Análisis DRI® Paracetamol Serum Tox

Análisis DRI® Paracetamol Serum Tox
Para uso diagnóstico in vitro
1086 (kit de 25 mL, 8 mL)
1091 (1 x 5 mL, 5 x 2 mL)
Indicaciones
Procedimiento del análisisProcedimiento del análisis
El análisis DRI® Paracetamol Serum Tox está indicado para la determinación cuantitativa de
paracetamol en suero o plasma humanos.
Para efectuar este enzimoinmunoanálisis homogéneo pueden utilizarse analizadores capaces
de mantener una temperatura constante, pipetear muestras, mezclar reactivos, medir
velocidades enzimáticas a 340 nm y cronometrar la reacción de manera precisa.
Resumen y explicación del análisisResumen y explicación del análisis
El paracetamol es un analgésico que también tiene efectos antipiréticos en humanos. Es uno de
los analgésicos de venta al público sin receta más populares. Los efectos secundarios tóxicos
asociados al paracetamol incluyen náuseas, somnolencia y vómitos. El tratamiento crónico
con paracetamol y la ingestión accidental o intencionada con motivos suicidas de grandes
cantidades del fármaco pueden producir hepatotoxicidad.1 Se ha demostrado que hay una
clara relación entre las concentraciones séricas de paracetamol y el daño hepático ulterior.2
El tratamiento adecuado de las sobredosis de paracetamol requiere la vigilancia precoz de
las concentraciones séricas del fármaco para evitar necrosis hepáticas que no son evidentes
clínicamente hasta las doce horas o más después de la ingestión.3,4 La determinación del
paracetamol sérico es el indicador más fiable para el pronóstico e incluso más importante para
el tratamiento con antídotos.4,5
Existen muchas técnicas para determinar las concentraciones séricas de paracetamol, entre
ellas la cromatografía de gases (GC), la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), el
enzimoinmunoanálisis, la espectrometría UV y el inmunoanálisis de fluorescencia. El análisis
DRI® Paracetamol Serum Tox es un enzimoinmunoanálisis homogéneo6 que utiliza reactivos
líquidos listos para su uso. El análisis se basa en la competición entre un fármaco marcado con
la enzima glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6PDH) y el fármaco de la muestra de suero por
una cantidad fija de lugares de unión de anticuerpos específicos del fármaco. Si la muestra no
contiene fármaco, el anticuerpo específico se une al conjugado fármaco-G6PDH, lo que inhibe
la actividad enzimática. Este fenómeno crea una relación directa entre la concentración de
fármaco de la muestra y la actividad enzimática. La actividad de la enzima G6PDH se determina
mediante espectrofotometría a 340 nm, midiendo su capacidad para convertir la nicotinamida
adenina dinucleótido (NAD) en NADH.
Antes de realizar el análisis, consulte los parámetros y las instrucciones de uso adicionales en
el protocolo específico del analizador empleado.
Control de calidad y calibración
Las prácticas correctas de laboratorio recomiendan emplear muestras de control para asegurar
el buen funcionamiento del análisis. Hay varios controles comerciales que se pueden utilizar
para realizar controles de calidad de este análisis. Asegúrese de que los resultados de los
controles están dentro de los rangos establecidos determinados por el laboratorio en que se
utilicen. Utilice todos los calibradores para calibrar el análisis. Vuelva a calibrar el instrumento
cuando se utilice un lote de reactivos diferente. Todos los requisitos de control de calidad
deben realizarse de acuerdo con las normas o los requisitos de acreditación locales, estatales
o federales.
Resultados y valores esperados
Los analizadores químicos clínicos determinan automáticamente la concentración sérica o
plasmática de paracetamol. No se requieren manipulaciones adicionales de los datos.
ReactivosReactivos
Para conseguir efectos analgésicos en adultos, por lo general se administran dosis de entre
325 y 650 mg de paracetamol cada tres o cuatro horas, sin que se produzca ningún efecto
secundario. Normalmente se necesita una concentración sérica de entre 5 y 20 μg/mL para
conseguir una respuesta analgésica.7 No obstante, la ingestión de grandes cantidades del
fármaco puede producir hepatotoxicidad. Se ha demostrado que hay una clara relación entre
las concentraciones séricas de paracetamol y el daño hepático ulterior.2 Cuatro horas después
de la ingestión, los pacientes con concentraciones de menos de 120 μg/mL no presentan
insuficiencia hepática. Entre los que tuvieron concentraciones de entre 120 y 300 μg/mL, el 50%
presentó necrosis hepática, mientras que las concentraciones superiores a 300 μg/mL están
asociadas con toda seguridad a necrosis hepática.
Reactivo de anticuerpo y sustrato. Contiene anticuerpos monoclonales antiparacetamol,
glucosa-6-fosfato (G6P) y nicotinamida adenina dinucleótido (NAD) en trometamol (tampón Tris)
con azida sódica como conservante.
Reactivo de conjugado enzimático. Contiene paracetamol marcado con glucosa6fosfato
deshidrogenasa (G6PDH) en trometamol con azida sódica como conservante.
La semivida sérica del paracetamol es probablemente el mejor indicio de la magnitud del daño
hepático. Se ha demostrado que puede producirse necrosis hepática cuando la semivida es de
más de cuatro horas, y es muy probable que se produzca coma hepático si la semivida es de
más de doce horas.2,5,8
Material adicional requerido (se vende por separado):
Limitaciones
1091
Descripción del kit
Kit calibrador de paracetamol. Contiene 5 mL de calibrador negativo
y 2 mL de calibradores de paracetamol a las siguientes
concentraciones: 10 μg/mL, 25 μg/mL, 50 μg/mL, 100 μg/mL y 200 μg/mL,
todos ellos en trometamol con azida sódica como conservante.
Precauciones y advertenciasPrecauciones y advertencias
Los reactivos son nocivos si se ingieren.
ADVERTENCIA: Los reactivos empleados en los componentes del análisis contienen ≤0,09%
azida sódica. Evite el contacto con la piel y las mucosas. En caso de contacto, lave las áreas
afectadas con abundante agua. En caso de contacto con los ojos o de ingestión, consulte
inmediatamente a un médico. La azida sódica puede reaccionar con el plomo o el cobre de las
cañerías y formar azidas metálicas que pueden ser explosivas. Al desechar dichos reactivos,
aclare siempre con agua abundante para evitar la acumulación de azida. Lave las superficies
metálicas expuestas con una solución de hidróxido de sodio al 10%.
No utilice los reactivos después de sus fechas de caducidad.
1. El análisis está diseñado para realizarse solamente con suero o plasma humanos, pero
no con sangre entera.
2. Las muestras de pacientes con concentraciones de paracetamol de más de
200 μg/mL deben diluirse con el calibrador negativo y volverse a analizar. La
concentración correcta de paracetamol se obtiene multiplicando el resultado del
análisis por el factor de dilución.
Características típicas de rendimiento
Los siguientes datos típicos se generaron con un analizador químico clínico Hitachi 717.
Precisión
Se determinaron la precisión intraserial y la precisión entre series utilizando tres muestras de
suero, y se obtuvieron los siguientes resultados:
Intraserial (n=20)
Sample
Mean ± SD
(μg/mL)
01
23 + 1,5
02
03
Entre series (n=12)
% CV
Mean ± SD
(μg/mL)
% CV
6,5
26 + 2,1
8,1
52 + 4,3
8,3
59 + 3,8
6,4
116 + 6,2
5,3
123 + 7,4
6,0
Preparación y almacenamiento de los reactivos
Los reactivos están listos para su uso, por lo que no es necesario prepararlos. Si se almacenan
correctamente a entre 2 y 8°C, todos los componentes del análisis son estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta.
Sensibilidad
La sensibilidad, definida como la concentración más baja que puede diferenciarse de 0 μg/mL
con una confianza del 95%, es de 2,5 μg/mL.
Recogida y manipulación de muestras
Exactitud y correlación
Se analizaron ochenta muestras clínicas de suero con el análisis DRI Paracetamol Serum Tox (y)
y con un análisis de paracetamol comercial (x). Se obtuvo una correlación con una ecuación de
regresión lineal de y = 0,91 (x) + 3,5 y un coeficiente de correlación (r) de 0,99. La concentración
media de paracetamol de las muestras según el análisis DRI fue de 35,9 μg/mL, con un rango
de 0 a 139,1 μg/mL. La concentración media de paracetamol de las muestras según el análisis
comercial fue de 35,5 μg/mL, con un rango de 0 a 138,5 μg/mL.
Para el análisis puede emplearse suero o plasma. Se ha observado que los anticoagulantes,
tales como la heparina, los citratos, los oxalatos y el ácido edético (EDTA), no interfieren en el
análisis. Pueden utilizarse muestras de plasma obtenidas con estos anticoagulantes, aunque
se recomienda emplear muestras de suero fresco. Almacene las muestras refrigeradas.
Debe hacerse todo lo posible para mantener las muestras pipeteadas libres de residuos
macroscópicos.
Manipule todas las muestras de orina como si pudieran ser infecciosas.
Bibliografía
Especificidad
Se comprobó la reactividad cruzada con el análisis de compuestos de estructura similar a la
del paracetamol y fármacos que pueden utilizarse simultáneamente con el paracetamol. La
tabla siguiente muestra las concentraciones de los compuestos analizados, que arrojaron unos
resultados de reactividad cruzada inferiores al límite de detección del análisis.
Compuesto
(μg/mL)
Paracetamol glucurónido
1.000
N-acetilcisteína
1.000
Amitriptilina
Ácido benzoico
Butalbital
Cafeína
20
1.000
30
100
Clorfeniramina
1.000
Clorzoxazona
1.000
Codeína
2
Cisteamina
1.000
d-cisteína
1.000
Dextrometorfano
5
Diazepam
20
Diflunisal
1.000
Efedrina
1.000
Fenoprofeno
1.000
Ácido gentísico
1.000
Éter gliceril guayacólico
1.000
Homatropina
1.000
Ibuprofeno
1.000
Indometacina
1.000
Metionina
1.000
Naproxeno
1.000
Fenacetina
30
Fenobarbital
1.000
Fenilbutazona
1.000
Fenilefrina
1.000
Propoxifeno
Pirilamina
Ácido salicílico
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Damage. Ann Intern Med, 87:299 (1977).
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8. Rumack BH and H Matthew: Acetaminophen Poisoning and Toxicity. Pediatrics for the
Clinician, 55:871 (1975).
2
1.000
300
Salicilamida
1.000
Secobarbital
3
No se observaron interferencias con muestras hemolizadas, lipémicas e ictéricas con
concentraciones de hemoglobina, colesterol y bilirrubina de hasta 800 mg/dl, 400 mg/dL y
30 mg/dL, respectivamente.
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