida como el de entrada de nuestro amplificador de instrumentación, tal y cómo proponen las especificaciones (Apéndice 4). Figura 2.6: Especificaciones de ajuste del offset. Datasheet INA110Kp Colocamos dos potenciómetros de espectro de 100KΩ entre las patas 14-15 y las patas 4-5 y los conectamos a ± VCC, en nuestro caso ± 9𝑉 respectivamente. Colocamos a la entrada del INA110KP una señal sinusoidal por una de las patas y la otra la dejamos a masa, midiendo VOUT en el osciloscopio variamos el valor del potenciómetro hasta que tengamos una componente continua nula. Figura 2.7: Esquemático del amplificador de instrumentación. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. 20 2.1.5 Filtro Rechaza Banda (NOTCH) El amplificador puede realizar registros cortos (horas) con alimentación basada en pilas. Así como registros largos (días) con una fuente de alimentación externa. En la práctica, la señal adquirida es muy débil y se encuentra contaminada con ruido de 50Hz acoplado como interferencia en caso de usar una fuente de alimentación externa. Para solventar este problema, diseñamos un filtro rechaza banda (filtro tipo Notch) de frecuencia central fr = 50.5Hz (teórico) y BW = 10Hz (teórico), basándonos en el siguiente esquema: Figura 2.8: Esquemático del filtro Notch. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. Fijamos el factor de calidad, RR y C considerando R = 10KΩ y con las siguientes ecuaciones: BW = 𝑓𝑟 Q = 𝐵𝑊 = 0.1591 𝑅𝐶 51,08 𝐻𝑧 10,6 𝐻𝑧 𝐻(𝑠) = ⟶ Con R = 10KΩ ⟶ C = 1.5µF (Valor comercial) = 4.819 ⟶ Calidad 𝑠2 + 𝑤𝑟 2 𝑠2 + 𝑤𝑟 + 𝑤𝑟 2 𝑄 RR = 𝑅 2𝑄 2 −1 ⟶ RR = 220Ω (Valor comercial) 𝑟𝑎𝑑 𝑟𝑎𝑑 ⟶ polos = -34.2 ± j*344 ( 𝑠𝑒𝑐 ) ⟶ ceros = ± j*346 ( 𝑠𝑒𝑐 ) Figura 2.9: Diagrama de Bode del filtro tipo Notch. La figura anterior representa la salida del filtro Notch para una entrada de 3 Vpp. 21 2.1.6 Atenuador Variable Con el propósito de poder registrar tanto señales de electrocardiográficas (ECG) como señales electroencefalográficas (EEG), colocamos una etapa de atenuación, para poder reducir la amplificación, puesto que las señales ECG son de mayor orden que las señales EEG. Figura 2.10: Esquemático del atenuador variable. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. A1:1 = 1𝐾Ω 1𝐾Ω A1:10 = 1𝐾Ω 10𝐾Ω A1:100 = 1𝐾Ω 100𝐾Ω 2.1.7 CD4016B Se trata del conmutador bidireccional analógico que utilizamos para conmutar las resistencias, lo alimentaremos con una tensión VDD = 9V y VSS = -9V, el micro-switch establece una tensión de 9V en los puertos ENABLE del CD4016B (Apéndice 6) para definir el estado de conducción del conmutador, colocamos una resistencia de 100KΩ conectada a la fuente de alimentación de -9V, que nos definirá el estado de no conducción. Figura 2.11: Esquemático del conmutador bidireccional analógico. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. 22 2.1.8 Filtro Paso Bajo (LPF) con Amplificación En la segunda etapa de amplificación, amplificamos en un factor 10, completando así los 10*500 = 5000 que se propusieron en un principio. Este factor de amplificación 10, consta de una etapa de amplificación basada en un amplificador inversor. Junto con esta amplificación tendremos un filtrado paso bajo con frecuencia de corte, fc = 159.154 Hz (teórico) para poder estudiar las señales adquiridas de ECG y EEG en la que consideramos relevantes las frecuencias menores a 150 Hz. La frecuencia de muestreo del conversor A/D es de 500 Hz, luego no tendremos problemas a la hora de reconstruir la señal muestreada. Esta segunda etapa de amplificación está basada en un amplificador operacional TL082 pueden consultar detalles en el (Apéndice 3). . 𝑉𝑜𝑢𝑡 = 𝐺 ∗ 𝑉𝑖𝑛 𝐺= − 𝑉𝑜𝑢𝑡 = − 𝑅2 𝑅1 𝑅2 ∗ 𝑉𝑖𝑛 𝑅1 Ilustración 1 Figura 2.12: Esquemático de la segunda etapa de amplificación. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. Filtramos con un filtro paso bajo segundo orden con, fc = 159.154 Hz (teórico). Figura 2.13: Esquemático del filtro paso bajo de segundo orden. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. 23 𝐻(𝑠) = −𝑅2/𝑅1 1+𝑅2𝐶2𝑠 1 ⟶ polos en s = ± 𝐶2∗𝑅2 = 1000 𝑟𝑎𝑑 𝑠𝑒𝑐 1 𝐶2∗𝑅2 ⟶ cero doble en s = = 1000 𝑟𝑎𝑑 𝑠𝑒𝑐 ⟶ frecuencia de corte: fc = 1 2𝜋𝑅2𝐶2 = 159.154 Hz Figura 2.14: Diagrama de Bode del filtro paso bajo. La figura anterior representa la salida del filtro paso bajo para una entrada de 400 mVpp. Observamos que para frecuencias medias tenemos una ganancia igual a 10dB o lo que es lo mismo, un factor 10. Comprobamos que el ancho de banda a – 3dB o en unidades lineales 1⁄√2, quedando un valor de 4𝑉 √2 = 2,8 V y coincide con la frecuencia de corte teórica f c = 159.154 Hz. 24 2.1.9 Tensión de Offset Todo el esquema de amplificación anteriormente propuesto, nos lleva a tensiones en un rango de -2.5V a 2.5V a la entrada de nuestro Arduino Uno, que únicamente trabaja con valores positivos de 0V a 5V. Por esta razón rectificamos la señal de entrada al Arduino Uno superponiendo una señal DC de 2.5V, basándonos en un regulador de inserción de tensión positiva LM78l05 (Apéndice 5) convertimos la tensión alimentación de 9V a una tensión de 5V. Figura 2.15: Esquemático del circuito equivalente de tensión de offset. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. V0UT = VIN*( −𝑅2 )+ 𝑅1 VA*(1 + 𝑅2 𝑅1 ) En primer lugar vamos a superponer un offset de 2.5V a la señal de entrada, tendremos que prestar atención a que la tensión a la salida no exceda los 5V que soporta el Arduino Uno, para eso, aplicamos dos diodos Schottky 1N5817 debido a que ofrecen una menor tensión de codo o de conducción que los diodos de silicio, luego tienen un tiempo de conmutación a estado de conducción menor. Este esquema de dos diodos nos permite que el rango de tensiones no sea mayor que 5V, tensión máxima que soporta el Arduino Uno. Para conseguir un offset de 2.5V realizamos un divisor de tensión para obtener VA= 𝑅1∗5𝑉 =1.25 𝑅1+𝑅2 V, porque la tensión VA, si observamos la formula anterior, se verá multiplicada por un factor 2, puesto que R3=R4. 25 2.2 Diseño PCB 2.2.1 Board Se presentan las distintas caras utilizadas para la implementación de nuestro circuito impreso. Se ha diseñado con taladros metalizados para asegurar la conexión entre las distintas capas. El software utilizado para su implementación ha sido el EAGLE versión 7.2.0. Figura 2.16: Esquema del diseño PCB. Bottom.gbx. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. La placa está dimensionada con 92.71 mm de alto y 68.57 mm de ancho. Figura 2.17: Esquema del diseño PCB. Top.gbx. Editor de diagramas electrónicos utilizado: CadSoft EAGLE. 26 2.2.2 Schematic Este esquemático corresponde con el esquemático real del prototipo, el resto de esquemas no son funcionales, simplemente pretender esclarecer los distintos bloques del sistema. Para mayor información, acudan al apéndice 2. 27 2.3 Software de Adquisición Figura 2.18: Ilustración del Block Diagram del software de adquisición. 2.3.1 Block Diagram 2.3.1.1 Apertura La apertura del software constará de un icono Initialize.vi, así como dos controles, uno para elegir el número de canales que vamos a adquirir y otro para controlar el puerto USB donde conectamos nuestro Arduino Uno. Esta sería la apertura a nuestra estructura while (While Loop). Contamos con el icono Loop Frecuency.vi, que tiene la función de hallar la frecuencia del bucle. También tenemos el indicador de número de muestras, que será en número de iteraciones del bucle while. Por último tenemos un control para poder cambiar el retardo entre iteraciones del bucle while y con el cambiar la frecuencia de muestreo. 28 2.3.1.2 Código En nuestro código, tendremos el icono Analog Read.vi, que tiene la función de leer el valor de los canales analógicos a la entrada (6 canales en nuestro caso). Esta parte del código está destinada a la realización de una tabla que guarde los datos adquiridos. Tomamos la señal dinámica (6 señales analógicas) lo pasamos por un splitter Unbundle.vi para obtener cada señal analógica por separado. Con cada una de las señales analógicas construiremos un array, Insert Into Array.vi que irá almacenando continuamente el valor actual y el valor anterior, gracias a que construimos un registro de desplazamiento (Shift Register). En esta parte añadimos la fecha y la hora a la tabla. Comenzamos con el icono Get Date/ Time String.vi, que nos ofrece la hora en un formato hh:mm:ss (String), utilizamos el icono Search/Split String podemos dividir en una substring antes del carácter ‘:’ y la substring después del carácter. 29 Con esto conseguimos tener tanto las horas, minutos y segundos como strings independientes. Finalmente convertiremos estos strings a número y crearemos un array con un Shift Register como hicimos en el caso anterior de la tabla. Una vez que tenemos todas las columnas de la tabla (las señales A0, A1, A2, A3, A4, A5, horas, minutos, segundos) en un array, creamos un array de dos dimensiones con el icono Build Array.vi. Para que sean las columnas de la tabla, transponemos la matriz resultante. Con la matriz creada, la guardamos en un archivo a elegir en una ventana emergente, utilizando el icono Write To Spreadsheet File.vi, para poder manipular dicho archivo en Matlab nos aseguramos de que utilice el carácter ‘.’ Para poder separar la parte entera de la decimal con el siguiente formato: %.;%4f. 30 2.3.2 MATLAB Una vez hayamos construido el archivo de muestras, cargaremos este archivo en MATLAB, programaremos un código que sea capaz de detectar las señales R del complejo QSR en el electrocardiograma y también las pulsaciones por minuto del sujeto. Paso 1: Primero realizaremos un filtrado paso bajo a la frecuencia límite que vamos a estudiar, la que impone el filtro paso bajo fc = 160 Hz. Hacemos un estudio previo para decidir qué tipo de filtro es más conveniente, para esto añadimos una interferencia a 160 Hz (sinusoide a 160Hz) a la señal de estudio. Filtraremos la señal ruidosa con los distintos filtros: Butterworth, Chebyshev tipo 2 y Elíptico. 2.3.2.1 Dominio del Tiempo Figura 2.19: Captura de filtrado de la señal bañada en ruido a 160Hz.Dominio del tiempo. >> [b0,a0] = butter(7,160/fn,'low'); >> [b1,a1] = cheby2(7,100,160/fn); >> [b2,a2] = ellip(7,0.01,100,160/fn); fs = 500; fn = fs/2; Donde fn es la frecuencia de Nyquist. Observamos en el dominio de tiempo que el filtrado que nos proporciona una señal más limpia a la salida, es el filtro Chebyshev tipo 2. 31 2.3.2.2 Dominio de la Frecuencia Figura 2.20: Captura de filtrado de la señal bañada en ruido a 160Hz.Dominio frecuencia. Probando los distintos filtros como filtro paso bajo a 160Hz, comprobamos que el filtro que mayor precisión ofrece, es el filtro Chebyshev tipo 2. Paso 2: Una vez que tengamos la señal filtrada, elevaremos la señal al cuadrado para hacer que los picos (señales R) de la señal sean más pronunciados. Paso 3: Detección de los picos R de la señal ECG y la posición de estos mismos, el proceder de la detección se explica en el siguiente esquema: Figura 2.21: Esquema de detección de señales R. Determinamos el threshold de la señal como un porcentaje del valor máximo. Para que solo detecte un pico y no considere picos todos los puntos por encima del valor de threshold, programamos un upflag a modo de contador que cuente desde 5 hasta 0 cada vez que encuentre un pico, de este modo solo contará picos cuando upflag = 0. 32 Los tres pasos anteriormente explicados quedarían resumidos en la siguiente figura. Figura 2.22: Esquema de detección de señales R y cálculo de pulsaciones por minuto. El programa nos muestra el número de pulsaciones, la colocación en número de muestra y el número de pulsaciones por minuto. 33 2.4 Experimento ECG El experimento de ECG consiste en la adquisición cardiaca con electrodos Swaromed silver silverchloride (Ag/AgCl) pueden encontrar información más detallada en el (Apéndice 9) colocados en ambas muñecas y también en el tobillo izquierdo. Una vez conectadas las entradas al aparato, conectaremos la salida de nuestro sistema a un osciloscopio Tektronix Tds 210. Las siguientes figuras ilustran el esquema del experimento. Figura 2.23: Esquema del experimento ECG. Los electrodos utilizados para la adquisición cardiaca: 34 Figura 2.24: Puesta en marcha del experimento ECG. 2.5 Experimento EEG Vaporizador de Isoflurano. El vaporizador es la pieza que suministra el anetésico líquido volátil de una forma precisa para la sedación veterinaria. Sedamos al ratón para la posterior inserción del correspondiente electrodo. Una vez tenemos el ratón conectado al electrodo del CyberAmp 380 de Axon Instruments. Conectamos ese mismo electrodo a la entrada de nuestro aparato. 35 Por último, colocamos los electrodos a la entrada del aparato y conectamos la salida de este a un puerto analógico del Arduino Uno que irá conectado a un ordenador. Dos electrodos implantados en la corteza somatosensorial izquierda y derecha (±2.0 mm lateral and +0.5 mm rostrocaudal from bregma, depth 0.5 mm).Dos tornillos implantados sobre la corteza visual de ambos hemisferios y sirven como la diferencia y el punto de conexión de masa (±2.0 mm lateral and -3 mm rostrocaudal from bregma). Para más información consulten las especificaciones en el Apéndice 10. 36 3 RESULTADOS 3.1 Protoboard Figura 3.1: Implementación del Protoboard (1). Como prototipo inicial presentamos este protoboard, cuya alimentación consiste en pilas de 9V cada una para proporcionar +9V, -9V y masa. Figura 3.2: Implementación del Protoboard (2). 37 3.2 Resultado PCB Figura 3.3: Implementación de la PCB (1). Figura 3.4: Implementación de la PCB (2). 38 3.3 Resultado Filtro Paso Bajo Figura 3.5: Resultado filtro paso bajo a 20 Hz. Colocamos una sinusoidal a la entrada del filtro paso bajo de 480mVpp a una frecuencia en la banda de paso 20 Hz y a la salida tenemos 4.64Vpp. Verificando la ganancia propuesta de 10 (𝐺 = 4.64𝑉𝑝𝑝 480 𝑚𝑉𝑝𝑝 ) Figura 3.6: Resultado filtro paso bajo a 160 Hz. Colocamos una sinusoidal a la entrada del filtro paso bajo de 480mVpp a la frecuencia de corte (160.3 Hz) y a la salida tenemos 3.28Vpp. Verificando una caída de 3dB. Figura 3.7: Resultado filtro paso bajo a 300 Hz. Colocamos una sinusoidal a la entrada del filtro paso bajo de 480mVpp a una frecuencia en la banda eliminada (300.3 Hz ≅ 2*160 Hz) y a la salida tenemos 2.24Vpp. Verificando una caída de 6dB. 39 3.4 Resultado Filtro Notch Figura 3.8: Resultado filtro Notch a 45 Hz. Observamos que en el borde inferior de la banda eliminada (46.8 Hz) para una sinusoidal de entrada de 400 mVpp, la salida es de 256mVpp ( 400mVpp √2 ) o lo que es lo mismo – 3 dB. Figura 3.9: Resultado filtro Notch a 50 Hz. Observamos que en la frecuencia central de la banda eliminada (50.76 Hz) para una sinusoidal de entrada de 472mVpp, la salida es de 28mVpp. Figura 3.10: Resultado filtro Notch a 55 Hz. Observamos que en el borde superior de la banda eliminada (56.12 Hz) para una sinusoidal de entrada de 384 mVpp, la salida es de 266mVpp ( 384mVpp √2 ) o lo que es lo mismo – 3 dB. 40 3.5 Resultado Aparato Registro con el aparato alimentado con pilas. Consiste en la PCB fija en una caja que consta de tres entradas, de una salida BNC, así como un botón de encendido, entradas para fuente de alimentación externa y por último, un micro-switch que permitirá manipular el factor de atenuación del atenuador variable. 41 3.6 Resultado Software 3.6.1 Resultado labVIEW En la interfaz tenemos la representación de los 6 posibles canales que Arduino Uno permite. Esta implementación en con vista al futuro, pues actualmente solo contamos con un canal. Por último, cuando queramos guardar las muestras en un archivo, solo tendremos que pulsar el botón Guardar y elegir un documento. Dicho documento será posteriormente utilizado para estudiar el comportamiento en frecuencia y en el tiempo en Matlab. 42 3.6.2 Resultado Software Matlab 43 3.7 Resultado Bode Figura 3.11: Salida del aparato atenuando por un factor 1. Entrada de 600 µVpp con una adquisición de 10 puntos por década. Figura 3.12: Salida del aparato atenuando por un factor 10. Entrada de 10mVpp con una adquisición de 10 puntos por década. 44 Figura 3.13: Salida del aparato atenuando por un factor 100. Entrada de 10mVpp con una adquisición de 10 puntos por década. 45 3.8 Resultado Experimento ECG Midiendo a la salida de nuestro aparato con un osciloscopio Tektronix tds 210 estas son las adquisiciones que hemos conseguido: Figura 3.14: Capturas de pantalla del experimento ECG (1). Figura 3.15: Capturas de pantalla del experimento ECG (2). 46 3.9 Resultado Experimento EEG La primera señal (verde) corresponde con la salida de nuestro aparato, comparándola con la salida de un CyberAmp 380 de Axon Instruments correspondiente a la cuarta salida (azul), observamos una señal ECG bastante similar. Figura 3.16: Capturas de pantalla del experimento EEG. Nuestro amplificador CyberAmp 380 La figura de arriba corresponde a la adquisición del amplificador, mientras que la señal de abajo corresponde a la adquisición del CyberAmp 380 de Axon Instrument, se observan grandes similitudes a pesar del ruido de la primera. 47 La siguiente figura muestra la comparación de calidad de adquisiciones de nuestro aparato (ordenador derecho) y el CyberAmp 380 (ordenador izquierdo). Para una mejor apreciación mostramos únicamente las señales de interés. Observamos el registro del CyberAmp 380 (arriba) y el registro de nuestro amplificador (abajo). FOTITOqueCYBERAMP Comentar el amplificador 380 superpone una continua de 2.5V que se puede apreciar en la primera adquisición, mientras que la segunda adquisición se trata en una medida en AC. 48 4 DISCUSION 4.1 Discusión ECG Figura 4.1: Discusión del experimento ECG. Comparando nuestra señal electrocardiográfica con la obtenida en Volumen 2 “Prácticas de Electrónica Aplicada” referencia [21]. Comparando adquisiciones observamos que la adquisición de nuestro aparato (derecha) nos ofrece suficiente resolución para distinguir el complejo QRS, la señal T y la señal P. Aunque es menos limpia que la observada por el electrocardiógrafo del laboratorio. La figura izquierda está registrada con 2V/div y 100ms de sensibilidad del osciloscopio, mientras que la figura derecha es 1V/div y 250 ms. 4.2 Discusión EEG Señal amplificada CyberAmp 380 Señal amplificada aparato Comparamos una adquisición cerebral en ratón amplificada por el CyberAmp 380 (Apéndice 11) con la señal mostrada por el CyberAmp pero amplificada por nuestro aparato. Aunque las señales son muy similares, la señal amplificada por el aparato es menos limpia que la 49 amplificada por el CyberAmp 380, una hipótesis es el ruido producido por la red eléctrica, debido a la baja pronunciación de la caída en las bandas del filtro elimina banda (NOTCH). 4.3 Discusión Resultado MATLAB Figura 4.2: Discusión temporal del experimento EEG. Comparamos el electrograma obtenido por el aparato “Señal Amplificador” con la señal obtenida por un sistema de amplificación CyberAmp 380 de Axon Instruments (apéndice 11) del laboratorio del CTB. La tercera gráfica muestra la comparación normalizada de las dos señales mencionadas anteriormente, observamos gran similitud en el dominio del tiempo. 50 Figura 4.3: Discusión espectral del experimento EEG. Comparando los espectros de ambas señales observamos que la señal del CyberAmp se asemeja mucho a la señal del amplificador en bajas frecuencias y difieren para altas frecuencias. Esto es debido a que en el registro del CyberAmp se utilizó un filtro paso bajo a 120 Hz, mientras que con la señal del amplificador el filtro paso bajo es a 160 Hz. De modo que observamos un espectro similar hasta los 120 Hz a partir de ahí, comienza a diferir. 51 4.4 Discusión diseño PCB Comparando el diseño de nuestra PCB con el utilizado en el electrocardiógrafo del manual de laboratorio, Volumen 2 “Prácticas de Electrónica Aplicada” para más información consulten la referencia [21]. Figura 4.4: Discusión del diseño de la PCB Comparando diseños, observamos que nuestro diseño es poco intuitivo y difícil de seguir. Deberíamos haber optado por dejar una de las dos caras como plano de masa. Así como definir los distintos bloques del amplificador como en el esquema del electrocardiógrafo. 52 4.5 Consumo La alimentación de nuestro aparato consta de dos fuentes de +9V y -9V respectivamente. La fuente de alimentación de +9V tiene un consumo de 25 mA, mientras que la fuente de alimentación de –9V tiene un consumo de 32 mA. Consultando la hoja de especificaciones de VARTA para pilas de 9V nos ofrece una capacidad de 200 mAh. Realizando los siguientes cálculos: Fuente +9V → 200 mAh/25 mA = 8 horas Fuente -9V → 200 mAh/32 mA = 6.25 horas La fuente que limita las horas de uso del aparato es la fuente de -9V. Concluimos que la vida útil de nuestro aparato es de 6.25 Horas, para salvar esta debilidad también podemos optar por alimentar con una fuente externa. 4.6 Debilidades y Fortalezas 4.6.1 Debilidades Multiplexador Analógico Contamos con cierta redundancia en el circuito, como puede ser el uso de un micro-switch como control de un multiplexador analógico CD4016B para la elección de la resistencia en el atenuador variable, tal y como muestra la figura adjunta: 53 En vez del esquema anterior podemos proponer utilizar el micro-switch como multiplexador analógico, tal y como ilustra la siguiente figura: Ahorraríamos un integrado para la PCB, dinero y el diseño sería más simple. 4.6.2 Debilidades Eficiencia Uso inefectivo del TL082, el amplificador operacional TL082 es un circuito integrado que consta de dos amplificadores por integrado (Apéndice 3).El aparato utiliza 5 amplificadores, con solo 3 integrados tendríamos suficiente. Sin embargo, nuestro diseño utiliza 4 integrados lo que supone un gasto extra y una pérdida de espacio en la PCB. 4.6.3 Debilidades Número de Canales Uso ineficiente del número de canales que nos ofrece Arduino Uno, 6 entradas analógicas de las cuales solo utilizamos una. Una futura mejora sería dedicar un canal a la adquisición de ECG y otro para la adquisición de EEG. 54 4.6.4 Fortalezas Además de la posibilidad de realizar registros cortos (horas) usando las pilas como alimentación, también tenemos la posibilidad de realizar registros largos (dias) usando una fuente de alimentación externa, eliminando la interferencia de la red con el filtrado elimina banda tipo Notch. Teniendo en cuenta sólo el coste reflejado en el presupuesto (Apéndice 12) se puede afirmar que el diseño presentado es de bajo costo. El aparato ofrece compatibilidad con cualquier PC de 64bits y esto lo convierte en una herramienta versátil para valoraciones diagnósticas. El aparato es de pequeño tamaño 15,5x9,5x5,3 cm3 , haciéndolo manejable y de fácil portabilidad. Ofrece la posibilidad de adquirir tanto señales electrocardiográficas como señales electrográficas gracias al atenuador variable. 5 CONCLUSIONES Todos los objetivos previamente establecidos han sido conseguidos en mayor o menor medida. Se ha construido un instrumento de bajo coste y fácil portabilidad para adquisición y procesamiento de señales electrocardiográficas (ECG) y señales electroencefalográficas (EEG). Se diferencia de los aparatos de amplificación de bajo coste convencionales en que, además de ofrecer alimentación aislada de la red eléctrica (pilas alcalinas), ofrece la posibilidad de usar una fuente externa como alimentación, haciendo posible realizar registros largos (días de duración) y ahorrándonos dinero en pilas alcalinas. La resolución que ofrece el instrumento permitirá dar soporte diagnóstico en análisis electrocardiográficos así como en modelos animales con desórdenes neurológicos. 55 5.1 Líneas de Mejora Destacaría tres aspectos a mejorar: En primer aspecto a mejorar sería simplificar el diseño de la PCB dividiéndolo en distintos módulos diferenciados y añadiendo un plano de masa, consiguiendo un diseño más intuitivo. Por otro lado, la eliminación de la redundancia del esquema de amplificación ahorraría espacio para la distribución de integrados en la PCB. El segundo aspecto a mejorar sería aumentar el número de canales de registro. Actualmente, solo registramos un canal, mientras que Arduino Uno nos ofrece 6 entradas analógicas. Nos ofrecería la posibilidad de registrar varios canales EEG y varios canales ECG simultáneamente. El tercer aspecto a mejorar sería la tarjeta de adquisición del Arduino Uno, actualmente de 10 bits, ofreciendo un paso de cuantificación o una resolución de 1/210 = 1⁄1024 . Una versión más moderna del software tendrá una tarjeta de adquisición de un mayor número de bits, ofreciéndonos una mayor resolución o un salto de cuantificación más preciso, haciendo posible conseguir muestras más fieles a señal original. 6 BIBLIOGRAFIA 56 [1] Van Drongelen, W. (2006). Signal processing for neuroscientists: an introduction to the analysis of physiological signals. Academic Press. [2] Lamberti, P. W., & Rodríguez, V. (2007). Desarrollo del modelo matemático de Hodgkin y Huxley en neurociencias. Electroneurobiología, 15(4), 31-60. [3] Fozzard, H. A., Haber, E., Jennings, R. B., & Katz, A. M. (1986). The heart and cardiovascular system. [4] DaSilva, A. F., Volz, M. S., Bikson, M., & Fregni, F. (2011). Electrode positioning and montage in transcranial direct current stimulation. Journal of visualized experiments: JoVE, (51). [5] Valencia Brito, E. I., & Villa Parra, F. F. (2013). 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Recuperado el 02/03/015 de: http://pdf.datasheetcatalog.com/datasheet/stmicroelectronics/2300.pdf 64 Apéndice 4: Datasheet INA110kp 65 66 67 Figura 5.8: Principales páginas del datasheet INA110Kp. Recuperado el 02/03/015 de: http://pdf.datasheetcatalog.com/datasheet2/9/0ogsap8g1iy6oou1cfll925tsk3y.pdf 68 Apéndice 5: Datasheet LM78l05 69 70 Figura 5.9: Principales páginas del datasheet LM78l05. Recuperado el 02/03/015 de: http://www.ti.com/lit/ds/symlink/lm78l05.pdf 71 Apéndice 6: Datasheet CD4016B 72 73 Figura 5.10: Principales páginas del datasheet CD4016B. Recuperado el 02/03/015 de: http://pdf.datasheetcatalog.net/datasheet2/b/0d79d1qlc3xic4xa4cwu1e6ietcy.pdf 74 Apéndice 7: Modelo de Hodgkin y Huxley en neurociencias 1.1 Antecedentes históricos El establecimiento de la relación entre lo que actualmente se conoce como neurofisiología y los fenómenos eléctricos no biológicos se remonta a tiempos de Luigi Galvani. En 1791 el investigador italiano propuso la existencia de una “electricidad animal”, tras observar la descarga eléctrica en los músculos de un animal muerto. Poco después, el investigador Alessandro Volta explicó que esta “electricidad animal” no era distinta de la electricidad observada en otros fenómenos eléctricos. En 1902 el investigador Julius Bernstein propuso que las distintas corrientes eléctricas observadas en órganos vivos de animales y plantas, podrían generarse por una causa común o tener un modo similar de generarse. Durante un potencial de acción, la membrana perdía su permeabilidad selectiva al potasio, de modo que el potencial de membrana debía aproximarse a cero, pues el potencial debía crecer al mismo nivel tanto dentro como fuera de la célula, pero la primera medición mostró un potencial por encima del nulo (figura derecha). Figura 5.2: Pedro W. Lamberti y Víctor Rodríguez (2007). Desarrollo del modelo matemático de Hodgkin y Huxley en neurociencias. Recuperado el 14/02/015 de: http://electroneubio.secyt.gov.ar/Lamberti-Rodriguez_Hodgkin-Huxley.htm 75 Apéndice 8: AD620 76 77 78 79 Apéndice 9: Electrodos ECG 80 81 Apéndice 10: Electrodos EEG Animals were anesthetized with ketamine (100 mg/Kg) and xylazine (10 mg/kg) prior to the stereotaxic implantation of subdural electrodes for recording of somatosensory evoked potentials (SSEPs). The mice were secured in a stereotaxic frame (David Kopf Instruments, California, USA) and under aseptic conditions a skin incision was made and four small holes drilled through the skull. The electrodes (0.1-mm diameter) were made with polyimide-insulated tainless steel wires (PlasticsOne,Virginia, USA). Two electrodes were implanted in the right and left somatosensory cortices (±2.0 mm lateral and +0.5 mm rostrocaudal from bregma, depth 0.5 mm). Two screws were placed over the visual cortex of both hemispheres and served as the indifferent and ground electrodes (±2.0 mm lateral and -3 mm rostrocaudal from bregma). The electrodes were secured in place with cyanoacrylate based glue and dental acrylate (Duraly, Illinois, USA). The animals were allowed two weeks to recover from surgery before experiments started. The electrodes placement was assessed following recording of SSEPs from both hemispheres after ipsi- and contra-lateral forelimb stimulation to obtain the baseline scores. One week later, focal cerebral ischemia was induced by direct occlusion of the distal middle cerebral artery (MCA) as described below. Brain histology was performed to examine the relative position of electrodes in the somatosensory cortex (Supplementary Figure S2). Electrical stimulation and SSEPs recordings were performed under anesthesia with ketamine (100 mg/kg) and xylazine (10 mg/kg). The SSEPs were recorded during the first 10-25 min after i.p. injection of anesthesia, a time period of stable SSEP amplitude (Supplementary Figure S3). The depth of anesthesia was assessed as a function of the loss of reflex tail movement after pinch and the amplitude of the EEG signal. For peripheral stimulation a tape was used to affix a pair of silver electrodes over the ventral surface of forelimb (distal to the elbow) along the median nerve pathway. Stimuli were applied with a frequency of 1 Hz. In all the cases, the magnitude of stimuli was fixed (1-2 mA; 0.5 ms duration) twice the current level necessary to obtain a supramaximal motor response. This current level is defined as the value of intensity able to elicit a visually evident and specific movement in the forepaw (palmar flexion of wrist), which is not significantly modified after increasing the stimulation intensity. Signals were amplified (x103) and filtered (bandpass, 10-2.000 Hz) using a portable Electromyography (EMG)Evoked potentials (EP) device (Micromed, Mogliano Veneto, Treviso, Italy). Thirty to 60 responses were averaged for each trial, and the procedure was repeated three times for each forepaw. 82 Apéndice 11: CyberAmp 380 Apéndice 11: CyberAmp 380 83 84 85 Apéndice 12: Presupuesto Apéndice 11: CyberAmp 380 Presupuesto Caja PCB Componentes pilas 9V + conector pila Arduino UNO Conector BNC hembra para panel Conectores bananas hembra 4 mm Unidades 1 1 1 2 1 1 2 Precio Unidad 5,13 29 35,7328 3,35 9,61 2,86 0,64 Total 5,13 29 35,7328 6,7 9,61 2,86 1,28 90,3128 € € € € € € € € Componentes Condensadores Styroflex 10 nF Condensador de polipropileno 10 nF Resistencias 10 M INA110KP Potenciómetro de espectro TL082CN micro-switch multiplexador analógico CD4016BE Regulador de tensión positiva LM78L05 Diodo Schottky 1N5817 Resistencias 1K Resistencias 10K Resistencias 100K Resistencias 47K Resistencias 3K Resistencias 220 Unidades 2 1 2 1 2 6 1 1 1 2 4 6 5 2 1 1 Precio Unidad 0,3034 0,109 0,062 14,43 2,5 2,09 0,54 0,65 0,3 0,036 0,02 0,015 0,143 0,141 0,056 0,138 Total 0,6068 0,109 0,124 14,43 5 12,54 0,54 0,65 0,3 0,072 0,08 0,09 0,715 0,282 0,056 0,138 35,7328 € € € € € € € € € € € € € € € € € 86