Biopsia de lomo por L. Bosch Puig, X. Puigvert Colomer, M

manual de técnicas clínicas
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IVIS agradece a Grupo Asís por su apoyo.
TÉCNICA CLÍNICA
Biopsia de lomo
Lluís Bosch Puig1
Xavier Puigvert
Colomer1
Marc Tor Naudí2
Daniel Villalba Mata2
Joan Estany Illa2
1
Universitat de Girona
Departament
d’Enginyeria
Química, Agrària i
Tecnologia
Agroalimentària
Avda. Lluís
Santaló s/n
17071 Girona
2
Universitat de Lleida
Departament de
Producció Animal
Avda. Rovira Roure
191
25198 Lleida
La posibilidad de utilizar biopsias para la predicción in vivo de la calidad de la carne fue mencionada por Schmidt et al. (1971). En estos primeros
experimentos se utilizaba una metodología de
obtención de biopsias en la cual la anestesia era
necesaria, siendo además un método de complejidad considerable. Posteriormente Lundström et al.
(1973) utilizaron un método de biopsia denominado needle biopsy, recogiendo muestras de grasa y
de masa muscular, con el inconveniente de la poca
cantidad obtenida con él, insuficiente para realizar
análisis de composición. Otro método empleado
ha sido el de disparo o shot biopsy (Schöberlein,
1976; Lahucky et al., 1987), con el cual la utilización de anestesia no era necesaria. Actualmente el
método de obtención de biopsias in vivo que parece más utilizado es el de muelle evolucionado o
spring loaded biopsy (Lahucky et al., 1999).
La utilización de biopsias in vivo en porcino ha tenido diferentes finalidades: determinación del potencial glicolítico relacionado con el gen del
Rendimiento Napole (Hamilton et al., 2000), determinación del pH, de la conductividad eléctrica, de
la capacidad de retención de agua y medidas de
color (Kovac, comunicación personal), la predicción del contenido y composición de la grasa intramuscular (Villé et al.,1992 y Baas et al., 1998) o la
determinación de la composición de la grasa subcutánea (Isabel et al., 2003), además de distintas aplicaciones con fines de diagnóstico veterinario.
Una de las preocupaciones mayores que puede
generar la utilización de biopsias en porcino es la
relativa al bienestar animal y su comportamiento.
En un experimento previo en el que se compararon
tres lotes de animales (uno de ellos control y otros
dos sometidos a biopsia –el primero con la utilización de anestesia total y el segundo sin anestesia
alguna–), no se apreciaron diferencias relevantes, ni
en consumo ni en comportamiento, entre los animales control y los sometidos a biopsia, así como
entre los anestesiados y los que no lo fueron, a
excepción del estrés momentáneo producido
durante la extracción de la biopsia o la aplicación
del anestésico. Esta observación coincidiría con lo
apuntado por los diseñadores del equipo (Kovac,
comunicación personal). En 1998, Geverink et al.
llevaron a cabo un experimento para determinar el
efecto de la biopsia (shot biopsy) sobre el comportamiento, contenido en cortisol salival y frecuencia
cardiaca en cerdos de sacrificio. De su estudio se
concluye que la realización de biopsias in vivo
repercute en un incremento de la frecuencia cardiaca y la concentración de cortisol, siendo no aconsejable la utilización de este sistema en ensayos donde
deba medirse el estrés previo al sacrificio.
La puesta a punto del método de realización de
biopsias se ha llevado a cabo con el fin de determinar el contenido y composición de la grasa intramuscular, así como la composición de la grasa
subcutánea.
MATERIAL
Agradecimientos:
A la empresa
GESCASER, S.A.,
por la cesión de los
animales.
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El material necesario para llevar a cabo la biopsia de lomo es el siguiente:
Jaula de inmovilización
Spring loaded biopsy BIOTECH PPB-U
Cánulas y cargador
Rasurador (cuchilla, hojas afeitar, navaja o afeitadora)
Jabón con digluconato de clorhexidina al 4%
Solución de digluconato de clorhexidina al 5%
Aparato de ultrasonidos estándar
Aerosol tópico con clortetraciclina
Aerosol tópico protector y coadyuvante
de la cicatrización
Bisturí
Tubos de conservación de tejidos
Detergente desengrasante, escobilla
y cepillos para limpiar las cánulas
Cajas metálicas de esterilización con tapa
Esterilizador de calor seco
Tanque de nitrógeno líquido
Nevera y hielo
Spray engrasante
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TÉCNICA CLÍNICA
DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO SPRING LOADED BIOPSY
Las biopsias se realizan con el equipo spring loaded biopsy
(PPB-U, Biotech, Nitra, Slovakia), utilizado anteriormente en
diversos experimentos (Baas et al., 1998; Ellis et al., 1998;
Lahucky et al., 1999 y Hamilton et al., 2000). Este aparato
consta de un muelle central recubierto de una camisa cilíndrica metálica; al final del muelle se dispone un eje central al
cual se le acopla una cánula metálica formada por un cilindro metálico hueco en su interior. La cánula dispone de un
extremo cortante con un mecanismo de cierre y corte. Todo
el conjunto se coloca en el interior de un cilindro metálico
que actúa de calibrador de la profundidad de penetración y
de cierre del mecanismo de la cánula. El conjunto, una vez
comprimido el muelle, impulsa la cánula a una velocidad
superior a los 300 m/s (Kovac, comunicación personal), la
cual atraviesa piel, grasa subcutánea y parte del músculo
longissimus dorsi. Una vez cortada y recogida la muestra se
procede a su extracción. Los diámetros de cánula utilizables
son de 6, 7 y 8 mm.
Figura 1. Esquema del aparato spring loaded biopsy.
Figura 2. Detalle de la cánula de extracción de biopsias.
1
DESCRIPCIÓN
DE LA TÉCNICA
1
Tras inmovilizar al animal en una jaula,
se localiza la última costilla y se ubica
el lugar de biopsia, desplazándonos 5
cm de la columna vertebral. Se lava
con agua y jabón con digluconato de
clorhexidina al 4% y, seguidamente, se
rasura una superficie de aproximadamente 5x5 cm.
2
Se decide la profundidad de biopsia en
función del grosor del tocino dorsal del
cerdo, utilizando un aparato de ultrasonidos estándar.
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TÉCNICA CLÍNICA
DESCRIPCIÓN DE LA TÉCNICA (continuación)
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La zona se desinfecta con una solución antiséptica de digluconato de clorhexidina al 5%. Se procede a cargar y asegurar el spring loaded biopsy, a armar
la cánula y a montarla en el aparato, adecuando la profundidad. Se aplica el dispositivo a la zona rasurada, se quita el seguro y se dispara.
4
Una vez retirado el spring loaded biopsy se desinfecta la zona con solución de digluconato de clorhexidina al 5%. Aplicamos aerosol con clortetraciclina
y, finalmente, aerosol protector y coadyuvante de la cicatrización.
5
Se desarma y se vacía la cánula; una vez extraída la muestra de biopsia se procede a la separación de grasa subcutánea y músculo con ayuda de un bisturí, envasándose cada fracción en un vial diferente y congelándose en nitrógeno líquido a –196 ºC. Posteriormente se conserva hasta su análisis en un
congelador a –80 ºC.
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Durante 2-3 días se sigue aplicando el aerosol tópico protector y coadyuvante de la cicatrización 2 veces al día. En la imagen se aprecia el estado de la
zona de incisión 9 días después de realizar la biopsia.
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TÉCNICA CLÍNICA
A TENER EN CUENTA
Una vez extraída la muestra de biopsia se limpia la cánula con detergente desengrasante (sumergir las cánulas durante 3-4 minutos). Se frota con un cepillo el interior y se limpia a fondo, lavando
con agua limpia, agua destilada, secando y esterilizando (calor seco 20’ a 180 ºC). Las cánulas se
almacenan en recipientes estériles (para conservarlas por largo tiempo, una vez limpias se rocían con
spray engrasante para proteger los mecanismos y evitar la corrosión; regularmente se procederá a
su examen y, si es preciso, afilado).
No se han observado daños en el matadero en los animales sometidos a biopsia. Tal como determinó Villé et al. (1992), el tiempo mínimo entre la realización de la biopsia y el sacrificio del animal
se estima en 15 días, si bien se acepta un período de 15 a 21 días como correcto.
La realización de biopsias 30 días antes del sacrificio de los animales imposibilita la utilización del
aerosol tópico con clortetraciclina, con el fin de respetar el período de retirada; en las pruebas llevadas a cabo, la no utilización de este producto no ha ocasionado infecciones locales salvo en contadas ocasiones (1-2%).
En la determinación del contenido de grasa intramuscular en animales con un elevado espesor de
grasa subcutánea, se pueden obtener predicciones del contenido de grasa intramuscular elevadas
debido a la contaminación producida en el momento de penetración de la cánula.
Para la determinación del contenido y composición de los ácidos grasos en el músculo longissimus dorsi se lleva a cabo la determinación cuantitativa de los ácidos grasos, que se realiza por cromatografía gaseosa en columna capilar, previa esterificación metílica directa sobre el tejido (Rule,
1997). Los ácidos grasos se cuantifican utilizando como patrón interno el triglicérido del ácido pentadecanoico (C15:0), al no hallarse éste presente en las muestras de carne analizadas.
BIBLIOGRAFÍA
Baas, T.J., L.L. Christian y G.H. Rouse. 1998. Prediction of muscle
quality in live pigs using press biopsy. Final Research Report.
Department of Animal Science. Iowa State University.
Ellis, M., F. K. McKeith, K. D. Miller y D. S. Sutton. 1998. The effect
of the rendement Napole Gene on pork quality. Disponible en
http//www.mark.asci.ncsu.edu/Genetics/pork/genmeat.html.
Acceso 15 de diciembre de 2000.
Geverink, N. A., M. A. W. Ruis, R. Eisen, E. Lambooij, H. J. Blokhuis
y V. M. Wiegant. 1999. The effect of shot biopsy on behavior, salivary cortisol and heart rate in slaughter pigs. Journal of Animal
Science. 77:1614:1619.
Hamilton, D.N., M. Ellis, K. D. Miller, F. K. Mckeith y D. F. Parrett.
2000. Journal of Animal Science. 78:2862-2867.
Isabel, B., A. Daza, C.J. López-Bote, V. Serradilla. 2003. Evolución
del perfil de ácidos grasos de tejido adiposo subcutáneo de cerdos _ Ibérico, _ Duroc cebados en montanera exclusiva. X
Jornadas sobre producción animal, volumen extra, número 24,
tomo I: 199-201.
Lahucky, R. 1987. Recent findings using the muscle shot biopsy to
evaluate meat quality in pigs. Pigs news and Information. 8:291-294.
Lahucky, R., G. Kohn, U. Baulain, M. Henning, E. Kallweit, P. Demo, D.
Vasicek, N. Pronayova. 1999. Ante-mortem 21 pNMR study of the skeletal muscle metabolism on entire and on a muscle biopsy in
Heterozygotes and MH Normal pigs. In: Proceedings 45th International
Congress of Meat Science and Technology, Vol.4:330-331.
Lundström, K., B. Malmforms y J. Hansson. 1973. Swedish Journal
of Agricultural Research., 3. 211.
Rule, D. C. 1997. Direct transesterification of total fatty acids of adipose tissue, and of freeze-dried muscle and liver with boron-trifluoride in methanol. Meat Science, 46:23-32.
Schmidt, G.R., Zuidam, L. y Sybesma, W. 1971. Biopsy technique and
analysis for predicting pork quality. Journal of Animal Sciences. 34:25.
Schöberlein, L. 1976. The shot biopsy, a new method of sampling
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Villé, H., G. Maes, R. Geers, V. Goedeseels, G. Parduyns, J.V. Bael,
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muscle biopsy sampling on pigs to assess intramuscular fat. Meat
Science. 32:123-129.
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ADVERTENCIA
Los conocimientos técnicos veterinarios están en constante evolución. Las investigaciones recientes y la experiencia clínica, al mismo tiempo que amplían nuestros
conocimientos hacen necesarios cambios en los tratamientos y en la terapia farmacológica, por lo que se
debe ser cuidadoso en su aplicación. En consecuencia, se
recomienda a los lectores que analicen los últimos datos
aportados por los fabricantes sobre cada fármaco para
comprobar la dosis recomendada, la vía y duración de
la administración y las contraindicaciones. Es responsabilidad ineludible del veterinario clínico determinar la
dosis y el tratamiento más adecuado para cada paciente, en función de su experiencia y del conocimiento de
cada caso concreto. Ni el editor ni el autor asumen responsabilidad por los daños y/o perjuicios que pudieran
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Editado con la colaboración de Boehringer Ingelheim
Diseño y maquetación: Asís Veterinaria
ISBN: 978-84-612-3074-7
Depósito Legal: Z-1.615/2008
Impreso en España
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