FASE S

Que indicaban los experimentos de fusión celular? RLFs
Como se descubrió que había un sitio de inicio?
Características de los orígenes eucariotes
Como se supo quien reconocía el sitio de inicio?
Genes de mating en levaduras
Mutaciones MCM
FASE S
DNA
ORIGEN DE REPLICACION
ATTTAATATTTT
TAAATTATAAAA
PROTEINAS ORC (1-6)
G1-M
CDC6
CDT1
M-G1
PROTEINAS MCM (2-7)
G1-S
CDC6
CDT1
M-G1
CDC6: Acumulación desde anafase. Regulación por CDKs
Degradacion por proteasoma dependiente de M-CDKs y S-CDKs
Posicionamiento en G1 tardía, salida en distintos tiempos de S
Transporta a MCM7
Estabilización causa re-duplicación
Trabaja en conjunto con CDT1
PROTEINAS ORC (1-6)
G1-M
Seis proteínas ORC, todas esenciales
Proteínas ORC: Marca permanente de los sitios de origen.
Todas tienen sitios de unión a ATP, pero solo Orc1 es ATPasa
Orc2 tiene unión mas estable en el origen. Orc6, unión a DNA?
Orc1 entra y sale del sitio. Se UB y se P por Cdks
Orc4 es peculiar en S. pombe y quizás Xenopus
Contacto con Cdc6 y con MCMs
Participarían en silencing y en control de transcripción
CDC6
CDT1
M-G1
CDT1: Corresponde a lo que se llamó RLF-B
Presente en fase M en forma inactiva: degradación-inhibición
Sustrato del proteasoma
Inhibido por la proteína geminina en G1-S, auxiliado por MCM9
Acumulación provoca re-duplicación
Fundamental para el cargado de MCMs (MCM7?) y su actividad de desapareo
Trabaja en conjunto con CDC6
PROTEINAS MCM (2-7)
G1-S
Seis proteínas diferentes, todas esenciales
Todas contienen motivos de unión a ATP. ATPasa sólida solo estando las 6
MCM4, 6, 7 son una helicasa; MCM2, 3, 5 controlan la actividad
Fosforilables por S-CDKs y por DDK en forma cooperativa
Se acumulan desde G1 temprana, pero sobre DNA hasta G1 tardía
Requieren forzosamente la presencia de CDC6 y CDT1
Corresponden a lo que se llamo RLF-M
CICLO DE CICLINAS
Fase M
Fase G1
PROTEASOMA G1
G1-Cycs
ORC
Cycs-Cdks de G1
Cycs-Cdks de M
P
Cdc6
M-Cycs
Cdt1
PROTEASOMA M-G1
Fase G1
Cycs-Cdks de G1
E2F
MCMs
P-RB
Transcripción
p27
CycE, Cdc7, Dbf4
Cks1
P
Pre-replication
CAKs
Complex
P
CycE-Cdk2
Cdc7-Dbf4
Metabolismo centrosomal
Cargado de MCM (sin CDK)
CycE-Cdk2
Cdc7-Dbf4
Transición a S
CycE-Cdk2
P
P
CycE-Cdk2
P
Cdc7-Dbf4
P
Cdc7-Dbf4
P (MCM 2 y 4)
P
P
CDK2/CIC E,
CDC 45
p
CDC7/DBF 4,
(asociación a MCM4, MCM7,
MCM2, MCM6) y P
ppp
p
SLD1, MCM1, MCM10
SLD2, SLD3
pp
pp
ACTIVACION DEL ORIGEN
p
ppp
ACTIVACION DEL ORIGEN
RPA, Cdc45, Sld1, DNA pol alfa-primasa
RP-A
PCNA
DNA POL ALFA-PRIMASA
CDC45-MCM10-MCM8
RF-C
DNA POL DELTA-cadena discontinua
DNA POL EPSILON- cadena continua
GINS
FEN-1
RNASA H
DNA LIGASA
Al menos 30 proteínas en la horquilla!!
Ciclina A/Cdk2
Cadena continua
Cadena discontinua
Polimerasa
Helicasa
Primasa
Cebador de RNA
Proteína de unión
a cadena sencilla
PCNA (matchmaker) e interacciones
Monómero
Dímero
Interactua con:
DNA ligasas, DNA polimerasas, RPA, RFC, CAF, Fen1,
CDks, ciclinas, p21, p27, Cdt1, etc.
Modificación por ubiquitinacion, sumoilacion, fosforilación
Otras funciones:
Proteínas de remodelaje de la cromatina
Factores de ensamblaje de la cromatina (CAF)
Cohesinas (proteínas SCC y SMC—ORC2)
DNA topisomerasas
Tipos de orígenes:
Orígenes tempranos
Orígenes tardíos
Como se regulan????
Montaje y activación de orígenes: Rad53