¿Espiralización defectuosa de las cromatidas de megalohlastos o

Rev.
Mecl.
Univ.
Navarra
XI;
23,
1967
GRAN HOSPITAL DE LA BENEFICENCIA. MADRID
INSTITUTO CAJAL. MADRID
¿Espiralización defectuosa de las cromatidas de
megalohlastos o espiral residual?
Estudio cromosómico de una anemia perniciosa
J.
M.ª Pajares* y A. Carrato**
RESUMEN
Hemos estudiado el cariotipo cromosom1co en médula ósea, en un caso
de anemia perniciosa con la técnica de Tjio y Whang, aportando algunas
modificaciones personales. Han sido encontradas dos clases de células:
l. Un clon celular en Ja proporción del 69,3 % con un número normal
de cromosomas.
2. Un segundo clon en Ja proporción del 30,7 % con un número eu··
ploide de cromosomas, pero presentando la mayoría de ellos una alteración:
Desespiralización defectuosa. Estos cromosomas aparecen más largos y más
deshilachados, con menos avidez por los colorantes y una cromafilia muy
mal distribuida en lo largo del mismo.
Se interpreta este hecho como un retardo en el proceso normal de despiralización que ha tenido lugar al final de la mitosis precedente.
INTRODUCCIÓN
Difícilmente se presenta en la clínica un
caso de anemia perniciosa libre de tratamiento con vitamina B12 o extractos
hepáticos. Por ello es difícil examinar el
* Jefe clínico de Medicina Interna, Prof.
Aydte. de la Cátedra de Patología Médica del
Prof. Gil Sanz.
** Director del Instituto Caja!. Profesor de
Histología y de Anatomía Patológica.
3
cuadro citológico de médula ósea megaloblástica, sin haber sido modificado por el
tratamiento. También escasean los trabajos y resultados de estudios citogenéticos
realizados en médulas megaloblásticas típicas. Los hechos registrados son escasos
y poco uniformes: Astaldi 1 encuentra
mayoría de células hipodiploides. Este
mismo autor publica otro caso con aneuploidia y cromosoma D, doble centromérico, como los hallados por Hsu en cé-
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Vol. XI
J. M. PAJARES Y A. CARRATO
lulas tumorales. Forteza y Baguena 2 publican un caso de anemia permc10sa sin
tratar con aneuploidia hipodiploide y
cromosoma D doble centromérico.
Estos resultados dispersos justifican el interés de nuestra comunicación.
MATERIAL y MÉTODO
Se ha estudiado un caso de nuestro serviCario tipo
44
medio T. C. 199. Mezclar cuidadosamente. Dejar en estufa a 37º durante
media hora. Añadir 2-3 gammas de colchicina por ml. Dejar a 37º con citrato
sódico al 0,75 %, como se hace en el cultivo de sangre periférica. Fijación en ácido acético-alcohol metílico; extensión y
secado al aire. Tinción con Giemsa alcalino, descrito en el método de HungerFord-Nowell y cols. Los resultados obtenidos con este método se resumen en el
siguiente esquema:
45
Total
46
47
3
44
2
49
3
10
2
15 (30,3
48
------
...
Meta fases
." ".
espiralización
defeca)
tu osa . " " .
b) espiralización normal ... " . " . ".
cío hospitalario, cuyo resumen clínico es
el siguiente :
A. C., mujer blanca de 70 años de edad.
Síndrome persistente de anemia: astenia,
zumbidos de oídos y palidez de piel y mucosas.
Hemograma: 1.800.000. Hb: 40 %. Vl.
Hemat. 14 %. Leuc: 3.800. Fórm.; C. 4;
Seg. 60. Linf. 33 ; Mon. 2; Eos. 1 ; Plaq.
195.000. Ret. 7 %.
Médubgrama: Transformación megaloblástica de la eritropoyesis.
Examen de jugo gástrico:
histaminoresistente.
%)
34
34
COMENTARIOS
Hemos hallado en el ¡:resente caso un número modal euploide de 46 cromosomas.
Las tres células con 45 (6 %) se incluyen
en el escaso número de células hipodiploides de la desviación standard del método. Puede ser significativo el hecho de
que todas las células con 45 cromosomas
aparecían con las cromatides débilmente
espiralizadas (fig. 1). Solamente dos células con 47 cromosomas (4,06 %) tam-
Aclorhidria
Examen radiológico de aparato digestivo:
Estómago sin alteraciones.
Examen citogenético: estudio directo de
células de médula ósea, sin cultivo previo, siguiendo la técnica de Tjio y Whang 6
ampliamente modificada por nosotros del
siguiente modo: Extracción de 1 ml de
médula ósea en un frasco universal que
contiene 0,5 ml de heparina al 5 por 1OO.
Inmediatamente se añaden 1O ml del
Fig. 1
b)
Dos cromosomas homólogos, cada cromátide
con diferente espiralización.
d) Las crorná tides hijas
muestran diferente situación y número de giros.
(Cortesía Dr. Jiménez Martín)
Marzo 1967
ESTUDIO CROMOSÓMICO DE UNA ANEMIA PERNICIOSA
bién admisible en la desviación standard
normal. Igualmente puede interesar el hecho de que estas células muestran sus cromátides con deficiente espiralización. En
44 células (90 %) el número es de 46 cromosomas, siendo éste el número modal
para este enfermo. De éstas, 34 (69,3 %)
conservan sus cromátides espirilizadas suficientemente, lo que llamamos espirili.zación normal. Las otras células (fig. 2)
que con las aneuploides suman el 30,7 %,
muestran las cromátides más largas, con
el aspecto helicoidal o serpenteado visible,
lo que suponemos se debe a una espirilización incompleta o deficiente del hilo
cromatínico o cromosoma (fig. 2). (Quizás
sea inadecuado el término de deficiente:
nosotros le tomamos solamente en el sentido de incompleta). Interesa recalcar que
todas las células han estado sometidas
durante el mismo tiempo a la solución
hipotónica. Durante el mismo tiempo a la
misma solución de Colcemid y prácticamente no ha existido cultivo.
DISCUSIÓN
está limitada por una fina película o membrana.
En nuestro caso hemos observado que un
número de cromosomas, significativamente valorable, conservan una gran espiralización, mayor que la del resto de las células, cuyos cromosomas están acortados
y en un estado de avanzada espiralización
parecido al observado normalmente en
células cultivadas y sometidas a la acción
de la colchicina.
Aquellos cromosomas de células tratadas
con colchicina se acortan, se abren en X
(es decir, adquieren una gran espiralización) porque la colchicina, veneno mitótico, destruye el huso o le incapacita funcionalmente según la teoría de Osterreich,
y por ello alarga el tiempo de duración
de la mitosis y con ello el tiempo de espiralización.
Es bien sabido que el tratamiento por la
colchicina puede provocar alteraciones
morfológicas de los cromosomas cuando
se prolonga demasiado. En nuestro caso
no puede interpretarse en este sentido ya
que el tratamiento sólo ha sido durante
media hora.
La estructura del cromosoma mitótico ha
sido estudiada ampliamente por gran número de citólogos. Ha sido descrito detalladamente que el cromosoma o hilo cromatínico profásico comienza a espiralizarse en esta etapa mitotótica para completarse en la metafase. El cromonema
tiene unos engrosamientos, que para otros
autores son hélices de una delgada espiral, a lo que llaman cromómeros. Quizás
donde más claramente pueden estudiarse
los fenómenos de espiralización que en
síntesis comentaremos es en las raíces de
algunas plantas. Mostraremos los fenómenos observados en la raíz de la Scilla 11011
scripta (fig. 1 b).
El proceso de espiralización en los cromosomas tiene lugar en forma progresiva
desde la profase a la metafase y regresiva
desde esta última hasta la telofase. La espiral no siempre es francamente visible,
debido a condiciones diversas que se suponen unidas a la existencia de una ma triz que circunstancialmente envuelve los
filamentos cromonémicos. El hecho cierto es que las espirales son perfectamente
demostrables en unos casos (pelos estaminales y células madres del polen de Tradescantia, Hyacinthus, meristemo radicular de Vicia faba, Aloe sp., espermatogonias de muchos locústidos y tettigónidos)
y muy difíciles de evidenciar en el resto.
Swanson 5 afirma, de acuerdo con la mayor parte de los citólogos, que el cromonema está envuelto por una masa de material acromático llamada matriz, la cual
Se admite que las vueltas de espira, muy
numerosas y de pequeño radio al principio, se van haciendo de radio mayor, más
apretadas y menos numerosas, con lo que
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J. M. PAJARES Y A. CARRATO
3
15
14
Fig. 2 Metafase de 45 cromosomas con despíralízacíóu defectuosa.
(A la derecha: pares l-3 y 13-15).
. 2 ..
13
14
. .3
"
······················· 15
Fíg. 3 Metafase de 46 cromosomas con defectuosa despíralízación.
(A Ja derecha: pares 1-3 y 13-15).
2
'
15
¡ -
Fig. 4 Me'.afase de 46 cromosomas y despíralízacíón normal.
(A Ja derecha: pares 1-3 y 13-15).
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ESTUDIO CROMOSÓM!CO DE UNA ANEMIA PERNICIOSA
el cromosoma resulta ensanchado y acortado al mismo tiempo que la "matriz"
se constituye en torno suyo. En la telofase sucede un proceso inverso de disolución de la matriz y aflojamiento de la
espiral con estiramiento del cromonema.
A veces no es completo dicho estiramiento y quedan todavía restos de espiral para
la profase de la siguiente mitosis ("espirales residuales"). La espiralización de la
nueva mitosis no aprovecha sin embargo
estas espirales residuales sino que imbrica
la terminación del proceso y la espiralización independiente de la nueva mitosis.
En la metafase ya completada se alcanza
un grado de espiralización y acortamiento cromosómico. El número de vueltas
de espira se ha calculado en 2 l/d· siendo 1 y d la longitud y el diámetro respectivamente del cromosoma.
En algunas profases mitóticas de especies
vegetales se constituven dos órdenes de
espirales: una mayor- y otra menor, de un
modo semejante a las bobinas de filamento espiralizado; la espiral mayor desaparece en la intercinesis para quedar sólo la
menor en la segunda mitosis meiótica.
Este hecho, demostrado claramente para
Tradescantia, es de difícil interpreta'ción
en otras plantas y nunca se ha comprobado en especies animales.
Un aspecto importante es el referente a la
dirección, dextrorsa o sinistrorsa, de las
vueltas de espira y a la asociación de las
diversas unidades cromonem1cas que
constituyen el cromosoma. Aunque el sentido de la espiral sea variable de unos casos a otros para el mismo elemento cromosónico, las espirales de una misma cromátida son coincidentes en los cromonemas constitutivos, dado que todos ellos
proceden de la autoduplicación de un
mismo filamento. Los estudios a este respecto de Giménez Martín y López Sáez 3
sobre Scil!a 11011 scripta (liliácea) han demostrado que cada cromátida consta de
cuatro filamentos cromonémicos y que el
27
sentido ele la espira\ cambia en tres puntos a lo largo del trayecto cromatíclico.
Dado que las crornátidas vienen ya formadas desde la profase y comienzan entonces la espiralización se comprende que
también el sentido ele ellas es coincidente.
Las posibilidades ele asociación son del
tipo llamado "paranémico" (Sarrow, Huslcins y Wilson) entre las dos cromáticlas
ele un cromosoma, pero pueden ser tanto
paranémicos como "plectonémicas" entre
las cromonemas de una misma cromátida. En el primer tipo las espirales se asocian por aproximación simple; en el segundo por enlace recíproco (fig. 1). Sólo
la condición paranémica permite libremente la separación de las unidades, como es el caso en las cromátidas, mientras
en el caso de asociación plectonémica (espiral de "relación", Matsura 4) se establecen tanto lazos como vueltas tienen las
espirales asociadas.
El aspecto más largo y con espirales laxas encontrado constantemente en una de
las poblaciones o clcnes celulares de nuestro caso puede deberse a dos causas: espiral residual de una mitosis anterior o
espiral mal desarrollada ele la mitosis actual. Este segundo factor es incapaz por
sí sólo de producir la imagen observada.
En efecto, si la espiral laxa observada a1
microscopio fuera la única desarrollada
durante la metafase, los cromosomas serían filamentos mucho más largos y má3
tenues. Compárese est·e hecho con el caso
ele los cromosomas PÜrnntes de las glándulas salivales de dfp'teros, únicos
plos de cromosomas completamente desespirilizados; la longitud es enormemente mayor que en los correspondientes de
otras células en mitosis; el srrosor también sería mínimo si no
el apareamiento somético y por la condición
politénica.
En nuestro caso cabe admitir como única
posibilidad que la espiral laxa observada
es realmente una espiral residual de la
mitosis anterior. En cuanto al aumento
h
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J. M.
PAJARES
de loagitud es muy probable que se deba
a que dicha espiral residual entorpece el
de la espiral correspondiente
a la mitosis actual, sin inhibirla por completo.
Creemos que este fenómeno de persistencia de la espiralización cromatídica y cromonémica o también insuficiente espira!i?ación puede recaer en células de megaloblasto, puesto que el tejido examinado
::s médula ósea. Resulta imposible conocer este dato con exactitud, pues hubiera sido preciso reconocerlo en estas
preparaciones. Sin embargo, la menor
proporción indica que una población de
células medulares, representada en el
menor número debe ser la que posea este
fenómeno. En orden de probabilidades
corresponde mejor a la serie megaloblástica que a otro sistema.
A título de sugerencia, en el terreno de
hipótesis en que todavía nos movemos,
cuando tratamos de interpretar el mecanismo de este proceso de espiralización,
cabe suponer que el trastorno bioquímico
Y
A. CARRATO
Vol. XI
responsable del crecimiento de la estirpe
celular megaloblástica en esta enfermedad
contribuya a este fenómeno observado
por nosotros.
Como indicamos anteriormente, escaso
número de casos ha sido estudiado citogenéticamente. Destacan los de Astaldi y
col. 1, que encuentra hipoploidia y alteración morfológica de los cromosomas
con hallazgo de un cromosoma D dicéntrico. Unicamente obtienen un 19 % de
células euploides. Forteza y Baguena 2
comunican los resultados del estudio citogenético de un caso de anemia perniciosa, en el que examinando 50 células
encuentran 28 % hipoploides y 62 % euploides. Después del tratamiento con Bl2
el número de células euploides es de
81 %. Observan también constricciones
secundarias y primarias en los pares 1315 y 21-22, con cromosomas largos y satélites largos también. Soldaduras de los
satélites 13-15 y 21-22 entre sí por sus
satélites. Todos ellos fenómenos que expresan una naturaleza y estructura especial de la cromatina.
SuMMARY
Defective cL.romatids spiralization of megaloblasts or residual spiral?
CL.romosomes study of one case of megaloblastic anemia
We have examined the kariotype on bone marrow tissue in one case of megaloblastic anemia. The method of Tuo and WHANG with
sorne personal modifications was applied on.
Two sources of cells were found: the 69,3 %
as an euploide clon. The other 30,7 % showed
an alteration upon most of the chromatides. We
called it defective despilaritation. This mitotic
defect consist in faster phases of the mitotic cicle; therefore chromosomes take a longer,
untwisted form like, with poorer staining and
unsteadely chromatophilia.
At present state of cytogenetics it is rather
difficult wether this alteration has a special
meaning. It could be a delay of the last nor·
mal despiralisation in the first mitosis.
BIBLIOGRAFÍA
l.
2.
3.
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Tno, A. H. y G. WHAN. Stain Tecf.110!.,
37: 17, 1962.
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