Métodos de esterilización y desinfección

Objetivo
Métodos de
esterilización y
desinfección
„
Curso: Métodos en
Fitopatología
24 de abril de 2012
Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp
Definiciones
Que el estudiante se
familiarice con los
procesos de
desinfección y
esterilización
comúnmente utilizados
en un Laboratorio de
Fitopatología.
Definiciones
Esterilización = proceso mediante el cual
se matan o eliminan todas las formas de
vida microbiana.
→ estéril o no estéril.
„ Asepsia
= exclusión continuada de
microorganismos contaminantes.
„
Desinfección = eliminar microorganismos
patógenos total o parcialmente
→ niveles de desinfección.
Muerte de una población microbiana
Antiséptico
= sustancia que impide del crecimiento de
microorganismos, aplicado a superficies
corporales
Métodos de esterilización
% sobrevivientes
„ FISICOS:
…Calor
„ seco
„ húmedo
…Radiaciones
„ MECÁNICOS
…Filtración
„ QUIMICOS
…Gaseosos
…No
gaseosos
tiempo
1
Métodos físicos de
esterilización
1.
Calor seco
1. Fuego directo
2. Hornos
Calor seco
Fuego directo
Esterilización directa en la llama
„
Para objetos de metal
„ Según el metal: anzas directamente al
fuego,
„ pinzas, bisturíes, agujas pasar por etanol
96 y flamear
„ Ídem portaobjetos, cubres.
„
Esterilización directa en la llama
Esterilización directa en la llama
Ansas
2
Calor seco - Horno
Calor seco
Actúa oxidando y desnaturalizando las
proteínas.
„ Solo para materiales resistentes al calor y
no inflamables.
„ Se utiliza para:
„
…
…
…
…
vidrios
instrumentos quirúrgicos
objetos metálicos
aceites, vaselinas y polvos
Calor seco
T ºC
Calor seco
„
(usar temp. menor en este caso)
horas
„
Temperaturas:
… 180
ºC ---------- 30 - 60 min.
… 170 ºC ---------- 60 - 120 min
Recipientes de metal o envolver en papel
„
Precauciones: vidrio debe estar seco
„
No usar para esterilizar vidrio graduado
„
Dejar que vuelva a temp. ambiente antes
de abrir
Calor húmedo
Métodos físicos de
esterilización
„
Pasteurización: T < 100°C
… Salmonella
„
Ebullición y Tindalización: T = 100°C
… mayoría
1.
Calor seco
2.
Calor húmedo
de formas vegetativas de hongos,
bacterias y virus lipídicos
Tindalización: T = 100°C x 3 veces
→ estéril
„ Autoclavado: T > 100°C
„
3
Calor húmedo
„
„
Autoclave
Con presión: autoclave, olla presión
Para sustancias estables al calor
… tener
en cuenta combinaciones reactivos a
temp altas
„
Temperatura – presión – tiempo
Temp.
100
110
Tiempo 20 h 2,5 h
115
121 125
130
51
15 6,4 2,4
min. min. min. min.
Autoclave
Autoclave
Presión
(lb/in.)
Calor húmedo - Autoclave
„
¿cómo optimizar eficacia?
… eliminar
aire,
… contenidos similares,
… no apretados, dejar espacios verticales,
100%
66%
50%
33%
0%
5
109
100
94
90
72
10
115
109
105
100
100
15
121
115
112
109
100
25
130
126
124
121
115
30
135
130
128
126
121
Autoclave
1.
2.
3.
4.
5.
6.
„
Precauciones:
… tapas
sueltas,
… recipientes con hasta 1/3 de volumen,
… vuelta a presión normal lenta.
Temperatura interna (ºC) según % aire
eliminado
7.
8.
9.
10.
Poner agua (si es necesario)
Colocar medios, etc.
Cerrar bien tapa
Abrir válvula de desagote
Encender fuente de calor
Desagotar aire
Cerrar válvula
Vigilar presión, computar tiempo cuando llega a 15 lb
Luego de 15 – 20 min. apagar fuego y dejar enfriar
Abrir válvula luego de >20 min.
4
Controles de esterilización
„
Controles físicos
„
Existen tres tipos:
Controlan parámetros como:
… Temperatura
… Físicos
… Presión
… Químicos
… Tiempo
… Biológicos
Controles químicos
„
Cinta de papel adhesivo indicador de
temperatura
Controles biológicos
„
Esporas de Bacillus estearothermophilus que se
exponen a ciclo de esterilización
… Más
„
seguro.
¿Por qué raramente se usan en Laboratorios de
Fitopatología?
Radiaciones
Métodos físicos de
esterilización
2.
Calor seco
Calor húmedo
3.
Radiaciones
1.
UV-A : 315-400 nm
„ UV-B : 280-315 nm
„ UV-C : 100-218 nm
„
„
Gamma
5
Radiaciones UV
„
„
„
„
Radiaciones UV
Mecanismo de acción: se atribuye a absorción
por ADN → uniones covalentes entre residuos
de pirimidina pertenecientes a la misma cadena
→ distorsiones del DNA → apareamiento de
bases → inhibición de la síntesis de ADN →
inhibición del crecimiento y la respiración.
Igualmente efectivas para Gram(+) y Gram (-).
Uso principal: esterilizar el aire y superficies
no penetran en sólidos y pobremente en
líquidos.
Esterilización por filtrado
Métodos mecánicos
de esterilización
Elimina microorganismos >virus
Ventaja: no modifica composición
„ Para: cantidades pequeñas
„ Para: vitaminas, hormonas,
antibióticos, etc.
„
„
Filtración
Filtración
Filtración
„
Requiere bomba de vacío
„
De diferentes materiales:
… vidrio:
re-usables, se lavan con ácidos
Lenta y costosa.
„ Se usa sólo para sustancias termolábiles,
que no se pueden esterilizar en autoclave.
„
… fibras
de amianto y celulosa: 1 uso, sitios
de adsorción
… membranas
de ésteres de celulosa:
1 uso, “poros” de 0,22 µm
6
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
Métodos químicos
de esterilización
1.
2.
Nivel de desinfectantes
„
De alto nivel:
… Oxido
„
… Clorados,
„
Esterilización química
„
Ventajas: no requiere altas temp ni aparatos
costosos
„
Desventajas: mayor tiempo, sustancias
inflamables y muy tóxicos y alto costo
„
Oxido de etileno: muy efectivo pero mutagénico,
inflamable en contacto con aire, hierve a 10,8ºC
Formaldehído (formol): gases altamente
irritantes, tóxicos y carcinogénicos.
de etileno, formaldehido, etc.
De mediano nivel:
iodados, alcoholes, fenólicos, etc.
De bajo nivel:
… Compuestos
mercuriales
Esterilización
Desinfección
de amonio cuaternario,
„
7
Desinfectantes de mediano nivel
Desinfectantes de mediano nivel
Agentes oxidantes:
„ Clorados
„
… se
inactiva con materia orgánica
inactiva con luz
… se inactiva con algunos detergentes
… renovarse mensualmente los preparados
… se
„
Alcoholes → desnaturalizan proteinas
Alcohol etílico rectificado 95% - deshidrata
rápidamente y no penetra
„ Alcohol etílico 70% - más efectivo
„
… Inactivado
por materia orgánica
tensión superficial
… Se evapora sin dejar residuos
… Disminuye
Iodados
Desinfección de tejido vegetal
Desinfección
superficial
1.
2.
De superficies inertes
De material vegetal
Desinfección superficial
Desinfección
Técnicas comunes en Fitopatología:
„ Lavado previo en agua corriente
Selección de técnica(s) según:
… detergente?
cepillo?
Agua corriente 2 o más horas
„ Alcohol 70%
„ Hipoclorito de sodio:
„
… 1%
Cloro activo, 2 %, 0,35% etc.
„
tejido: grosor, consistencia
„
hongo a aislar: ej. Oomycetes,
Rhizoctonia
„
dónde pensamos que está el patógeno
… minutos
… enjuague
posterior
8
Biliografía
„
„
Vignoli, R. Esterilización y
desinfección.21p.
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%
2027.pdf
Laboratorio de Microbiología. Métodos de
Esterilización.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/faculta
d_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9todos_
de_esterilizaci%C3%B3n.pdf
9