Objetivo
Métodos de
esterilización y
desinfección
Curso: Métodos en
Fitopatología
24 de abril de 2012
Ing. Agr. MSc. Vivienne Gepp
Definiciones
Que el estudiante se
familiarice con los
procesos de
desinfección y
esterilización
comúnmente utilizados
en un Laboratorio de
Fitopatología.
Definiciones
Esterilización = proceso mediante el cual
se matan o eliminan todas las formas de
vida microbiana.
→ estéril o no estéril.
Asepsia
= exclusión continuada de
microorganismos contaminantes.
Desinfección = eliminar microorganismos
patógenos total o parcialmente
→ niveles de desinfección.
Muerte de una población microbiana
Antiséptico
= sustancia que impide del crecimiento de
microorganismos, aplicado a superficies
corporales
Métodos de esterilización
% sobrevivientes
FISICOS:
Calor
seco
húmedo
Radiaciones
MECÁNICOS
Filtración
QUIMICOS
Gaseosos
No
gaseosos
tiempo
1
Métodos físicos de
esterilización
1.
Calor seco
1. Fuego directo
2. Hornos
Calor seco
Fuego directo
Esterilización directa en la llama
Para objetos de metal
Según el metal: anzas directamente al
fuego,
pinzas, bisturíes, agujas pasar por etanol
96 y flamear
Ídem portaobjetos, cubres.
Esterilización directa en la llama
Esterilización directa en la llama
Ansas
2
Calor seco - Horno
Calor seco
Actúa oxidando y desnaturalizando las
proteínas.
Solo para materiales resistentes al calor y
no inflamables.
Se utiliza para:
vidrios
instrumentos quirúrgicos
objetos metálicos
aceites, vaselinas y polvos
Calor seco
T ºC
Calor seco
(usar temp. menor en este caso)
horas
Temperaturas:
180
ºC ---------- 30 - 60 min.
170 ºC ---------- 60 - 120 min
Recipientes de metal o envolver en papel
Precauciones: vidrio debe estar seco
No usar para esterilizar vidrio graduado
Dejar que vuelva a temp. ambiente antes
de abrir
Calor húmedo
Métodos físicos de
esterilización
Pasteurización: T < 100°C
Salmonella
Ebullición y Tindalización: T = 100°C
mayoría
1.
Calor seco
2.
Calor húmedo
de formas vegetativas de hongos,
bacterias y virus lipídicos
Tindalización: T = 100°C x 3 veces
→ estéril
Autoclavado: T > 100°C
3
Calor húmedo
Autoclave
Con presión: autoclave, olla presión
Para sustancias estables al calor
tener
en cuenta combinaciones reactivos a
temp altas
Temperatura – presión – tiempo
Temp.
100
110
Tiempo 20 h 2,5 h
115
121 125
130
51
15 6,4 2,4
min. min. min. min.
Autoclave
Autoclave
Presión
(lb/in.)
Calor húmedo - Autoclave
¿cómo optimizar eficacia?
eliminar
aire,
contenidos similares,
no apretados, dejar espacios verticales,
100%
66%
50%
33%
0%
5
109
100
94
90
72
10
115
109
105
100
100
15
121
115
112
109
100
25
130
126
124
121
115
30
135
130
128
126
121
Autoclave
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Precauciones:
tapas
sueltas,
recipientes con hasta 1/3 de volumen,
vuelta a presión normal lenta.
Temperatura interna (ºC) según % aire
eliminado
7.
8.
9.
10.
Poner agua (si es necesario)
Colocar medios, etc.
Cerrar bien tapa
Abrir válvula de desagote
Encender fuente de calor
Desagotar aire
Cerrar válvula
Vigilar presión, computar tiempo cuando llega a 15 lb
Luego de 15 – 20 min. apagar fuego y dejar enfriar
Abrir válvula luego de >20 min.
4
Controles de esterilización
Controles físicos
Existen tres tipos:
Controlan parámetros como:
Temperatura
Físicos
Presión
Químicos
Tiempo
Biológicos
Controles químicos
Cinta de papel adhesivo indicador de
temperatura
Controles biológicos
Esporas de Bacillus estearothermophilus que se
exponen a ciclo de esterilización
Más
seguro.
¿Por qué raramente se usan en Laboratorios de
Fitopatología?
Radiaciones
Métodos físicos de
esterilización
2.
Calor seco
Calor húmedo
3.
Radiaciones
1.
UV-A : 315-400 nm
UV-B : 280-315 nm
UV-C : 100-218 nm
Gamma
5
Radiaciones UV
Radiaciones UV
Mecanismo de acción: se atribuye a absorción
por ADN → uniones covalentes entre residuos
de pirimidina pertenecientes a la misma cadena
→ distorsiones del DNA → apareamiento de
bases → inhibición de la síntesis de ADN →
inhibición del crecimiento y la respiración.
Igualmente efectivas para Gram(+) y Gram (-).
Uso principal: esterilizar el aire y superficies
no penetran en sólidos y pobremente en
líquidos.
Esterilización por filtrado
Métodos mecánicos
de esterilización
Elimina microorganismos >virus
Ventaja: no modifica composición
Para: cantidades pequeñas
Para: vitaminas, hormonas,
antibióticos, etc.
Filtración
Filtración
Filtración
Requiere bomba de vacío
De diferentes materiales:
vidrio:
re-usables, se lavan con ácidos
Lenta y costosa.
Se usa sólo para sustancias termolábiles,
que no se pueden esterilizar en autoclave.
fibras
de amianto y celulosa: 1 uso, sitios
de adsorción
membranas
de ésteres de celulosa:
1 uso, “poros” de 0,22 µm
6
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
CAMPANAS DE FLUJO LAMINAR
Métodos químicos
de esterilización
1.
2.
Nivel de desinfectantes
De alto nivel:
Oxido
Clorados,
Esterilización química
Ventajas: no requiere altas temp ni aparatos
costosos
Desventajas: mayor tiempo, sustancias
inflamables y muy tóxicos y alto costo
Oxido de etileno: muy efectivo pero mutagénico,
inflamable en contacto con aire, hierve a 10,8ºC
Formaldehído (formol): gases altamente
irritantes, tóxicos y carcinogénicos.
de etileno, formaldehido, etc.
De mediano nivel:
iodados, alcoholes, fenólicos, etc.
De bajo nivel:
Compuestos
mercuriales
Esterilización
Desinfección
de amonio cuaternario,
7
Desinfectantes de mediano nivel
Desinfectantes de mediano nivel
Agentes oxidantes:
Clorados
se
inactiva con materia orgánica
inactiva con luz
se inactiva con algunos detergentes
renovarse mensualmente los preparados
se
Alcoholes → desnaturalizan proteinas
Alcohol etílico rectificado 95% - deshidrata
rápidamente y no penetra
Alcohol etílico 70% - más efectivo
Inactivado
por materia orgánica
tensión superficial
Se evapora sin dejar residuos
Disminuye
Iodados
Desinfección de tejido vegetal
Desinfección
superficial
1.
2.
De superficies inertes
De material vegetal
Desinfección superficial
Desinfección
Técnicas comunes en Fitopatología:
Lavado previo en agua corriente
Selección de técnica(s) según:
detergente?
cepillo?
Agua corriente 2 o más horas
Alcohol 70%
Hipoclorito de sodio:
1%
Cloro activo, 2 %, 0,35% etc.
tejido: grosor, consistencia
hongo a aislar: ej. Oomycetes,
Rhizoctonia
dónde pensamos que está el patógeno
minutos
enjuague
posterior
8
Biliografía
Vignoli, R. Esterilización y
desinfección.21p.
http://www.higiene.edu.uy/cefa/Libro2002/Cap%
2027.pdf
Laboratorio de Microbiología. Métodos de
Esterilización.
http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/faculta
d_farmacia/catedraMicro/10_M%C3%A9todos_
de_esterilizaci%C3%B3n.pdf
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0
